靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。     

WWOX基因过表达对人胃癌细胞增殖、凋亡能力的影响及机制研究

目的探究含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)mRNA在胃癌中的表达量及过表达WWOX对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡能力的影响及作用机制。方法使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测WWOX mRNA在胃癌组织和癌旁组织中的表达量;利用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒pc DNA3.0-WWOX、空载体pc DNA3.0-NC转入人胃癌SGC7901细胞中,未转染细胞为空白组,蛋白质印迹法(Western blotting)检测WWOX蛋白表达量;绘制转染后人胃癌SGC7901细胞增殖状况;流式细胞术检测SGC7901细胞凋亡率;Western blotting检测转染后细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和生存素(Survivn)蛋白的表达量。结果 WWOX mRNA在胃癌组织中的表达量显著低于癌旁组织(P0.05);pc DNA3.0-WWOX组WWOX蛋白的表达量显著高于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05);绘制细胞生长曲线发现,WWOX基因能抑制胃癌SGC7901细胞的增殖;流式细胞术检测结果显示,pc DNA3.0-WWOX组细胞的凋亡率显著高于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05);pc DNA3.0-WWOX组细胞Cyclin D1蛋白的表达显著低于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05),而Survivn蛋白显著高于pc DNA3.0-NC组和空白组(P0.05)。结论 WWOX mRNA在胃癌中的表达量低于癌旁组织;过表达WWOX可通过降低Cyclin D1蛋白、增加Survivn蛋白抑制胃癌SGC7901细胞的增殖,并促进其凋亡。     

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法 通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果 胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。     

GRP78在胃癌中表达水平及沉默表达后对人胃癌SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响

目的研究内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)在人不同胃组织(正常胃组织和胃癌组织)和细胞(正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞)中的表达水平;揭示GRP78沉默表达对SGC-7901/DDP细胞增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)方法分别检测人正常胃组织、胃癌组织、人正常胃上皮GES1细胞、胃癌SGC-7901细胞、多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平。利用LipfectamineTM2000将GRP78 siRNA转染至SGC-7901/DDP细胞中,同时设置未转染Control组和无义转染Control siRNA组。Real-time PCR和Western blotting方法检测各组SGC-7901/DDP细胞转染效率;MTT方法检测各组SGC-7901细胞的生长活力变化和不同浓度顺铂DDP作用下细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡情况。结果胃癌组织中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常胃组织(P0.05);多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著高于胃癌SGC-7901细胞和正常胃上皮GES1细胞(P0.05);GRP78 siRNA转染SGC-7901/DDP细胞后GRP78 mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05);与Control组和Control siRNA组相比,GRP78 siRNA转染组SGC-7901/DDP细胞生长活力显著下降,DDP作用下细胞增殖抑制率和细胞凋亡率显著增加(P0.05)。结论 GRP78 mRNA和蛋白在胃癌组织中高表达,在多耐药性胃癌SGC-7901/DDP细胞中也高表达,证实GRP78在胃癌中发挥促癌基因的作用。而GRP78 siRNA转染能够沉默SGC-7901/DDP细胞中GRP78基因表达,抑制SGC-7901/DDP细胞增殖并促进细胞凋亡。     

慢病毒介导过表达果糖-1,6-二磷酸酶1基因降低胃癌细胞糖酵解水平的机制研究

目的探讨慢病毒介导过表达果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)基因对胃癌SGC7901细胞糖酵解的影响及其机制。方法 RT-PCR和Western blotting检测人正常胃黏膜上皮GES-1细胞和胃癌SGC7901细胞中FBP1 mRNA和蛋白表达。以慢病毒介导的p Lenti6.3/FBP1质粒转染SGC7901细胞,采用RT-PCR和Western blotting检测转染效果,CCK-8和Transwell实验检测各组细胞的增殖和迁移能力,Western blotting检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)蛋白的表达,生物化学法检测胞外乳酸含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胞内磷酸果糖(PFK)含量。结果与GES-1细胞相比,SGC7901细胞中FBP1mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05)。p Lenti6.3/FBP1质粒转染使SGC7901细胞中FBP1 mRNA和蛋白表达显著升高(P0.05),显著抑制SGC7901细胞的增殖和迁移能力(P0.05);同时,降低了HIF-1α和GLUT-1蛋白的表达以及胞内PFK和胞外乳酸含量(P0.05)。结论 FBP1过表达能够通过降低细胞的糖酵解水平抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与抑制GLUT-1和HIF-1α表达有关。     

