核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用

核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术体外筛选得到的单链DNA或RNA片段,能高亲和、高特异性地结合氨基酸、糖类、蛋白质、细胞、细菌和病毒等多种目标物质,具有操作简单、灵敏度高和检测成本低等优点.在海洋生物毒素的检测和预防中,核酸适配体技术已显示出巨大的潜力.本文概述了核酸适配体技术的基本原理、目前的应用现状及优势,分析了海洋生物毒素分子的特点及现有检测手段的局限,并对核酸适配体技术在海洋生物毒素检测中的应用前景进行了展望.     

雌激素受体核酸适配体在乳腺癌免疫组织化学检测中的应用

  目的  筛选出能应用于乳腺癌免疫组织化学检测的雌激素受体（ER）核酸。  方法  制备ER蛋白,用指数富集的配体系统进化（SELEX）技术筛选出对ER具有高亲和力和特异性的核酸适配体。采用配体－受体相互反应实验来测定合成的ER适配体复合物的亲和力,用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗对105例乳腺癌组织进行免疫组化染色,以检测合成的ER适配体在癌组织中的特异性表达。用Kappa检验进行一致性检验。  结果  线性回归法计算获得生物素化适配体与ER复合物的解离常数Kd值为（0.34±0.05）nmol/L (n=3, r=0.989),最大结合力（B_max）为769.23 fmol/(mg prot·nmol-1·L-1)。实验结果表明,分别用生物素化ER适配体和ER单克隆抗体分别作为一抗进行免疫组化染色的结果具有高度一致性。其中ER阳性和阴性样本n=105,kappa值=0.943,95%可信区间=0.879~1.006,P<0.05;而ER弱阳性和中度/强表达样本n=75,kappa值=0.805,95%可信区间=0.642~0.967,P<0.05。进一步观察发现,ER适配体和ER抗体能使乳腺癌组织同一部位出现阳性表达,而阴性对照组均无表达。2例子宫内膜癌用生物素化ER适配体检测,癌细胞ER表达均为阳性。  结论  我们合成的ER适配体在体外能高度结合ER,ER适配体和ER抗体都能检测乳腺癌组织中ER的特异性表达。     

靶向乳腺癌的核酸适配体应用研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,实现乳腺癌的早期诊断和早期治疗意义重大.核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)筛选得到的寡核苷酸序列,在肿瘤诊断及治疗方面拥有良好的应用前景.本文对靶向乳腺癌的核酸适配体及适配体作为载体和探针在乳腺癌诊疗中的作用进行综述.     

液体活检在头颈部肿瘤诊治中的应用进展

随着精准医学的发展,液体活检包括液体DNA、液体RNA、循环肿瘤细胞等的检测,已经在各类恶性肿瘤诊治中崭露头角,但是,其在头颈部肿瘤诊治中的应用数据还不丰富.本文就目前液体活检在头颈部肿瘤诊治中的应用进展作一简述.     

液体活检在消化道肿瘤诊疗中应用的研究现状

液体活检是近几年来兴起的一种分子检测手段,可以帮助临床医生早期筛查和发现肿瘤,为肿瘤的早期诊断提供了一种比常规肿瘤标志物灵敏性及特异性更高的替代方法。同时,液体活检还具有实时监测治疗疗效和耐药基因的产生,评估复发转移风险的作用,在肿瘤的精准治疗中具有重要临床应用前景。本文主要对液体活检的生物学特性及其在消化道肿瘤中的临床应用进行概述。     

肿瘤液体活检

肿瘤是危害人类健康的重大疾病,其复杂性和异质性使得肿瘤诊疗进展缓慢.精准医疗促使肿瘤诊疗方式朝着更加精细化、个体化的方向发展,分子诊断技术和靶向治疗正逐步应用于肿瘤临床诊疗过程.液体活检技术能够通过患者体液反映疾病状态,无创且能提供动态丰富的肿瘤相关分子信息,在肿瘤早期预警及辅助诊断、疗效实时监测、用药指导和耐药机制探...     

