Zebularine对肝癌HepG2细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨新型DNA甲基转移酶抑制剂Zebularine对肝癌细胞系Hep G2细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养Hep G2细胞,用不同浓度的Zebularine(25~400μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对Hep G2细胞增殖的影响;Zebularine(100、200、400μmol/L)处理Hep G2细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rho123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase9表达,并检测RUNX3基因表达情况。结果 Zebularine能抑制Hep G2细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;Zebularine(浓度分别为50、100、200μmol/L)作用Hep G2细胞48 h后,细胞凋亡率分别为12.4%、23.4%、35.4%,对照组凋亡率仅为3.3%;线粒体膜电位降低;凋亡相关蛋白Bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,Pro-Caspase-3、Pro-Caspase-9表达减弱,而Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9表达增强,呈浓度依赖性;RUNX3表达上调,也呈剂量依赖性。结论 Zebularine能抑制Hep G2细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调RUNX3表达,进而增加细胞Casepase-3、Casepase-9活性,下调Bcl-2基因的表达及上调Bax基因有关。     

HBV X基因转染对HepG2肝癌细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究HBV X基因转染对HepG2肝癌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响.方法:用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3/HBx瞬时转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pcDNA3的细胞为对照.RT-PCR法检测HBx基因的表达;MTT法检测各组细胞的增殖活性;TUNEL法检测各组的凋亡情况.β-actin为内参,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-xL、c-myc的表达量变化.结果:pcDNA3-X转染HepG2细胞后,RT-PCR扩增出HBV X片段,空质粒组及正常对照组均未扩增出相应片段.HepG2细胞转染HBx基因后,相对于对照组细胞增殖能力明显下降,凋亡增多,差异有显著性意义(P＜0.01);转染HBx的细胞Bax、Bcl-xL、c-myc mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:成功将HBx基因转染入HepG2细胞,并在细胞中表达,转染HBx基因可同时上调Bax、Bcl-xL、c-myc mRNA表达,促进HepG2细胞凋亡,抑制增殖.     

细胞凋亡的分子机制

细胞凋亡是一种由基因调控的,具有特征形态学和生化改变的细胞主动死亡过程,自1972年病理学家Kerr et al首先提出细胞凋亡的概念以来,世界范围的科学家给予了极大的关注并进行了大量的研究。细胞凋亡学说的建立是20世纪生物医学科学发展史上的又一里程碑。细胞凋亡贯穿生命活动的始终,不仅有助于解释个体发育、衰老过程中的诸多现象,而且有利于阐明许多长期困扰人类的疾病,如恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷、感染性疾病、多种神经退化性疾病等的发生及发病机制,并为这些疾病的治疗提供新的可能途径。同样,细胞凋亡与许多消化系统疾病密切相关,凋亡是病毒性肝炎肝细胞死亡的重要机制;细胞凋亡还参与急慢性胰腺炎、溃疡性结肠炎的发生和发展;除细胞增生和分化的异常外,细胞凋亡的异常在绝大多数消化系统肿瘤的形成和发展中同样起着相当重要的作用。因此,本期焦点论坛邀请了有关专家和学者,就细胞凋亡的基础,细胞凋亡与病毒性肝炎、胃癌、肝癌、大肠肿瘤、溃疡性结肠炎的关系做一较为系统的阐述,希望对读者有所启示。     

球囊扩张术对血管平滑肌细胞COX-2表达的影响及其增殖凋亡分子机制研究

目的研究球囊扩张术后血管平滑肌细胞(VSMC)中环氧化酶2(COX-2)mRNA表达及选择性COX-2抑制剂处理VSMC后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、凋亡蛋白Bcl-2的变化,明确COX-2表达与VSMC增殖凋亡分子机制的相关性。方法用RT-PCR检测20只兔腹主动脉球囊拉伤前后VSMC中COX-2的mRNA表达水平；体外实验将选择性COX-2抑制剂NS-398,作用于兔VSMCs,运用MTF法分别于0,24h,48h,72h检测细胞增殖状态；流式细胞仪观察NS-398对细胞凋亡的影响,进一步采用Western blot检测药物作用前后Cyclin D1、Bcl-2的表达。结果兔腹主动脉球囊拉伤后VSMC COX-2mRNA的表达水平明显高于正常VSMC(P＜0．01),为正常组2．42倍；对照组S及G2/M期DNA百分含量与处理组比值分别为1．31,1．62(P＜0．01),NS-398呈时间、剂量依赖性方式抑制VSMC增殖,促进其凋亡。同时,72h时空白组与NS-398(75μmol/L)处理组Cyclin D1、Bcl- 2表达水平比值分别为2．37和3．81(P＜0．01),故两者表达水平随作用时间延长而下降。结论COX-2在球囊扩张术后血管平滑肌细胞中高表达可能在VSMC过度增殖、凋亡受阻中起重要作用。选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过Cyclin D1,Bcl-2影响VSMC的增殖与凋亡,提示COX-2抑制剂可作为预防血管成形术后再狭窄新的候选药物。     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌Hep G-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测TFV对肝癌Hep G-2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平,Western印迹法检测核因子(NF)-κB p65和IκB-α蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,不同浓度TFV能明显抑制Hep G-2细胞的生长(P0.01),呈浓度和时间依赖性。TFV作用于Hep G-2细胞24 h后,Hep G-2 G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞百分率增加(P0.05),诱导细胞凋亡效果明显(P0.01),能明显的降低NF-κBp65表达,升高IκB-α蛋白表达(P0.05)。结论 TFV能抑制Hep G-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与促进IκB-α蛋白表达,下调NF-κBp65蛋白表达有关。     