DEK基因在胃癌中的表达及调控Notch1信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨DEK基因的表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法 RT-PCR检测胃癌细胞中DEK mRNA的表达;DEK-siRNA、NC-siRNA转染人胃癌BGC-823细胞,不作任何处理的细胞作为对照组,转染48 h后,Western blotting检测DEK、MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖情况;Transwell小室检测细胞的侵袭能力。结果 DEK基因在人胃癌MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中的mRNA表达均显著高于GES-1细胞(P0.01),DEK基因在胃癌BGC-823细胞的mRNA表达最高,选择作为后续研究对象;DEK-siRNA转染BGC-823细胞后DEK的蛋白表达显著降低(P0.01);与对照组及NC-siRNA组比较,DEK-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均显著降低(P0.01)。结论 RNA干扰(RNAi)抑制胃癌细胞中DEK基因的表达后可抑制细胞的增殖及侵袭能力,其机制与Notch1信号通路的调控有关。     

PFKFB3基因增强阿帕替尼对胃癌凋亡的影响及机制

[目的]探讨沉默PFKFB3基因对阿帕替尼处理的胃癌细胞凋亡的影响及机制。[方法]通过Western blotting检测人胃黏膜上皮细胞株GES1及SGC-7901、BGC823和MKN45胃癌细胞PFKFB3蛋白表达。将PFKFB3特异性siRNA(si-PFKFB3)转染SGC-7901细胞,Western blotting检测转染效果。MTT法检测转染siPFKFB3或不同浓度(10、20、30、40μmol/L)阿帕替尼处理SGC-7901细胞48h的细胞活力。流式细胞术检测转染si-PFKFB3或/和40μmol/L阿帕替尼处理SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率,Western blotting检测Bcl-2、Bax、PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达。[结果]与对照GES1细胞相比,PFKFB3在SGC-7901、BGC823和MKN45胃癌细胞中的表达均明显升高(P0.05)。si-PFKFB3转染SGC-7901细胞后,PFKFB3蛋白表达明显降低(P0.05)。转染si-PFKFB3及不同浓度阿帕替尼均可抑制SGC-7901细胞活力,阿帕替尼对细胞活力抑制呈现浓度依赖性(P0.05)。转染si-PFKFB3及阿帕替尼均可诱导SGC-7901细胞凋亡,下调Bcl-2、PI3K和p-AKT表达,上调Bax表达,二者合用对SGC-7901细胞凋亡诱导更明显(P0.05)。[结论]沉默PFKFB3基因表达可明显增强阿帕替尼对胃癌细胞的凋亡诱导作用,机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ在白藜芦醇抑制胃癌SGC-7901细胞增殖中的作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)在白藜芦醇(Res)抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖中的作用.方法:体外常规培养人胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测Res和GW9662(PPAR-γ特异阻断剂)对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定对细胞周期的影响,RT-PCR方法检测PPAR-γ,Cyclin D1的mRNA表达,Western blot检测PPAR-γ蛋白的表达,免疫细胞化学检测Cyclin D1蛋白表达的改变.结果:Res以时间、浓度依赖性方式抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖(P<0.05),使细胞周期停留在G1期;胃癌细胞SGC-7901存在PPAR-γmRNA和蛋白的表达,Res呈浓度依赖性的激活PPAR-γmRNA的转录.25,50,75,100μmol/L Res作用于胃癌细胞后,细胞中PPAR-γmRNA相对表达分别是空白对照组的122.2%,195.1%,232.9%和277.1%(P<0.05),而PPAR-γ蛋白的表达几乎没有变化;胃癌SGC-7901细胞高水平表达Cvclin D1,Res显著的抑制Cyclin D1的表达.经25,50,75,100μmol/L Res处理后,Cyclin D1 mRNA抑制率分别为11.3%,24.3%,35.4%,59.5%,而GW9662能够明显降低Res的上述作用.结论:Res在胃癌SGC-7901细胞中部分的通过激活PPAR-γ从而抑制Cyclin D1的表达,使癌细胞停留在G1期,抑制细胞的增殖.     

