阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.     

16SrDNA分型技术在单核细胞增生李斯特菌分型中的应用

目的:建立浙江省食品中单核细胞增生李斯特菌系统树,为食物中毒事件追源提供依据。方法:采用PCR扩增16SrDNA的方法,对浙江省2000~2005年从食品中分离的36株单核细胞增生李斯特菌进行分子分型,并结合MEGA软件构建单核细胞增生李斯特菌带型关系系统树状图。结果:所采用PCR方法可使单核细胞增生李斯特菌扩增出1.5 kb大小的条带,应用MEGA软件构建的系统树可以将36株单核细胞增生李斯特菌划分为两大类,18个分支;单核细胞增生李斯特菌血清型与16SR rDNA系统树无关联。结论:16SrDNA分型方法可以对单核细胞增生李斯特菌进行有效分型,可为单核细胞增生李斯特菌食源性疾病的流行病学调查和溯源提供科学依据。     

随机引物扩增技术对变形菌DNA多态性分型研究

目的建立变形菌随机扩增DNA多态性分型技术,应用于临床菌株流行病学调查. 方法优化随机扩增DNA多态性指纹技术(RAPD)的实验条件,利用RAPD技术成功地检测21株变形菌DNA指纹图谱. 结果 21株变形菌分为18型别,其中16株奇异变形菌分为13个型,5株普通变形菌分为5个型. 结论 RAPD分型技术可简便、快速为变形菌提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法.     

1例孕妇感染李斯特菌病例的病原学分析及分子特征研究

目的对北京市1名孕妇感染单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)病例进行病因食品溯源、病原学检测、血清学分型、耐药及分子特征研究。方法对流行病学相关的1株孕妇病例Lm分离株和1株可疑食品Lm分离株进行血清型分型及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,并采用CLSI和EUCAST推荐的微量肉汤稀释法检测菌株对12种抗生素的敏感性。结果 2株Lm分离株均为1/2a血清型,药敏结果一致,对有国际标准的青霉素、氨苄西林、复方新诺明及红霉素敏感,其他8种抗生素的MIC值均较小,经AscⅠ酶切后具有100%同源的PFGE指纹图谱带型。结论结合流行病学调查、实验室病原学检测、药敏和PFGE分子分型结果,高度怀疑本例孕妇感染李斯特菌病例是由进食受1/2a血清型单核细胞增生李斯特菌污染的牛肉三明治所致。     

PCR检测食品中单核细胞增生性李斯特菌毒力基因

目的 检测食品中分离的单核细胞增生性李斯特茵毒力基因携带率。方法 应用GB4789．30-94单核细胞增生性李斯特菌的检验方法分离菌株，采用PCR检测李斯特菌的两种致病因子。结果 从2000．2001年我省采集的272份食品中分离出35株单核细胞增生性李斯特菌。其中11株含有内化素基因(Internalin，Inl)和李斯特菌溶血素O基因(Listerialysin0，Hly)，1株仅含有内化素基因；其它23株两种基因均为阴性。结论 我省存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险。建立PCR方法检测李斯特菌毒力基因对快速诊断单核细胞增生性李斯特菌有现实意义。     

肺炎克雷伯菌随机DNA多态性分型研究

目的 建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性分型技术,以应用于临床菌株流行病学调查。方法 对临床分离的29株肺炎克雷柏菌进行Etest检测,并用酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型。结果 29株临床分离菌有7株ESBL阳性,24株有稳定的RAPD带型,其中ICU分离的5株ESBL阳性株的4株RAPD指纹图谱相同。结论 RAPD基因分型技术不需已知核酸序列,分型率高,分辨力强,简便快捷可为肺炎克雷伯菌株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

RAPD技术在唐山市结核分枝杆菌指纹分型研究中的应用

[目的]RAPD DNA指纹分型方法的建立及其在分枝杆菌基因分型中的应用。[方法]收集结核病患者痰标本,分离培养获得分枝杆菌,进行表型鉴定及耐药性检测;提取基因组DNA,在建立RAPD DNA指纹分型方法的基础上对分枝杆菌进行DNA指纹图谱分析。[结果]RAPD指纹图谱分析将102株分枝杆菌分为7种菌型,其中Ⅰ型35株（34.31%）,Ⅱ型28株（27.45%）,Ⅲ型24株（23.53%）,Ⅳ型6株（5.88%）,Ⅴ型3株（2.94%）,Ⅵ型4株（3.92%）,Ⅶ型2株（1.97%）,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型是主要的3种类型。RAPD扩增特征条带大小为201～1 018 bp。分组统计显示,3种主要的RAPD DNA指纹的分布与患者的居住地、职业、结核菌耐药性有关,而与患者的性别、年龄、结核接触史等无关。[结论]RAPD DNA指纹分型方法是一种简单、快速的分枝杆菌的分型方法;3种主要类型的结核分枝杆菌在唐山地区流行。     

