槲皮素对宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响

目的 观察槲皮素对人宫颈癌细胞C33A增殖和凋亡的影响,初步探讨其相关作用机制.方法 用不同浓度槲皮素(空白对照、20、40、80 μmol/L),顺铂(空白对照、5、10、15、20 μg/mL)以及两者联合(槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL)分别作用于C33A细胞24 h和48 h后,噻唑蓝(MTT法)检测细胞活力的变化;流式细胞术检测槲皮素对C33A细胞周期的影响;Western blot检测槲皮素对C33A细胞Cyclin D1、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示,经过槲皮素处理24 h后,各组细胞活力分别为86.92 ±3.953)%(20 μmol/L组)、(66.54 ±3.932)%(40 μmol/L组)和(52.21 ±2.970)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(98.35 ±1.230)%;经过槲皮素处理48 h后,各组细胞活力分别为(65.19 ±7.071)%(20 μmol/L组)、(47.04 ±8.881)%(40 μmol/L组)和(29.71 ±6.505)%(80 μmol/L组),均低于空白对照组的(96.97 ±1.788)%.;此外,槲皮素40 μmol/L+顺铂10 μg/mL联合作用于C33A细胞24h后,细胞活力下降为(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ± 3.182)%,同空白对照组相比均出现了明显的下降,(31.12 ±2.835)%;48 h后,细胞活力下降为(17.86 ±3.182)%(P<0.05).细胞周期检测结果显示,槲皮素可增加C33A细胞G0/G1期数量,减少S期数量.Western blot 结果显示,槲皮素可下调C33A细胞Cyclin D1蛋白的表达,还可上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达.结论 槲皮素通过下调Cyclin D1蛋白的表达可以抑制C33A细胞的活力和增殖,槲皮素通过上调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达,可以诱导C33A细胞的凋亡.     

青蒿虎酯对人急性髓系白血病原代细胞及其细胞株K562增殖和凋亡的影响研究

背景　目前急性髓系白血病（AML）长期治疗仍面临着高复发率、治疗相关死亡风险及化疗相关毒副作用等多重挑战。而青蒿素作为我国学者首次从菊科植物黄花蒿中提取出的化合物（青蒿琥酯为其类衍生物）,其近年来在白血病、肿瘤疾病治疗中的作用逐渐引起广泛关注。目的　探究青蒿虎酯对人AML原代细胞、细胞株K562增殖和凋亡的影响。方法　采用密度梯度法分离2016年10月-2018年10月于河南省儿童医院血液科就诊的符合纳入标准的24例初治或复发AML患儿的骨髓液中的AML原代细胞。并购买AML细胞株K562进行研究。将AML原代细胞及细胞株K562均分为对照组和实验组（依次为对照组1和实验组1,对照组2和实验组2）,其中对照组1及对照组2不予青蒿琥酯干预,实验组1和实验组2分别添加终浓度为12.5、25.0、50.0 μg/ml的青蒿琥酯液（分别记为终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1及终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2）。采用细胞计数法观察AML原代细胞、细胞株K562存活情况;采用MTT法检测其生长抑制情况;采用流式细胞术检测其凋亡情况。结果　终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞存活率低于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预72 h AML原代细胞存活率低于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML细胞株K562存活率低于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预72 h AML细胞株K562存活率低于终浓度12.5μg/ml实验亚组2（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预24 h、48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h、72 h AML原代细胞生长抑制率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组2（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组1（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组1干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组1（P<0.05）。终浓度12.5、25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于对照组2（P<0.05）;终浓度25.0、50.0 μg/ml实验亚组2干预48 h AML原代细胞凋亡率高于终浓度12.5 μg/ml实验亚组2（P<0.05）。结论　青蒿琥酯能够有效抑制AML原代细胞及细胞株K562的增殖并诱导其凋亡,可为青蒿素治疗AML提供实验依据。     

