位点特异性PCR鉴别两面针掺伪飞龙掌血的方法研究

目的:探讨DNA条形码技术对鉴定两面针掺伪飞龙掌血的可行性，建立两面针特异性快速聚合酶链式反应(PCR)分子鉴定方法。方法:通过对两面针和伪品飞龙掌血DNA条形码进行对比分析，寻找单核苷酸多态性(SNP)位点并设计特异性鉴别引物，优化PCR反应体系与程序，进行退火温度、引物酶、反应循环数、灵敏度及专属性等方法学考察。结果:ITS2条形码适用于两面针及伪品飞龙掌血的鉴别，所建立的位点特异性PCR鉴别方法，在退火温度为56℃、循环数为33次时，伪品飞龙掌血经过特异性引物扩增后，在200～300 bp之间检出一条单一DNA条带，而两面针则无此条带。结论:所建立的位点特异性PCR方法可准确检测两面针中是否含有飞龙掌血，为两面针质量监测提供一种新型的鉴定手段。     

紫苏属药用植物的rDNA ITS区SNP分子标记与位点特异性PCR鉴别

目的分析单种属——紫苏属各变种间rDNA ITS区的序列以及存在的单核苷酸多态性(SNP)现象，设计出位点特异性PCR引物，用于紫苏属各变种间的分子标记鉴别。方法对紫苏属各变种多个体的rDNA ITS区全序列进行了准确测定，运用Clustral X 1.8，MEGA 3.0进行排序并进行SNP分析，从而设计出鉴别各变种的等位基因位点特异性PCR鉴别引物。结果紫苏属各变种(紫苏、白苏、鸡冠苏和耳齿紫苏等)的rDNA ITS区全序列共有615～618 bp的长度，ITS1为233～235 bp，5.8S为179 bp，ITS2为203～204 bp，GC含量为61.5%～61.9%。从rDNA ITS区碱基变异的整体情况来看，紫苏属各变种间不仅在非编码的转录间隔区ITS1和ITS2内存在非编码区单核苷酸多态性(ncSNP)，而且在保守的5.8S编码区内也存在3个位点的单核苷酸多态性，即编码区SNP(cSNP)，所有的SNP均只具2等位多态性。5.8S区cSNP的出现与产生该变异的变种出现的显著形态差异关联。本文还利用这些SNP位点设计出了鉴别紫苏属各变种的位点特异性PCR引物，无需测序即可对紫苏属的原植物及“苏子”、“苏叶”等药材进行有效准确的分子鉴别。结论紫苏属药用植物rDNA ITS区存在的SNP可用作紫苏属各变种鉴别的分子标记。     

齿瓣石斛的位点特异性PCR鉴别

目的设计出齿瓣石斛的位点特异性鉴别引物,仅通过PCR就能完成对齿瓣石斛真伪进行准确鉴别。方法根据齿瓣石斛及其他枫斗类、黄草类石斛的rDNA ITS序列数据库,设计了齿瓣石斛的位点特异性PCR鉴别引物JB-Chiban-01S和JB-Chiban-01X。然后,对38种石斛属植物模板DNA进行了PCR扩增,阳性者即为齿瓣石斛正品。结果当退火温度设定为58℃时,只有齿瓣石斛的模板DNA能被扩增出来,而其他的37种石斛属植物均为阴性。该鉴别反应重复性好,已在鉴别齿瓣石斛时发挥重要作用。结论运用位点特异性鉴别引物能成功地对齿瓣石斛进行PCR鉴别,与DNA测序鉴别方法相比,位点特异性PCR具有高效、准确、简便、省时等优点。     

RNaseH依赖性PCR扩增结合熔解曲线法鉴别石菖蒲与藏菖蒲掺杂

目的 采用核糖核酸酶H依赖性PCR(rhPCR)扩增结合熔解曲线分析对石菖蒲与藏菖蒲进行快速鉴定及相互掺杂检测。方法 比对分析石菖蒲与藏菖蒲核基因组内转录间隔区2(ITS2)序列，寻找稳定的单核苷酸多态性(SNP)位点设计特异性扩增引物，根据扩增产物熔解温度(T_m)不同进行鉴别，考察引物特异性，筛选最佳混合引物比例，并考察该方法灵敏度、掺混检出限及适用性。结果 设计的特异性引物具有良好特异性，石菖蒲、藏菖蒲扩增产物可分别产生(89.4±0.2)与(87.9±0.2)℃的单一特异性熔解曲线峰。所建立的方法灵敏度高，DNA检出限均为0.1 ng,对石菖蒲和藏菖蒲的掺混检出限均为10%。检测样品28份，其中石菖蒲16份、藏菖蒲12份，检测结果与DNA条形码结果一致。结论 该研究基于RNase H依赖性PCR扩增结合熔解曲线建立的石菖蒲及藏菖蒲鉴别及掺杂检测方法可有效鉴别石菖蒲、藏菖蒲及掺杂样品，有利于石菖蒲药材质量控制。     