通州区6类食品单增李斯特菌污染状况及分子流行病学特征调查研究

目的:了解通州区6类食品中单增李斯特菌的污染情况,探讨所污染菌株携带的三个毒力基因(hlyA、iap、prfA)的状况和DNA随机扩增多态性PCR分型情况。方法:依据国标方法,采用全自动微生物分析仪和API Listeria试剂条鉴定系统对样本进行单增李斯特菌分离和生化鉴定;采用聚合酶链反应检测实验菌株携带毒力因子的情况,使用随机引物PCR的方法对菌株进行分子分型。结果:从通州区共采集6类食品样品121件,检出单增李斯特菌18株,检出率为14.9%;18株实验菌株均携带单核细胞增多性李斯特菌特异的毒力因子;随机引物PCR方法将实验菌株分成6个随机引物PCR型别。结论:本区食品中单增李斯特菌污染较为严重,且毒力基因prfA、hly、iap同时存在,说明有潜在的致病能力,应引起相关部门关注;通州区在不同时间、不同地点分离的单增李斯特菌其PCR型别差别较大,有多种型别的细菌存在;也可根据PCR分型看出在食品加工过程中存在着内部污染问题。但来源不同的菌株之间PCR分型无关联,无流行趋势。     

新疆食源性单核细胞增生李斯特菌分离株的分子分型与耐药性分析

目的了解新疆食源性单核细胞增生李斯特菌分子分型特征及抗生素耐药状况。方法对2010年—2020年食品中分离的32株单核细胞增生李斯特菌采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型,采用微量肉汤稀释法对8种抗生素进行耐药性检测。结果 32株单核细胞增生李斯特菌经AscⅠ酶切与脉冲场凝胶电泳后共获得21种PFGE带型,每种带型包含1株～5株菌株不等,相似度在48.5%～100%;32株单核细胞增生李斯特菌均对青霉素、氨苄西林、复方新诺明敏感,对其他5种抗生素的MIC值较小。结论新疆食源性单核细胞增生李斯特菌PFGE带型呈现多态性,揭示了不同来源菌株之间的亲缘性,对抗生素敏感性高,应持续开展耐药状况监测。     

重庆市老年中心铜绿假单胞菌流行病学分型研究

目的对重庆市老年中心引起医院感染的铜绿假单胞菌(PAE)进行流行病学分型研究,了解其流行与耐药,以便更好地控制其引起的医院感染.方法采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对重庆市老年中心分离的24株PAE进行RAPD基因分型.结果24株PAE共得RAPD 14型,分型率100%;同一病区不同患者分离出的PAE未检出相同基因型的PAE,3个不同病区间未检出相同RAPD型别的PAE;7例感染个体连续收集的PAE有5例RAPD指纹图谱完全一致,2例出现跳跃性指纹图谱,且与其他分型指纹图谱不相同.结论RAPD能满足对PAE进行分子流行病学分型;通过分型可判断内原性、外源性或突变PAE引起的感染.     

广东省食品中单核细胞增多性李斯特菌脉冲场凝胶电泳技术分子分型的研究

目的应用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对广东省食品中分离的单核细胞增多性李斯特菌（Lm）进行分子分型,并建立PFGE数据库。方法参照美国PulseNet的Lm PFGE分子分型标准方法进行检测。应用BioNumerics软件对不同食物种类、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性。结果107株Lm分成41个PFGE型,型别较为分散;从鸡肉中分离的菌株数最多（37株）,PFGE分型也最多（19个）;冷藏和冷冻食品的分离率较高,其中有26株菌仅存在1-2个电泳条带的差异,相似度极高;韶关和惠州地区分离的Lm存在着地区特异性;随时间变迁,部分菌株仍存在不同程度的相关性。结论广东省食品中分离的Lm在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有不同程度的相关性。     

Genetic typing of human and food isolates of Listeria monocytogenes from episodes of listeriosis

Ten clinical and food Listeria monocytogenes strains isolated during the epidemiological investigations of episodes of listeriosis (one outbreak and two sporadic cases) that occurred in northern Italy during 1993–1995 have been examined by DNA macrorestriction pattern analysis obtained by PFGE and RAPD typing, in order to confirm the food vehicle of infections. The same DNA profiles within the isolates from the three episodes were obtained by both techniques. The ApaI and SmaI PFGE profiles and RAPD patterns with primer OPM-01 confirmed the close relationship between strains from two distinct episodes. However, RAPD analysis with primer UBC-127 distinguished between these L. monocytogenes isolates.     

