反向间接夹心ELISA法检测柯萨奇B组病毒的方法

建立反向间接夹心ＥＬＩＳＡ法，检测可疑为柯萨奇Ｂ组病毒性心肌炎患者血清中病毒特异性ＩｇＭ抗体，在对临床诊断为病毒性心肌炎的患者中，柯萨奇病毒ＩｇＭ抗体阳性率为２７％，结果说明该法在早期诊断病毒性心肌炎方面具有一定的价值。     

应用合成肽检测病毒性心肌炎患者血清中柯萨奇B组病毒抗体

目的研究应用合成肽代替完整病毒检测柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）抗体及其在病毒性心肌炎（ＶＭＣ）病因诊断中的作用。方法从ＣＶＢ衣壳蛋白ＶＰ１及ＶＰ３的保守区及ＣＶＢ３衣壳蛋白ＶＰ２的非保守区各选出一段多肽（分别称为ＶＰ１－１肽、ＶＰ３－１肽、ＶＰ２－１肽）进行化学合成,应用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测这几条多肽与型特异性ＣＶＢ１～６抗体的结合反应。以ＶＰ１－１肽、ＶＰ３－１肽作包被抗原,用间接ＥＬＩＳＡ检测患者血清中ＣＶＢＩｇＧ及ＶＣＢＩｇＭ抗体。结果ＶＰ１－１肽和ＶＰ３－１肽与型特异性ＣＶＢ１～６抗体均有良好的结合反应。８５例健康人、６７例急性ＶＭＣ、３９例慢性ＶＭＣ患者血清ＣＶＢＩｇＧ阳性率分别为２３．５％、５３．７％、３８．５％,ＣＶＢＩｇＭ阳性率分别为７．１％、４９．３％、２８．２％。ＣＶＢＩｇＭ抗体与中和抗体检测结果之间有良好的相关性（Ｐ＜０．００１）,阳性率无明显差别（Ｐ＞０．０５）。结论应用合成肽抗原检测ＣＶＢＩｇＭ抗体有较好的敏感性和特异性。     

小儿病毒性心肌炎柯萨奇病毒B组特异性IgM检测及临床意义

应用间接ＥＵＳＡ法测定９６例小儿病毒性心肌炎柯萨奇病毒Ｅ特异性ＩｇＭ（ＣＶＢ。－ＩＭ牡）。结果阳性３０例，总阳性率３１．３％：１９例健康儿中有１例阳性，阳性率５．３％，两者比较差异有显著意义（ｘ＝４，２０，Ｐ＜０．０５）病程＜２月者阳性率为４２．４％（２８／６６例）．病程２～６月者阳性率为７．７（１／１３例），病程＞６月者阳性率为５．９％（１／１７例）．后两组与病程＜２月组比较差异均显著（分别为４，９．６．６１，Ｐ均＜（０．０５）。提示ＣＶＢ－ＩＭ测定对小儿病毒性心肌炎病原学的早期诊断有临床意义     

柯萨奇病毒B3致病毒性心肌炎动物模型的建立

病毒性心肌炎的治疗一直是临床工作者非常关注的问题[1].建立一个稳定而可靠的病毒性心肌炎动物模型,对治疗心肌炎的药物筛选及药效研究是必不可少的,心肌炎动物模型可以提供明确的病原,进行全面的心肌病理检查,适用于临床与基础研究.我们在观察各种药物治疗柯萨奇病毒(CVB3)模型鼠的作用中(另文报告),首先进行了CVB3的致病模型研究,现报告如下.     

柯萨奇病毒B致神经系统病变11例

探讨柯萨奇Ｂ组病毒引进的神经系统病变的临床特征。方法；采用酶联免疫吸附试验，用ＣＶ１－６Ｂ型抗原分别测定２４例患者血清中ＩｇＭ，ＩｇＧ抗体。结果：２４例患者中用ＣＶＢ感染者１１例，占４５．８％，其中脑膜炎５例，脑炎３例，痛性眼肌麻痹，病毒性肌无力，单纯性头痛各１例。     

柯萨奇病毒B组3型疫苗研究进展

柯萨奇病毒B组3型（coxsackie virus B3,CVB3）属于小核糖核酸病毒科（picornaviridae）,肠道病毒属（enterovirus）,通常感染后会使人出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状,但也可导致新生儿、婴幼儿以及免疫缺陷的成人出现严重的心脏、胰腺及中枢神经系统症状[1]。根据美国疾病预防控制中心（CDC）统计数据发现,     

免疫-PCR法检测柯萨奇病毒B组抗原的实验研究

目的：建立免疫－PCR法,对分离培养和柯萨奇B组病毒（CoxB)毒株及临床可疑为CoxB感染的血清标本进行检测。方法：以间日疟原虫SSUrRNA基因为指示分子,采用生物系进行末端标记,利用酶联免疫吸附试验（ELISA）和PCR原理,建立免疫－PCR法,并对60份临床标本进行检测。结果：该方法具有较高敏感性和特异性,其敏感性是ELISA法的3000倍,也高出RT－PCR法10倍。结论：免疫－PCR法是检测CoxB抗原的敏感而特异的方法,为CoxB的临床早期快速鉴定和流行病学研究等提供了一种新的微量抗原检测手段。     

