短发夹RNA及其在头颈肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是一种分子生物学上由双链RNA(dsRNA)诱发的特定基因沉默现象。随着该项技术的不断发展,以质粒、病毒为载体表达的短发夹RNA(shRNA)具有更强大的基因沉默作用,可使目的基因在细胞内稳定增殖并获得长效剔除效应。近年来,以shRNA为工具的RNAi技术开始在体内外各项实验中应用并取得突破,包括功能基因组学、药物靶点筛选、细胞信号转导通路分析及疾病治疗等,尤其在肿瘤领域显示出广阔的应用前景。     

RNA干扰FZD4基因表达对人胶质瘤干细胞自我更新能力的抑制作用

目的: 探讨FZD4在人胶质瘤干细胞自我更新能力中的作用,并阐明其作用机制。方法: 针对人的FZD4设计了2条短发夹RNA(shRNA)序列,利用慢病毒包装后感染人胶质瘤U251细胞(FZD4 shRNA干扰组分为FZD4-shRNA-1#和FZD4-shRNA-2#组),经空病毒感染的U251细胞为对照组。倒置显微镜观察感染的U251细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,通过RT-PCR和免疫印迹法检测各组细胞中FZD4 mRNA和蛋白表达水平。利用干细胞培养基筛选出胶质瘤干细胞,采用极限稀释实验观察FZD4 shRNA对肿瘤干细胞增殖及自我更新的影响。结果: 与对照组比较,FZD4 shRNA干扰组FZD4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与对照组比较,FZD4 shRNA干扰组中干细胞形成的神经球直径明显缩小(P<0.01)。极限稀释实验,与对照组比较,FZD4 shRNA干扰组干细胞在每个孔中生成至少1个神经球所需要的细胞数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论: 通过shRNA下调U251细胞中FZD4的表达后可以显著抑制胶质瘤肿瘤干细胞的自我更新能力。     

蜂王浆冻干粉对小鼠肿瘤的抑制作用

目的研究蜂王浆冻干粉对小鼠肿瘤的抑制作用.方法按每公斤体重0g、0.25g、0.50g、0.75g设对照及低、中、高3个剂量组,经口给予蜂王浆冻干粉30d后,接种小鼠肉瘤180(S180)和艾氏癌腹水型(EAC)两个瘤种.结果在两次重复的小鼠S180和EAC抑瘤试验中发现中剂量组瘤重明显低于阴性对照组(P<0.05),抑制率可达34%;中剂量组荷瘤小鼠平均生存时间均明显高于对照组(P<0.05).结论蜂王浆冻干粉具有抑制肿瘤的作用.     

蜂胶对小鼠移植肿瘤的抑制作用

目的　探讨蜂胶对移植小鼠肿瘤的抑制作用 ,寻找最佳抑瘤搭配。方法　采用有重复的正交试验设计 ,根据正交表L16 ( 4 2 × 2 9)安排试验因素 ,并进行试验 ,取得试验指标数据 ,分析不同的蜂胶浓度在不同的饲喂时间对不同肿瘤的抑制作用。结果　蜂胶浓度 (A)、饲喂时间 (B)、对不同肿瘤细胞株 (D)的抑瘤作用差异有显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 5) ,性别间 (C)差异无显著性 (P >0 .0 5) ,各显著性试验因素各水平的最优搭配为A4 B3D2 。结论　一定浓度的蜂胶饲喂一段时间后对移植的小鼠肿瘤有显著的抑制作用     

短发夹RNA对头颈肿瘤细胞端粒酶活性和增殖的影响

目的:观察靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的短发夹RNA(shRNA)对喉癌Hep-2细胞株和鼻咽癌NEC细胞株端粒酶活性和生长增殖影响,探讨抑制端粒酶活性途径治疗头颈肿瘤的可行性。方法:根据hTERT cDNA序列构建表达shRNA、含荧光素基因、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒shRNA1和表达shR-NA的、含荧光素基因的、靶向非人类基因的真核表达质粒shRNA2。分别以质粒shRNA1、shRNA2、转染试剂及空白培养液处理体外培养的Hep-2细胞和NEC细胞。转染48 h后以TRAP PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性并行HE染色;倒置显微镜下每天观察细胞形态;MTT法检测细胞增殖活性。结果:①Hep-2细胞和NEC细胞shRNA1处理48 h后与空白对照组比较端粒酶活性下降,P<0.05。②HE染色发现shRNA1处理后Hep-2和NEC细胞胞体缩小、核固缩,同等培养条件下,细胞生长密度变稀,见许多圆形死亡细胞。③与相应时间点空白对照组细胞平均吸光度(A)值比较,shRNA1处理组Hep-2细胞和NEC细胞24,48,72 h A值均减小,P<0.05。结论:靶向hTERT mRNA的小干扰RNA能够显著降低Hep-2细胞和NEC细胞的端粒酶活性,抑制癌细胞生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

