红花黄色素抑制血小板激活因子介导的血小板活化作用的研究

 目的 观察血小板激活因子(PAF)对血小板聚集性、5-HT释放、胞浆内游离钙离子浓度的影响及红花总黄色素的抑制作用。方法 红花水煎液经硅胶吸附法除杂质得到红花总黄色素,以比浊法及邻苯二甲醛(OPT)荧光分光光度法观察其对PAF诱导家兔洗涤血小板(WRP)聚集及5-HT释放的影响。以Fura-2荧光分光光度法测定血小板内游离钙离子浓度。结果 红花总黄色素抑制PAF诱发的WRP聚集、5-HT释放作用呈明显的量效关系。PAF 2.0×10^-9 mol·L^-1时,0.21,0.42,0.85,1.69 g·L^-1红花总黄色素血小板聚集抑制率依次为28.0%,32.9%,60.0%,79.4%;5-HT释放抑制率分别为4.70%,12.9%,32.9%,58.4%;同时4.1,6.5,10.3,16.7,26.7 mg·ml^-1红花总黄色素剂量依赖地抑制8×10^-10 mol·L^-1 PAF引起的血小板内游离钙增高。结论 红花总黄色素可抑制PAF诱导的血小板聚集、5-HT释放及血小板内游离钙增加。     

山柰酚拮抗血小板活化因子与其受体结合的作用

目的 :观察山柰酚对氚标记的血小板活化因子与血小板膜上受体结合作用的影响 ,试图证明该药为一新型血小板激活因子 (PAF)受体拮抗剂。方法 :以放射配基结合试验观察 [³H]PAF与家兔血小板受体的特异性结合 ;分光光度法测定PAF诱发的血小板黏附强度 ;Fura-2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细胞 (PMNs)内钙离子浓度的升高。结果 :山柰酚可浓度依赖地抑制 1,2 ,4nmol·L^-1[³H]PAF与血小板受体的特异性结合 ,IC50 分别为 30 .8,74 .6 ,92 .0 μmol·L^-1;该药可明显抑制PAF诱发的兔血小板黏附及PMNs内游离钙升高 ,且均呈明显的量效关系 ,其抑制血小板黏附的IC50 为 65μmol·L^-1。结论 :山柰酚具抗PAF的作用 ,为一新的PAF受体拮抗剂。     

羟基红花黄色素A热稳定性的初步研究

红花CarthamustinctoriusL .为主要的活血化瘀药,可活血通经、化瘀止痛。临床上红花主要以水煎液入药,羟基红花黄色素A(hydroxysaffloryellowA ,HSYA ,化学结构见图1)为红花主要水溶性活血化瘀有效成分,可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集与释放,为一血小板激活因子受体拮抗剂[1,2 ] 。目前许多企业与科研单位正在大力研发红花黄色素制剂,该药的主要有效成分为HSYA。作者发现HSYA受热后会发生变化,为了探讨该成分的热稳定性,....     

应用m2-Gi1α融合蛋白鉴别M2受体的特异性药物

 目的表达m2-Gilα融合蛋白,通过检测GDP与m2-Gilα融合蛋白的亲和力大小来鉴别m2受体的特异性激动剂、拮抗剂和反向激动剂。方法用两步PCR反应重组m2-Gilα融合蛋白cDNAs,并插入到pBacPAK9病毒载体中,利用Sf9细胞表达M2受体蛋白和m2-Gilα融合蛋白,通过[³H]QNB结合饱和实验及[³⁵S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测受体表达水平及GDP 与m2-Gilα融合蛋白的亲和力。结果m2-Gilα融合蛋白表达水平是(18.14±0.17)pmol·mg(膜蛋白)^-1。M2-Gilα融合蛋白与[³H]QNB的结合量随着[³H]QNB浓度的升高而增加,10μmol·L^-1GTDγS使m2-Gilα融合蛋白与[³H]QNB的饱和结合曲线明显下移。Ach使m2-Gilα融合蛋白与[³⁵S]GTPγS竞争性替代结合曲线明显右移,Pilo稍次之,alcuronium,AF—DX116,Iso及atropine 则使曲线左移,GDP的IC₅₀值分别是168.4,152.3,6.84,6.12,5.59,4.52μmol·L^-1,无配体存在时为14.7μmol·L^-1。结论表达的m2-Gilα融合蛋白具备M2配体结合的特性及G蛋白耦联受体的信号转导功能,对于有基础活性的m2-Gilα融合蛋白,Ach, Pilo是完全激动剂;atropine,alcuronium,Iso和AF-DX116为拮抗剂。     

