骨桥蛋白在黑素瘤中的表达

目的研究骨桥蛋白(OPN)的表达与黑素瘤浸润、转移的关系。方法采用免疫组化SP法检测OPN在黑素瘤(30例)、黑素细胞痣(30例)、正常皮肤组织(15例)以及在黑素瘤A375细胞株和不同浓度乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染的裸鼠黑素瘤移植瘤中的表达。结果 OPN在黑素瘤、黑素细胞痣及正常皮肤组织中阳性表达率分别为86.67%(26/30),13.33%(4/30)和0(0/15),黑素瘤组与黑素细胞痣组及正常皮肤组OPN的阳性表达率比较差异有统计学意义(P=0.000)。3种不同浓度的乙酰肝素酶反义寡核苷酸在转染的裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中表达表现出不同程度的抑制作用,30μmol/L实验组的抑制作用最强。OPN在人黑素瘤A375细胞株中呈强阳性表达。结论 OPN在黑素瘤中的表达明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达;乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠体内黑素瘤移植瘤中OPN的表达有显著抑制作用;OPN在A375细胞株中呈强阳性表达。     

乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达

目的探讨乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达及意义。方法选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、恶性黑素瘤A375细胞株及15例正常皮肤组织,分别采用原位杂交、免疫组化法检测皮损及细胞株中乙酰肝素酶mRNA及蛋白的表达。结果A375细胞株及19例(19/30,63.33%)恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶mRNA呈阳性表达,2例(2/30,6.67%)黑素细胞痣皮损中乙酰肝素酶mRNA表达阳性,正常皮肤组织中无1例呈阳性表达;恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常对照组相比,差异均有显著性意义(χ12=19.200,P=0.000;χ22=25.714,P=0.000)。乙酰肝素酶蛋白在恶性黑素瘤、恶性黑素瘤A375细胞株、黑素细胞痣及正常皮肤组织的表达情况与mRNA相一致。结论乙酰肝素酶mRNA和蛋白的高表达可能与恶性黑素瘤的发生发展有关,有望作为治疗黑素瘤的靶点。     

乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制剂2在恶性黑素瘤的表达

【摘要】 目的 探讨乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶2（MMP2）和金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP2）蛋白在恶性黑素瘤皮损中的表达及意义。方法 选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、正常皮肤组织15例,分别采用免疫组化SP法检测皮损中乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白的表达。结果 恶性黑素瘤皮损乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 21.172,P < 0.01;χ22 = 27.805,P < 0.01）。恶性黑素瘤皮损MMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 19.817,P < 0.01;χ22 = 19.866,P < 0.01）。恶性黑素瘤皮损TIMP2蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常皮肤组织相比,差异均有统计学意义（χ21 = 19.200,P < 0.01;χ22 = 15.000,P < 0.01）。结论 乙酰肝素酶、MMP2和TIMP2蛋白在恶性黑素瘤中的表达水平明显高于其在黑素细胞痣和正常皮肤中的表达水平。     

色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中色素上皮衍生因子的表达

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)在色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测正常人皮肤组织、正常人色素痣以及恶性黑素瘤组织中PEDF的表达与分布.用蛋白印迹法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF的表达与分布.用RTPCR法检测正常黑素细胞及A375中PEDF mRNA的表达.结果 ①PEDF在正常皮肤组织、正常人色素痣及恶性黑素瘤组织中的表达逐渐降低,三组间差异有统计学意义(P<0.05).②PEDF在正常黑素细胞中表达,而在恶性黑素瘤细胞株缺失.③PEDF mRNA在恶性黑素瘤细胞中的表达量明显低于正常黑素细胞.结论 PEDF的表达降低在恶性黑素瘤的发病机制中可能起一定作用.     

乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-9蛋白在皮肤黑素瘤中的表达

目的探讨乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-9蛋白在皮肤黑素瘤中的表达及其意义。方法应用免疫组化S-P法检测乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-9蛋白在皮肤黑素瘤30例、交界痣30例及15例正常皮肤组织中的表达。结果皮肤黑素瘤中乙酰肝素酶(63.3%)和基质金属蛋白酶-9蛋白(73.3%)的阳性表达率明显高于交界痣(6.6%)和正常对照组(0)(P均<0.05),交界痣与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙酰肝素酶和基质金属蛋白酶-9蛋白的高表达可能与皮肤黑素瘤的发生发展有关,有望作为治疗黑素瘤的靶点。     