核酸适配体筛选方法研究进展

指数富集的配基数系统进化(SELEX)技术的基本过程是用化学方法合成一个单链寡核苷酸库,将之于与靶标物质混合,寡核苷酸链与靶标物质结合形成复合物,去除未结合的核酸链后,再将结合的核酸分子与靶标物质分离,以此寡核苷酸分子为模板进行PCR扩增,用其产物进行下一个循环的筛选。经过数次循环,即可得到能与靶标物质高亲和力高特异性结合的核酸适配体分子。本文综述了SELEX技术筛选核酸适配体技术的一些研究进展。     

基于核酸适配体-荧光染料EvaGreenTM快速检测ATP的研究

目的 利用荧光嵌入染料EvaGreenTM在单双链DNA溶液中不同的荧光性质构建基于核酸适配体的ATP检测体系,建立一种简单、高效的检测ATP的新方法.方法 利用ATP核酸适配体双链DNA(dsDNA)和核酸绿色荧光染料Eva GreenTM嵌合作用,实现了对ATP的检测.考察了ATP的孵育温度、pH、浓度等因素对荧光...     

Cell-SELEX技术在肿瘤诊治中的应用进展

 Aptamers,selected by an in vitro process known as systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX),are single stranded DNA or RNA oligonucleotides with high selectivity,affinity and stability.Aptamers that can bind whole cells,especially cancer cells,are generated by a method called cell SELEX.Compared with antibodies,aptamers possess many advantages,including wide range of targets,quick and reproducible synthesis,nontoxicity and lack of immunogenicity,easy and controllable modification to fulfill the recognition of cancer cells.Aptamers conjugated nanomaterials gain more flexibility as cancer cell targeting tools.In this review,we discuss the application of cell-SELEX based aptamers in novel cancer biomarkers identification,cancer imaging,cancer therapy and enhanced targeting when conjugated with nanomaterials.     

基于核酸适配体-荧光染料EvaGreenTM快速检测ATP的研究

目的利用荧光嵌入染料EvaGreenTM在单双链DNA溶液中不同的荧光性质构建基于核酸适配体的ATP检测体系,建立一种简单、高效的检测ATP的新方法。方法利用ATP核酸适配体双链DNA(dsDNA)和核酸绿色荧光染料Eva GreenTM嵌合作用,实现了对ATP的检测。考察了ATP的孵育温度、pH、浓度等因素对荧光强度的影响,并对该方法的特异性进行了验证。结果反应体系在12℃,pH 7.5条件下具有最佳实验效果,在最优条件下,最低能检测10-6mol/L的ATP,并具有较高的特异性。结论本研究为ATP的快速检测提供了一种易于操作、低成本的新方法。     

基于核酸适配体的比率荧光探针定量检测血浆外泌体

目的:建立一种新型比率荧光探针法用于定量检测血浆中外泌体。方法:将Cy5荧光探针标记的CD63核酸适配体固定到链霉亲和素磁珠(MNPs)上,得到MNPs-Apt,加入SYBR GreenⅠ(SGⅠ)核酸染料构建比率荧光免疫磁珠(MNPs-Apt-SGⅠ)。当外泌体存在时,CD63核酸适配体捕获外泌体而发生结构改变,SGⅠ探针从双链中释放,免疫磁珠上的SGⅠ荧光强度大幅减弱,而Cy5荧光探针的荧光恒定,根据两种荧光探针被激发的荧光信号比值变化[Δ(F_C/F_S)]对外泌体进行定量检测。结果:外泌体浓度在8.0×10⁴～1.0×10⁷个/μL范围内,Δ(F_C/F_S)与外泌体浓度呈良好的线性关系。该方法灵敏度高,选择性好,检出限为4.0×10⁴个/μL。此外,所建立的方法成功地应用于血浆外泌体的检测。结论:构建的比率荧光探针法具有快速、灵敏、准确度高、特异性强等优点,可用于血浆样品外泌体的定量检测。     

