非小细胞肺癌组织中miR-203启动子DNA甲基化状态与SRC表达及临床病理因素的相关研究

目的 探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)组织中miR-203启动子DNA甲基化状态与SRC蛋白表达及临床病理因素的关系,并进一步证实了miR-203启动子DNA甲基化可能参与SRC的表达调控。方法 收集45例经手术切除的非小细胞肺癌组织标本及其对应的癌旁正常组织。采用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)检测miR-203基因启动子DNA甲基化水平,并通过亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)进行确认,实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测miR-203的表达丰度,并通过免疫组织化学染色(Immunohistochemical, IHC)研究SRC蛋白在肺癌组织中的表达情况。分析miR-203基因启动子DNA甲基化与miR-203、SRC表达的相关性,以及与患者临床病理特征的关系。结果 肺癌组织中miR-203甲基化率为66.67%(30/45),明显高于癌旁组织的24.44%(11/45),与miR-203...     

维生素D受体在结直肠癌中的表达及其调控机制

背景:维生素D受体(VDR)属于类固醇激素受体超家族,参与细胞增殖、分化、凋亡以及免疫应答等多种生物学过程,在多种恶性肿瘤中呈低表达。目的:探讨VDR在结直肠癌中的表达及其调控机制。方法:收集2010年2月-2012年12月上海交通大学医学院附属仁济医院收治的结直肠癌患者30例,以免疫组化法检测癌组织和相应癌旁非癌组织标本的VDR表达情况。从基因表达汇编(GEO)数据库中提取224例结直肠癌患者的临床资料,分析其癌组织VDR表达与患者临床病理特征和生存期的关系。采用组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶EZH2-siRNA或5-氮杂胞嘧啶核苷(5-AZA)处理人结肠癌细胞株HCT116和SW620,以实时PCR检测VDR表达水平,以甲基化特异性PCR(MSP)检测VDR启动子区甲基化水平。结果:结直肠癌患者癌组织VDR阳性表达率显著低于癌旁非癌组织(26.7%对70.0%,P0.001)。结直肠癌组织VDR表达与肿瘤组织学分期、远处转移、脉管转移、淋巴结转移呈负相关(P0.05);VDR高表达者生存期显著长于低表达者(P=0.032)。与转染对照-siRNA相比,HCT116、SW620细胞转染EZH2-siRNA后,EZH2 mRNA表达水平和VDR启动子区甲基化水平均显著降低(P0.05),VDR mRNA表达水平显著升高(P0.05)。5-AZA处理HCT116、SW620细胞后,VDR启动子区甲基化水平较阴性对照组显著降低(P0.05),VDR mRNA表达水平显著升高(P0.05)。结论:结直肠癌中VDR表达下调且与患者预后呈正相关。VDR在结直肠癌中的转录抑制受组蛋白甲基化和DNA甲基化共同调控。     

结直肠癌组织及细胞株中分泌型卷曲相关蛋白家族的甲基化研究

目的 研究分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)基因启动子区CpG岛甲基化与结直肠癌的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测20对结直肠癌及相应癌旁组织中SFRP基因启动子区CpG岛甲基化状况,T-A克隆测序验证MSP产物.5-氮杂-2'-脱氧胞苷对结直肠癌细胞株HCT116、SW480进行去甲基化处理,MSP和Western印迹法分别检测细胞株中SFRP基因甲基化和蛋白表达.结果 SFRP 1、2、4、5在结直肠癌中甲基化率分别为19/20、17/20、3/20、13/20,癌旁组织中分别为12/20、8/12、1/20、7/20.结直肠癌中SFRP 1、2、5甲基化率均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).HCT116细胞株SFRP 1、2、4、5基因均发生甲基化,而SW480细胞株中仅SFRP1和SFRP2出现启动子甲基化.SFRP蛋白表达与启动子甲基化呈明显负相关,经5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后能有效恢复SFRP蛋白表达.结论 SFRP 1、2、5甲基化可能与结直肠癌的发生有关,SFRP基因甲基化与其表达失活密切相关.     

