KPC型碳青霉烯酶研究进展

碳青霉烯类抗生素包括亚胺培南、美罗培南和厄他培南等是治疗肠杆菌科细菌尤其是产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)及AmpC酶等多重耐药菌株引起感染的最有效的抗菌药物[1].然而,随着碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)的出现及不断增多,该类药物的临床应用受到严峻的挑战.     

碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌中KPC酶的研究

目的了解上海部分医院肠杆菌科细菌中KPC酶的产生及耐药情况。研究KPC酶的分子生物学特性和blaKPC的转移和传播。方法在上海4所医院收集亚胺培南或美罗培南（纸片扩散法）中介或耐药的肠杆菌科菌株,PCR检测blaKPC、DNA测序、接合转移试验、质粒电泳、Southern blot。结果在上海4所医院共收集到7株对亚胺培南药敏结果（纸片扩散法）中介或耐药的肠杆菌科细菌;PCR检测显示有2株菌株携带blaKPC-2接合转移试验、质粒电泳、Southern blot试验显示blaKPC-2是由一个50kb大小的质粒携带。结论上海4所医院2006年的KPC酶的检出率还比较低;2株肠杆菌科菌株的blaKPC-2都是由1个50kb的质粒所携带。     

碳青霉烯类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌产KPC酶监测

目的了解武汉地区肺炎克雷伯菌产KPC型碳青霉烯酶的耐药基因流行状况及型别,为有效监测和控制医院感染提供实验室依据。方法收集2014年6月至2015年10月武汉地区3家三甲医院对碳青霉烯类抗菌药物敏感性下降的肺炎克雷伯菌53株,均采用Phoenix-100全自动系统进行鉴定和药敏试验,采用改良Hodge试验进行KPC初筛,聚合酶链反应对53株菌分别进行blaKPC基因扩增,阳性扩增测序验证型别。结果 53株菌中38株菌改良Hodge试验阳性,阳性率为71.70%(38/53);32株扩增出780bp左右的目的条带,阳性率为60.38%(32/53);经测序和比对分析为blaKPC-2基因。结论武汉地区对碳青霉烯酶类抗菌药物不敏感的肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶基因主要为KPC-2型,临床感染和控制部门应加强监控,防范产KPC-2型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌在院内暴发和流行。     

产KPC型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的检测与耐药状况分析

目的：了解该院肺炎克雷伯菌产KPC型碳青霉烯（KPC酶）的情况。方法收集临床分离的肺炎克雷伯菌756株,采用K‐B法进行药敏试验,筛选出耐碳青霉烯的肺炎克雷伯菌,采用改良的Hodge试验、PCR检测产KPC酶的肺炎克雷伯菌。结果在756株肺炎克雷伯菌中,检出耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌41株,进行Hodge试验,检出36株KPC酶阳性菌株,阳性率87．8％。PCR扩增检出KPC酶阳性菌株39株。结论该院内发现了产KPC酶的肺炎克雷伯菌,但其分型还有待于进一步检测。     

产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点

目的 研究分析产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点.方法 收集2011年1-12月武警总医院18株产KPC酶的肠杆菌科细菌,使用PCR和测序的方法对菌株进行鉴定,用微量肉汤稀释法检测其对常用抗菌药物的耐药性,并对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染的病例临床资料进行调查分析.结果 2011年从临床送检的标本中,通过表型鉴定和PCR检测,共分离出产KPC型碳青霉烯酶细菌18株,其中肺炎克雷伯菌13株,大肠埃希菌4株,产气肠杆菌1株.90％患者在产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌分离之前,使用过头孢菌素类(包括第二、三、四代头孢菌素)、头霉素、氨曲南和β内酰胺酶抑制剂复方制剂,70％患者使用过碳青霉烯类抗生素.所有菌株对头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素耐药,对阿米卡星的敏感率为60.0％,对替加环素的敏感率为100％.经过治疗后,7例患者死亡,病死率43.8％.结论 产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的出现,提示临床上应严格控制抗生素的使用,加强医院感染控制措施,防止和减少此类耐药菌在医院内的传播.     

耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶的研究

近年来不动杆菌对碳青霉烯酶的耐药性不断增强，并且呈现多药耐药趋势。研究表明，不动杆菌对碳青霉烯的主要耐药机制是产生了质粒或染色体编码的碳青霉烯酶。为了解本地区鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶的类型，进行了研究。     

KPC碳青霉烯酶及检测的研究进展

KPC是2001年发现的一类具有碳青霉烯水解活性的A类丝氨酸β-内酰胺酶,至今,至少有5种变异酶组成(KPC-1～KPC-5),其编码基因位于可转移质粒。可有效水解几乎所有β-内酰胺类抗生素,包括青霉素类、头孢菌素类、单酰胺类和碳青霉烯类,其活性可被克拉维酸和他唑巴坦所抑制。此外,KPC编码基因常与其他类抗生素(如氟喹诺酮类和氨基糖苷类)耐药基因联合,这将最终限制有效治疗药物的选择。若按CTX-M和质粒介导AmpC的传播速度推算,可以想象,KPC的广泛传播必将给医学界带来严峻挑战。     

碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行病学及碳青霉烯酶类型的研究

目的 了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的耐药性、同源性及碳青霉烯酶类型。方法 收集本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌45株，浓度梯度法(Etest)测定最低抑菌浓度(MIC)；采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性；通过等电点聚焦电泳(IEF)、三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)、克隆测序等方法分析碳青霉烯酶类型。结果 45株细菌均为多重耐药株，仅对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率较低分别为2．2％和6．5％，敏感率分别为63．0％和43．5％。45株菌株PFGE图谱分为A、B两型，A型是主要流行株(44株)，主要集中在重症监护病房(ICU)。B型1株来自血液科病房。45株菌中有43株产碳青霉烯酶，其中16号株(PFGE为B型)等电点有6．6、7．2两个条带，pI6．6为OXA-23，其余42株(A1～A4亚型)pIs均有6．4、7．0两个条带，均不被克拉维酸、氯唑西林及2-巯基丙酸抑制，PCR方法也未能检出OXA-23、OXA-24系列的基因。结论 本院碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行主要为医院感染所致，该流行株呈多重耐药，未发现金属酶，仅1株产OXA型碳青霉烯酶，为OXA-23。     

碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药情况以及碳青霉烯酶的基因型。方法收集21株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法（K—B法）进行药敏试验,PCR方法检测碳青霉烯酶基因型。结果21株碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌对阿米卡星、左氧氟沙星和氨曲南的耐药率分别为35．7％、42．9％和78．6％,对其余抗菌药物耐药率均高达92．9％～100％。21株中检出OXA-23基因阳性17株（80．9％）,OXA-51基因阳性15株（71．4N）,OXA-58基因阳性2株（9．5％）。12株（57．1％）含OXA-23＋OXA-51基因,1株（4．8％）含OXA-23＋0XA-51＋OXA～58基因。上述菌株中均未检出OXA-24、IMP和VIM耐药基因。结论碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌多重耐药情况严重,碳青霉烯酶基因型OXA-23和OXA-51携带率高,且以OXA-23＋OXA-512种基因型同时存在为主。     

儿童患者临床标本中产KPC碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的研究儿童患者临床标本中,对厄他培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC型碳青霉烯酶存在情况及对各类抗生素的耐药性,并对结果进行分析。方法对我院儿内科病房和儿外科病房分离的8株对厄他培南耐药的肺炎克雷伯菌进行KPC酶特异性PCR扩增,并对阳性结果进行测序,用E-test法测定菌株对亚胺培南、美罗培南、厄他培南、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、阿莫西林/棒酸、左氧氟沙星、阿米卡星和庆大霉素的耐药性。结果 8株肺炎克雷伯菌对美罗培南、厄他培南、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、阿莫西林/棒酸均耐药;对阿米卡星、庆大霉素和左氧氟沙星均敏感;有5株对亚胺培南耐药,3株中介;仅1株对哌拉西林/他唑巴坦和氨曲南耐药。8株肺炎克雷伯菌经测序均携带KPC-2型碳青霉烯酶。结论我院儿童患者感染的对厄他培南耐药的肺炎克雷伯菌均产KPC-2型碳青霉烯酶,产酶菌株对碳青霉烯类抗生素的耐药性明显高于氨曲南和哌拉西林/他唑巴坦。     

KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药中的研究

目的运用RNA干扰技术探讨blaKPC表达与碳青霉烯类耐药的关系。方法用电转移法将双链小RNA（SiRNA）转入到2株产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2（KPC-2）的肺炎克雷伯菌中,检测RNA干扰前后菌株blaKPC的RNA水平和亚胺培南、厄他培南的最低抑菌浓度（MIC）值的变化。结果菌株在RNA干扰前后blaKPC-2的RNA水平有差异,但干扰前后亚胺培南和厄他培南的MIC值没有变化。结论 SiRNA虽然能在RNA水平上抑制blaKPC的表达,但对产KPC-2菌株碳青霉烯类耐药的影响不明显,证明革兰阴性杆菌对碳青霉烯类耐药由多种因素共同引起。     

KPC酶在肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药中的研究

目的运用RNA干扰技术探讨blaKPC表达与碳青霉烯类耐药的关系。方法用电转移法将双链小RNA(SiRNA)转入到2株产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2(KPC-2)的肺炎克雷伯菌中,检测RNA干扰前后菌株blaKPC的RNA水平和亚胺培南、厄他培南的最低抑菌浓度(MIC)值的变化。结果菌株在RNA干扰前后blaKPC-2的RNA水平有差异,但干扰前后亚胺培南和厄他培南的MIC值没有变化。结论 SiRNA虽然能在RNA水平上抑制blaKPC的表达,但对产KPC-2菌株碳青霉烯类耐药的影响不明显,证明革兰阴性杆菌对碳青霉烯类耐药由多种因素共同引起。     

佛山市中医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的产酶型别及耐药性分析

目的 了解佛山市中医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的产酶类别、对头孢他啶/阿维巴坦(CZA)等常用抗菌药物的耐药性,以及CZA与美罗培南(MEM)、氨曲南(ATM)的联合作用,为临床合理用药提供依据。方法 收集佛山市中医院2020年1月1日至2022年3月1日临床分离的CRE 95株,对临床常用抗菌药物的耐药性进行回顾性分析,用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM试验)联合乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM试验)与胶体金免疫层析技术2种方法检测碳青霉烯酶,采用纸片扩散法检测CZA同MEM、ATM的联合药敏试验。结果 95株CRE中,mCIM试验阳性菌株93株(97.9%),不产酶2株(2.1%);eCIM试验阳性菌株49株(51.6%)。93株产酶CRE菌株中产丝氨酸酶44株(47.3%),产金属β-内酰胺酶49株(52.7%)。胶体金免疫层析法检测6个基因型结果除了1株不是KPC基因型外,其他与mCIM和eCIM表型结果一致。44株产丝氨酸酶菌株的敏感率为97.7%,49株产金属β-内酰胺酶菌株的敏感率为0.0%。35株携带KPC基因型肺炎克雷伯菌中有33株CZA和MEM、C...     

宿迁地区碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌耐药性及碳青霉烯酶基因型分析

目的了解宿迁地区耐碳青霉烯肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)分布、耐药特点及产碳青霉烯酶的主要类型。方法收集宿迁地区3家三级综合医院2016年1月至12月临床分离的CRE非重复菌株52株,E-test法测定厄他培南、亚胺培南、美罗培南、替加环素的最低抑菌浓度(MICs),纸片扩散法检测其他抗菌药物的敏感性,PCR检测碳青霉烯酶基因。结果 CRE菌株标本来源广泛,痰液(38.5%)和尿液(28.8%)位于前两位;菌种分布以大肠埃希菌为主,其次为肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌。大部分CRE菌株对碳青霉烯类药物显示高水平耐药(MICs32 mg/L),未检测到碳青霉烯酶基因的菌株中厄他培南比亚胺培南及美罗培南显示更高的MICs。CRE菌株除对阿米卡星、米诺环素和替加环素的耐药率分别为40.4%、30.8%和0外,对大多临床常用抗菌药物耐药率超过90%。49株CRE检测到碳青霉烯酶基因,产酶比例94.2%,其中blaNDM-1占主导(79.6%),blaKPC次之(22.4%)。blaNDM-1菌株主要为大肠埃希菌(66.7%)、肺炎克雷伯菌(15.4%)和阴沟肠杆菌(10.3%)。blaKPC阳性菌株中,除1株同时携带blaNDM-1为大肠埃希菌,其余均是肺炎克雷伯菌。结论宿迁地区CRE以大肠埃希菌为主,对常用抗菌药物呈高度耐药,产生碳青霉烯酶是对碳青霉烯类耐药的主要耐药机制,其中blaNDM-1是主要型别。临床应加强CRE的监测工作,采取合理的预防控制措施,防止耐药基因的传播。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌KPC和NDM-1β内酰胺酶耐药基因的研究