胸腺肽促进人肝癌细胞HepG2凋亡机制的研究

将对数生长期的人肝癌细胞H epG 2(3×104/m l)随机分为1、2、3、4组,1、2、3组分别用浓度为400、200、100μg/m l的胸腺肽1m l处理,4组用相同体积RPM I-1640培养液处理。免疫组化法检测H epG 2中p53、B c1-2、B ax蛋白的表达,用流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡及死亡率。结果1、2、3组细胞凋亡率及死亡率均显著高于4组;随胸腺肽浓度升高,细胞死亡率升高。胸腺肽作用于H epG 2细胞24h后,琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNA梯形条带,大约相当于180~200bp的整倍数,对照组无DNA梯形条带出现。荧光显微镜下可见H epG 2细胞缩小、染色质固缩,细胞核裂成碎片,但细胞形态仍完整。1、2、3组p53、B ax表达显著高于4组,P均<0.05;B c1-2表达显著低于4组,P均<0.05。提示胸腺肽可诱导人肝癌H epG 2细胞凋亡,其机理是上调p53、B ax表达,抑制B c1-2表达。     

细胞凋亡调控机制及其与肝癌的关系

肝癌的发生一方面与控制细胞增殖的癌基因过度表达有关,另一方面与抑制细胞凋亡的基因高度表达及诱导细胞凋亡的抗癌基因等变异失活有关。 1 肝癌细胞凋亡 肝癌(HCC)存在高速的细胞增殖率和自然的细胞死亡率,两者共同决定肿瘤细胞的生长速度。Grask等通过非基因毒致癌剂NAF,观察由正常肝→突变增生→结节→肝腺瘤→肝癌突变过程,发现凋亡活性呈逐渐增强,但每一阶段中细胞的复制率均高于凋亡率,因此癌前肝细胞可获得优先净增长。从启动阶段到癌变前阶段,促发阶段到肿瘤形成,抑制细胞凋亡与加速肿瘤细胞增长的各期比例虽有不同,但总体上形成复制大于凋亡趋势。但在TGF及免疫细胞因子调节F,可诱导HCC     

泛素特异性肽酶22对肝癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)对肝癌细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法采用RT-PCR和Western blotting分别检测人正常肝Chang liver细胞和人肝癌HepG2细胞中USP22 mRNA及蛋白表达。利用脂质体转染USP22-siRNA靶向沉默USP22基因,并采用RT-PCR和Western blotting检测其沉默效果;流式细胞仪检测USP22基因沉默对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blotting检测USP22基因沉默对HepG2细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved caspase-9)、细胞周期素D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)表达的影响。结果 USP22基因在人肝癌HepG2细胞中表达明显高于人正常肝Chang liver细胞(P0.05);siRNA干扰HepG2细胞后,与对照组相比,干预组中USP22 mRNA和蛋白的表达均显著降低(P0.05),而阴性组差异无统计学意义(P0.05)。靶向沉默USP22基因后,与对照组相比,干扰组中G_0/G_1期细胞所占比例显著升高,S期和G_2/M期细胞所占比例显著下降,细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);阴性组与对照组间G_0/G_1期、S期、G_2/M期细胞所占比例和细胞凋亡率相比,差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,干预组中Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、Cyclin D1和CDK2蛋白的相对表达量均显著降低(P0.05),阴性组与对照组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 USP22基因沉默可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与周期蛋白Cyclin D1、CDK2及凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9的表达下降有关。     

香芹酚对肝细胞癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其分子机制

目的:探讨香芹酚(carvacrol,CV)对人肝癌细胞(HepG2)的抗癌作用及其分子机制.方法:予以不同浓度的香芹酚(0.00、0.05、0.10、0.20、0.40 mmol/L)处理肝癌细胞HepG2后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色法及流式细胞仪(FCM)技术检测...     