恶性黑素瘤中T-钙粘蛋白的表达

目的:探讨恶性黑素瘤组织中T-钙粘蛋白(T-cadherin)的表达.方法:采用免疫组化SP法对18例恶性黑素瘤组织标本和40例皮肤色素痣组织标本及同一标本的正常表皮、黑素瘤细胞系M14和A375进行T-cadherin的检测.结果:正常表皮均表达T-cadherin,恶性黑素瘤组织中11.1%检测到T-cadherin,皮肤色素痣组织中97.5%检测到T-cadherin(P<0.001),差异有统计学意义;黑素瘤细胞系M14、A375中T-cadherin均呈弱阳性表达.结论:T-cadherin在恶性黑素瘤组织、细胞的表达明显降低或缺失,提示T-cadherin在皮肤恶性黑素瘤的发生、发展中可能起重要作用.     

MMP-2,MMP-9和E-cadherin在皮肤恶性黑素瘤中的表达及意义

目的检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)在皮肤恶性黑素瘤中的表达及在肿瘤侵袭转移过程中的作用。方法采用免疫组化SP法检测MMP-2、MMP-9和E-cadherin在32例恶性黑素瘤及10例色素痣中的表达。结果 MMP-2与MMP-9在恶性黑素瘤中阳性表达率分别为93.75%和87.50%,均明显高于色素痣,组间差异有统计学意义(P0.01,P0.01);MMP-2与MMP-9在有淋巴结转移者中阳性表达率均高于无淋巴结转移者(P0.05,P0.01)。E-cadherin在恶性黑素瘤中阳性表达率为21.88%,明显低于色素痣,组间差异有统计学意义(P0.01);E-cadherin在有淋巴结转移者中阳性表达率低于无淋巴结转移者(P0.05)。结论 MMP-2、MMP-9在恶性黑素瘤中均呈高表达,E-cadherin却高表达于色素痣,对它们的检测可能成为预测恶性黑素瘤转移和预后的重要指标。     

黄种人与白种人正常皮肤痣和黑素瘤组织中优黑素和褐黑素含量比较

目的比较一组黄种人和白种人正常和异常皮肤组织中褐黑素和优黑素含量.方法采用高效液相色谱(HPLC)分析黄种人和白种人痣细胞痣、白种人发育不良性黑素细胞痣、恶性黑素瘤组织中优黑素和褐黑素含量.正常对照为痣周围皮肤组织.结果黄种人正常皮肤和痣细胞痣组织中优黑素含量明显高于相应白种人皮肤组织(P＜0.01,P＜0.05);而褐黑素含量则明显低于白种人皮肤组织(P＜0.01,P＜0.01).本文进一步显示在白种人发育不良性黑素细胞痣、恶性黑素瘤组织中褐黑素含量明显增高.结论进一步研究优黑素和褐黑素在黑素瘤发生中的作用似有必要.     

恶性黑素瘤的端粒酶活性研究

目的检测恶性黑素瘤标本中的端粒酶活性,探讨端粒酶在黑素瘤发生机制中的作用。方法采用聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定法(PCR-ELISA),对黑素瘤标本进行端粒酶的定性和定量分析。结果90.0％的原发性黑素瘤和100％的转移性黑素瘤显示端粒酶阳性,仅14.3％的黑素细胞痣呈阳性,而正常皮肤中均为阴性。转移性黑素瘤、原发性黑素瘤、黑素细胞痣和正常皮肤的端粒酶活性水平的平均A值分别为0.729、0.405、0.118和0.044。各组端粒酶活性A值之间经统计学分析差异有显著性。结论大部分恶性黑素瘤患者中存在高水平的端粒酶活性,提示端粒酶可能在黑素瘤的发生机制中起重要作用,对黑素瘤的诊断有一定的临床意义。     

恶性黑素瘤血管内皮细胞生长因子和nm23抑癌基因蛋白表达及微血管密度的研究

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)、nm23抑癌基因和微血管密度(MVD)与恶性黑素瘤发病的关系。方法 采用免疫组化法检测47例恶性黑素瘤和10例黑素细胞痣组织中VEGF、nm23和CD34的表达并计算其MVD。结果 恶性黑素瘤VEGF阳性表达率和MVD值均明显高于黑素细胞痣(P均<0.01),有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P值分别<0.05和<0.01);随着浸润深度增加,Ⅰ级与Ⅳ、Ⅴ级恶性黑素瘤比较,VEGF阳性表达率和MVD值差异均有统计学意义(P值分别<0.05和<0.01)。恶性黑素瘤中nm23阳性表达率明显低于黑素细胞痣(P<0.01),有淋巴结转移者明显低于无淋巴结转移者(P<0.01),与临床分型和浸润深度无明显关系。结论 VEGF和nm23表达在恶性黑素瘤的发展和转移中起重要作用。     

