蒿甲醚在体外及荷瘤小鼠体内条件下抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的机制

目的:探讨蒿甲醚(artemether,ART)在体外以及荷瘤小鼠体内对于人胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用及增殖抑制作用及具体机制.方法:采用MTT法检测不同浓度ART在体外环境下对于人胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用,采用流式细胞术对经过不同浓度的A RT处理后的人胃癌S G C-7901细胞进行细胞周期分析,检测凋亡情况.建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,通过计算肿瘤体积和抑瘤率探讨ART在荷瘤裸鼠体内的抗肿瘤作用.利用Western blot方法探讨ART抑制肿瘤细胞生长增殖的具体机制.结果:MTT结果显示,相比于对照组ART对该株肿瘤细胞具有显著的杀伤作用(P0.05),分析应用的A RT变化、作用时间和细胞不良反应变化关系发现,ART对于人胃癌细胞株SGC-7901杀伤作用呈现时间依赖和剂量依赖特性(P0.05);FCM检测结果表明,ART抑制癌细胞增殖的机制主要是在于阻滞细胞周期进程,使其细胞周期停滞于G0/G1期和诱导细胞凋亡;与对照组比较,中、高剂量ART组对人胃癌S G C-7901细胞裸鼠移植瘤的生长抑制效果最明显(P0.05),抑瘤率分别为34.5%和41.0%.Westernblot法检测发现A R T处理后细胞增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclearantigen,P C N A)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量下降,Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)蛋白表达量上升(P0.05).结论:ART对人胃癌细胞株SGC-7901有较明显的细胞毒效应,且具有时间依赖性和剂量依赖性;其抑制作用与阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡有关.ART对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,ART阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡可能与抑制PCNA、Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达相关.     

eIF4A1基因沉默对胃癌SGC-7901细胞生物学行为影响机制的探讨

目的探讨沉默eIF4A1基因对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移的细胞生物学行为影响的机制。方法以eIF4A1沉默重组慢病毒颗粒(LV-EIF4A1-RNAi组)感染人胃癌SGC-7901为eIF4A1沉默组(eIF4A1-RNAi组),感染阴性对照慢病毒颗粒(CON077)的胃癌细胞为阴性对照组(CON077组),空白对照组(control组)不作任何处理。以每个副孔初始含4×10~3个细胞,CCK-8检测各组细胞增殖能力;流式细胞仪检测各组5×10~6个细胞凋亡和1×10~6个细胞周期分布;Transwell实验检测各组1×10~5个细胞迁移和侵袭能力;实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞eIF4A1和AKT基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 LV-EIF4A1-RNAi(44683-1)组eIF4A1基因的表达量最低为(0.31±0.04),因此选择该组为eIF4A1沉默组(eIF4A1-RNAi)。与CON077组和control组相比,eIF4A1-RNAi组细胞增殖活力明显降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞于S期,G1/G2期细胞减少,细胞的迁移、侵袭能力下降,eIF4A1和AKT基因的mRNA和蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05);CON077组与control组比较,上述指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论慢病毒介导eIF4A1基因沉默能抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖和迁移、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期于S期,其机制可能与AKT表达下调有关。     

过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ在白藜芦醇抑制胃癌SGC-7901细胞增殖中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)在白藜芦醇(Res)抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖中的作用.方法体外常规培养人胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测Res和GW9662(PPAR-γ特异阻断剂)对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定对细胞周期的影响,RT-PCR方法检测PPAR-γ,Cyclin D1的mRNA表达,Western blot检测PPAR-γ蛋白的表达,免疫细胞化学检测Cvclin D1蛋白表达的改变.结果Res以时间、浓度依赖性方式抑制胃癌细胞SGC-790l的增殖(P＜0.05),使细胞周期停留在G1期;胃癌细胞SGC-7901存在PPAR-γmRNA和蛋白的表达,Res呈浓度依赖性的激活PPAR-γ mRNA的转录.25,50,75,100μmol/L Res作用于胃癌细胞后,细胞中PPAR-γmRNA相对表达分别是空白对照组的122.2%,195.1%,232.9%和277.1%(P＜0.05),而PPAR-γ蛋白的表达几乎没有变化;胃癌SGC-7901细胞高水平表达Cyclin D1,Res显著的抑制Cyclin D1的表达.经25,50,75,100 μmol/LRes处理后,Cyclin D1 mRNA抑制率分别为11.3%,24.3%,35.4%,59.5%,而GW9662能够明显降低Res的上述作用.结论Res在胃癌SGC-7901细胞中部分的通过激活PPAR-γ从而抑制Cvclin D1的表达,使癌细胞停留在G1期,抑制细胞的增殖.     

