HPI-4对胃癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的探讨Hedgehog信号通路抑制剂HPI-4对胃癌细胞生长的抑制作用及其可能的作用机制。方法不同浓度(0、20、40和80μmol/L)的HPI-4处理BGC-823细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况,Transwell小室法检查细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blotting检测细胞中GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达情况。结果不同浓度的HPI-4处理BGC-823细胞24、48和72 h后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间-剂量关系(P0.05);与对照组(0μmol/L)相比,20、40和80μmol/L HPI-4处理过的BGC-823细胞的侵袭细胞数、GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白相对表达均显著降低,且呈浓度依赖性(P0.05);与对照组相比,20、40和80μmol/L HPI-4处理BGC-823细胞的凋亡率均显著升高,且呈浓度依赖性(P0.05)。结论 HPI-4可抑制BGC-823增殖和侵袭,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与GLI1、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达有关。     

大蒜素对人肺腺癌细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究大蒜素对人肺腺癌A549细胞增殖抑制、细胞凋亡的影响。方法用不同浓度大蒜素作用体外培养的A549细胞,采用CCK8法检测大蒜素对A549细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察A549细胞形态学变化,ELISA法测定A549细胞上清液VEGF水平,比色法检测caspase3、caspase9活性变化。结果大蒜素对A549细胞增殖有明显抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;24 h、48 h及72 h大蒜素对A549细胞的IC50分别为114.26μg/ml、85.27μg/ml、76.83μg/ml(P<0.05);60μg/ml以上大蒜素作用A549细胞48h可产生显著凋亡特征;随大蒜素浓度增加,A549细胞上清液VEGF水平呈下降趋势,A549细胞caspase3、caspase9蛋白活性显著增加。结论大蒜素能显著抑制A549细胞增殖、诱导其凋亡,可能与VEGF表达下降及caspase3、caspase9激活相关。     

曲古抑菌素A对胃癌细胞生长的抑制作用

目的: 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素A(trichostatin A, TSA)对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制作用, 证实该作用是通过促使细胞凋亡而实现的.方法: 用不同浓度(0.2、0.4和0.8 mg/L)和不同作用时间(24、48和72 h)的TSA作用于SGC-7901细胞, 采用MTT法观察TSA对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化;通过透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果: TSA可抑制胃癌SGC-7901细胞的生长,且这种作用呈时间和剂量依赖关系. 当TSA作用浓度分别为0.2、0.4和0.8 mg/L时, 与SGC-7901细胞均作用72 h, TSA对SGC-7901细胞生长的抑制率分别为25%±1.2%, 45%±1.4%和73%±1.7%, 各组均与TSA 0.2 mg/L组比较, 差异显著( P<0.05). 当0.8 mg/L TSA分别与SGC-7901细胞作用24、48和72 h, TSA对SGC-7901细胞生长的抑制率分别为21%±1.1%, 37%±2.0%和73%±1.7%, 各组均与TSA作用24 h组比较, 差异显著( P<0.05). TSA可延缓细胞周期, 具有明显的诱导细胞凋亡作用. 电镜下见细胞染色质凝聚成段片状, 细胞核固缩断裂, 核膜破裂, 细胞器及胞膜自溶, 凋亡小体形成.结论: TSA通过诱导细胞周期阻止和凋亡来抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长, 且这种作用呈时间和剂量依赖性, 为TSA用于胃癌的治疗提供理论依据.     