基质金属蛋白酶7在恶性黑素瘤中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶7（MMP7）的表达与恶性黑素瘤浸润、转移的关系。方法 采用免疫组化SP法研究MMP7在恶性黑素瘤（30例）、交界痣（30例）、正常人皮肤（15例）组织中的表达，并观察其在恶性黑素瘤A375细胞株和不同浓度乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染的裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中的表达情况。结果 MMP7在恶性黑素瘤组、交界痣组及正常人皮肤组中的阳性表达率分别为83.33%（25/30）、6.67%（2/30）和0，恶性黑素瘤组与交界痣组MMP7的阳性表达率比较，χ2 = 35.62，P < 0.01；交界痣组与正常人皮肤组比较，差异无统计学意义。10、20、30 μmol/L乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤MMP7表达表现出不同程度的抑制作用，30 μmol/L组的抑制作用最强，与其他2个组相比，差异均有统计学意义（P < 0.05）。MMP7在A375细胞株中呈强阳性表达。结论 MMP7在恶性黑素瘤中的表达明显高于其在交界痣和正常人皮肤；乙酰肝素酶反义寡核苷酸对裸鼠体内恶性黑素瘤移植瘤中MMP7的表达有显著抑制效应；MMP7在A375细胞株中呈强阳性表达。     

错配修复基因hMLH_1和hMSH_2蛋白在正常皮肤黑素细胞痣和皮肤恶性黑素瘤中的检测

目的检测DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白在正常皮肤、黑素细胞痣和皮肤恶性黑素瘤(CMM)中的水平,探讨其在皮肤黑素瘤发生、发展中的可能作用。方法用免疫组化SP法检测20例正常皮肤、30例黑素细胞痣和57例原发性CMM中hMLH1和hMSH2蛋白的水平。结果①正常皮肤的表皮、皮肤附属器和黑素细胞痣的细胞核中,hMLH1和hMSH2蛋白强阳性,这两种蛋白在正常皮肤和黑素细胞痣无显著性差异(P>0.05);②在57例CMM中,hMLH1蛋白阳性35例(61.40%),hMSH2蛋白阳性32例(56.14%),这两种错配修复蛋白在CMM中的阳性率和阳性强度显著低于其在正常皮肤和黑素细胞痣中的水平(P均<0.005);③在CMM中,随Clark分级升高,hMLH1和hMSH2蛋白的阳性率和阳性强度逐渐降低。结论错配修复基因hMLH1和hMSH2蛋白在维护正常皮肤和皮肤附属器细胞基因组稳定性中可能发挥了重要作用,其异常可能参与了CMM发生和发展的过程。     

Upregulation of S100P,receptor for advanced glycation end products and ezrin in malignant melanoma

S100P is a member of the S100 family. Increased levels of S100P have been documented in various malignancies. Binding of extracellular S100P to receptor for advanced glycation end products (RAGE) or coupling of intracellular S100P with a cytoskeletal protein, ezrin, play a crucial role in tumor growth, invasion and metastasis. However, little is known about the expression of S100P, RAGE and ezrin in malignant melanoma. We immunostained these three molecules in 20 primary and 20 metastatic melanomas. Samples of 20 benign nevus pigmentosus and 10 of normal skin were tested as controls. The expression levels (percentage of positively stained cells) of S100P, RAGE and ezrin were significantly higher in melanomas than in nevus pigmentosus. Moreover, slightly but significantly higher expression levels were observed in metastatic than in primary melanomas. Significant positive correlations were evident between the expression levels of S100P and RAGE, S100P and ezrin, and RAGE and ezrin, respectively. In conclusion, the coordinate upregulation of S100P, RAGE and ezrin may possibly facilitate malignant transformation of melanoma.     

