补肾中药对雷公藤多苷所致雄性幼鼠生殖损伤的保护作用及最终生育能力的影响

目的: 探讨雷公藤多苷(glycosides of Tripterygium wilfordii,GTW)对雄性幼鼠生殖损伤和损伤后最终生育能力的影响及补肾中药(菟丝子黄酮、六味地黄丸)的保护作用。方法: ①生殖损伤研究:3~4周龄SD雄性幼鼠48只,随机分为4组:空白组(CMC-Na)、雷公藤多苷组(9 mg·kg^-1·d^-1)单独ig,六味组(六味地黄丸1 g·kg^-1·d^-1＋GTW 9 mg·kg^-1·d^-1),黄酮组(菟丝子黄酮0.1 g·kg^-1·d^-1+GTW 9 mg·kg^-1·d^-1)混合ig,持续12周后,处死取一侧睾丸、附睾立即称质量,计算脏器指数,称重后放入固定液中保存,待观察睾丸组织形态学改变;②生育能力研究:成年大鼠100只,每组25只,分组喂养方法同上,持续12周后,将所有大鼠分笼喂养,每笼1只,按照1:1比例放入成年雌性大鼠1只,分3次合笼,每次合笼时间为15 d,合笼后观察雌鼠受孕率、仔鼠离乳存活率、仔鼠生长发育情况。结果: 雷公藤多苷对睾丸病理组织生精细胞肿胀变性,精原细胞、精母细胞、精子细胞明显减少,菟丝子黄酮、六味地黄丸能明显减轻这种损伤;用药12周后雄性幼鼠体重、睾丸质量、睾丸指数、附睾质量、附睾指数与空白组相比无显著性差异(P＞0.05);每次合笼后受孕率、离乳存活率、幼鼠的生长发育与空白组相比无显著性差异。结论: 雷公藤多苷对雄性幼鼠生殖系统的损伤是可逆的,对睾丸的病理组织损伤是可以恢复的,补肾中药具有保护这种病理组织损伤作用;雷公藤多苷对最终的生育能力没有影响,对幼仔生长发育没有影响。     

菟丝子黄酮干预雷公藤多苷所致雄性幼鼠生殖损伤

目的:研究不同剂量菟丝子黄酮干预雷公藤多苷(GTW)所致雄性幼鼠生殖损伤的影响。方法:雄性SD幼鼠80只,分2批喂养,每批40只。每批随机分为5组,空白组[ig羧甲基纤维素钠(CMC-Na)],多苷组(ig GTW,9 mg·kg~(-1)·d~(-1)),黄酮高、中、低剂量组(ig菟丝子+GTW,0.2 g·kg~(-1)+9 mg·kg~(-1),0.1 g·kg~(-1)+9 mg·kg~(-1),0.05 g·kg~(-1)+9 mg·kg~(-1)),持续给药4,12周,分别在停药时麻醉处死留取睾丸组织,称重检测脏器指数,苏木素伊红(HE)染色观察睾丸组织病理变化,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及免疫印迹法(Western blot)检测雄激素受体(AR)mRNA及蛋白表达。结果:给药4,12周时多苷组大鼠体重、睾丸质量较空白组显著降低(P0.01);黄酮组大鼠体重、睾丸质量较多苷组显著提高(P0.01);黄酮中剂量组大鼠体重、睾丸质量较黄酮高、低剂组明显增高(P0.05)。给药4周时,多苷组大鼠睾丸曲细精管间距变宽、曲细精管扭曲、水肿,严重者曲细精管破裂,间质细胞散乱,精原细胞、精母细胞明显减少,12周时损伤程度更重;黄酮组中剂量上述病理损伤较轻。给药4,12周后,多苷组大鼠睾丸组织AR mRNA及蛋白表达明显下调(P0.05,P0.01),黄酮中剂量可以明显提高大鼠睾丸组织AR mRNA及蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:GTW可以明显降低大鼠体重、睾丸质量;下调睾丸组织AR mRNA及蛋白水平表达;GTW对雄性大鼠睾丸组织有明显的损伤作用,且随剂量的增加和时间延长损伤程度越重;菟丝子黄酮中剂量组保护这种损伤作用更加显著。     