芦丁拮抗血小板活化因子与受体结合的作用

目的　观察芦丁对血小板活化因子(PAF)与受体结合的拮抗作用。方法　以放射配基结合试验观察[3H]PAF与家兔血小板受体特异性结合的作用;体外以分光光度法测定PAF介导血小板黏附的强度;以Fura- 2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细胞(PMNs)内钙离子浓度的升高。结果　芦丁可浓度依赖地抑制1、2、4 nm ol/L [3H]PAF与血小板受体的特异性结合,其IC50 分别为7.3、8.7、17.2 mm ol/L ;芦丁可明显抑制PAF介导的血小板黏附,IC50 为1.5 1mm ol/L;芦丁浓度为6 8.2～5 4 6 μm ol/L 时可浓度依赖地抑制PAF介导的PMNs内游离钙浓度的升高。结论　芦丁具有抗PAF作用,为一种新的PAF受体拮抗剂。     

豚鼠肺膜LTD4受体结合特征及二苯乙烯低聚体(Gn-3)的LTD4受体拮抗作用

 目的 采用LTD₄放射受体结合实验方法,在分析LTD₄受体的有关特征的基础上,观察比较二苯乙烯低聚体(Gn-3)对LTD₄受体的拮抗作用。方法 以豚鼠肺膜为实验材料,采用³H-LTD₄为放射配体,以FPL₅₅₇₁₂作阳性对照药物,Gn-3为实验药物,进行药物竞争结合实验。采用离体器官生物检测法鉴定Gn-3对LTD₄受体的拮抗作用。结果³H-LTD₄与其相应受体呈现单一结合位点,其Kd和B_max值分别为19.9×10^-11mol·L^-1和232.9 fmol·mg^-1蛋白。Gn-3可明显取代³H-LTD₄与其受体结合,IC₅₀值为5.71×10^-7 mol·L^-1,Ki值为2.54×10^-7 mol·L^-1。生物学鉴定法证实Gn-3可抑制LTD-4引起的生物学效应。结论 豚鼠肺膜LTD₄受体为单一结合位点受体,Gn-3为高活性的LTD4受体拮抗剂。     

葶苈子黄酮对血小板激活因子的拮抗作用

目的研究葶苈子黄酮对血小板激活因子(PAF)诱导的家兔中性粒细胞(PMN)和洗涤家兔血小板(WRP)的聚集及黏附作用的影响。方法比浊法观察PAF诱导的PMN(或WRP)聚集;PAF诱导已着色PMN(或WRP)黏附,比色法测定此PMN(或WRP)破膜后溶液吸光度,表示其黏附活性。结果葶苈子黄酮可明显抑制PAF诱导的PMN和WRP聚集及黏附活性的升高(P<0.05)。结论葶苈子黄酮具有拮抗PAF的作用。     

组胺H3受体配体研究进展

 目的阐述组胺H3受体配体的研究进展。方法结合国内外文献简述组胺H₃受体配体及其构效关系的发展,组胺H₃受体配体的治疗应用前景以及H₃受体配体发展的新方向。结果与结论选择性的H3受体激动剂及拮抗剂具有广泛的生物活性,是目前抗组胺药物研究开发中的一个新的热点领域,随着对H₃受体配体研究的深入,极有希望开发出可用于临床的新药。     