大肠可利用越橘成分抑制人结直肠癌细胞生长的机制研究

目的利用植物化学物(phytochemicals)中的越橘提取物,制备大肠可利用越橘提取物(Colon-available cranberry extract,CACE),并以此观察CACE对H₂O₂诱导的DNA损伤的保护作用;并研究CACE对人大肠癌细胞的增殖和侵袭能力的影响及其分子机制。 方法经模拟上消化道环境消化吸收后,将越橘提取物制备成CACE。首先以MTT法检测CACE对大肠癌Lovo细胞的生长抑制作用。然后利用单细胞凝胶电泳实验检测CACE对于过氧化氢诱导的大肠癌细胞核损伤的保护作用;进而用Matrigel基底膜侵袭实验检测CACE对Lovo细胞侵袭能力的影响,并通过流式细胞技术观察CACE对于Lovo细胞周期的影响。最后利用Western-blot方法检测CACE对Lovo细胞P53及VEGF蛋白表达的影响,同时使用实时荧光定量聚合酶链反应方法检测CACE对于Lovo细胞VEGF表达的影响。 结果MTT实验结果示：CACE浓度从20μg/ml增至120μg/ml,Lovo细胞增殖率从90.64±3.11%降至38.54±3.13%。单细胞凝胶电泳实验结果发现：以相同浓度的H₂O₂损伤Lovo细胞,CACE干预组较对照组的细胞DNA损伤明显减轻,而且随CACE浓度增加损伤进一步减轻。流式细胞仪检测细胞周期结果发现：CACE增加了Lovo细胞在G1期的比例,但没有明显的统计学意义(P>0.05)。穿膜侵袭实验显示：穿膜细胞数量随CACE浓度增加而减少;Western-blot结果：CACE能显著降低大肠癌Lovo细胞P53和VEGF蛋白的表达,且随浓度增加该作用进一步增强;Real-time PCR实验结果显示,CACE抑制了VEGF的mRNA的表达。 结论CACE在体外模型中能够显著抑制人大肠癌细胞系Lovo的增殖和侵袭,且对DNA损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制P53和VEGF的表达来实现。     

酪酪肽对人胰腺癌细胞生长的调节作用及其机制研究

目的：观察酪酪肽（PYY）对人胰腺癌细胞生长的抑制作用及其对细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量的影响。方法：采用^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR）掺入、放射免疫法，测定PYY对人胰腺癌细胞株SW－1990生长的调节作用及其对细胞内cAMP含量的影响。结果：PYY对SW－1990细胞的生长有显著抑制作用，随其浓度的增加或作用时间的延长而增强，并可减少细胞内cAMP的产生呈剂量依赖关系。结论:PYY树人胰腺癌细胞生长有抑制作用，其机制可能与通过降低细胞内cAMP含量有关。     

cGKⅠ对胃癌细胞的抑制作用及其机制

目的探讨c GMP依赖性蛋白激酶(cGK)Ⅰ对胃癌细胞的抑制作用及其机制。方法构建过表达cGKⅠ慢病毒,感染胃癌细胞株(AGS)获得过表达cGKⅠ细胞系,通过四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定过表达cGK对AGS细胞活力的影响,Western印迹检测原癌基因p53,抑癌基因C-myc,细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(caspas)3以及迁袭转移相关基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9蛋白的表达变化。结果 cGKⅠ腺病毒载体感染的AGS细胞,细胞活性显著下降。p53抑癌基因和C-myc原癌基因并没有显著变化,细胞迁移相关蛋白MMP-2、7、9均显著下降,凋亡蛋白caspase3显著上升。结论 cGKⅠ对AGS细胞增殖有抑制作用。cGKⅠ诱导的细胞迁移能力的下降和凋亡的上升与抑癌基因和原癌基因无关,或者在AGS细胞中存在p53和C-myc原癌基因突变。     

野生型p53对人肺癌细胞体内生长的抑制作用

观察外源性野生型ｐ５３基因对有Ｐ５３基因突变的人肺癌细胞系８０１－Ｄ体内生长的抑制作用。将转染了ｐ５３基因之细胞８０１－Ｄ－ｐ５３及转染ｐＺＩＰ之８０１－Ｄ－ｐＺＩＰ和母系细胞，接种裸小鼠皮下，以观察ｐ５３对癌细胞肿瘤源性的影响。瘤内注射或腹腔注射脂质体包裹的ｐ５３基因治疗荷人肺癌８０１－Ｄ细胞之裸小鼠，观察对肿瘤细胞体内生长的抑制作用。转染ｐ５３之８０１－Ｄ－ｐ５３细胞肿瘤源性显著降低，３／４移     