冬虫夏草特异性PCR鉴定方法研究

目的建立一种准确、简便的方法鉴别冬虫夏草真伪。方法采用改良CTAB法从冬虫夏草样品中提取总DNA,根据r DNA中ITS1区序列设计一对特异性引物,对虫草样品进行特异性扩增。结果冬虫夏草标准品和部分市售虫草样品能扩增出255bp大小的目的片段,其余虫草样品未能扩增出相应条带。结论改良CTAB法提取DNA所需时间短对DNA分子破坏性小。特异PCR鉴别冬虫夏草真伪的方法准确快捷,对珍贵药材的甄别具有广阔的前景。     

雷公藤药材基原考证及分子鉴定研究

目的 为确保雷公藤药材临床用药的安全性和有效性,对雷公藤药材基原进行文献考证,并建立特异性快速聚合酶链式反应(PCR)分子鉴定方法.方法 查阅文献对雷公藤基原进行考证;对雷公藤及混伪品DNA条形码进行对比分析,筛选具有稳定差异的特异性鉴别位点,设计鉴别引物,优选出特异性快速PCR扩增条件.结果 文献考证发现雷公藤和昆明...     

基于巢式PCR的紫草鉴别引物筛选

目的:基于巢式聚合酶链式反应(PCR)理念设计并筛选出可用于高效扩增与鉴别紫草市场样品真伪的特异性引物。方法:针对新疆紫草的ITS序列和紫草非《中华人民共和国药典》品ITS2序列,利用Primer Premier 5软件进行巢式引物设计;比较ITS2通用引物PCR和巢式PCR对紫草药材基因组DNA的扩增效率;基于巢式引物直接扩增紫草基因组DNA,并进行琼脂糖凝胶电泳检测;基于扩增产物片段长度、变异位点覆盖情况对设计的紫草药材特异性引物进行评价。结果:经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出11对引物进行合成;巢式PCR对紫草药材基因组DNA的扩增效率明显优于ITS2通用引物PCR;基于巢式引物直接扩增紫草基因组DNA琼脂糖凝胶电泳检测的结果明显优于ITS2引物直接扩增紫草基因组DNA,且呈单一条带;确定AE-9S/AE-2A、AE-4S/AE-10A、AE-12S/10A、AE-29S/AE-29A共4对引物适用于紫草正伪品鉴定。结论:在DNA条形码鉴定和巢式PCR技术的基础上,确定了4对可以用于有效区分药材市场中主流的新疆紫草和紫草非《中华人民共和国药典》品的特异性...     

鹿类中药材的位点特异性PCR鉴定研究

目的　建立一种简便、准确的鹿类中药材鹿茸、鹿鞭、鹿筋、鹿胎的DNA分子标记鉴定方法。方法　在对鹿类中药材的正品原动物梅花鹿、马鹿及其混伪品原动物的Cytb基因全序列分析的基础上 ,设计了一对专用于鉴定正品鹿类药材的位点特异性鉴别引物ILu0 1 L和ILu0 1 H。结果　在 6 4℃的复性温度下 ,用鉴别引物对原动物样品进行鉴别PCR ,仅正品能得到约 36 5bp阳性扩增带 ;对鹿茸、鹿鞭及鹿筋正、伪品药材进行PCR鉴定 ,结果表明 :3批鹿茸仅一批为正品 ,2批鹿鞭皆为伪品 ,鹿筋正、伪品药材PCR鉴定与形态鉴定结果一致。随机选取 2枚鹿茸及一个原动物做Cytb基因片段序列分析 ,其结果与PCR鉴定完全一致。结论　对市售鹿类商品药材需加强质量监督和管理。所设计的鉴别引物对梅花鹿、马鹿有高度特异性 ,可应用于以其为原动物的鹿类中药材的鉴定。     