索拉非尼对人肝癌HepG2细胞凋亡及其Raf激酶表达的影响

目的观察索拉非尼对人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡及其Raf激酶的影响。方法体外构建培养肝癌HepG2细胞,设A、B组。A组加入索拉非尼0．2ml（将索拉非尼稀释至5μmol／L）,B组不加任何药物。继续培养细胞,于加药后第1、3、5、7天采用流式细胞术和荧光共振能量转移法（FRET）观察两组细胞凋亡及其Raf激酶表达变化。结果A组HepG2细胞Raf激酶活性为45．21％,低于B组的98．11％（P〈0．05）;A组加药后第1、3、5、7天Raf激酶活性分别为96．34％、78．21％、65．21％、45．11％（P均〈0．05）。与B组比较,A组细胞凋亡率明显增加、S期细胞明显减少（P均〈0．05）。结论索拉非尼可以有效地抑制人肝癌HepG2细胞Raf激酶的表达,使S期细胞明显减少,从而抑制HepG2细胞的生长。     

放疗对人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨放疗对人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响。方法采用6MV-X射线照射细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,检测DNA-LADDER的形成,Western印迹方法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果照射后48h,2、4、6Gy剂量组出现明显DNA降解（梯形结构）,但对照组及8、10Gy剂量组无“梯形结构出现”。Western印迹方法分析发现照射后48h,2、4、6Gy剂量组HepG2细胞Caspase-3蛋白表达明显增高,与假照射对照组（0Gy）比较,差异具有显著性（P〈0.05,P〈0.01）。结论X射线能在体外诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能是通过激活Caspase-3蛋白表达实现的。     

环状RNA TADA2A在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响

目的:探讨环状RNA TADA2A(circTADA2A)在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法:对海南医学院第二附属医院80名肝癌患者病理采样肝癌病灶及癌旁组织,采用实时定量逆转录PCR法(RT-qPCR)检测circTADA2A的相对表达量,t检验分析统计学差异,并进一步采用χ²检验分析circTADA2A的相对表达量与临床病理特征的关系;顺时转染空白质粒和circTADA2A过表达质粒;Western blot检测人肝癌HepG2细胞凋亡指标Casapase3,t检验分析统计学差异。结果:肝癌组织中的circTADA2A的相对表达量明显高于癌旁组织(2.03±0.12>0.45±0.03,t=10.358,P=0.001),差异有统计学意义(P<0.05);circTADA2A相对表达水平与肿瘤T分期(χ²=7.301,P=0.002)和分化程度(χ²=10.651,P=0.000)呈显著相关,差异有统计学意义(P<0.05);circTADA2A过表达的HepG2细胞凋亡指标Casap...     

三氧化二砷对炎症细胞的影响及其分子机制

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人T淋巴细胞和人树突状细胞(DCs)凋亡以及对树突状细胞表型、细胞因子分泌的影响,探索As2O3洗脱支架局部抗炎作用的有关机制。方法分离培养人T淋巴细胞,用rhGM-CSF和rhIL-4诱导单个核细胞分化为树突状细胞,流式细胞仪检测As2O3对T淋巴细胞和树突状细胞凋亡的影响;用LPS诱导树突状细胞分化成熟,流式细胞仪检测As2O3干预对树突状细胞成熟表型的影响,ELISA检测As2O3对树突状细胞分泌细胞因子的影响。结果 As2O3在1umol/L浓度时即可明显诱导人T淋巴细胞凋亡,在5umol/L浓度时可诱导树突状细胞凋亡,且均呈剂量依赖性;As2O3在低于凋亡诱导剂量时即可抑制LPS诱导的树突状细胞成熟,下调树突状细胞表面分子CD83和CD86的表达率,并减少树突状细胞IL-10、IL-12和IFN-γ等细胞因子的释放。结论 As2O3具有诱导T淋巴细胞、树突状细胞凋亡以及抑制树突状细胞的免疫成熟的作用,As2O3洗脱支架的局部抗炎作用和As2O3的上述作用有关。     

刺五加皂甙对肝癌细胞凋亡的影响

探讨刺五加皂甙（ＡＳＳ）对体外培养肝癌细胞凋亡的影响。采用透射电镜及琼脂糖凝胶电泳观察ＡＳＳ作用肝癌凋亡的形态学改变和ＤＮＡ电泳。电镜观察ＡＳＳ作用肝癌细胞出现异染色体边集,线粒体肿胀等凋亡的改变。ＡＳＳ作用肝癌细胞ＤＮＡ出现典型梯状改变。提示ＡＳＳ促进体外培养肝癌细胞凋亡。且随着时间的增加和剂量加大,诱发凋亡程度增高。     