RNAi沉默CD14基因对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的以胃癌SGC-7901细胞为研究对象,在细胞水平观察沉默CD14基因对胃癌细胞增殖、凋亡、周期及下游靶因子TNF-α、IL-8的影响,探讨CD14基因在胃癌中的发病地位。方法重组CD14shRNA慢病毒为载体转染胃癌SGC-7901细胞。实验分3组,正常组、慢病毒阴性对照组(NCshRNA)、CD14沉默组(CD14shRNA)。采用荧光显微镜观察转染效率,确定最佳转染时间;Western blotting检测CD14蛋白的沉默效率;MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Real-time PCR技术检测TNF-α、IL-8表达。结果成功转染慢病毒CD14shRNA的SGC-7901人胃腺癌细胞可表达绿色荧光蛋白,测得在病毒MOI=10时,转染72 h后,慢病毒的转染效率最佳。转染后24 h,正常组细胞增殖率为218.18%,阴性对照组为216.27%,CD14shRNA组为211.63%,各组间相比,差异无统计学意义(P0.05);转染后48 h、72 h,正常组细胞增殖率为427.49%、479.22%,阴性对照组为417.84%、473.37%,CD14shRNA组为345.54%、362.64%,经比较,CD14沉默后细胞增殖率下降(P0.05)。CD14shRNA组细胞早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率均高于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。CD14shRNA组细胞G1期42.57%、S期38.65%、G2期13.22%,正常组细胞G1期35.91%、S期52.60%、G2期11.49%,差异有统计学意义(P0.05)。Western blotting结果显示,在转染胃癌细胞后,CD14shRNA慢病毒载体组细胞CD14蛋白表达相对于正常组及阴性对照组明显减少(P0.05);Real-time PCR结果显示,CD14shRNA转染胃癌细胞后,TNF-α、IL-8 mRNA表达较正常组、阴性对照组明显下降。结论 CD14基因沉默后,胃癌细胞增殖能力减弱,细胞周期阻滞在S期,细胞合成减少,凋亡率增加,TNF-α、IL-8表达下降,这说明CD14基因在胃癌细胞增殖、发展过程中占据重要地位。     

siRNA沉默PKM2抑制人胃腺癌SGC-7901细胞增殖能力和糖酵解水平

背景:M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈特异性高表达,与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关,是潜在的治疗靶点。目的:探讨siRNA沉默PKM2对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。方法:选择未转染SGC-7901细胞、转染空质粒pU6 SGC-7901细胞以及转染PKM2 siRNA的SGC-7901细胞,采用蛋白质印迹法和Real-time PCR检测PKM2 mRNA和蛋白表达;免疫荧光法检测PKM2在细胞内的表达和分布;CCK-8法、流式细胞分析、细胞迁移和细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭能力;蛋白质印迹法、分光光度法分别检测葡萄糖转运蛋白-1(Glut-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达以及葡萄糖、乳酸浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:与其余两组相比,PKM2 siRNA转染组细胞PKM2 mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05),胞内表达明显减弱,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降,细胞凋亡明显增加(P0.05),Glut-1、LDHA蛋白表达明显下降(P0.05),葡萄糖摄取率、乳酸产量、LDH活性明显减低(P0.05)。结论:RNA干扰能抑制胃癌SGC-7901细胞PKM2mRNA和蛋白表达,进而抑制胃癌细胞的增殖能力和糖酵解水平。     

过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ在白藜芦醇抑制胃癌SGC-7901细胞增殖中的作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)在白藜芦醇(Res)抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖中的作用.方法:体外常规培养人胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测Res和GW9662(PPAR-γ特异阻断剂)对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定对细胞周期的影响,RT-PCR方法检测PPAR-γ,Cyclin D1的mRNA表达,Western blot检测PPAR-γ蛋白的表达,免疫细胞化学检测Cyclin D1蛋白表达的改变.结果:Res以时间、浓度依赖性方式抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖(P<0.05),使细胞周期停留在G1期;胃癌细胞SGC-7901存在PPAR-γmRNA和蛋白的表达,Res呈浓度依赖性的激活PPAR-γmRNA的转录.25,50,75,100μmol/L Res作用于胃癌细胞后,细胞中PPAR-γmRNA相对表达分别是空白对照组的122.2%,195.1%,232.9%和277.1%(P<0.05),而PPAR-γ蛋白的表达几乎没有变化;胃癌SGC-7901细胞高水平表达Cvclin D1,Res显著的抑制Cyclin D1的表达.经25,50,75,100μmol/L Res处理后,Cyclin D1 mRNA抑制率分别为11.3%,24.3%,35.4%,59.5%,而GW9662能够明显降低Res的上述作用.结论:Res在胃癌SGC-7901细胞中部分的通过激活PPAR-γ从而抑制Cyclin D1的表达,使癌细胞停留在G1期,抑制细胞的增殖.     