异牛肝菌素对人胃癌BGC-823细胞增殖及周期影响

目的 探讨异牛肝菌素(iso-suillin)对人胃癌BGC-823细胞增殖及细胞周期的影响。方法 体外培养人胃癌BGC-823细胞至对数生长期,分别使用12.5、25.0、50.0μg/ml的异牛肝菌素干预72h,同时设置对照组。CCK-8法测定人细胞增殖抑制率,流式细胞术碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期分布情况,Western blot法检测p21、p53、cyclinD1、CDK4蛋白表达,Hoechst 33342荧光染色观察细胞凋亡情况。结果 随时间延长,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组和50.0μg/ml剂量组A值均减小,细胞增殖抑制率均升高(P均<0.05);与对照组比较,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组和50.0μg/ml剂量组不同时刻的A值减小,细胞增殖抑制率升高,且呈现出剂量依赖效应(P<0.05)。与对照组比较,12.5μg/ml剂量组、25.0μg/ml剂量组和50.0μg/ml剂量组细胞G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例减少,并且呈现出剂量依赖效应(P<0....     

HLA-G通过促进活化性受体的表达增强NK细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用

目的 探索宫颈癌细胞中HLA-G表达差异对NK细胞表面活化性受体的影响。方法 实时定量PCR(real-time PCR)及免疫印迹法（Western-Blot WB）检测宫颈癌细胞及正常宫颈细胞中HLA-G的表达差异。利用慢病毒载体构建HLA-G稳定下调的宫颈癌细胞株,并与NK细胞共培养,CCK8法检测共培养后宫颈癌细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡水平。同时,流式细胞术检测共培养后NK细胞表面活化性受体NKG2D、NKP30的表达水平及颗粒素（Granzyme）、穿孔酶（Perforin）的表达差异。结果 RT-PCR及WB法检测结果显示：与H8细胞相比,C33a、SiHa细胞中HLA-G的表达显著升高（P <0.05）。CCK8法检测结果显示：HLA-G下调后,C33a及SiHa细胞与NK细胞共培养,C33a及SiHa细胞的增殖能力显著减弱（P <0.05）,同时,C33a及SiHa细胞的凋亡水平显著升高（P <0.05）。流式细胞术检测结果显示：C33a及SiHa细胞HLAG下调后,与其共培养的NK表面NKG2D表达显著升高（P <0.05...     

pcDNA3转染HPV16E6基因对人宫颈癌细胞C33A细胞生长及周期的影响

目的 探讨HPV16E6对宫颈癌C33A细胞生长增殖的影响.方法 通过脂质体法将HPV16E6基因稳定转染宫颈癌C33A细胞,RT-PCR及Western blot分别检测转染细胞中HPV16E6 mRNA和蛋白表达水平,流式细胞仪检测HPV16E6基因转染对C33A细胞生长增殖与细胞周期的影响.结果 稳定转染获得了稳定表达pcDNA3-HPV16E6质粒的C33A细胞克隆(C33A-E6细胞,即pcDNA3/HPV16E6/C33A组)及稳定复制空载体质粒的细胞克隆(C33A-P细胞,即pcDNA3/C33A组),并将未转染的C33A细胞作为对照组.pcDNA3/HPV16E6/C33A组细胞的生长速度比pcDNA3/C33A组和对照组明显加快(P<0.05).在转染了HPV16E6基因的C33A细胞中,其DNA合成前期G1和静止期G0(G0/G1期)细胞百分率(39.3%)明显低于pcDNA3/C33A组(53.7%)和对照组(55.4%)(P<0.01);而处于S期细胞的百分率(38.3%)、DNA合成后期G2及分裂期M的细胞百分率(G2/M:32.9%),均明显高于pcDNA3/C33A组(S:29.4%;G2/M:17.0%)和对照组(S:28.0%;G2/M:16.6%)(P<0.01).pcDNA3/C33A组和对照组细胞周期的各期分布无明显差异(P>0.05).结论 HPV16E6可能通过某种途径参与了C33A细胞的周期调控,促进细胞分裂,从而促进C33A细胞的增殖.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡调控作用的研究