菟丝子黄酮对雷公藤多苷损伤雄性幼鼠睾丸组织凋亡相关蛋白Bcl-2和蛋白Bax表达的影响

目的：研究菟丝子黄酮对雷公藤多苷（GTW）损伤雄性SD幼鼠睾丸组织凋亡相关蛋白蛋白Bcl-2和蛋白Bax的表达的影响。方法：健康3周龄SD雄性幼鼠36只,随机分为三组：空白组、雷公藤多苷组、菟丝子黄酮＋雷公藤多苷组。免疫组化法测定Bcl-2/Bax表达。结果：各实验组Bcl-2蛋白表达：雷公藤多苷组表达最少,与其他各组之间比较（P〈0.05）差异有统计学意义。空白组表达最高,菟丝子组次之,空白组与菟丝子组之间比较（P〉0.05）差异没有统计学意义。各实验组Bax蛋白表达：雷公藤多苷组表达最高,与其他各组之间比较（P〈0.05）差异有统计学意义。空白组表达最少,空白组与菟丝子组之间比较（P〈0.05）差异有统计学意义。结论：菟丝子黄酮能增强雄性幼鼠生育能力,其机制可能是对抗雷公藤多苷所致雄性幼鼠睾丸组织Bcl-2蛋白表达减少和Bax蛋白表达增强。     

雷公藤多苷对青春期大鼠睾丸超微结构及睾酮的影响

目的观察雷公藤多苷对青春期大鼠睾丸组织超微结构及血清睾酮的影响。方法 5周龄雄性SD大鼠32只,随机分为2组,分别给予1%羧甲基纤维素钠6ml.kg-1.d-1和雷公藤多12 mg.kg-1.d-1灌胃4周,停药后24 h每组随机取8只大鼠检测血清睾酮浓度,观察睾丸组织超微结构改变;其余大鼠于停药4周后检测上述各指标。结果停药24 h,两组大鼠血清睾酮浓度无明显差别(P>0.05),雷公藤多苷组少数生精细胞胞质桥分离。停药4周,雷公藤多苷组大鼠血清睾酮水平降低(P<0.05),生精细胞稀少,核空泡样变,胞质桥分离,精子消失,支持细胞间紧密连接分离,曲细精管基膜迂曲、断裂,间质血管内皮细胞增生,血管基膜断裂,血管腔狭窄。结论雷公藤多苷以12 mg.kg-1.d-1剂量用药4周可造成青春期大鼠睾丸组织迟发性损伤,表现为生精细胞减少,支持细胞、血睾屏障受损,并引起血清睾酮含量迟发性降低。     

甘草减轻雷公藤多苷片所致肝损伤的作用机制

目的：探究肝脏药物代谢关键酶细胞色素P4502D6(CYP2D6)、细胞色素P4503A4(CYP3A4)在甘草水提物对急性肝损伤发挥保护作用的分子机制。方法：将健康雄性昆明种小鼠分为正常组、模型组、甘草水提物低、中、高剂量组(5、10、15 g·kg^-1·d^-1)及阳性药甘草酸二铵组(75 mg·kg^-1·d^-1),每组10只。以预防给药1周后采用雷公藤多苷片270 mg·kg^-1单次灌胃诱导急性肝损伤模型,作用18 h后采集样本。采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化;生化法检测血清中肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)和总胆红素(TBIL)的含量及肝细胞氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肝脏药物代谢关键酶CYP2D6、CYP3A4的mRNA及蛋白表达...     

菟丝子黄精颗粒剂对雷公藤多苷所致生殖损伤雌鼠卵巢损伤及smad4 mRNA表达的影响

目的 研究雷公藤多苷(GTW)对卵巢组织smad4 mRNA表达的影响以及菟丝子与黄精的干预作用.方法 采用4周龄SD雌鼠,将实验大鼠据体质量随机分3组,分别为空白对照组、GTW组、干预组,连续灌胃12周后处死动物检测指标.结果 GTW组卵巢次级卵泡数值最小,与空白组间差异有统计学意义(P＜0.05),与干预组间差异也有统计学意义(P＜0.01),空白组与干预组间差异没有统计学意义(P＞0.05);黄体数比较各组间差异没有统计学意义(P＞0.05).GTW组smad4 mRNA表达与空白组间差异有统计学意义(P＜0.01),与干预组间差异也有统计学意义(P＜0.05);空白组与干预组间差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 雌性幼鼠服用雷公藤多苷可造成卵巢组织病理改变,其中smad4 mRNA表达的下降可能是GTW导致雌性生殖损伤的关键点之一.中药菟丝子、黄精可以促进该过程的修复.     