TLS9a核酸适配体对小鼠肝癌细胞的靶向作用研究

目的 探讨TLS9a核酸适配体对小鼠肝癌细胞的靶向作用.方法 制备马来酰亚胺修饰的装载阿霉素的脂质体(liposome),合成FITC荧光及巯基修饰的TLS9a核酸适配体,并将其耦联到脂质体表面.紫外分光光度法检测阿霉素包封率.动态光散射法(DLS)测纳米粒子粒径大小及电位分布,倒置荧光显微镜观察小鼠肝癌细胞对阿霉素摄入及用流式细胞技术检测平均荧光强度,评估小鼠肝癌细胞对药物摄入量.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性.结果 流式细胞术检测TLS9a核酸适配体与BNL.1ME.A.7R.1小鼠肝癌细胞结合率为54.1％,TLS9a耦联的脂质体平均粒径分布在(116.0±5.0)nm.TLS9a-liposome/DOX在pH 5.0的环境中可以快速释放化疗药物DOX,72 h药物释放量超过70％.TLS9a-liposome/DOX在体外能够有效抑制小鼠肝癌细胞BN L.1ME.A.7R.1生长.结论 TLS9a核酸适配体可以特异性与小鼠肝癌细胞BNL.1ME.A.7R.1结合,可用于检测小鼠肝癌细胞.     

液体活检在胃癌诊疗中的研究进展

胃癌是一种全球常见的恶性肿瘤,目前迫切需要具有高特异性和敏感度的生物学标志物以协助诊断,预判疗效和预后。液体活检的特点是从外周血或其他体液中分离癌症来源成分,如循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA、microRNA、外泌体、长链非编码RNA等,并对其基因组或蛋白质组学进行评估。液体活检是一种微创、可重复的技术,可以用于早期胃癌的筛查和诊断、指导治疗、评估治疗效果和预测预后。在此,本文将对液体活检在胃癌诊疗中的临床应用及常规实施液体活检仍需克服的问题予以综述。     

液体活检在肺结节诊疗中的应用现状及前景

在全世界范围内,肺癌是发病率和死亡率居于第一位的恶性肿瘤,且约四分之三的病人在诊断时已处在疾病的晚期,失去了手术机会,5 年存活率低[1].随着低剂量螺旋计算机断层扫描在国内外的广泛应用,大量肺结节的患者被发现,但是肺结节并不等于肺癌,只有5％～10％的肺结节为恶性,而恶性结节如果不进行早期干预,其恶性程度强、病情进展...     

液体活检在肺癌诊疗中的研究进展

在我国,肺癌已成为危害生命健康的常见恶性肿瘤。随着分子生物检测技术的发展及精准化、个体化治疗要求的提高,液体活检因具有传统组织活检所不具备的微创、重复、实时动态监测等优点,正逐渐引起人们的关注。该文旨在描述液体活检的检测对象(如循环肿瘤细胞、循环肿瘤DNA、外泌体、长链非编码RNA等)在肺癌诊疗中的应用前景及面临的挑战。     

癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选

目的:筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础?方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ssDNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列?结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列?结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口?     

反义核酸在肿瘤研究中的应用

利用反义核酸对肿瘤进行反义基因治疗是九十年代兴起的一项治疗肿瘤的新技术。反义核酸可用来调控肿瘤细胞某些异常基因的表达 ,阻断细胞内异常信号的传导 ,使瘤细胞进入正常分化轨道或引起瘤细胞凋亡。随着各国学者的深入研究 ,反义核酸技术已日趋成熟 ,目前已在不同水平 (细胞、动物和临床前期 )上对多种肿瘤使用了这项技术 ,并取得了可喜的成果。但是同时也存在着许多问题有待解决。1　反义核酸的种类及作用机制　　用于基因治疗的反义核酸大致分为三类 :一类是将特异的反义基因连到特定的表达载体上 (质粒、病毒 ) ,导入靶细胞直接转录…     

液体活检在肝癌中的研究进展

肝细胞肝癌(HCC)简称肝癌,是严重威胁我国人民群众生命健康的恶性肿瘤,占我国恶性肿瘤死亡率的第2位,我国是肝癌大国,肝癌发病率位列全世界第5位,死亡原因位列第3位[1],它具有起病隐匿,手术切除率低,易早期转移和复发的特点.虽然经过多年研究,诊断及治疗水平有了很大提高,但复发转移率仍较高,因此,采取更加精准、简易、有...