目的：研究丹参酮ⅡA磺酸钠（sodium tanshinone ⅡA sulphonate,STS）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）引起的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）功能异常和凋亡的调控作用。方法：将第6~8代处于对数生长期的HUVEC按如下分组给予处理：DMEM组、LPS（1.0 μg/mL）处理组、高浓度（50.0 μg/mL）STS预处理组、中浓度（25.0 μg/mL）STS预处理组和低浓度（12.5 μg/mL）STS预处理组。其中,各STS预处理组均先以对应浓度的STS预处理HUVEC 2 h,再加入1 μg/mL LPS进行刺激。处理24 h后,CCK?8 法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞增殖;ELISA 法检测细胞培养上清中炎症因子白介素1β（interleukin?1β,IL?1β）的蛋白浓度;Western blot法检测细胞裂解液中IL?1β和凋亡相关分子cleaved caspase?9和cleaved caspase?3的表达,以及细胞核蛋白中核因子κB?p65（nuclear factor?κB?p65,NF?κB?p65）的水平。此外,划痕实验检测HUVEC的迁移能力;光镜观察细胞形态变化;DAPI染色显示细胞核染色质的改变;Annexin V/PI双染法检测HUVEC的凋亡情况。结果：与DMEM相比,LPS处理导致HUVEC活力和迁移能力减低,但促进其增殖;IL?1β和NF?κB p65蛋白水平升高;cleaved caspase?3和cleaved caspase?9表达增高并伴有凋亡水平提高（P＜0.05）。STS预处理能够以浓度依赖的方式部分或完全逆转LPS引起的上述现象（P＜0.05）。结论：STS能够通过浓度依赖的方式抑制LPS引起的HUVEC功能异常和凋亡,对血管内皮起到保护作用。     

潜在抑癌基因 eIF4 E3对宫颈癌细胞分裂增殖的影响

目的：探讨潜在抑癌基因eIF4E3对宫颈癌细胞分裂增殖能力的影响及其分子机制。方法转染eIF4E3表达质粒至Hela细胞和C33A细胞,用定量PCR和WB鉴定转染效率,用CCK－8、流式细胞术分别检测过表达eIF4E3后对细胞增殖及细胞周期的影响,用平板克隆实验检测细胞克隆形成率,用WB分析细胞周期相关蛋白的表达。结果转染 eIF4E3表达质粒后, Hela 细胞和C33A 细胞的增殖能力显著下降,在48 h 分别下降32.84％和30.42％（P＜0.05）;平板克隆形成率分别下降39.99％和21.42％（P＜0.05）; G2／M期细胞比率分别下降55.33％和54.79％（ P＜0.05）;PCNA蛋白和cyclin B蛋白水平显著下调,而cyclin A1和P27蛋白水平无明显改变。结论 eIF4E3通过下调cyclin B1蛋白表达,抑制细胞周期G2／M期,从而抑制宫颈癌细胞的分裂增殖及克隆形成能力。本发现为进一步研究和阐明eIF4E3是否宫颈癌的抑癌基因打下了坚实基础,为宫颈癌预防和诊治靶点的研究提供了重要线索。     

miR-150靶向调控FOXO4促进宫颈癌C 33A细胞生长与生存

【摘要】 目的 检测miR 150在宫颈癌细胞C 33A中的表达,并探讨其是否通过调控靶向基因FOXO4促进宫颈癌细胞的增殖与凋亡。方法 将携带miR 150 mimic（模拟物）和miR 150 inhibitor（抑制物）、阴性对照siRNA经 LipofectamineTM 2000 转染至C 33A细胞中,将细胞分为 NC组( 阴性对照组) 、miR 150 模拟物组( 转染miR 150 mimic细胞组) 及 miR 150 in 抑制物组( 转染miR 150 inhibitor细胞组)。采用流式细胞仪、TUNEL检测法、荧光定量PCR、Western bolt 分别检测miR 150对宫颈癌C 33A细胞周期、凋亡以及周期和凋亡相关基因的影响。3’ 端非翻译区（UTR）荧光素酶活性分析证实miR 150的直接靶向作用。结果 miR 150模拟物促进宫颈癌细胞C 33A的增殖与凋亡,抑制物作用相反,miR 150模拟物促进细胞由G1/G0期进展到S期,从而促进宫颈癌细胞增殖,抑制物相反,miR 150调控几个细胞周期、凋亡相关基因CyclinD1、 p27、 BIM和FASL的表达; miR 150通过靶向结合FOXO4的3’UTR区从而抑制FOXO4的表达。结论 miR 150靶向作用于FOXO4从而调节多种基因的表达以致宫颈癌细胞C 33A的增殖与凋亡。     