IL-6表观遗传改变调节SOCS3在大肠癌发病机制中的作用

目的 检测大肠癌（CRC）中IL-6、SOCS3基因mRNA表达和启动子甲基化状态,以及STAT3基因mRNA表达水平,探讨大肠癌中IL-6、SOCS3基因表观遗传学改变及其对IL-6/STAT3通路的影响.方法 实时荧光定量PCR检测20例CRC癌组织及癌旁组织IL-6、SOCS3及STAT3基因mRNA水平,甲基化特异性PCR（MSP）检测SOCS3甲基化状态,亚硫酸氢盐测序（BSP）检测IL-6启动子甲基化状态.结果 与癌旁组织相比,癌组织中IL-6、STAT3 mR-NA表达显著增高（P＜0.05）,而SOCS3显著降低,IL-6与SOCS3表达呈负相关;癌组织中IL-6启动子-633、-611、-575、-575bp位点甲基化水平均降低,而SOCS3则呈现高度甲基化状态（P＜0.05）.结论 大肠癌中IL-6和SOCS3基因DNA甲基化状态异常,影响基因表达,从而诱导IL-6/STAT3信号转导通路持续活化,促进了大肠癌的发生发展.     

HOXC12基因甲基化是胰腺癌的潜在诊断和预后标志物

目的 在胰腺癌中探讨HOXC12基因的启动子区甲基化状态及其作为诊断和预后标志物的可能性。方法 应用半定量RT-PCR和甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测10株胰腺癌细胞系中HOXC12的表达及启动子区甲基化情况，应用MSP在145例胰腺癌组织中检测HOXC12启动子区甲基化情况，并分析HOXC12甲基化与临床病理因素之间的关系。结果 HOXC12在SW1990、Panc10.05、AsPC1、MIAPaCa2、PANC1、PATU8988T、Capan1、PANC-28和JF305细胞中缺失表达，其MSP结果为完全甲基化状态，在Panc5.04中表达水平明显降低，MSP结果呈部分甲基化状态。应用5-aza-dc处理细胞后，HOXC12在SW1990、Panc10.05、AsPC1、MIAPaCa2、PANC1、PATU8988T、Capan1、PANC-28和JF305细胞恢复表达，在Panc5.04细胞中表达增加。表明HOXC12基因在胰腺癌中的表达受甲基化调控。在145例原发性胰腺癌组织中，50.34%(73/145)病例发生H...     

胃癌组织中MGMT基因甲基化与DNMT1蛋白表达的关系

背景:研究表明MGMT基因启动子区甲基化与包括胃癌在内的多种恶性肿瘤密切相关。DNA甲基转移酶1(DNMT1)在多种肿瘤组织中的表达上调。但目前关于胃癌组织中MGMT基因甲基化状态与DNMT1表达关系的研究少见。目的:探讨MGMT基因甲基化、DNMT1蛋白表达与胃癌的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测60例胃腺癌组织及其相应癌旁组织中MGMT基因启动子区甲基化状态,RT-PCR、免疫组化法分别检测MGMT、DNMT1 mRNA和蛋白表达。结果:胃癌组织中MGMT基因启动子区甲基化率明显高于癌旁组织(45.0%对13.3%,P0.001)。胃癌组织中MGMT mRNA阳性表达率显著低于癌旁组织(41.7%对93.3%,P0.001),而DNMT1 mRNA阳性率明显升高(76.7%对18.3%,P0.001)。MGMT mRNA阴性表达的胃癌组织中其基因启动子甲基化率较阳性表达者升高(57.1%对28.0%,P0.05)。胃癌组织中MGMT蛋白表达与DNMT1蛋白表达呈负相关(r=-0.795,P0.01)。结论:MGMT基因启动子区高甲基化和DNMT1高表达可能与胃癌的发生、发展有关。DNMT1可能调控MGMT基因的甲基化过程。     