中药材龟甲及原动物的高特异性PCR鉴定研究

目的:建立一种简便、实用的龟甲药材DNA 分子鉴定方法。方法:根据22 种亚洲产龟类的线粒体12SrRNA 基因片段序列,设计一对专用于鉴定中药材龟甲原动物乌龟的鉴别引物,用该对引物扩增从乌龟和其他18 种龟共48 个样品的DNA 模板。结果:在72℃的复性温度下进行PCR,4 个乌龟的模板DNA 均得到约180 bp 的阳性扩增带,而其他各龟的模板DNA,在同样条件下无扩增产物,用这对鉴别引物经一次PCR 反应便可准确地鉴定受试原动物是否为乌龟。同法对江苏省药品检验所提供的17 块样品龟甲进行了鉴定,结果表明只有4 块样品为正品,其余皆为伪品,与性状鉴定和DNA序列分析鉴定结果完全一致。结论:所设计的鉴别引物对乌龟有高度特异性,所配制的龟甲药材鉴定试剂盒可在龟甲药材鉴定中使用。     

多重连接探针扩增技术鉴别半夏及其常见混伪品

目的 基于多重连接探针扩增技术(MLPA)建立一种中药材半夏与其常见伪品虎掌、滴水珠的分子鉴定方法,为半夏药材质量控制提供依据。方法 从Genbank数据库下载半夏属核基因组内转录间隔区(ITS)序列,利用MEGA 6.05版软件进行序列比对,依据半夏、虎掌及滴水珠ITS序列中的单核苷酸多态性(SNP)位点设计物种特异性MLPA探针,MLPA反应后采用熔解曲线法对扩增产物进行分析。结果 半夏、虎掌和滴水珠样品DNA与物种特异性MLPA探针可分别产生位于84.84,82.76及80.14℃的单一熔解峰,表明探针具有良好特异性;构建的探针体系可对0.1 ng模板DNA进行检测,并可有效检出半夏中掺混1%的虎掌或滴水珠样品。对市场收集样品进行检测,鉴别结果准确,灵敏度高。结论 该研究建立的多重连接探针扩增方法可准确鉴别半夏和虎掌、滴水珠,具有特异性强、灵敏度高等特点,可为半夏药材质量控制提供技术支持。     

竹叶花椒根质量标准研究

目的建立竹叶花椒根的质量标准。方法鉴别竹叶花椒根药材的性状、显微特征;检查水分、总灰分、醇溶性浸出物;采用TLC法进行定性鉴别;采用HPLC法测定木兰花碱含量。结果对竹叶花椒根的性状、显微特征进行了描述;根据6批次测定结果,水分测定平均值11.7%,总灰分测定平均值5.9%,醇溶性浸出物测定平均值7.6%;TLC斑点清晰,分离度好;含量测定中木兰花碱的进样量在0.5200~2.6000μg(r=0.9998)与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.5%,RSD为1.6%(n=6),含量以木兰花碱计均不低于2.0 mg·g~(-1)。结论建立的分析方法简便可行,专属性强,可用于竹叶花椒根的质量控制。     

椒目的化学成分

目的对椒目(Zanthoxylum bungeanumMaxim.)质量分数为95%的乙醇提取物的化学成分进行研究。方法椒目用质量分数为95%的乙醇溶液回流提取,减压回收溶剂后,得浸膏加适量水混悬,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,回收溶剂。所得各部分浸膏综合利用硅胶柱色谱S、ephadex LH 20凝胶柱色谱、薄层色谱、重结晶等各种方法进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据分析进行结构鉴定。结果从椒目的乙酸乙酯萃取物中分离得到4个化合物,分别鉴定为:表儿茶素(Ⅰ)、槲皮素(Ⅱ)、24烯环阿尔廷酮(Ⅲ)、辛二酸(Ⅳ)。结论化合物Ⅰ~Ⅳ均为首次从该属植物中分离得到。     

Constituents of Zanthoxylum Sprucei

The known compounds lupeol, ß-sitosterol, (+)-sesamin, trans -dimethylmatairesinol, hesperidin, (-)- cis - N -methylcanadine and sucrose were isolated from Zanthoxylum sprucei . The 1 H-NMR and 13 C-NMR signals of (-)- cis - N -methylcanadine are hereby fully assigned.     