柯萨奇病毒B1/B3型二价VP1基因疫苗的构建及其免疫试验

目的 构建柯萨病毒（CV）B1／B3型二价VP1免疫质粒,并探讨其免疫原性。方法 通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术扩增CVB1的主要中和抗原VP1基因,将分别由CMV和SV40启动子控制的 CVB1和CVB 3的VP1基因反向串联插入到真核表达载体pCR3-Uni中。将该质料一转染鼠NIH3T3细胞,于转染后24、48、96h进行免疫荧光及RT－PCR检测,应用重组质粒免疫BALB／c小鼠,于免疫前、免疫后2 、4、6周分别断尾采血,用ELISA方法检测CVB特异性抗体。结果 获得了含有CVB1和CVB3的VP1南粒,RT－PCR及免疫荧光检测结果表明该质粒在NIH3T3细胞获得瞬时表达,小鼠免疫后4、6周均有特异性抗体产生。结论 本研究构建的CVB1／B3型二价VP1基因疫苗能诱导小鼠产生CVB特异性抗体,可以作为候选基因疫苗。     

心肌梗塞患者柯萨奇B病毒循环免疫复合物分析

我们对临床诊断为急性心肌梗塞的60例病人,进行了血清循环免疫复合物(CIC)测定,阳性率为47％,并与恢复期病人做了CIC的动态比较,结果为急性期显著高于恢复期(P<0.05),恢复期与正常人无明显差异(P>0.05)。我们又对CIC的组成进行了分析,证明CIC中的抗原有36％为柯萨奇B病毒(CoxBV),抗体28.5％为抗CoxBV的IgM,21.4％为抗CoxBV的IgG,有7％CIC可同时检测出上述两种抗体。     

新生儿柯萨奇B＿3病毒性心肌炎及其病原学检测

１９９２年北京市某医院发生一次新生儿柯萨奇Ｂ３病毒感染流行，发病３５例，合并病毒性心肌炎８例，２例死亡，尸解病理诊断为急性弥漫性非化脓性心肌炎。为明确病原学诊断，用ＥＬＩＳＡ测患儿血中柯萨奇Ｂ病毒抗体ＩｇＭ；用ＰＣＲ测患儿血及心肌组织中的肠道病毒（包括柯萨奇病毒）ＲＮＡ；用大便及咽拭子分泌物进行病毒分离，证实此次流行的病原为柯萨奇病毒Ｂ３。认为ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ方法快速、敏感、特异强，可推广应用。     

THE INHIBITORY EFFECT OF ASTRAGALUS MEMBRANACEUS ON COXSACKIE B-3 VIRUS RNA REPLICATION

Using mice infected with coxsackie B-3 virus (CVB3) as a viral myocarditis model,we observed the inhibitory effect of Astragalus membranaceus (AM) on CVB3-RNA replication in myocardial tissue of mice by RNA-RNA in situ hybridization with negative-strand RNA probes labelled with ^35S and quantitative imaging analysis of positive signals.The mechanism of its effect on CVB3-RNA replication has been inves-tigated by detection of beta-interferon (β-IFN) as well.Results showed that the copy numbers of CVB3-RNA as well as the histologic scores (necrosis) in myocardial tissues of infected-AM treated mice were sig-nificantly lower than those in infected and normal saline treated mice,suggesting that AM could inhibit the replication of CVB3-RNA,but its effect on CVB3-RNA replication had no correlation with induction of β-IFN.     

心安颗粒体外抗柯萨奇病毒的药效学试验研究

目的：测定心安颗粒对柯萨奇病毒（CVB3）的体外抗病毒活性作用。方法：采用细胞培养法。结果：心安颗粒浸膏的浓度在15.5mg/ml时,若先作用于Hela细胞2小时后,再感染CVB3,可以保护Hela细胞免受病理损伤。若Hela细胞先感染CVB32小时后,再上药物,则31mg/ml的心安颗粒浸膏液可以保护Hela细胞。结论：心安颗粒用于预防CVB3的感染有较好的效果。     

比较硒、钼与硒钼合用对柯萨奇B_3病毒在心肌细胞内复制的影响

作者利用体外培养新生SD大鼠心肌细胞的方法,并控制营养液中硒、钼含量各为10ppm及硒-钼合用,比较各组对柯萨奇B_3病毒复制的影响。结果表明,Se、Mo均有一定的抑制病毒在细胞内复制作用和保护心肌细胞的存活作用。Se、Mo合用确有协同作用。     