Melanocytes express 3G5 surface antigen

The 3G5-reactive ganglioside antigen (3G5 antigen) is expressed on the surface of various cell types including pericytes, pancreatic islet cells, thyroid follicular cells, and cells of the pituitary and the adrenal medulla. Expression on melanocytes has not yet been reported. We examined 148 5-microm cryosections of 12 normal skin samples and 45 skin tumors (21 melanocytic nevi, 8 malignant melanoma primaries, 4 metastases of malignant melanoma, 3 basal cell carcinomas, and 9 pigmented seborrheic keratoses) by triple fluorescence technique with the monoclonal antibody 3G5, DNA fluorochrome, and the anti-melanocytic antibody A103 (Anti-Melan-A). In normal skin, 3G5 reactivity was detected in epidermal melanocytes of 4 of 12 cases with 14.8 +/- 24.1% positive melanocytes; 20 of 21 nevi (72.2 +/- 29.1% positive nevus cells, mean +/- SD), 8 of 8 primary melanomas (83.9 +/- 12.3% positive melanoma cells), and 4 of 4 melanoma metastases (82.5 +/- 6.5% positive melanoma cells) expressed the 3G5 antigen. All tumor cells of investigated basal cell carcinoma or seborrheic keratosis were 3G5 negative. This is the first report of 3G5 antigen expression in melanocytes. The data demonstrate high expression of this ganglioside in the aggregated melanocytes of malignant or benign tumors but low or absent expression in singular melanocytes (normal epidermis, seborrheic keratoses) reflecting a different biologic state.     

Nerve growth and expression of receptors for nerve growth factor in tumors of melanocyte origin.

Nerve growth factor (NGF) stimulates growth and differentiation of sensory and sympathetic neurons. It is not known what role NGF plays in melanoma development, but nevus and malignant melanoma cells express NGF-receptor (NGF-R). We counted nerve fibers within melanocytic nevi, primary cutaneous melanomas, and cutaneous melanoma metastases using a monoclonal antibody (MoAb) as marker against a 200-kD glycoprotein that is expressed on human nerves. The expression of NGF-R was studied in serial cryostat sections using a MoAb against the NGF-R. Compared to normal skin, increased numbers of nerve fibers were found in 72 melanocytic nevi. In congenital nevi their number significantly increased with age. In 47 primary cutaneous melanomas the number of nerve fibers decreased in proportion to tumor thickness. In 33 cutaneous melanoma metastases no accumulation of nerve fibers was found. NGF-R was not expressed in normal skin melanocytes and in the majority of nevus cells in melanocytic nevi. Considerable numbers of NGF-R-positive nervus cells were found only in some congenital nevi and few acquired nevi with dysplastic features. By contrast, in primary and metastatic melanomas higher expression of NGF-R was observed. The increased number of nerve fibers in melanocytic nevi suggests that neurite-promoting factors are produced in situ. Production of such factors appears to be lost in malignant melanoma cells. The finding of an inverse correlation between an abundance of nerve fibers in NGF-R-poor nevi and a high expression of NGF-R in melanomas that show no evidence of nerve growth suggest a role of NGF and its receptor in malignant melanocytic tumors.     

恶性黑素瘤Survivin和C-erbB-2的检测及其意义

目的检测恶性黑素瘤的Survivin和CerbB2及其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化SP法检测72例恶性黑素瘤、61例瘤旁组织、22例黑色素细胞痣和20例正常皮肤组织中Survivin和CerbB2蛋白。结果恶性黑素瘤Survivin蛋白阳性率为59.7%,明显高于瘤旁组织3.3%,黑色素细胞痣4.5%和正常皮肤组织0%(P均<0.01)。Survivin阳性与转移状况和组织学分级有显著相关性。恶性黑素瘤无转移组和Ⅰ级分别明显低于转移组和Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ级(P均<0.05)。恶性黑素瘤CerbB2蛋白阳性率为68.1%,明显高于瘤旁组织8.3%,黑色素细胞痣5.6%和正常皮肤组织2.8%(P均<0.01),CerbB2阳性与临床病理特征无明显相关性。Survivin在CerbB2阳性和阴性患者中阳性率分别为69.4%和39.1%,两者间有显著性差异(P<0.05)。结论Survivin和CerbB2蛋白在恶性黑素瘤组织中水平上调,提示两者对恶性黑素瘤发生发展起重要作用。恶性黑素瘤中Survivin蛋白水平与肿瘤转移和组织学分级有关,Survivin可能为临床判断恶性黑素瘤转移和评估预后的有用指标。