VEGFR-3 siRNA体外对人结肠癌细胞生长的抑制作用

目的: 探讨血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在肿瘤细胞生长中的作用.方法:根据人ⅦGFR-3mRNA编码序列,设计3个RNA干涉靶点,构建siRNA表达载体,并转染到LoVo细胞中,应用半定量RT-PCR检测基因转染前后VEGFR-3mRNA表达水平的变化,采用四甲基偶氮唑蓝显色法(MTT)观察细胞生长变化,并应用流式细胞计数仪分析细胞凋亡的情况.结果:针对,VEGFR-3基因的siRNA表达载体成功构建,psiRNA-VEGFR-3可显著抑制LoVo细胞中VEGFR-3基因的表达,转染psiRNA-VEGFR-3细胞生长明显抑制,并可诱导LoVo细胞出现凋亡.结论:p3iRNA-VEGFR-3载体能够在loVo细胞中引发RNA干扰效应,下调VEGFR-3基因的表达可以抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.     

miR-144-5p对人结肠癌细胞生长和转移的抑制作用及机制

目的检测miR-144-5p在结肠癌中的表达,并研究其对结肠癌细胞生长和转移的抑制作用和机制。方法采用RT-qPCR技术检测结肠癌标本、癌旁组织及癌旁细胞中miR-144-5p的表达。使用噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,并使用Transwell分析评估细胞侵袭和迁移。结果 miR-144-5p在结肠癌组织和细胞系中显著下调(P0.01)。MTT检测发现,miR-144-5p可抑制细胞增殖。且miR-144-5p可以明显抑制小鼠荷瘤模型中结肠癌的生长。通过划痕实验发现,miR-144-5p可抑制肿瘤细胞迁移,且miR-144-5p还可以明显抑制结肠癌细胞在体外的侵袭。结论 miR-144-5p可抑制结肠癌细胞的增殖和转移,并促进其凋亡,有望作为靶点用于结肠癌的临床治疗。     

曲古霉素A对人胃癌细胞的抑制作用及其机制探讨

背景：组蛋白去乙酰基酶抑制剂（HDACi）是一类新型抗肿瘤药物。曲古霉素A（TSA）是目前研究最为广泛的HDACi之一,已发现其对多种肿瘤细胞具有明显抑制作用,但关于TSA对胃癌作用的研究尚少。目的：观察TSA对人胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期以及相关基因表达的影响,探讨其抑制人胃癌细胞的可能作用机制。方法：以不同浓度TSA（0—1μmol／L）处理人胃癌细胞株AGS和HGC-27。CCK-8实验检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,realtimeRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡、细胞周期相关基因mRNA和蛋白水平的表达。结果：TSA能剂量依赖性地抑制AGS、HGC-27细胞增殖（P=0．000）,对两者的半数致死浓度分别约为0．25μmol／L和0．5μmol／L。TSA能诱导AGS、HGC-27细胞发生G0／G1期和G2／M期阻滞,以G0／G11期阻滞更为明显。TSA对AGS细胞的诱导凋亡作用强于HGC-27细胞（P〈0．05）。TSA尚能上调p21、p53、BaxmRNA和蛋白表达,下调Bel-2、CDK2、cyelinD1mRNA和蛋白表达,作用均呈时间依赖性（P〈0．05）。结论：TSA抑制人胃癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用可能是通过调节细胞凋亡、细胞周期相关分子、激活多种肿瘤相关信号通路实现的。     

IL-24融合蛋白表达载体的构建及其对人小肠癌细胞的生长抑制作用

目的:构建人白细胞介素-24(IL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达．研究IL-24融合蛋白对人小肠癌细胞(HIC)的生长抑制作用．方法:用PCR从质粒TRAP-hIL-24中扩增人 IL-24 cDNA片段,并将该片段插入DGEX-KG 原核表达载体中,实现插入基因的融合表达．用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定．提取并纯化IL-24融合蛋白,以不同浓度与 HIC细胞共培养72 h,同时设立相应浓度梯度的GST蛋白组、HIC细胞对照组及空白孔,采用MTT法检测各组人小肠癌细胞的体外增殖结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX- KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr) 同预期值相一致,融合蛋白为Mr53 000,GST 蛋白为Mr29 000．IL-24融合蛋白以浓度依赖性的关系抑制HIC细胞的生长,并且在20和40 mg／L时的抑制率明显高于GST蛋白．结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG- IL-24,并在E.coli BL21中表达．IL-24融合蛋白对HIC细胞生长有抑制作用．     