MAL基因在胃癌组织中的甲基化及其mRNA的表达

目的:研究MAL基因在胃癌和癌旁组织中的甲基化状态及其mRNA表达.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)和实时荧光定量RT-PCR法检测37例人胃癌组织及对应癌旁5 cm组织中MAL基因的甲基化状态和mRNA表达,并分别将其与各临床病理指标进行统计学分析.结果:37例胃癌组织中MAL基因甲基化率为78.4%.对应37例癌旁组织中MAL基因甲基化率为5.4%.癌组织与癌旁组织的甲基化率差异有统计学意义(P<0.01).胃癌组织中MAL基因甲基化状态与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、胃癌分化程度、临床分期无统计学意义(P>0.05).在胃癌组织与对应癌旁组织中MAL基因mRNA定量表达差异有统计学意义(P<0.05),胃癌组织中MAL基因mRNA定量表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、胃癌分化程度、有无淋巴结转移、有无神经束浸润及肿瘤TNM分期无相关(P>0.05).结论:胃癌组织中MAL基因表达缺失或低下,并且存在高甲基化率,MAL基因发生甲基化可能与胃癌发生有关.     

全血RUNX3启动子甲基化对胃癌早期诊断的意义

目的: 探讨全血RUNX3启动子甲基化对胃癌早期诊断的意义.方法: 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法, 检测80例胃癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织及全血中RUNX3启动子甲基化情况.结果: 胃癌组织标本中RUNX3基因启动子甲基化率为45%, 癌旁组织中甲基化率为0%,全血中甲基化率为40%. 胃癌组织、全血中RUNX3基因启动子甲基化, 差异无统计学意义( P>0.05). 全血标本中RUNX3启动子甲基化表达情况与分化程度、是否有淋巴结转移密切相关, 与年龄、性别、肿瘤部位浸润深度无关.结论: 全血RUNX3启动子区甲基化对胃癌早期诊断有重要指导意义, 与胃癌的发生、发展密切相关.     

结直肠癌组织中PAQR3、PDCD4基因甲基化水平与结直肠癌的关系

目的研究结直肠癌组织抑癌基因PAQR3、PDCD4甲基化水平,以及二者与结直肠癌临床资料之间的关系。方法收集2013~2014年结直肠癌及癌旁正常组织标本各54例,用甲基化特异性PCR(MSP)法检测结直肠标本中PAQR3、PDCD4基因甲基化水平。结果 (1)PAQR3癌组织和癌旁组织甲基化率分别为33.3%(18/54)和5.6%(3/54),差异显著(P0.05);PDCD4癌组织和癌旁组织发生甲基化率为分别为53.7%(29/54)和7.4%(7/54),差异显著(P0.001)。二者同时检测的甲基化阳性率为87%,PAQR3和PDCD4没有相关性(R=0.155,P=0.408)。(2)结直肠癌组织中PAQR3基因甲基化与性别、肿瘤部位无关,年龄越大、分化程度越低、淋巴结转移、浸润越深者,PAQR3甲基化发生率越高。结直肠癌组织中PDCD4基因甲基化与性别、年龄、肿瘤部位无关,分化程度越低、淋巴结转移、浸润越深者,PDCD4甲基化发生率越高。结论结直肠癌中PAQR3、PDCD4发生了甲基化,PAQR3基因甲基化水平与年龄、分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关,PDCD4甲基化水平与分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关。     