2007年-2009年山东省生肉中单增李斯特菌的耐药性及分子分型分析

目的:了解山东省生肉中单增李斯特菌的耐药及分子分型特点。方法:药敏实验采用微量肉汤稀释法对15种抗生素进行了耐药检测,分子分型采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)的方法。结果:药敏实验显示14.08%的菌株产生耐药,其中对红霉素、左氧氟沙星、复方新诺明的耐药率较高(2.82%);71株菌用PFGE方法分为17个带型,以3型为主。结论:山东省生肉中单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,应加强菌株的耐药性监测;相同来源的单增李斯特菌来自不同的克隆株,但部分菌株有不同程度的相关性;耐药试验和PFGE分型可以相结合,以更好地预防和控制细菌性传染性疾病的发生。     

2006年吉林省食品污染物监测结果分析

目的：了解吉林省高危食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、肠出血性大肠杆菌（O157：H7）、弯曲菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌的污染状况，提高我省乃至我国食源性疾病的检测、预警和控制能力，有效地预防、预测食源性疾病的爆发。方法：依据国家食源性疾病监测网2006年度工作手册进行。结果：检测生畜肉、生禽肉、非定型包装熟肉制品、动物性水产品、蔬菜、速冻面米食品、非发酵豆制品共625件，检出沙门菌97株，检出率15．52％；单核细胞增生李斯特菌84株，检出率13．44％；大肠杆菌0157：H79株，检出率2．5％；金黄色葡萄球菌9株，检出率13．4％；副溶血弧菌3株，检出率3％；未检出弯曲菌。结论：吉林省居民主要消费食品存在食源性致病菌污染，其中生肉速冻生制面米食品品种污染较重，另外熟肉制品、蔬菜色拉、非发酵豆制品等即食食品也有不同程度的污染。     

生鸡肉中单核细胞增生李斯特菌的污染监测

目的：了解绍兴市部分农贸市场及超市的生鸡肉中单核细胞增生李斯特菌的污染状况。方法：监测农贸市场及超市的生鸡肉食品。结果：82份样品中检出Lm26株，总污染率为31．71％。其中农贸市场52份中检出Lm10株，总污染率为19．23％；超市30份中检出Lm16株，总污染率为53．33％。结论：大型超市生鸡肉中Lm检出率明显高于农贸市场。     

廊坊市食品中沙门菌等6种食源性致病菌的监测

目的:了解廊坊市高危食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7、空肠弯曲菌的污染状况,提高我市食源性疾病检测、预警和控制能力,为食物中毒监测提供科学依据。方法:依据国家食源性疾病监测网工作手册进行。结果:检测生畜肉、生禽肉、非定型包装熟肉制品、动物性水产品、蔬菜、速冻米面食品、非发酵豆制品共300件,检出沙门菌31株,单核细胞增生李斯特菌26株,副溶血性弧菌11株,金黄色葡萄球菌2株,肠出血性大肠杆菌O157:H71株,未检出弯曲菌。结论:廊坊市居民主要食品存在食源性致病菌污染,其中动物性水产品副溶血性弧菌株污染较重,生肉沙门菌和单核细胞增生李斯特菌污染较重。     

2009—2010年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的耐药性和分子分型研究

目的 了解山东省单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)耐药及分子分型特点,并探讨耐药表型与PFGE基因组型之间的关系.方法 从2009-2010年山东省6个城市的生畜禽肉、熟肉制品、水产品等食品中采集80株单增李斯特菌,采用微量肉汤稀释法测定其抗生素敏感性,采用PFGE进行分子分型,并对耐药谱与PFGE型别关系进行分析.结果 16.25％(13/80)的菌株存在耐药,其中,业胺培南的耐药率最高(12.50％,10/80),其次是四环素和强力霉素(3.75％,3/80;2.50％,2/80).耐药分型可将80株菌分为9个型别.PFGE将80株菌分为34个带型,以17型和29型为主.A型耐药谱分布范围较广,出现在79.41％ (27/34)的PFGE型别中.结论 2009-2010年山东省单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,单增李斯特菌的PFGE分型与其药敏分型无对应关系.     

马鞍山市2010～2011年食源性致病菌监测结果分析

目的为了解食源性致病菌污染状况,控制食品生物性污染。方法按国家食源性致病菌监测方案要求,无菌采集超市(商店)、农贸市场、餐饮店制售的10类食品496份,监测10种致病菌。结果肉类、餐饮食品、速冻熟制米面制品、即食非发酵性豆制品、动物水产品检出单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、副溶血性弧菌四种致病菌24株;单核细胞增生李斯特氏菌占致病菌构成比的62.50%,金黄色葡萄球菌29.17%;肉类食品致病菌检出率高达11.21%。结论肉类及其制品是食源性疾病的高危食品,单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌则是食源性疾病的高风险致病菌。     

Comparative investigations of Listeria monocytogenes isolated from a turkey processing plant, turkey products, and from human cases of listeriosis in Denmark

Listeria monocytogenes was isolated from critical control points in a Danish turkey processing plant, from turkey products and from cases of human listeriosis. During processing in the plant the prevalence of L. monocytogenes ranged from 25.9 to 41.4%. Cleaning and disinfection decreased the prevalence to 6.4%. Isolates of L. monocytogenes were characterized by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using restriction endonuclease ApaI. Identical DNA types were obtained from turkey products and the processing line even after cleaning and disinfection. Two identical DNA types were demonstrated among isolates from turkey products and human cases of listeriosis. The prevalence of L. monocytogenes in turkey products ranged from 7.3 to 17.4% for ready-to-eat products and raw products, respectively. Since none of the 27 flocks examined before slaughter sampled positive for L. monocytogenes and the prevalence increased during processing, the potential risk from turkey meat was apparently due to factory hygiene rather than intrinsic contamination of the turkeys.