槲皮素对钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡抑制作用研究

目的 探讨槲皮素对钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡的抑制作用。方法 采用钛颗粒处理小鼠MC3T3-E1细胞系构建细胞凋亡模型，应用槲皮素进行干预并设置对照，噻唑蓝法[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，MTT法]法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）检测白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）表达，免疫荧光技术检测C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein，CHOP）、B细胞淋巴瘤因子2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白的表达，实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）检测CHOP和Bcl-2的mRNA的表达。结果 钛颗粒抑制成骨细胞增殖活性，并呈浓度依赖性。流式细胞术检测结果显示，钛颗粒诱导成骨细胞凋亡。槲皮素预培养能有效缓解钛颗粒对成骨细胞增殖活性的抑制，减少其凋亡。ELISA检测结果显示，槲皮素能减少IL-1β和TNF-α表达。免疫荧光技术显示槲皮素参与调控CHOP蛋白和Bcl-2蛋白的表达，RT-PCR检测结果显示，槲皮素参与调控CHOP和Bcl-2的mRNA的表达。结论 槲皮素能抑制钛颗粒诱导的成骨细胞凋亡，其作用机制可能与内质网应激启动的凋亡途径抑制，调控CHOP、Bcl-2蛋白表达的信号通路有关。     

27-羟基胆甾醇诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的调控机制

目的探讨27-羟基胆甾醇（27-OHCH）诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）凋亡的调控机制。方法不同浓度（0、3.125、6.25、12.5、25.0、50.0滋M）的27-OHCH作用SH-SY5Y细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,在光学显微镜下观察27-OHCH处理组、添加苏氨酸蛋白激酶（AKT）抑制剂（LY294002）的27-OHCH处理组细胞形态变化,Westernblot法检测磷酸化AKT（p-AKT）、cleaved-caspase-9蛋白表达,AnnexinV-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果给药24h,12.5、25.0、50.0滋M27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低（均P＜0.05）;给药48h,不同浓度（3.125~50.0滋M）27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低（均P＜0.05）。在显微镜下观察发现,27-OHCH能诱导SH-SY5Y细胞凋亡,使细胞数量减少,而LY294002能减弱27-OHCH诱导的细胞毒效应。随着27-OHCH处理组浓度的增加,SH-SY5Y细胞内p-AKT（Ser473）、cleaved-caspase-9（37/35kD）表达明显增强;经LY294002预作用后,不同浓度（0~50.0滋M）27-OHCH处理组p-AKT（Ser473）表达均受抑制,而12.5、25.0、50.0滋M27-OHCH处理组cleaved-caspase-9蛋白表达变化不明显。给药48h,12.5、25.0滋M27-OHCH处理组均能引起SH-SY5Y细胞凋亡效应,而LY294002预作用2h能逆转细胞凋亡效应（均P＜0.05）。结论27-OHCH可通过AKT信号通路诱导SH-SY5Y细胞凋亡。     