丹参红花有效部位配伍对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的:通过中药组分优化方法将丹参红花提取物有效部位(丹参酚酸B和羟基红花黄色素A)含量提高,观察其注射液对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响。方法:结扎SD大鼠冠状A左前降支40min后,再灌注120min,建立心肌缺血再灌注损伤模型。结扎大鼠冠状A前降支后10min,股静脉注射给药。实验分为模型组、假手术组、丹红注射液(0.065生药g.kg^-1)组、丹参红花提取物有效部位-丹参酚酸B和羟基红花黄色素A(丹酚酸B含量10.44mg·mL^-1、羟基红花黄色素A含量22.1mg·mL^-1)小剂量(1.94生药g·kg^-1)组、中剂量(3.89生药g·kg^-1)组和大剂量(5.83生药g·kg^-1)组,每组10只动物。试验测定大鼠血清肌钙蛋白T(cTnT)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的含量,观察药物对大鼠心电图ST-T幅度变化及血浆中血栓素(TXB₂)、6-酮-前列腺素F_1α(6-Keto-PGF_{1α)含量和血小板聚集性的影响。结果:与模型组比较,丹参红花有效部位大、中、小剂量均可使大鼠血清cTnT,CK-MB的含量显著降低(P<0.01);丹参红花有效部位中、大剂量组还可抑制心肌缺血/再灌注损伤后大鼠血小板聚集率,降低血清中TXB2的含量(P<0.01),并使6-Keto-PGF1α/TXB2的不平衡得以纠正(P<0.01);缺血再灌注30min时丹参红花有效部位小、大剂量组的心电图ST-T下降幅度显著改善(P<0.01)。结论:丹参红花有效部位配伍配比可以降低大鼠再灌注损伤引起的血小板聚集和6-Keto-PGF1α/TXB2的失衡,减少损伤心肌CK-MB酶的漏出,防止血栓的形成,从而发挥保护和改善心肌缺血的作用。}     

橐吾中倍半萜对二氢吡啶类受体的作用研究

 目的：观察8个倍半萜类化合物对二氢吡啶类受体结合的作用和对离体血管张力的影响。方法：用［3H］尼群地平对猪心室肌微粒体膜受体结合方法和家兔离体血管条实验对化合物的体外作用进行研究。结果：化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对尼群地平与受体结合有明显抑制作用，其IC₅₀分别为2.0×10^-5mol·L^-1，2.7×10^-5mol·L^-1和3.9×10^-5mol·L^-1，其余化合物作用较弱。这些化合物抑制受体结合的作用强度与结构中母核与取代基的改变有关，而取代基的变化对活性的影响更重要。化合物Ⅱ、Ⅲ对高K+引起的兔胸主动脉收缩有剂量依赖性的抑制作用。结论：这类化合物有钙拮抗作用，作用机制可能与影响二氢吡啶类受体有关；它们作用有量效关系和构效关系，提示有以此为先导进行深入结构改造和构效关系研究的价值。     

银杏内酯B衍生物抗血小板聚集作用和作用机制

目的：探讨银杏内酯B衍生物（XQ）抗血小板聚集的作用及其机制。方法：运用比浊法测定静脉给药后PAF诱导的家兔血小板聚集作用,采用放射配基结合试验观察[3H]PAF与兔血小板受体特异性结合的作用。结果：XQ1.95、3.90、7.80mg·kg^-1对家兔血小板聚集的抑制率分别为29.8%、43.5%和55.2%（P〈0.01）,PAF与家兔血小板膜上PAF受体结合的平衡解离常数（KD）=8.31×10^-5mmol·L^-1,最大结合容量（BMAX）=2.62×10^-9mmol/10^8血小板。XQ和银杏内酯B（GB）可抑制[3H]PAF与兔血小板受体的特异性结合,抑制常数（Ki）分别为8.72×10^-8、7.13×10^-7mol·L^-1。结论：XQ具有抗血小板聚集作用,Ki值接近,其拮抗PAF受体的能力与GB相似。     