艾迪注射液对大肠癌细胞的生长抑制作用观察及相关机制探讨

目的观察艾迪注射液对大肠癌SW620细胞的生长抑制作用,并探讨其相关机制。方法选对数生长期的SW620细胞,分别加入终浓度为20、40、60、80、100mg／ml的艾迪注射液实验组,以不加艾迪注射液的SW620细胞作对照（对照组）,两组培养3d后用MTT法测定SW620细胞光密度值,计算细胞生长抑制率。用巨噬细胞建立模拟肿瘤微环境,将SW620细胞置于该环境,分别加入终浓度为20、60、100mg／ml的艾迪注射液作为实验组,以不加艾迪注射液的SW620细胞作对照,在不同时间点取培养上清液检测TNF-α、TGF—β,收集SW620并检测其E-钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）。结果随着艾迪注射液浓度的增加,SW620的生长抑制率逐渐降低（P〈0．05）,明显低于对照组（P〈0．05）;肿瘤微环境中细胞培养上清液中的TNF—α、TGF—β表达逐渐减少（P〈0．05）,细胞中的E-cadherin的表达先减后增,Vimentin的表达先增后减。结论艾迪注射液能抑制大肠癌SW620的增殖,其作用机制可能是阻止巨噬细胞对SW620细胞上皮-间质转化的促进作用。     

高良姜素对肝癌细胞抑制作用的机制

肝细胞癌(HCC)病死率较高,尽管已有较多的治疗手段,但迄今为止HCC的临床治疗效果仍然欠佳,患者预后差。因此,临床上有必要寻找一种治疗HCC的新药以提高患者的生存率。介绍了一种新的抗肿瘤药物高良姜素,其可以通过抑制细胞增殖、促进凋亡、诱导自噬,以及抑制转移等途径发挥抗癌作用。除此之外,高良姜素还可抑制肝癌新生血管形成、逆转多药耐药以及加强药物的协同作用等。因此,认为高良姜素具有广阔的临床应用前景,期待更多的研究聚焦于高良姜素抗肝癌细胞的作用机制,为其临床转化应用提供充分的科学依据。     

血管活性肠肽对人胰腺癌细胞生长自分泌调节作用及其机制的研究

采用＾３Ｈ－胸腺嘧啶掺入研究了血管活性肠肽（ＶＩＰ）对我院所建一株人胰腺癌细胞生长的影响，并对该细胞株进行ＶＩＰ受体、受休珀细胞内介质ｃＡＭＰ和多胺产生的研究。发现ＶＩＰ在１０＾－６Ｍ和１０＾－７Ｍ对具有ＶＩＰ受体的人胰腺癌细胞有明显促生长作用，且成浓度依赖关系，这种作用可被其受体拮抗剂（４－Ｃｌ－ＤＰｈｅ＾６，Ｌｅｕ＾１７）ＶＩＰ所阻断；ＶＩＰ能显著促进本株人胰腺癌细胞内ｃＡＭＰ及多胺的产生，表     

血管活性肠肽对人胰腺癌细胞生长的自分泌调节作用及其机制的研究

采用３Ｈ－胸腺嘧啶掺入研究了血管活性肠肽（ＶＩＰ）对我院所建一株人胰腺癌细胞生长的影响，并对该细胞株进行ＶＩＰ受体、受体后细胞内介质ｃＡＭＰ和多胺产生的研究。发现ＶＩＰ在１０－８Ｍ和１０－７Ｍ对具有ＶＩＰ受体的人胰腺癌细胞有明显促生长作用，且成浓度依赖关系，这种作用可被其受体拮抗剂（４－Ｃｌ－Ｄ－ｐｈｅ６，Ｌｅｕ１７）ＶＩＰ所阻断；ＶＩＰ能显著促进本株人胰腺癌细胞细胞内ｃＡＭＰ及多胺的产生，表明ＶＩＰ的促生长作用可能与细胞内ｃＡＭＰ和多胺的生物合成增加有关；本株细胞在培养过程中可向培养基中分泌一定量的ＶＩＰ，ＶＩＰ抗体能抑制其在无血清培养基中生长，提示ＶＩＰ对本株人胰腺癌细胞的生长有自分泌调节作用。