节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响

目的 探讨节律基因Bmal1对胃癌细胞BGC-823增殖及凋亡的影响.方法 构建针对Bmal1序列的shRNA,用脂质体介导转染入胃癌细胞BGC-823,G418筛选稳定细胞株(转染组),同时设对照组(空白组).用克隆形成率检测细胞生长,用流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,RT-PCR及Western blot法检测相关基因及蛋白表达.结果 转染组克隆形成率低于对照组(P＜0.05).与对照组比较,转染组Bmal1总凋亡率升高(P＜0.05),其细胞周期再分布出现G1期缩短(P＜0.05),G2期延长(P＜0.05),同时发现Bcl-2 mRNA表达下调(P＜0.05),c-Myc mRNA表达上调(P＜0.05).结论 Bmal1可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖,促进细胞凋亡,有可能成为诱导胃癌细胞凋亡的新靶点.     

过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ在白藜芦醇抑制胃癌SGC-7901细胞增殖中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)在白藜芦醇(Res)抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖中的作用.方法体外常规培养人胃癌细胞SGC-7901,MTT法检测Res和GW9662(PPAR-γ特异阻断剂)对SGC-7901细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定对细胞周期的影响,RT-PCR方法检测PPAR-γ,Cyclin D1的mRNA表达,Western blot检测PPAR-γ蛋白的表达,免疫细胞化学检测Cvclin D1蛋白表达的改变.结果Res以时间、浓度依赖性方式抑制胃癌细胞SGC-790l的增殖(P＜0.05),使细胞周期停留在G1期;胃癌细胞SGC-7901存在PPAR-γmRNA和蛋白的表达,Res呈浓度依赖性的激活PPAR-γ mRNA的转录.25,50,75,100μmol/L Res作用于胃癌细胞后,细胞中PPAR-γmRNA相对表达分别是空白对照组的122.2%,195.1%,232.9%和277.1%(P＜0.05),而PPAR-γ蛋白的表达几乎没有变化;胃癌SGC-7901细胞高水平表达Cyclin D1,Res显著的抑制Cyclin D1的表达.经25,50,75,100 μmol/LRes处理后,Cyclin D1 mRNA抑制率分别为11.3%,24.3%,35.4%,59.5%,而GW9662能够明显降低Res的上述作用.结论Res在胃癌SGC-7901细胞中部分的通过激活PPAR-γ从而抑制Cvclin D1的表达,使癌细胞停留在G1期,抑制细胞的增殖.     

上调miR-7对胃癌细胞增殖凋亡的影响及其机制研究

目的探讨上调miR-7对胃癌细胞增殖凋亡的影响及其可能的作用机制。方法利用实时定量PCR(q PCR)检测人正常胃黏膜上皮RGM-1细胞和胃癌BGC823细胞中miR-7表达差异;采用脂质体转染法上调BGC823细胞中miR-7表达,并通过q PCR检测其转染效果;CCK-8法检测转染24 h、48 h和72 h后BGC823细胞的增殖情况;转染48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡的变化;Western blotting检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白的表达。结果 miR-7在胃癌BGC823细胞中的表达明显低于正常胃黏膜上皮RGM-1细胞(P0.05)。转染miR-7 mimics后,与空白组相比,阴性组中miR-7表达水平无显著差异(P0.05),干扰组中miR-7表达显著上升(P0.05)。CCK-8检测结果显示,转染24 h、48 h和72 h后,干扰组BGC823细胞中的OD值较空白组显著降低(P0.05),而阴性组与空白组组间差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测显示,与空白组相比,阴性组中G1期、S期、G2/M期细胞所占比例和细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05),而干扰组中G1期细胞所占比例和细胞凋亡率显著升高,S期和G2/M期细胞所占比例显著下降,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blotting检测结果显示,上调miR-7表达后,BGC823细胞中CDK6、CDK4、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的相对表达水平均显著下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论上调miR-7可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与上调Cleaved Caspase-3蛋白表达、下调CDK6、CDK4、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达有关。     