错配修复基因hMLH1甲基化与胃癌的关系

目的:通过研究散发性胃癌中错配修复基因hMLH1 mRNA的表达及其启动子区5'CpG岛甲基化状态,探讨hMLH1基因异常甲基化在胃癌发生过程中的作用.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)检测60例胃癌组织及其癌旁黏膜组织中hMLH1基因启动子区的甲基化状态,逆转录PCR(RT-PCR)检测两种组织中hMLH1 mRNA表达情况.结果:胃癌组织hMLH1 mRNA表达水平明显低于癌旁组织(t=4.082,P<0.01),hMLH1基因启动子区高甲基化18例(30%),其癌旁黏膜组织中未发现有甲基化.hMLH1基因启动子区甲基化与胃癌的临床病理参数之间无明显的相关性.hMLH1 mRNA表达阴性的21例病例中,17例(81%)发生甲基化,而hMLH1 mRNA表达阳性的39例中仅有1例(2.5%)发生甲基化,hMLH1 mRNA表达降低与甲基化之间存在明显的相关性(χ2=8.0182,P=0.0046).结论:胃癌组织中hMLH1基因启动子区甲基化与其mRNA表达缺失密切相关,是导致hMLH1基因错配修复功能缺陷的重要原因之一.     

胃癌组织中BNIP3基因甲基化及其与DNMT1表达的关系

目的探讨人胃癌组织DNMT1表达及其与BNIP3基因甲基化状态的关系。方法收集120例手术切除并经病理学证实的胃癌组织及其相应的癌旁正常组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌组织及其相应癌旁组织BNIP3基因甲基化状态,采用免疫组化SP法检测BNIP3基因及DNMT1基因的蛋白表达水平。结果 120例胃癌组织中有72例发生了BNIP3基因甲基化,甲基化阳性率为60.0%,其相应癌旁正常组织有5例发生了BNIP3甲基化,甲基化阳性率为4.2%,差异有统计学意义(χ~2=85.839,P0.01),胃癌组织中BNIP3基因甲基化状态与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分期无相关性(P0.05),而与分化程度及淋巴结转移情况有相关性(P0.05),胃癌组织中BNIP3蛋白的表达率为17.5%(21/120),显著低于其癌旁正常组织(80.0%,96/120),差异有统计学意义(χ~2=93.809,P0.01),胃癌组织中DNMT1蛋白的表达率为75.0%(90/120),显著高于其癌旁正常组织(5.8%,7/120),差异有统计学意义(χ~2=119.195,P0.01)。胃癌组织中BNIP3蛋白与DNMT1蛋白的表达呈负相关(r=-0.542,P0.01)。结论 DNMT1高表达可能导致BNIP3蛋白表达减少,从而参与了胃癌的发生。     

乳腺癌组织中乳腺癌1号基因启动子甲基化状态与蛋白表达的关系

目的研究乳腺癌组织中乳腺癌1号基因(BRCA1)启动子甲基化与蛋白的表达情况,并分析BRCA1启动子甲基化及蛋白表达与乳腺癌生物学行为的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术和免疫组织化学SP法检测48例患者乳腺癌组织、癌旁乳腺组织中BRCA1启动子甲基化及蛋白表达情况。结果乳腺癌组织中BRCA1启动子甲基化阳性率(27.1%)明显高于其癌旁乳腺组织(0,P0.05);BRCA1启动子甲基化与乳腺癌的组织学分级及淋巴结转移有关(P0.05);乳腺癌组织中BRCA1蛋白阳性率(54.2%)明显低于其癌旁乳腺组织(100%,P0.05);BRCA1蛋白的表达与乳腺癌的组织学分级及淋巴结转移有关(P0.05);BRCA1启动子甲基化与蛋白表达呈明显的负相关(P0.05)。结论BRCA1启动子的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的原因之一,BRCA1蛋白表达缺失与乳腺癌的发生、发展有关。     