Antibacterial alkaloids from Zanthoxylum rhoifolium

Two new dihydrobenzophenanthridine-type alkaloids, 6-methoxy dioxolo[4',5':4,5]benzo[c] dioxolo[4,5- j]phenanthridine (1) and 2,3,13-trimethoxy-5,11a-dihydro dioxolo[4',5':4,5]benzo[c]phenanthridine (2) were isolated from the stem bark of Zanthoxylum rhoifolium, together with four other previously known benzophenanthridine alkaloids, 6-acetonyldihydronitidine (3) [= 8-acetonyldihydronitidine], 6-acetonyldihydroavicine (4) [= 8-acetonyldihydroavicine], 6-acetonyldihydrochelerythrine (5) and xanthoxyline (6). The structures were elucidated mainly by spectroscopic methods, including 1D and 2D NMR spectroscopy. For alkaloids 1 and 2 we propose the trivial names rhoifolines A and B. The crude plant extracts and the alkaloids 3, 4 and 6 showed activity against Gram (+/-) bacteria, while the new alkaloids 1 and 2 were inactive.     

Antibacterial compounds from Zanthoxylum rhetsa

A new amide, zanthorhetsamide (1), along with nine known compounds (2-10) was isolated from the roots and stem barks of Zanthoxylum rhetsa. The structure was characterized by spectroscopic methods. In addition, the antibacterial activity of the isolates was evaluated. Dihydrochelerythrine (4) exhibited strong activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus SK1 and moderate activity against Escherichia coli TISTR 780 with MIC values of 8 and 16 μg/mL, respectively.     

Leaf Alkaloids of Zanthoxylum rubescens

An alkaloid, 8-methoxy dictamnine ( 1) and a fagaramide like compound ( 2) were isolated from the leaves of ZANTHOXYLUM RUBESCENS for the first time. These compounds were absent in the root and stem barks from which nitidine chloride (0.013% (w)/ (w))( 3) and 9-methoxylchelerythrine (0.18% (w)/ (w))( 4) (possibly an artefact from chelerythrine) were isolated.     

Essential oil from Zanthoxylum hyemale

The essential oils from aerial parts of young (sample A) and mature leaves (sample B), fruit (sample C), and flowers (sample D) of Zanthoxylum hyemale were obtained by hydrodistillation and analyzed by GC, GC/MS, and chiral phase gas chromatography (CPGC). Thirty-four compounds were identified from the essential oils, representing approximately 90.71, 91.19, 87.33, and 89.08 % of the oils, respectively. The major constituent of the young leaf essential oil was the sesquiterpene trans-nerolidol (51 %), while the main constituent of mature leaf (31 %) and flower oils (22 %) was an as yet unknown humulane-type sesquiterpenoid, which was characterized by spectral techniques (EI-MS and 1D-, 2D-NMR) as 3,7,10,10-tetramethylcycloundeca-3,7-dien-1-ol ( 1) and given the trivial name "hyemalol". In the fruit essential oil, the most abundant components were the monoterpenes beta-pinene (25 %) and alpha-pinene (10 %). The antimicrobial activity of the essential oils and some isolated compounds is also reported.     

Antibacterial and Antifungal Activities of Volatile Oils from Zanthoxylum Rhoifolium. Leaves

Abstract

The volatile oil extracted from Zanthoxylum rhoifolium. Lam (Rutaceae) leaves was tested to verify its antimicrobial activity efficacy against six types of different high-virulent Gram-negative bacteria isolated from clinical material and against three different types of fungi (two yeast and a filamentous one). Some results were different from those observed in the literature, and these differences might have occurred due to seasonal, geographic, or nutritional variations of the plants. Nevertheless, the volatile oil was found to be very efficient against Salmonella enteritidis. and Shigella sonnei., bacteria responsible for diarrhea and for a huge number of deaths. Regarding the fungi, a great capacity of the volatile oil in inhibiting the growth of Aspergillus flavus. was found, although it does not affect Candida tropicalis. and Candida guilliermondii. growth.     

不同产地花椒挥发油含量及组成成分比较研究

目的:比较研究不同产地花椒的挥发油含量和组成。方法:以水蒸气蒸馏法提取挥发油,挥发油测定器测定含量,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)检测,运用自动质谱退卷积定性系统(AMDIS)结合Kováts保留指数对其化学成分进行分析。结果:6批花椒的挥发油含量在1.52~3.410mL.100g-1。6批挥发油样品共鉴定出68个化合物,其中5批样品含量最高的化合物为芳樟醇,其含量在24.28~42.10%;1批样品含量最高的化合物为乙酸芳樟酯,其含量为32.52%。结论:不同产地的花椒在挥发油含量及组成上均存在一定差异。