目的检测江苏盛泽医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的KPC和NDM-1耐药基因,分析耐碳青霉烯类的耐药机制。方法采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA纸片协同试验和AmpC酶三维试验检测29株耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌产酶情况;用PCR方法检测KPC及NDM-1两种碳青霉烯酶耐药基因。结果29株分离菌中,26株菌改良Hodge试验阳性,7株亚胺培南EDTA纸片协同试验阳性,7株AmpC酶三维试验阳性,16株携带KPC型碳青霉烯酶耐药基因,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论该院耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的耐药机制主要是携带KPC型碳青霉烯酶基因。     

3-氨基苯硼酸联合乙二胺四乙酸碳青霉烯酶抑制增强试验检测肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶的研究

目的 了解3-氨基苯硼酸(PBA)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯酶抑制剂增强试验(PBA-EDTA法)用于检测肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶的检测结果.方法 使用PBA-EDTA法测定275株经金标准PCR及DNA测序已明确为产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶结果的符合率,并与CLSI推荐的mCIM联合eCIM改良碳...     

乌鲁木齐地区耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型及同源性分析

目的 探讨乌鲁木齐地区临床分离的对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌耐药性、同源性和碳青霉烯酶型.方法 收集42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌,采用纸片扩散法测定亚胺培南耐药菌对18种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法扩增碳青霉烯酶基因型包括OXA-23,OXA-24,OXA-58,IMP和VIM型.采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析同源性.结果 42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌对阿米卡星耐药率最低(28.5%),左氧氟沙星、庆大霉素、头孢他啶耐药率均为53.6%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率为39.3%,其余抗菌药物耐药率均大于80.0%;RAPD分型发现42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌属于6个型,其中以A型(8株)、D型(20株)和F型(6株)3个型为主.42株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌有33株携带 OXA-23组基因,未检测到金属酶基因.结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药现象非常严重,临床应根据药敏结果合理选用抗生素,克隆播散是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌最主要的传播方式,OXA-23型是最主要的碳青霉烯酶基因型.     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶耐药基因及整合子检测与分析

目的了解耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)碳青霉烯酶耐药基因及整合子基因携带情况。方法收集徐州医科大学附属医院2011至2015年CRAB菌株76株,用PCR技术检测bla_(OXA-23)、bla_(OXA-24)、bla_(OXA-51)、bla_(OXA-58)、bla_(OXA-143)、bla_(OXA-235)、blaVIM、blaIMP碳青霉烯酶基因和Ⅰ类、Ⅱ类整合子基因。结果 76株CRAB中bla_(OXA-51)检出率为100.0%,bla_(OXA-23)检出率为93.4%,blaIMP检出率为86.8%,Ⅰ类整合子检出率为50.0%,未检出其他耐药基因和Ⅱ类整合子基因。结论我院CRAB的耐药基因以bla_(OXA-23)和blaIMP为主,且Ⅰ类整合子较为流行。     

肠杆菌科产碳青霉烯酶菌株筛选试验方法的研究

目的 评价肠杆菌科产碳青霉烯酶菌株纸片扩散初筛试验与改良Hodge试验的符合性,为基层实验室常规开展产碳青霉烯酶菌株检验提供依据.方法 收集临床分离的34株对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分离株,采用纸片扩散法检测其对厄他培南、亚胺培南、美罗培南的耐药性;通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶.结果 34株临床分离株经纸片扩散法检测对厄他培南为全部耐药;对美罗培南29株耐药,5株敏感;对亚胺培南25株耐药,1株中介,8株敏感.通过改良Hodge试验检测碳青霉烯酶34株菌中有21株阳性;厄他培南、美罗培南、亚胺培南耐药株与Hodge试验阳性株的符合率分别为61.8%、72.4%、80.8%.结论 以亚胺培南作为初筛底物对筛选产碳青霉烯酶菌株的特异度更高,亚胺培南耐药菌株应高度怀疑是产碳青霉烯酶株.