HSP90抑制剂17-DMAG对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响.方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,以不同浓度的17-DMAG处理后采用MTT法检测SGC-7901细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布,流式细胞仪及Annexin V-FITC试剂盒监测17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.结果:不同浓度的17-DMAG对人胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用,各组之间比较(P＜0.01),且呈时效量效依赖关系(F=241.313,246.856,均P＜0.001).17-DMAG作用24 h后胃癌细胞株SGC-7901呈现G2/M期阻滞,试验组与对照组比较(F=231.991,P＜0.001),呈浓度依赖关系.17-DMAG处理胃癌细胞SGC-7901 24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加.结论:17-DMAG可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,使胃癌细胞SGC-7901阻滞于G2/M期,诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡.     

去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的观察去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,探讨其抗胃癌的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度去甲斑蝥酸钠对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制率,其中实验组的去甲斑蝥酸钠浓度分别为0.4、1.0、2.5、6.0 mg/L,对照组不加去甲斑蝥酸钠。采用流式细胞仪检测SGC-7901细胞的增殖周期,并计算细胞增殖指数。结果浓度0.4、1.0、2.5、6.0 mg/L去甲斑蝥酸钠的实验组的OD值均低于对照组(t=2.871、5.295、10.100、13.836,P均0.05)。随着去甲斑蝥酸钠浓度的提高,对SGC-7901细胞的抑制率随之增大。经过流式细胞仪的检测,与对照组相比,实验组的G0/G1期细胞比例显著增高(P0.05),而S期细胞比例和细胞增殖指数明显降低(P0.05),均呈现出时间、浓度依赖性。结论去甲斑蝥酸钠在体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,体现出抗癌活性,在胃癌治疗方面具有广阔的应用前景。     

SCH66336对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的探讨法尼基转移酶抑制剂（FTIs）SCH66336对胃癌SGC-7901与MGC-803细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期胃癌SGC-7901与MGC-803细胞,分为实验组和对照组,实验组加入SCH66336使终浓度分别为0.1、0.3、1.0、3.0μM,对照组加入含等体积DMSO的培养基,每组设3个复孔。MTT法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期与细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中核糖体蛋白S6的磷酸化（S235/236）、细胞周期素D1（cyclin D1）与活化的Caspase-3表达情况。结果与对照组比较,SCH66336作用后SGC-7901与MGC-803细胞抑制率及凋亡率明显升高,呈G0/G1细胞周期阻滞,cyclin D1与S6磷酸化表达明显降低、活化的Caspase-3表达升高（P〈0.05）,且呈时间及剂量依赖性。结论 SCH66336对SGC-7901与MGC-803胃癌细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能为抑制S6的活化、下调cyclin D1表达、激活Caspase-3依赖的凋亡通路。     

RNA干扰沉默Twist基因对人胃癌细胞系SGC7901细胞增殖能力的影响

目的 探讨Twist基因沉默后对人胃癌SGC7901细胞增殖能力的影响.方法 利用脂质体转染法将携带有Twist干扰片段的pGenesil/Twist载体导入人胃癌SGC7901细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR,Western印迹法检测干扰效果.通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期等反映Twist对SGC7901细胞增殖能力的影响.结果 生长曲线结果显示Twist基因沉默组细胞生长速度较两对照组缓慢.细胞周期结果显示Twist基因沉默组S期细胞数明显较对照组减少,增殖能力下降.结论 Twist基因沉默后可抑制SGC7901细胞的分裂增殖,可能成为临床胃癌基因治疗的新靶点.     