慢病毒介导靶向survivin基因的shRNA抑制子宫内膜在裸鼠腹腔种植生长

目的研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shRNA) 对人子宫内膜在裸鼠腹腔种植生长的影响。
方法将45只裸鼠随机分为实验组、阴性对照组及空白对照组,每组15只,将子宫内膜异位症患者在位内膜注射入裸鼠腹腔,同
时将survivin-shRNA慢病毒、空载慢病毒及磷酸盐缓冲液分别注射至3组裸鼠腹腔内,2周后观察各组子宫内膜种植成功率,光
镜下观察异位病灶的形态学特点,免疫组化方法检测各组病灶中survivin 的表达水平。结果实验组子宫内膜种植成功率
（26.67%）明显低于阴性对照组（73.33%）及空白对照组（80%,P<0.01）;实验组成活的异位内膜腺体发育不良,间质伴有不同程
度的坏死;该组病灶中survivin蛋白表达亦明显下降,与两对照组比较差异有显著性（P<0.001）。结论慢病毒介导survivin基因
特异性shRNA能够通过靶向沉默survivin基因明显抑制人子宫内膜在裸鼠腹腔中的种植生长。
     

蜂胶对小鼠移植肿瘤的抑制作用

目的　探讨蜂胶对移植小鼠肿瘤的抑制作用 ,寻找最佳抑瘤搭配。方法　采用有重复的正交试验设计 ,根据正交表 L16( 4 2× 2 9)安排试验因素 ,并进行试验 ,取得试验指标数据 ,分析不同的蜂胶浓度在不同的饲喂时间对不同肿瘤的抑制作用。结果　蜂胶浓度 ( A)、饲喂时间 ( B)、对不同肿瘤细胞株 ( D)的抑瘤作用差异有显著性 ( P <0 .0 1或 P <0 .0 5 ) ,性别间 ( C)差异无显著性 ( P >0 .0 5 ) ,各显著性试验因素各水平的最优搭配为 A4 B3D2 。结论　一定浓度的蜂胶饲喂一段时间后对移植的小鼠肿瘤有显著的抑制作用。     

Apigenin对肿瘤的抑制作用及其机制研究进展

Apigenin是一种黄酮类化合物,广泛存在于蔬菜、水果、花生、大豆、茶叶和葡萄酒等日常饮食中,其化学名为4',5,7-三羟基黄酮,属黄酮类化合物.近几年的实验研究发现,Apigenin不仅具有抗炎、抗氧化、抗变态反应等多种生物学活性和药理作用,而且还可以抑制多种肿瘤的发生与发展.     

蜂胶对小鼠移植肿瘤的抑制作用

目的探讨蜂胶对移植小鼠肿瘤的抑制作用,寻找最佳抑瘤搭配.方法采用有重复的正交试验设计,根据正交表L16(42×29)安排试验因素,并进行试验,取得试验指标数据,分析不同的蜂胶浓度在不同的饲喂时间对不同肿瘤的抑制作用.结果蜂胶浓度(A)、饲喂时间(B)、对不同肿瘤细胞株(D)的抑瘤作用差异有显著性(P<0.01或P<0.05),性别间(C)差异无显著性(P>0.05),各显著性试验因素各水平的最优搭配为A4B3D2.结论一定浓度的蜂胶饲喂一段时间后对移植的小鼠肿瘤有显著的抑制作用.     

肿瘤自身抗体的研究进展

随着肿瘤的发病率日益增高,人们越来越重视肿瘤的早期筛查,但目前应用于临床的肿瘤标志物(癌胚抗原、甲胎蛋白及糖类抗原199等)大多特异性和敏感性不够高。由于机体的免疫监视作用而产生的针对肿瘤相关抗原的肿瘤自身抗体,因其出现时间早、特异性高、检测手段容易等优势而受到了越来越多研究者的关注。     

槲皮素诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

槲皮素是从中药及天然植物中提取的黄酮类化合物,具有抗肿瘤细胞增殖及促肿瘤细胞凋亡的生物学作用。本文主要阐述槲皮素诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制的研究进展,其中包括阻滞细胞周期;调节Bcl-2/bax的表达;上调cspases-3;阻遏热休克蛋白;抑制Survivin;抑制端粒酶活性;改变线粒体膜电位和阻断信号转导通路等。     