胃癌中NDRG2基因甲基化及其表达缺失的研究

目的探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)基因启动子甲基化与胃癌发生、发展的关系。方法取40例手术的胃癌组织及40例相应癌旁正常组织(距癌5 cm以上),MSP法检测其启动子区甲基化状况,免疫组化检测蛋白的表达水平。结果胃癌组织中NDRG2甲基化率为72.5%(29/40),而癌旁正常组织中仅8例(20.0%)发生了甲基化,差异有统学意义(χ2=22.17,P0.01)。NDRG2甲基化与性别、年龄、TNM分期及有无淋巴结转移无相关性(P0.05)。NDRG2蛋白在癌旁正常组织中的表达阳性率为87.5%(35/40),胃癌组织中为10.0%(4/40),差异有统计学意义(χ2=48.08,P0.01)。结论 NDRG2基因可能参与胃癌的发生、发展。     

胃癌死亡相关蛋白激酶基因甲基化对其信使核糖核酸和蛋白表达的影响

目的 研究胃癌组织死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子区甲基化对原发性胃癌组织中DAPK mRNA及蛋白表达的影响.方法 采用逆转录(RT)-PCR法检测62例原发性胃癌及癌旁组织DAPK mRNA表达,甲基化特异性PCR(MSP)法检测DAPK启动子区CpG岛甲基化状态,对其中34例胃癌组织甲基化阳性者的DAPK蛋白表达进行Western印迹法检测.结果 胃癌组织中DAPKmRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁组织,分别为0.2863±0.2027比0.5736±0.1968、0.2616±0.0913比0.6529±0.1808,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).DAPK在胃癌组织和癌旁组织中的甲基化频率分别为54.8%和17.7%,差异有统计学意义(P＜0.01).在胃癌组织中,甲基化组DAPKmRNA表达明显低于非甲基化组(0.1399±0.0835比0.4640±0.1569,P＜0.01).DAPK基因甲基化与胃癌TNM分期显著相关(P=0.04).结论 原发性胃癌组织DAPK mRNA和蛋白表达缺失或低下与其启动子甲基化程度增高显著相关.     

胃癌组织中肿瘤相关基因甲基化及其表达与叶酸和代谢酶MTHFR基因多态性的关系

目的:探讨人胃癌组织中癌基c-myc,抑癌基因p16INK4A,p21WAF1,错配修复基NhMLH1和hM2SH2的甲基化状态及其表达与叶酸、MTHFR基因多态性的关系．方法:胃癌38例手术切除标本的癌区、癌旁和外周正常黏膜组织,运用FOL ACS:180自动化学发光系统测定叶酸含量,PCR-RFLP技术检测MTHFR基因677(C→T)和1298(A→C)两个常见多态,并分别以Real—time RT-PCR和甲基化特异性PCR (MSP)技术检测肿瘤相关基因的表达和甲基化状态．结果:c-myc表达升高,p16INK4A,hMLH1和hMSH2表达降低的胃癌黏膜组织其基因启动子区异常甲基化．p21WAF1,hMSH2表达降低, p16INK4A高甲基化者叶酸水平明显降低,c-myc低甲基化和表达升高者中均存在低叶酸水平．MTHFR 677CC基因型的胃癌黏膜组织p16INK4A甲基化升高且表达降低,而其余肿瘤相关基因的甲基化及其表达与MTHFR两个常见多态均无明显相关性．结论:DNA甲基化在胃癌的发生、发展中具有重要作用,叶酸水平和MTHFR基因多态性通过影响部分肿瘤相关基因的甲基化状态而调控其表达．     