华蟾素对胃癌细胞SGC-7901生长和增殖的影响

目的探讨华蟾素对人胃癌细胞SGC-7901生长和增殖的影响。为其临床应用奠定基础。方法应用细胞培养技术,将不同浓度的华蟾素在一定的时间内体外干预SGC-7901细胞。分别采用MTT法、克隆形成试验、流式细胞技术(FCM)测定细胞生长、增殖情况和细胞周期变化。结果 SGC-7901细胞经华蟾素作用后细胞生长明显受抑,最高抑制率为(78.36±3.43)%;SGC-7901细胞克隆形成的数目受到抑制;细胞周期分布表现为S期和G2/M期细胞比例下降,G0/G1期细胞比例升高;上述作用均呈明显的剂量和时间依赖性。结论华蟾素可通过阻滞细胞周期而抑制胃癌细胞SGC-7901生长和增殖。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

MicroRNA-129通过靶向调控HMGA2抑制胃癌细胞增殖、侵袭

背景:越来越多的研究表明microRNA在胃癌发生、发展中起重要作用。有研究表明miR-129在胃癌组织中表达异常,但其对胃癌细胞增殖、侵袭的作用仍不明确。目的:探讨miR-129在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其影响胃癌细胞增殖和侵袭的机制。方法:收集82例胃癌组织及其相应癌旁组织,培养人胃黏膜上皮细胞株和不同的胃癌细胞株,以q PCR法检测miR-129表达。将miR-129 mimic或miR-NC转染胃癌SGC-7901细胞后,转染HMGA2过表达质粒。以克隆形成实验观察细胞增殖情况,Transwell小室法检测细胞侵袭情况,Pearson相关分析评估miR-129表达与HMGA2表达的相关性,荧光素酶实验检测荧光素酶活性,q PCR和蛋白质印迹法分别检测miR-129、HMGA2 mRNA和蛋白表达。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-129表达明显下降(P0.05);与人胃黏膜上皮细胞株GES-1相比,各胃癌细胞株中miR-129表达明显下降(P0.05)。与miR-NC组相比,miR-129 mimic组SGC-7901细胞增殖、侵袭能力均明显下降(P0.05)。胃癌组织中HMGA2 mRNA表达明显增加(P0.05),并与miR-129表达呈负相关(r=-0.543 9,P0.01)。野生型miR-129 mimic组荧光素酶活性显著低于miR-NC组(P0.05);转染miR-129 mimic后HMGA2 mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05)。与miR-129+阴性对照组相比,miR-129 mimic+HMGA2组细胞增殖、侵袭能力明显升高(P0.05)。结论:miR-129在胃癌组织和细胞中低表达,其可通过下调HMGA2抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭。     

萝卜硫素对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究萝卜硫素对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测萝卜硫素对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞术分析萝卜硫素对SGC-7901细胞周期和凋亡的影响,蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析萝卜硫素对SGC-7901细胞中Notch1、Hes1、Bax及Bcl-2蛋白表达的影响。结果 萝卜硫素能够显著抑制SGC-7901细胞的增殖,促使其凋亡,表现出时间和剂量依赖性,萝卜硫素还能将SGC-7901细胞停留在G_1期;萝卜硫素能显著抑制Notch1、Hes1、Bcl-2蛋白表达,诱导促凋亡蛋白Bax表达,与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 萝卜硫素可以明显诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,可能通过抑制Notch1/Hes1信号通路、降低Bcl-2/Bax比例实现。     

VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．     

西咪替丁对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:培养人胃癌SGC-7901细胞,以不同浓度的西咪替丁处理后用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况;流式细胞术检测癌细胞周期和凋亡;Hoechst33258染色后荧光显微镜观察药物作用后癌细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;Western印记法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:以不同浓度的西咪替丁分别处理人胃癌SGC-7901细胞24h和48 h,结果发现,在0.5,1,2.5,5,10 mmol/L时对SGC-7901细胞的增殖具有显著的抑制作用,与对照组相比差异显著(24 h:0.705±0.018,0.560±0.038,0.408±0.029,0.276±0.042,0.205±0.031 vs 0.803±0.012,P<0.05;48 h:0.902±0.024,0.671±0.015,0.420±0.030,0.180±0.037,0.0117±0.021 vs 1.079±0.040,P<0.05),并呈时间和剂量依懒性,而在0.25 mmol/L以下浓度对SGC-7901细胞未见明显细胞毒作用;0.5-10 mmol/L西咪替丁作用后,可观察到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0/G1期细胞明显增多(60.83±2.27,67.21±1.18,75.15±4.01,81.88±3.10,86.99±1.43 vs 50.28±1.97,P<0.05);西咪替丁还可下调SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论:西咪替丁可改变细胞周期分布,并能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