高浓度葡萄糖对人胰岛β细胞凋亡影响的分子机制

目的　初步探讨高浓度葡萄糖对人胰岛 β细胞凋亡的影响及其分子机制。　 方法　分离培养人胰岛细胞 ,并分为对照组、高糖组和高糖 氨基胍组 ,3 7℃ ,5 %CO2 培养 72h ,测定培养液上清液中胰岛素、一氧化氮 (NO)、还原性谷胱甘肽 (GSH)水平。原位末端核苷酸标记法 (TUNEL)和胰岛素免疫组化双染色法及ELISA法检测胰岛 β细胞凋亡 ,RT PCR检测胰岛细胞p5 3、Bcl 2和胰岛素基因启动转录因子 1 (PDX 1 )mRNA表达水平。　结果　高糖组胰岛 β细胞凋亡小体富计因子(1 91± 0 6 9)、β细胞凋亡率 (1 4 8% )、NO〔(1 82 3± 1 5 5 ) μmol/L〕和 p5 3mRNA(0 3 0 6± 0 0 3 9)表达水平均显著高于高糖 氨基胍组〔分别为 1 1 9± 0 3 3、6 8%、(1 5 4 2± 1 9 7) μmol/L、0 1 3 9±0 0 6 9,P <0 0 1〕和对照组〔分别为 1 0 6± 0 2 6、4 2 %、(1 1 7 3± 2 1 7) μmol/L、0 1 2 5± 0 0 1 5 ,P <0 0 5〕 ,而胰岛素释放量、GSH、bcl 2mRNA和PDX 1mRNA表达水平则显著低于高糖 氨基胍组(P <0 0 5 )和对照组 (P <0 0 5 )。　结论　高浓度葡萄糖可通过诱导人胰岛 β细胞凋亡及PDX 1表达降低使胰岛素分泌减少 ,其机制与高糖状态下胰岛 β细胞抗氧化能力降低引起NO介导的p5 3高表达和PDX 1低表     

胰岛β细胞凋亡的分子机制

胰岛β细胞凋亡在糖尿病的发病中扮演重要角色,1、2型糖尿病β细胞凋亡的分子机制有所不同。在1型糖尿病中,胰岛β细胞主要通过死亡受体介导的信号转导途径及颗粒酶B途径发生凋亡,而在2型糖尿病中,线粒体途径是胰岛β细胞凋亡的主要信号转导途径。多种细胞因子通过激活核转录因子调节相应基因表达,进而调控胰岛β细胞的凋亡。     

肝癌宿主防御的分子细胞机制

机体可通过复杂的分子和细胞机制阻止肿瘤的形成和发展。肝癌对人类生命造成严重危害，而宿主则通过其防御机制干扰肝癌的形成及播散，目前对此尚未完全了解。本文简要介绍宿主对原发性肝细胞癌(HCC)防御机制的初步研究。     

β细胞凋亡的主要分子机制

β细胞凋亡是1型和2型糖尿病发病机制中的关键环节,但1型和2型糖尿病β细胞凋亡的分子机制有所不同.Fas配体、穿孔素和颗粒酶、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、γ-干扰素和NO在1型糖尿病的β细胞凋亡中起着重要的作用.炎症应激、氧化应激和内质网应激在2型糖尿病的β细胞凋亡中发挥着关键作用.     

血管内皮生长因子-A siRNA对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及机制

目的通过RNA干扰技术特异性地使人肝癌细胞株Hep G2中血管内皮生长因子(VEGF)-A表达下调,检测细胞凋亡率变化及pAkt、生成素、caspase-3表达。方法采用脂质体介导将针对靶基因VEGF-A的小片段RNA导入人Hep G2细胞内,用Western印迹和RT-PCR技术检测人Hep G2细胞内VEGF-A、p-Akt、生成素、caspase-3的表达,用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)双标记流式细胞术检测细胞凋亡。结果细胞转染成功后,VEGF-A siRNA组VEGF-A mRNA表达量显著降低,较RNA干扰组下降80.88%(0.26±0.07 vs 1.36±0.05,P0.01),VEGF-A蛋白表达量显著降低,较RNA干扰组下降75.34%(0.18±0.02 vs 0.73±0.06,P0.01);细胞凋亡率增加,VEGF-A siRNA组较RNA干扰组增高21.96%(28.21%±1.75%vs 6.25%±0.82%,P0.01)。伴随p-Akt和生存素蛋白水平降低和caspase-3表达上调(P0.01)。结论通过RNA干扰技术特异性地使人肝癌细胞株Hep G2中VEGF-A表达下调,可以诱导Hep G2细胞发生凋亡,这可能是通过PI3K/p-Akt/生存素信号转导通路实现的。