泛素特异性肽酶22对肝癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)对肝癌细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法采用RT-PCR和Western blotting分别检测人正常肝Chang liver细胞和人肝癌HepG2细胞中USP22 mRNA及蛋白表达。利用脂质体转染USP22-siRNA靶向沉默USP22基因,并采用RT-PCR和Western blotting检测其沉默效果;流式细胞仪检测USP22基因沉默对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blotting检测USP22基因沉默对HepG2细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved caspase-9)、细胞周期素D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)表达的影响。结果 USP22基因在人肝癌HepG2细胞中表达明显高于人正常肝Chang liver细胞(P0.05);siRNA干扰HepG2细胞后,与对照组相比,干预组中USP22 mRNA和蛋白的表达均显著降低(P0.05),而阴性组差异无统计学意义(P0.05)。靶向沉默USP22基因后,与对照组相比,干扰组中G_0/G_1期细胞所占比例显著升高,S期和G_2/M期细胞所占比例显著下降,细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);阴性组与对照组间G_0/G_1期、S期、G_2/M期细胞所占比例和细胞凋亡率相比,差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,干预组中Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、Cyclin D1和CDK2蛋白的相对表达量均显著降低(P0.05),阴性组与对照组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 USP22基因沉默可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与周期蛋白Cyclin D1、CDK2及凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9的表达下降有关。     

TPX2基因在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖凋亡的影响和机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)基因在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖凋亡的影响和机制。方法 RT-PCR及Western blotting检测胃癌组织及癌旁组织中TPX2 mRNA和蛋白表达;将NC-siRNA、TPX2-siRNA1、TPX2-siRNA2、TPX2-siRNA3转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何siRNA作为对照组,Western blotting检测转染后各组细胞中TPX2蛋白表达;CCK8实验检测人胃癌SGC-7901细胞转染12、24、48 h后细胞增殖情况;细胞转染48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotting检测PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果胃癌组织中TPX2 mRNA和蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);NC-siRNA组TPX2蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);TPX2-siRNA1、TPX2-siRNA2、TPX2-siRNA3组的TPX2蛋白表达均显著低于对照组(P0.01),TPX2-siRNA3组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;NC-siRNA组在12、24、48 h后的细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),TPX2-siRNA组在12、24、48 h后的细胞存活率均显著低于对照组,且随着时间延长细胞存活率降低(P0.01);NC-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),TPX2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于对照组,PI3K、p-AKT蛋白表达显著低于对照组(P0.01)。结论 TPX2在胃癌中高表达,沉默TPX2的表达能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖和促进细胞凋亡,其机制可能与PT3K/AKT信号通路的调控有关。     

SiRNA干扰LOX基因对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨siRNA靶向干扰赖氨酰氧化酶(LOX)基因对胃癌BGC-823细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用脂质体转染法建立LOX-siRNA的BGC-823细胞株和阴性对照BGC-823细胞株。应用RT-PCR法检测胃癌细胞转染前后LOX mRNA水平,应用Western blotting法检测胃癌细胞转染前后的LOX蛋白表达水平。MTS法检测BGC-823细胞的增殖情况;Transwell迁移和侵袭实验检测干扰LOX基因对BGC-823细胞迁移及侵袭能力的影响。结果与NC-siRNA组及空白组比较,LOX-siRNA转染组LOX mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05),细胞增殖、迁移、侵袭能力明显下降(P0.05)。结论 LOX基因对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭及迁移有一定的促进作用。     