血小板激活因子受体拮抗剂SY0916抑制巨噬细胞血管生成作用的研究

 目的 考察血小板激活因子（platelet activating factor,PAF受体拮抗剂SY0916对巨噬细胞释放血管内皮生成相关因子的影响,探讨SY0916抗血管生成的相关分子机制。方法 采用Boyden Chamber法检测小鼠腹腔巨噬细胞的趋化反应;放射性免疫分析法检测巨噬细胞U937上清中白细胞介素（IL-1β含量;L929生物测定法分析肿瘤坏死因子（TNF-α分泌;ELISA法测定血管内皮细胞生长因子（VEGF含量;明胶酶谱法检测间质金属蛋白酶（MMP-9活性;Western Blot法检测MMP-9蛋白表达;RT-PCR法观察IL-1β、TNF-α、VEGF mRNA的表达;凝胶电泳迁移率变更法（EMSA分析核转录因子（NF-κB活性。结果 SY0916对PAF诱导的小鼠腹腔巨噬细胞趋化反应具有显著的抑制作用;SY0916可呈剂量依赖性地抑制PMA刺激人U937巨噬细胞引起的IL-1β、TNF-α、VEGF的生成以及IL-1β、TNF-α、VEGF的mRNA表达;SY0916能显著抑制U937细胞MMP-9的活性及蛋白表达;SY0916明显抑制NF-κB的活化。结论 PAF受体拮抗剂SY0916可能通过抑制巨噬细胞NF-κB的活性而下调促血管生成因子和MMP的表达发挥抗血管生成的作用。     

芦丁抑制家兔血小板激活因子诱导血小板活化作用的实验研究

目的：观察芦丁对家兔血小板激活因子（PAF）诱导血小板聚集、5－羟色胺（5－HT）释放、血小板内游离钙离子浓度的影响及其机理。方法：以比浊法测定家兔洗涤血小板（WRR）聚集率，邻苯二甲醛（OPT）荧光分光光度法测定5－HT含量，以Fura-2荧光分光光度法测定血小板游离钙离子浓度的变化。结果：芦丁体外呈浓度依赖性抑制PAF（9．55×10^-9mol/L)诱发的WRP聚集、5－HT释放作用，IC50分别为0．73、1．13mmol/L；同时68．3、274、545μmol/L芦丁剂量依赖地抑制PAF（4．78×10^-9mol/L)引起的血小板内游离钙浓度增高。结论：芦丁可抑制PAF诱导的血小板聚集、5－HT释放及血小板内游离钙浓度增加。     

陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖影响的研究

目的体外培养法研究陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的影响。方法将体外培养的HO-8910PM细胞分为挥发油组、阳性对照组、阴性对照组及Control组,分别以挥发油、环磷酰胺、DMSO及完全培养基处理后,以MTT法评价不同浓度及不同作用时间下陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞的生长抑制作用;以Hoechst33258荧光染色法染色细胞核,倒置显微镜观察细胞核形态变化;测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、Caspase-3酶活性,评价4种挥发油对细胞膜结构及细胞凋亡的影响。结果陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞增殖具有抑制作用,并且呈时间剂量依赖性。Hoechst33258荧光染色法观察细胞核有明显的凋亡形态变化。各实验浓度挥发油处理后,细胞培养液中LDH活性、细胞中Caspase-3酶活性均明显增加,较Control组及阳性药环磷酰胺组差异有统计学意义(P0.01)。结论陈皮、枫香脂、没药、木香挥发油对HO-8910PM细胞具有增殖抑制及促凋亡作用,其机制可能为破坏肿瘤细胞的细胞膜,激活细胞凋亡途径中的关键酶Caspase-3。     

Effects of tetrandrine and fangchinoline on human platelet aggregation and thromboxane B2 formation.

Tetrandrine (TET) and fangchinoline (FAN) are two major components of the radix of Stephania tetrandra. The effects of TET and FAN on human platelet aggregation and formation of thromboxane (TX) B2, a stable metabolite of TXA2, were examined in the aspect of platelet aggregation. TET and FAN inhibited platelet-activating factor (PAF)-induced human platelet aggregation. IC50 values for TET and FAN were 28.6+/-3.24 microM and 21.7+/-2.61 microM, respectively. In the PAF-receptor binding assay, neither TET nor FAN showed any inhibitory effects on the specific bindings of PAF to its receptor. TET and FAN also inhibited PAF-, thrombin- and arachidonic acid-induced thromboxane B2 formation in human washed platelet. These results indicate that TET and FAN inhibit the platelet aggregation by interfering with the intracellular messengers system, but not by inhibiting the binding of PAF to PAF-receptor on the platelet membrane directly, and the suppression of TXA2 formation by TET and FAN may be responsible for their inhibitory activities on the platelet aggregation and further on the thrombosis.     