奥曲肽对SGC-7901胃癌细胞中Fas,FasL及P53表达的影响

目的:探讨奥曲肽(OCT)对胃癌细胞SGC-7901中Fas,FasL,P53,P21,P27和C-Myc表达的影响.方法:流式细胞术和RT-PCR法分别用于检测经OCT(1×10-7 mol/L)处理前后胃癌细胞SGC-7901中Fas,FasL,P53,P21,P27,c-Myc阳性癌百分率、mRNA表达和蛋白表达及细胞周期G0/G1、S、G2/M的变化.结果:胃癌细胞SGC-7901经OCT诱导6、12、24和48 h垢,Fas和FasL mRNA表达均明显增加,P53 mRNA表达则显著减少,而P21,P27和c-Myc mRNA表达均无明显变化;胃癌细胞SGC-7901经OCT诱导12 h后,Fas和FasL蛋白相对表达强度也显著增加,P53蛋白相对表达强度则明显降低(5.5±0.3 vs 3.2±0.1,5.1±0.3 vs 4.5±0.1.3.3±0.2 vs 4.9±0.3,P＜0.05或0.01),而P21,P27和c-Myc蛋白相对表达强度均无明显改变.细胞周期G0/G1、S、G2/M在OCT处理前后的变化并不明显.结论:OCT能上调SGC-7901胃癌细胞中Fas和FasL表达,下调突变型p53表达,是其诱导凋亡作用的重要机制之一.     

环氧合酶-2抑制剂celecoxib抑制胃癌生长的实验研究

目的研究celecoxib在体内外对胃癌增殖及凋亡的影响.方法不同浓度celecoxib处理体外培养的SGC7901细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测处理后24、48、72、96小时SGC7901细胞的增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡.利用SGC7901胃癌细胞株建立裸鼠胃癌种植瘤模型,实验组予以celecoxib 10 mg/Kg/day灌胃,共给药6周.结果 25,50,100,200μmol/Lcelecoxib处理SGC7901细胞24、48、72、96小时后,细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性特点.50 μmol/L celecoxib处理SGC7901细胞24 h后,流式细胞仪细胞周期分析表明G0/G1期细胞百分率上升,S期和G2/M期细胞百分率下降.流式细胞仪检测实验组的凋亡率明显高于对照组(20.4±2.8%vs 7.6±0.6%,P＜0.05).celecoxib治疗组裸鼠胃癌种植瘤重量为(0.43±0.21)g,明显低于对照组(1.33±0.45)g(P＜0.05).结论体内及体外实验表明,celecoxib能有效抑制胃癌生长,其机制可能与其阻滞细胞周期及诱导凋亡有关.     

氯化两面针碱对人胃癌细胞增殖、迁移的抑制作用

目的探讨氯化两面针碱(NC)对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移的作用及其机制。方法 MTT实验检测NC对SGC-7901细胞的增殖作用;Transwell小室实验检测NC对SGC-7901细胞迁移和侵袭的影响;Western印迹检测NC对人胃癌SGC-7901细胞中Bax,Bcl-2,PCNA,MMP2,MMP1和GAPDH表达的影响。结果 MTT实验表明NC抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);此外,NC显著抑制SGC-7901细胞中PCNA表达,呈剂量依赖性(P<0.05);Transwell小室实验表明NC显著抑制SGC7901细胞迁移和侵袭,呈剂量、时间依赖性(P<0.05);Western印迹表明NC上调凋亡蛋白Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,抑制MMP1以及MMP2的表达(均P<0.05)。结论 NC通过诱导细胞凋亡抑制SGC-7901细胞增殖,通过降解MMP1和MMP2从而抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移。     

CD14对胃癌细胞SGC-7901生物学性能的影响

目的 观察CD14对胃癌细胞SGC-7901生物学性能的影响,探讨其在胃癌发生发展中的作用.方法 用CD14蛋白受体胞壁酰二肽(MDP)刺激CD14稳定转染的胃癌SGC-7901细胞,CCK-8法以及平板克隆形成实验检测细胞的活性和增殖能力,流式细胞术检测CD14对细胞凋亡的影响,Transwell侵袭模型检测细胞的侵袭能力.结果 CD14稳定转染的胃癌SGC-7901细胞活性显著降低(P ＜0.05);CD14稳定转染的细胞克隆形成率为15.66％±5.94％,与空质粒转染细胞的19.28％ ±5.48％相比,P＜0.05;CD14稳定转染的胃癌细胞凋亡率为14.38％,与空质粒转染细胞的4.58％相比,P＜0.05;CD14稳定转染的胃癌SGC-7901细胞在24、48 h的侵袭细胞数分别为(69.40±6.73)、(108.20±9.68)个,与空质粒转染细胞的(81.40±7.80)、(133.20±12.87)个相比,P均＜0.05.结论 CD14能够促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡,同时抑制其增殖及侵袭.