宫颈癌细胞系中HPV 感染与GRP78、JNK 及 CHOP 表达的相关性分析

目的 探讨宫颈癌细胞系中HPV（HPV）感染状态与内质网应激相关蛋白表达之间的相关性。 方法 采用免疫组织化学法、Western blot、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测GRP78、JNK 及 CHOP 蛋白和mRNA 在HPV16（+）Siha、HPV18（+）Hela 及HPV（-）C33a 3 种宫颈癌细胞系中的表达 水平,并采用统计学分析其表达的差异性。结果 免疫组织化学法结果显示,GRP78 蛋白在高危型HPV16（+） Siha 和HPV18（+）Hela 的表达高于HPV（-）C33a（P <0.05）,内质网应激相关蛋白JNK、CHOP 在HPV16 （+）Siha 和HPV18（+）Hela 的表达高于HPV（-）C33a（P <0.05）。RT-PCR 及Western blot 结果显示, GRP78、JNK 及CHOP mRNA 及蛋白表达在HPV16（+）Siha 和HPV18（+）Hela 细胞株中高于HPV（-） C33a 细胞株（P <0.05）。结论 宫颈癌中GRP78 和内质网应激相关蛋白JNK、CHOP 的表达与HPV 亚型相关, 内质网应激相关蛋白可能参与了宫颈癌的发生与发展。     

纳米二氧化硅颗粒对血管内皮细胞的毒性及其氧化损伤作用

目的：探讨纳米二氧化硅（SiO2）颗粒的血管内皮细胞毒性,阐明其作用机制。方法：选用粒径约60 nm的纳米SiO2颗粒,以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）为模型,分为对照组和纳米SiO2颗粒暴露组（浓度分别为12.5、25.0、50.0和100.0 mg•L^-1）,采用MTT法测定细胞活力;乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞膜的完整性;流式细胞术（FCM）检测细胞内活性氧（ROS）水平;实时荧光定量PCR法检测细胞内核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）、超氧化物歧化酶2（SOD2）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位（GCLC）　mRNA表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,纳米SiO2颗粒暴露组细胞活力降低,呈现明显的剂量依赖效应;当作用时间为12 h时,仅100.0 mg•L^-1纳米SiO2颗粒暴露组细胞活力显著降低（P<0.05）;当作用时间延长至24 h,25.0～100.0 mg•L^-1纳米SiO2颗粒暴露组细胞活力明显降低（P<0.05）;同一浓度作用下,随着作用时间的延长,细胞活力也呈现下降趋势,呈时间效应关系。LDH和FCM检测,与对照组比较,除12.5 mg•L^-1组外,其余纳米SiO2颗粒暴露组细胞培养液中LDH活力和细胞内ROS水平均明显升高（P<0.05）,且随着暴露剂量的增加而逐渐升高。实时荧光定量PCR法检测,与对照组比较,100.0 mg•L-1纳米SiO2颗粒暴露组,细胞内Nrf2、HO-1、SOD2和GCLC mRNA表达水平均显著升高（P<0.05）。结论：纳米SiO2颗粒具有降低细胞活力、破坏细胞膜完整性、诱导ROS生成和转录调控氧化还原因子等血管内皮细胞毒性,氧化损伤是纳米SiO2颗粒发挥血管内皮细胞毒性的作用机制之一。     

金纳米颗粒对人肺腺癌细胞株A549的毒性效应

目的:探讨直径4 nm的金颗粒对人肺腺癌细胞株A549的毒性以及浓度-效应关系?方法:在A549细胞培养液中,分别加入柠檬酸钠溶液(对照组)以及浓度分别为12.5?25.0和50.0 ?滋g/ml的直径4 nm的金颗粒溶液孵育48 h?采用透射电子显微镜(TEM)鉴定金纳米颗粒并观察其在细胞内的分布情况;采用细胞增殖和毒性试剂盒检测细胞活力;采用流式细胞术检测A549的细胞周期和凋亡?结果:TEM显示金纳米颗粒大小及形态均一,主要分布于A549细胞的微小囊泡?胞浆?溶酶体以及细胞核周围?与对照组相比,4 nm金颗粒能显著降低细胞活力(P < 0.05),且具有浓度-效应关系?流式细胞检测结果显示,较高浓度(25及50 ?滋g/ml) 4 nm金颗粒处理后,A549细胞凋亡比例显著增加(P < 0.05),但细胞周期未见显著性差异?结论:直径4 nm的金颗粒能显著降低A549的细胞活力,促进A549凋亡,且具有浓度-效应关系,为肺癌的治疗提供了一种新思路?     