Inhibitory effects of xanthones on platelet activating factor receptor binding in vitro

Nine naturally occurring xanthones were investigated for their platelet activating factor (PAF) receptor binding inhibitory effects using rabbit platelets. 2-(3-methylbut-2-enyl)-1,3,5-trihydoxyxanthone, macluraxanthone, 1,3,5-trihydroxy-6,6'-dimethylpyrano(2',3':6,7)-4-(1,1-dimethylprop-2-enyl)xanthone, 6-deoxyjacareubin and 2-(3-methylbut-2-enyl)-1,3,5,6-terahydroxyxanthone showed strong inhibition with IC50 values of 4.8, 11.0, 21.0, 29.0 and 44.0 microM, respectively. The prenyl group at C-2, the dimethylprop-2-enyl group at C-4 and the hydroxyl group at C-5 are all beneficial to the binding of xanthones to the PAF receptor. The results revealed that xanthones can represent a new class of natural PAF receptor antagonists.     

Blockade of glycoprotein IIb/IIIa mediates the antithrombotic activity of butanol fraction of Actinostemma lobatum Maxim

AIM OF THE STUDY: Actinostemma lobatum Maxim, a wildlife plant of Cucurbitaceae family, has been utilized for the prevention or treatment of cardiovascular diseases as a folk remedy in Korea. However, its scientific evidence remains unclear. Thus, in the present study, we examined the effects of butanol fraction of Actinostemma lobatum Maxim (BFALM) on the in vitro and in vivo antithrombotic activity and possible mechanisms were elucidated for the first time. MATERIAL AND METHODS: To elucidate the antithrombotic mechanism of BFALM, platelet aggregation assay, coagulation assay, glycoprotein IIb/IIIa assay, thromboxane A(2) assay and in vivo pulmonary thromboembolism experiment were performed. RESULTS: BFALM significantly inhibited collagen, adenosine diphosphate (ADP) and thrombin-induced platelet aggregation in a concentration dependent manner. Consistently, oral administration of BFALM resulted in a dose-dependent increase of survival rates of mice with pulmonary thromboembolism induced by intravenous injection of collagen and epinephrine. In mechanism assays for the antithrombotic activity of BFALM, BFALM significantly inhibited the fibrinogen binding to the platelet surface Glycoprotein IIb/IIIa (GP IIb/IIIa) receptor in a concentration dependent fashion, as well as reduced the level of thromboxane A(2) at 400microg/ml. Furthermore, BFALM significantly prolonged the prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT) compared with untreated control. CONCLUSIONS: These results suggest that BFALM may exert antithrombotic activity through inhibition of platelet aggregation via GP IIb/IIIa and thromboxane A(2) pathways, along with anticoagulatory activity through intrinsic and extrinsic pathways.     

红花黄色素抗血小板聚集作用的研究

目的:观察红花黄色素(Sofflor yellow,SY)对胶原诱导的小鼠血小板聚集的影响,并探讨其对小鼠血小板"第二信使"环磷酸腺苷(Cyclic AMP,c AMP)水平的作用。方法:比浊法测定血小板聚集率;酶联免疫吸附法ELISA检测c AMP的水平。结果:0.25 g/L和0.5 g/L的SY对血小板聚集的抑制率分别为(24.06±3.65)%和(62.36±7.17)%,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与对照组的c AMP水平(2.06±0.13 pmol/108 plts)相比,0.25 g/L和0.5 g/L的SY使血小板的c AMP水平分别升高到(2.48±0.20 pmol/108 plts,P<0.05)和(3.52±0.28 pmol/108 plts,P<0.01),差异均具有统计学意义。结论:SY对胶原诱导的小鼠血小板聚集有显著的抑制作用,其作用机制可能是升高血小板c AMP的水平。