黄芪皂甙对CVB_3病毒引起Vero细胞凋亡的研究

目的：细胞水平上建立病毒性心肌炎（Viral Myocarditis,VMC）模型,通过相关实验得出黄芪皂甙（total extract astragalus,TEA）具有抗病毒能力,进一步明确VMC发病过程中是否存在细胞凋亡以及黄芪皂甙是否能够抑制细胞凋亡。方法：体外培养Vero细胞和出生1-3 d乳鼠心肌细胞,通过细胞病变抑制实验、病毒繁殖抑制实验测定黄芪皂甙抗病毒能力,采用AnnexinV-FITC染色观察VMC发病过程中心肌细胞是否有凋亡,采用流式细胞仪检测TEA是否抑制细胞凋亡。结果：通过MTT染色分析发现TEA可有效保护细胞免受CVB3病毒侵袭,病毒繁殖抑制实验显示中、高剂量组TCID50比病毒组相差一个以上对数值,且TEA对细胞凋亡有抑制作用。结论：实验证实黄芪皂甙对心肌细胞有一定的保护作用,并且在VMC发病过程中存在细胞凋亡,且TEA能抑制心肌细胞凋亡。     

病毒性心肌炎柯萨奇病毒B特异性IgM的临床观察

用间接酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）测定１３４例病毒性心肌炎患儿的柯萨奇病毒Ｂ（ＣＶＢ）特异性ＩｇＭ。其中阳性５８例总阳性率为４３．３５％以正常血清３０做对照，仅１例为阳性，占３．２％。两者比较，有显著差异性。病程早期（半月内）阳性率较高，病程超过８周者２７便，阳性检出率４０．３％，阳性检出机会仍然较多，提示ＣＶＢ在病毒感染的心肌中是主要的病原。临床检测特异性ＩｇＭ不仅有早期病原学诊断意义，并能观     

基因疫苗干预对感染小鼠心肌组织病理及超微结构的影响

目的 探讨基因疫苗干预对柯萨奇病毒B组3型(coxsackie virus group B type 3,CVB3)感染后,小鼠心肌组织病理及细胞超微结构的变化及意义.方法 将BALB/C小鼠随机分为3组,每组11只,用空质粒pcDNA3、基因疫苗pcDNA3/VP1和融合基因疫苗pcDNA3/MDC-L19-VP1分别免疫,共3次,每次间隔4周.末次免疫后第3周,每组随机取3只小鼠,腹腔注射含3倍半数致死量(3 half lethal dose,3LD50) 的CVB3病毒液,感染后第7天将小鼠处死,用于检测血中病毒滴度,并取心脏组织进行病理观察和细胞超微结构观察.每组剩余8只小鼠,腹腔注射致死量病毒液,观察并记录动物存活情况.结果 预防性接种重组基因疫苗后,CVB3感染的小鼠生存率pcDNA3/MDC-L19-VP1组为37.5%,pcDNA3/VP1组12.5%,pcDNA3组11 d内全部死亡,3组生存率比较差异有统计学意义(P<0.01);3组小鼠血中的病毒滴度依次降低,且差异有统计学意义(P<0.01);光镜观察显示pcDNA3/MDC-L19-VP1 组小鼠心肌组织细胞未出现严重的水肿和炎细胞浸润,电镜显示心肌细胞未出现核周水肿,肌原纤维未见断裂溶解,线粒体、肌浆网等细胞器未见明显异常,仅有少量炎性细胞浸润.结论 融合基因重组疫苗可以有效的预防CVB3感染对心肌的损伤.     

糖皮质激素对柯萨奇B3病毒感染小鼠免疫状态的调控

目的:研究病毒性心肌炎时应用糖皮质激素治疗对机体免疫指标的调控作用.方法:将240只4周龄Balb/c小鼠随机分为6组,每组40只,包括正常对照组、激素对照组、病毒对照组、早期激素治疗组、中期激素治疗组和晚期激素治疗组.正常对照组每只小鼠腹腔接种0.1 ml不含病毒的Eagle液,其他组每只小鼠均腹腔接种0.1 ml 107.5TCID50/ml的柯萨奇B3(CVB3)病毒液.正常及病毒对照组小鼠均予以生理盐水0.2 ml灌胃,激素治疗组小鼠分别在感染病毒后不同时期给予泼尼松1 mg/kg,灌胃给药10 d.采用膜联蛋白V(Annexin V)联合碘化丙啶(PI)染色双参数技术,即Annexin V/PI法,通过流式细胞术定量检测各组小鼠外周血、胸腺、脾脏淋巴细胞的凋亡,应用流式细胞仪自动细胞计数法测定外周血及脾脏T淋巴细胞亚群CD 3、CD 4、CD 8.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗心磷脂抗体(ACA).结果:正常小鼠外周血、胸腺、脾脏有少量淋巴细胞凋亡,短期服用激素不升高淋巴细胞凋亡率;病毒性心肌炎小鼠淋巴细胞凋亡增加,应用激素治疗可诱导活化淋巴细胞凋亡,减少其对心肌细胞的浸润.病毒性心肌炎小鼠外周血CD 3、CD 4、CD 8下降与应用激素治疗的心肌炎小鼠CD 3、CD 4、CD 8下降无显著性差异.正常小鼠抗心磷脂抗体阳性率很低,病毒性心肌炎小鼠ACA阳性率升高,早期及中期应用激素可降低ACA阳性率.结论:病毒性心肌炎应用激素治疗对细胞免疫功能无严重不良影响,还可明显抑制细胞毒T淋巴细胞对心肌的损害作用以及降低自身免疫应答.