谷胱甘肽过氧化物酶3甲基化及蛋白表达在胃癌中的临床意义

目的探讨血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)3基因启动子甲基化及GPX3蛋白表达在胃癌发病中的临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测胃癌组和胃炎组血标本中的GPX3甲基化程度;采用免疫组化方法检测胃癌组和癌旁正常组织标本中的GPX3蛋白表达情况,分析其与临床病理特征间的关系。结果 1胃癌组GPX3甲基化程度显著高于胃炎组(P0.01);胃癌伴有淋巴结转移组GPX3甲基化程度显著高于无淋巴结转移组(P0.05);胃癌组GPX3甲基化程度与患者年龄、性别和肿瘤分化程度、浸润情况、TNM分期无关(P0.05);2胃癌组GPX3蛋白表达较癌旁正常组显著降低(P0.01);胃癌伴有淋巴结转移组GPX3蛋白表达显著低于无淋巴结转移组(P0.05);胃癌组GPX3蛋白表达与患者年龄、性别和肿瘤分化程度、浸润情况、TNM分期无关(P0.05);3胃炎组GPX3蛋白表达与癌旁正常组无显著差异(P0.05)。结论GPX3基因启动子区高甲基化通过下调GPX3蛋白表达,参与胃癌发生和促进淋巴结转移,有潜力成为诊断胃癌、判断预后的预警分子指标和临床治疗中的基因调控靶点。     

胃癌组织Runx3基因甲基化的检测及意义

目的探讨胃癌组织中Runx3基因甲基化情况及其意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR技术（MSP）对35例胃癌患者手术切除的肿瘤组织及癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用RT—PCR检测Runx3mRNA的表达。结果胃癌及癌旁组织Runx3基因的甲基化发生率分别为40．0％和8．5％;胃癌组织Runx3mRNA表达较癌旁正常组织下调（P〈0．05）;Runx3mRNA的表达与胃癌分化程度及淋巴结转移有关。结论Runx3基因甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃癌的发生发展密切相关。     

食管鳞状细胞癌组织中IRAIN的表达变化及启动子甲基化状态观察

目的 观察胰岛素样生长因子1受体长链非编码RNA(IRAIN)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达变化,并探讨其启动子甲基化状态与患者临床病理参数的关系.方法 行手术治疗的ESCC患者63例,术中取肿瘤组织和癌旁正常组织,分别采用QPCR法和MSP法检测组织中IRAIN和启动子甲基化状态,并分析IRAIN启动子甲基...     

胃癌组织中ERCC1基因的高甲基化及DNMT1的表达

目的探讨人切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementing gene 1,ERCC1)基因启动子Cp G岛甲基化和DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因的表达与胃癌发生的关系及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测60例胃癌组织及其相应癌旁正常组织中ERCC1基因启动子区甲基化状态。同时应用逆转录聚合酶链反应(realtime RT-PCR)法和免疫组化(IHC)SP法分别检测ERCC1及DNMT1基因的mRNA和蛋白表达水平。结果胃癌组织中ERCC1基因启动子Cp G岛甲基化阳性率为68.3%,明显高于相应的癌旁正常组织(23.3%)。胃癌组织中ERCC1 mRNA阳性率显著低于癌旁正常组织(31.7%vs 71.7%,P0.05),而胃癌组织中DNMT1 mRNA阳性率明显增高,差异均有统计学意义(78.3%vs 16.7%,P0.05)。ERCC1 mRNA阴性表达的胃癌组织中基因启动子的甲基化率较ERCC1 mRNA阳性表达者明显升高,差异具有统计学意义(92.7%vs 15.8%,P0.001)。结论 ERCC1基因启动子Cp G岛高甲基化及DNMT1基因表达上调可能参与胃癌的发生与发展。DNMT1可能调控ERCC1基因的甲基化。     

胃癌患者p16基因启动子甲基化检测及其临床意义

目的 探讨p16基因启动子CpG岛甲基化在胃癌发生、发展中的作用.方法 应用特异性甲基化PCR(MSP)检测58例胃癌及癌旁组织和30例正常胃黏膜组织中p16基因启动子CpG岛的甲基化状态,分析其与胃癌临床病理参数的关系.结果26例(44.8％)胃癌组织、5例(8.6％)癌旁组织也检测出甲基化的存在,30例正常胃黏膜组织标本中均未检测出p16基因甲基化的存在(P ＜0.05);p16基因甲基化与胃癌淋巴结转密切相关(P＜0.05).结论 p16基因启动子CpG岛甲基化可促进胃癌的发生、发展;此基因的异常甲基化可作为胃癌早期诊断的敏感指标.