补肾益精丸对雷公藤多苷诱导睾丸支持细胞损伤的影响

目的:探讨补肾益精丸干预雷公藤多苷诱导睾丸支持细胞损伤的作用机制。方法:将36只SD大鼠按体质量随机分为无药血清组、雷公藤多苷组和补肾益精丸组,每组各12只,制备含药血清。体外培养小鼠睾丸支持细胞,取对数生长期细胞分为空白对照组、无药血清组、雷公藤多苷组和补肾益精丸组,每组4孔。血清干预后采用MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞周期。结果:补肾益精丸组细胞增殖率高于雷公藤多苷组,差异具有统计学意义(P <0. 05),补肾益精丸组细胞增殖率与空白对照组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。与空白对照组比较,无药血清组及雷公藤多苷组G1期细胞数增多,S期细胞数减少;补肾益精丸组与雷公藤多苷组比较,S期细胞数增多。结论:雷公藤多苷对睾丸支持细胞的增殖具有抑制作用,主要作用于细胞G1期及S期。补肾益精丸可有效拮抗雷公藤多苷对睾丸支持细胞的损伤。     

淫羊藿苷对雷公藤多苷模型小鼠睾丸病理损伤的影响

目的:探讨淫羊藿苷对雷公藤多苷模型小鼠睾丸病理损伤的影响.方法:应用雷公藤多苷所致的睾丸生精障碍小鼠模型,观察淫羊藿苷对小鼠睾丸病理形态学的影响.结果:模型组小鼠睾丸组织可见明显的病理损伤;淫羊藿苷治疗组小鼠睾丸生精小管管壁较厚,细胞层次较宽,各级生精细胞排列较规则,基底面至腔面可见精原细胞、初级精母细胞、精子细胞等各个发育阶段的细胞,细胞增殖旺盛,可见到较多分裂期细胞,腔内可见成熟精子,间质稀少,血管丰富,间质细胞发育良好.结论:淫羊藿苷具有拮抗雷公藤多苷睾丸病理损伤的作用.     

电针对中老年部分雄激素缺乏综合征雄性大鼠睾丸细胞色素P 450侧链裂解酶及17 β-羟基类固醇脱氢酶3表达的影响

目的:观察中老年部分雄激素缺乏综合征(partial androgen deficiency of aging male,PADAM)雄性大鼠睾丸细胞色素P 450侧链裂解酶(cytochrome P 450side chain cleavage,P 450scc)及17β-羟基类固醇脱氢酶3(17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3,17β-HSD3)的表达及电针干预对其表达的影响,探讨电针治疗PADAM的可能作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组和电针组,每组10只,腹腔注射环磷酰胺复制PADAM模型。电针组取"肾俞""关元",每日治疗1次,每次15min,连续治疗8周。治疗前后观察大鼠悬尾时间和强迫游泳时间,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清总睾酮(total testosterone,TT)、游离睾酮(free testosterone,FT)水平,免疫组织化学法、免疫印迹法和逆转录聚合酶链反应法检测大鼠睾丸P 450scc和17β-HSD3蛋白及mRNA的表达。结果:治疗前,模型组与正常组比较,悬尾不动时间延长,强迫游泳力竭时间缩短(P0.05);治疗后,电针组悬尾不动时间短于模型组而强迫游泳力竭时间长于模型组(P0.01)。与正常组相比,模型组大鼠血清TT、FT水平,睾丸P 450scc和17β-HSD3蛋白和mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组相比,电针组血清TT、FT水平,睾丸P 450scc和17β-HSD3蛋白和mRNA表达显著升高(P0.01)。结论:电针可能通过调节睾酮合成限速酶P 450scc和17β-HSD3蛋白和mRNA的表达,从而促进睾酮的合成和分泌。这可能是电针治疗PADAM的作用机制之一。     

雷公藤多苷对小鼠生殖功能的影响及肉苁蓉的干预作用

目的 观察雷公藤多苷（GTW）对小鼠生殖功能的影响及肉苁蓉预防生殖毒性的作用。方法将雄性小鼠随机分为空白对照组、GTW组、肉苁蓉组、停药组。空白组灌胃1％羧甲基纤维素（CMC）溶液;GTW组灌胃GTW混悬液;肉苁蓉组灌胃GTW混悬液共20d,第28天起同时灌胃肉苁蓉水煎剂加GTW混悬液;停药组灌胃GTW混悬液共20d,第28天起改为灌胃1％CMC溶液。各组灌胃20d后与雌鼠以1：2比例合笼;第28天起分笼继续给药,于48d后再次合笼。观察两次合笼雌鼠受孕率及雄鼠睾酮水平的变化。结果随着雷公藤多苷给药时间的延长,雌鼠受孕率呈下降趋势,雄鼠睾酮水平亦呈减低的变化趋势。肉苁蓉干预后,受孕率由15％上升到35％;停药组受孕率由10％上升到30％,与GTW组比较有显著性差异（P〈0．01）,与空白组比较无统计学差异（P〉0．05）。结论GTW对雄性小鼠的生殖毒性呈时间依赖性,停用后可自行恢复;肉苁蓉可以改善GTW对雄鼠生殖系统的抑制作用。