内质网应激参与高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的作用机制

目的 探讨内质网应激是否参与高磷诱导血管平滑肌细胞钙化及其作用机制。方法 体外培养人胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,分为对照组、正常磷组（1.3 mmol/L磷,NP组）、高磷组（2.6 mmol/L磷,HP组）,培养10 d。茜素红染色后观察细胞钙盐沉积情况;实时定量PCR和Western blotting检测肌醇需求因子1 (IRE1)、RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、内质网应激标志蛋白C/EBP同源蛋白（CHOP）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、骨形态发生蛋白2 (BMP-2)及Runt相关转录因子2 (Runx-2)的表达;应用CHOP siRNA转染高磷培养VSMC敲低CHOP表达后,检测BMP-2及Runx-2表达;应用JNK抑制剂SP600125 (DMSO溶解),终浓度10μmol/L预处理30 min后加入高磷培养基培养10 min,茜素红染色观察钙沉积情况。结果 与对照组及NP组比较,HP组内质网应激蛋白（IRE1、PERK、JNK、CHOP）及钙化蛋白（BMP-2、Runx-2）均明显增高（均P <0.01）。敲低CHOP表达后钙化蛋白...     

纳米雄黄对人宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨纳米雄黄对不同宫颈癌细胞株Hela(HPV18阳性,腺癌),Caski(HPV16阳性,鳞癌), C33A(HPV阴性,腺癌)增殖、凋亡的影响。方法：体外培养3种不同宫颈癌细胞,采用不同质量浓度(5,10, 20,40 mg/L)纳米雄黄作用于不同宫颈癌细胞24,48,72,96 h,相差显微镜下观察不同质量浓度组与对照 组细胞形态学变化;MTT法测定药物对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果： 纳米雄黄混悬液(5,10,20,40 mg/L)作用于Caski,Hela,C33A细胞24,48,72,96 h,均可抑制细胞增殖, 且呈时间剂量依赖性,抑制率波动于9.02%~49.06%,以20 mg/L质量浓度组为例,抑制率Caski(39.15%)>Hela (36.17%)>C33A(30.56%)。随着质量浓度的增加,早期凋亡、中晚期凋亡细胞均增加,凋亡率(早期+中晚期凋亡率)波 动于19.29%~99.54%,以20 mg/L质量浓度组为例,凋亡率Caski(60.43±2.88)%>Hela (41.95±3.01)%>C33A (43.49±2.19)%。 细胞周期结果显示高质量浓度组(20,40 mg/L)对Hela,Caski细胞有G2/M期阻滞。结论：纳米雄黄混悬液可抑制不同 宫颈癌细胞株的增殖,促进细胞凋亡,其对Caski细胞的作用最强,对Hela细胞次之,对C33A细胞相对最弱。对HPV 阳性的细胞可产生G2/M期阻滞。     

白杨素对5- 氟尿嘧啶诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏机制研究

目的 探讨白杨素对5- 氟尿嘧啶（5-FU）诱导肝癌Bel-7402 细胞凋亡的增敏作用。方法 白 杨素单独或联合5-FU 作用Bel-7402 细胞,用MTT 法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡与周期分 布变化;Western blotting 检测Bcl-2、Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白。结果 50 ～ 250μmol/L 白杨 素作用Bel-7402 细胞48 h 呈浓度依赖性的抑制细胞活力,且100μmol/L 白杨素组细胞存活率为（82.261± 7.793）%。100μmol/L 白杨素单独作用24 h 对Bel-7402 细胞活力和凋亡均无影响（P >0.05）。与空白对照 组比较,100μmol/L 白杨素作用24 h 后,不同浓度5-FU（12.5、25.0 及50.0μg/ml）作用48 h 对Bel-7402 细胞活力的抑制作用增强（P <0.05）;25.0μg/ml 5-FU 诱导Bel-7402 细胞凋亡率增加（P <0.05）;G2/M 期 细胞比例升高（P <0.05）;促凋亡蛋白Bax、Bad 及Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平上调（P <0.05）;抗凋亡 蛋白Bcl-2 表达水平下调（P <0.05）。结论 白杨素增强5-FU 诱导人肝癌Bel-7402 细胞凋亡,其机制可能 与线粒体凋亡通路激活有关。     