恶性肿瘤神经内分泌分化

恶性肿瘤有着许多特征，但基本特征之一是细胞的异常分化。在肿瘤细胞向不成熟方向退行性发育的过程中，可出现原来组织或器官中的正常细胞所没有的新的分化特征或原有一些特征的丢失，这种分化不仅给肿瘤的诊断带来困难，同时也给肿瘤治疗造成了许多障碍。     

麻醉药物对肿瘤影响的研究新进展

肿瘤是世界各国常见的疾病之一,其有着较高的发生率和病死率,肿瘤治疗的方法多以手术切除为主,而手术治疗可增加肿瘤的复发和转移。近年来研究表明,麻醉药物可影响肿瘤的复发和转移。麻醉药物在治疗肿瘤中的应用越来越广泛,围术期选择合适的麻醉药物可能会降低肿瘤的复发和转移。目前其对肿瘤的影响机制仍未明确,有待进一步探讨。     

Twist与肿瘤关系的研究进展

Twist基因属于碱性螺旋-环-螺旋转录因子家族,具有高度保守性,在胚胎发育过程中起关键调控作用。Twist信号通路是一个复杂、多途径的网络系统,其可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B、信号转导与转录激活因子3、Wnt等信号通路参与肿瘤的发生、发展、侵袭与转移。Twist在肿瘤的发生、侵袭转移、耐药性以及靶向治疗等方面发挥着重要作用,深入研究Twist对肿瘤的诊断和治疗具有重要意义。     

花青素抑制肿瘤转移研究进展

转移是指肿瘤细胞经血管等途径从原发部位扩散到远端部位,形成继发性肿瘤。肿瘤转移是癌症治疗面临的重大问题,其往往是癌症患者死亡的重要原因。研究表明,自然界中的植物化学物质具有抗肿瘤转移的能力,花青素就是其中一种。花青素（anthocyanins）是广泛存在于自然界中的黄酮类物质,其在肿瘤转移方面发挥着重要作用。本文就花青素抑制肿瘤转移方面研究做一综述。     

神经内分泌肿瘤干细胞的研究进展

该文简要介绍了肿瘤干细胞(CSC)和神经内分泌肿瘤(NEN)近年来的发展状况,指出目前在NEN患者的临床诊疗中确实存在诊断困难、传统治疗效果差以及预后不佳的现象。随后阐述了关于NEN信号通路的最新研究进展,发现NEN中似乎也存在一些调控正常干细胞生长分化的信号通路,因此间接证实了NEN中存在神经内分泌肿瘤干细胞的可能性,并且认为神经内分泌肿瘤干细胞的耐药性可能是造成NEN临床疗效差的重要原因。     

肿瘤血管生成的调节机制研究进展

肿瘤血管生成 (angiogenesis)是指肿瘤细胞诱导的微血管生长以及肿瘤中血液循环建立的过程。随着对肿瘤发生机制研究的不断深入 ,肿瘤血管生成在肿瘤发展中的重要地位及抗血管生成治疗肿瘤的作用成为研究的热点。本文就近年来对肿瘤血管生成的调节机制研究进展综述如下。1　肿瘤血管生成过程及特点　　机体的血管形成包括血管发生和血管生成两个过程 ,即胚胎发育形成原始血管结构及以出芽方式继续增生分化出新生血管的过程。生理条件下此过程是严格受控的。而病理的血管生成 ,特别是肿瘤条件下的血管生成则呈一持续、无控性的过程。肿瘤血管…     

抑癌基因WWOX在消化道肿瘤中的研究进展

WWOX基因定位于染色体16q23.3～24.1,位于染色体普通脆性位点FDR16D,包含9个外显子,编码414个氨基酸,WWOX可能与p53、Bmi1、survivin、p73、Ap2α/γ、c-Jun、ErbB4、Runx2等相互作用而发挥凋亡作用。在多种消化道肿瘤中均发现WWOX基因杂合子缺失,WWOX mRNA表达低下或缺失,WWOX蛋白表达水平低。     

丹皮酚诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

丹皮酚有镇静、催眠、解热、镇痛、抗炎、抗菌等药理作用。细胞凋亡是生物体内广泛存在的一种重要的生命过程,是多细胞动物调节机体发育、维护内环境稳定、有基因调控的细胞主动性死亡过程。近年来试验研究表明,丹皮酚还具有抗肿瘤细胞增殖及促肿瘤细胞凋亡的生物学作用。本文综述了丹皮酚诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究进展。