大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823 G2/M期的阻滞调节机制

目的:研究大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823G2/M期阻滞作用及其调节机制.方法:应用MTT法测定大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞增殖抑制率及72h的IC50.通过流式细胞仪检测IC50浓度的大蒜素对SGC-7901和BGC-823细胞周期的影响.应用免疫组化染色检测大蒜素作用前后SGC-7901和BGC-823细胞CDC2和CyclinB蛋白表达.结果:不同浓度的大蒜素可以抑制人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823的增殖,且随着大蒜素浓度的增大,抑制率逐渐增高.大蒜素抑制SGC-7901细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72h为23mg/L;大蒜素抑制BGC-823细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72h为35mg/L.大蒜素作用于两种细胞,其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(SGC-7901细胞24,48hvs对照:26.47±2.54%,28.88±2.75%vs24.30±2.74%,P<0.01;BGC-823细胞24,48hvs对照:22.78±1.45%,24.87±1.61%vs20.32±1.34%,P<0.01),S期细胞无明显变化.未经大蒜素处理的两种细胞,CDC2和CyclinB蛋白表达均为阳性,大蒜素处理后,CDC2和CyclinB蛋白表达下降.SGC-7901细胞经23mg/L大蒜素处理后,CDC2蛋白相对阳性表达率为87.2%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为59.3%.BGC-823细胞CDC2蛋白在35mg/L大蒜素作用后,相对阳性表达率为84.4%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为62.8%,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论:大蒜素使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823停滞于G2/M期,其机制是通过CDC2和CyclinB蛋白表达下降实现的.     

胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的相关性研究

目的探讨胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因(包括ABCB1、MMP2、CDH1、CD44)的mRNA表达水平。采用细胞划痕实验、Transwell迁徙实验评价两株胃癌细胞的侵袭转移能力,进而探讨胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与侵袭转移能力的关系。结果荧光定量PCR实验发现胃癌细胞株BGC-823的ABCB1、CDH1、CD44基因表达较SGC-7901高,而MMP2基因的表达在SGC-7901中较高。细胞划痕实验及Transwell迁徙实验显示胃癌细胞株BGC-823的迁徙能力比SGC-7901强。结论胃癌细胞的多药耐药与侵袭转移有一定的关系,CD44的高表达在胃癌细胞的侵袭转移中可能起主要作用。     

抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

侧群细胞在胃癌细胞株中的分布及其致瘤特性

目的 研究侧群细胞的致瘤特性及其在胃癌细胞株和胃癌组织中的分布.方法 用荧光激活细胞分选法分析SGC-7901、MKN28和BGC-823三种胃癌细胞株中的侧群细胞.取36只裸鼠,分为6组,将SOC-7901分离出的侧群细胞和非侧群细胞分别以每只500、5000、50 000的数量接种到裸鼠皮下,8周后观察成瘤情况.实时定量PCR检测胃癌组织和胃癌细胞株中三磷酸腺苷结合转运蛋白超家族成员G2(ABCG2)mRNA的表达,免疫组化法检测胃癌组织中ABCG2蛋白的表达.结果 SGC-7901细胞株中侧群细胞比例为1.0%,BGC-823为1.3%,MKN28则为阴性.从SGC-7901中分离的侧群细胞最少可成瘤细胞数是500/只,非侧群细胞为50000/只.胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823的ABCG2 mRNA相对量高于MKN28(分别为0.162、0.096和0.005).ABCG2 mRNA和蛋白在胃癌和胃炎组织中有不同程度的表达.结论 胃癌细胞株侧群细胞的致瘤能力明显强于非侧群细胞.在胃癌组织和部分胃炎组织中检测到ABCG2的表达,在胃癌细胞株中侧群细胞比例高的细胞株ABCG2表达高.     

MiR-9对人胃癌细胞增殖和迁移的影响

背景:MicroRNA-9(miR-9)参与调控生长、发育、细胞自我更新和多向分化等多种生理过程,而且其表达异常与多种恶性肿瘤密切相关。目的:探讨miR-9对人胃癌细胞生物学行为的影响。方法:以real-time PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1和人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901中的miR-9表达。采用瞬时转染法将miR-9类似物、miR-9抑制物和空载体分别转染BGC-823、SGC-7901细胞,并以real-time PCR验证转染效率。CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell细胞迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力。结果:与正常胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞miR-9表达显著升高(P0.05)。与空载体对照组相比,miR-9类似物组BGC-823、SGC-7901细胞miR-9表达上调,细胞增殖和迁移能力明显增强(P0.05),miR-9抑制物则可显著抑制胃癌细胞的增殖和迁移能力(P0.05)。结论:上调miR-9表达可促进胃癌细胞增殖和迁移,提示miR-9过表达可能与胃癌进展有关。