基于TMT蛋白质组学探讨黄精多糖对顺铂诱导C2C12细胞肌管萎缩的作用机制

目的 基于串联质量标签(TMT)标记的定量蛋白质组学研究黄精多糖改善顺铂诱导小鼠成肌细胞(C2C12细胞)肌管萎缩的蛋白质代谢轮廓,探讨黄精多糖的作用机制。方法 将C2C12细胞培养至肌管,分为4组：正常组、顺铂组、黄精多糖组、顺铂+黄精多糖组。按如下方法处理。正常组：不含血清的高糖DMEM培养基;顺铂组：不含血清的高糖DMEM培养基+50μmol/L顺铂;黄精多糖组：不含血清的高糖DMEM培养基+0.200 mg/L黄精多糖;顺铂+黄精多糖组：不含血清的高糖DMEM培养基+50μmol/L顺铂+0.200 mg/L黄精多糖。各组均避光培养24 h。CCK8法检测C2C12细胞活力,免疫荧光法检测肌管直径和细胞融合指数,TMT蛋白质组学表征黄精多糖改善顺铂致C2C12细胞肌管萎缩的蛋白质代谢轮廓。结果 CCK8法结果显示,黄精多糖可促进C2C12细胞活力,顺铂致C2C12肌管萎缩的造模浓度为50μmol/L,黄精多糖的给药质量浓度为0.200 mg/L。免疫荧光法结果显示,与顺铂组比较,顺铂+黄精多糖组萎缩肌管的直径和融合指数升高(P<0.01)。蛋白质组学结果显示,以磷酸泛酰-...     

RNA干扰TMEM33的表达对宫颈癌细胞生长的影响

目的 通过生物信息学方法探究跨膜蛋白33(transmembrane protein 33,TMEM33)在宫颈癌组织中的表达及其与预后的关系,观察TMEM33经RNA干扰后对宫颈癌细胞生长的影响。方法 应用基因表达谱数据动态分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA）数据库筛选出与宫颈癌相关的TMEM33基因,设计两条特异siRNA序列进行RNA干扰实验。实验分为3组：siTMEM33#1干扰组、siTMEM33#2干扰组、阴性对照组（非特异性siRNA）。采用Western blot法检测siRNA干扰后宫颈癌SiHa/HeLa细胞中TMEM33蛋白的表达,CCK-8法检测SiHa/HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blot法检测细胞凋亡关键基因BCL-2、Bax及细胞周期蛋白CyclinD1、P21的表达变化。结果 与阴性对照组相比,特异性siRNA显著下调宫颈癌SiHa/HeLa细胞中TMEM33蛋白的表达（P<0.05）;宫颈癌细胞增殖明显受抑,细胞凋亡显著增加,...     

RNA干扰TMEM33的表达对宫颈癌细胞生长的影响

目的 通过生物信息学方法探究跨膜蛋白33(transmembrane protein 33,TMEM33)在宫颈癌组织中的表达及其与预后的关系,观察TMEM33经RNA干扰后对宫颈癌细胞生长的影响。方法 应用基因表达谱数据动态分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA）数据库筛选出与宫颈癌相关的TMEM33基因,设计两条特异siRNA序列进行RNA干扰实验。实验分为3组：siTMEM33#1干扰组、siTMEM33#2干扰组、阴性对照组（非特异性siRNA）。采用Western blot法检测siRNA干扰后宫颈癌SiHa/HeLa细胞中TMEM33蛋白的表达,CCK-8法检测SiHa/HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blot法检测细胞凋亡关键基因BCL-2、Bax及细胞周期蛋白CyclinD1、P21的表达变化。结果 与阴性对照组相比,特异性siRNA显著下调宫颈癌SiHa/HeLa细胞中TMEM33蛋白的表达（P<0.05）;宫颈癌细胞增殖明显受抑,细胞凋亡显著增加,...