骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位

目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。     

Gab2在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的:探讨Gab2在结直肠癌组织中的表达及其意义。方法:应用免疫组化方法检测78例结直肠癌及46例癌旁正常组织中Gab2的表达水平,并结合临床病理学资料进行统计学分析,Western blot方法检测10对结直肠癌组织及相对应的癌旁正常组织中Gab2的表达状况。结果:免疫组化检测结果显示78例结直肠癌组织中Gab2蛋白表达阳性率为53.85%,而癌旁正常组织中Gab2蛋白多不表达或弱表达,两组结果比较差异有显著性(P0.001);Gab2蛋白在结直肠癌中的表达与肿瘤TNM分期及有无淋巴结转移呈正相关(P0.05),与肿瘤大小、分化程度无明显相关性(P0.05);Western blot检测结果显示结直肠癌组织中Gab2蛋白表达显著高于相对应的癌旁正常组织(P0.05)。结论:Gab2在结直肠癌组织中过表达,可能在结直肠癌的发生发展中起重要作用。     

S100a7蛋白在体外培养人视网膜色素上皮细胞中的表达及功能

背景：S100a7蛋白在细胞增殖、血管形成等病理生理过程中发挥重要作用,但在视网膜色素上皮细胞中的作用少有报道。 目的：探讨S100a7蛋白在体外培养人视网膜色素上皮细胞中的表达及作用。 方法：体外培养ARPE-19细胞株,通过免疫荧光及Western blot技术,检测S100a7在ARPE-19细胞中的表达;不同稀释度(1∶1 000,1∶10 000,1∶100 000)S100a7蛋白抗体与ARPE-19细胞共培养,通过MTT技术检测S100a7蛋白在人视网膜色素上皮细胞增殖过程中的作用。 结果与结论：免疫荧光及Western blot技术证实该蛋白在ARPE-19细胞中表达;MTT实验结果显示,人视网膜色素上皮细胞加入S100a7抗体72 h后,各浓度处理组的吸光度值较对照组显著均降低(P < 0.05)。结果证实S100a7蛋白在人视网膜色素上皮细胞中的表达,并明显促进人视网膜色素上皮细胞增殖。     

ILK在胰腺癌中的表达及临床病理意义

目的研究整合素连接激酶(ILK)在胰腺癌中的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法利用免疫组织化学方法和Western Blot方法检测61例胰腺癌标本,26例癌旁组织,4例正常胰腺组织中ILK蛋白的表达情况,并统计分析其表达率与临床病理学特征的相关性。结果免疫组织化学染色示ILK蛋白定位于细胞浆,其表达率为65.6%,其中7例Ⅲ期胰腺癌中有6例ILK染色强度均呈(+++);26例癌旁组织中有3例阳性表达,表达率11.5%;4例正常胰腺组织未见ILK的表达,胰腺癌组织的ILK表达明显高于可配对癌旁组织(P0.05)及正常胰腺组织(P0.01)。Western Blot检测发现胰腺癌组织ILK蛋白的表达水平明显高于癌旁组织(P0.01)。结论 ILK高表达与胰腺癌患者病理类型中的分化程度无关,而与肿瘤的淋巴结转移、临床分期密切相关。     

hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位

目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot。最后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位。结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功。Western blot检测GFP-hCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000。pEG-FP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。     

mdm2蛋白和线粒体肌酸激酶在甲状腺癌组织中的表达

一、材料和方法1 材料 :采用 1994～ 1998年间白求恩国际和平医院经手术切除的带有正常甲状腺组织的甲状腺肿瘤标本共 46份 ,其中甲状腺瘤 10例、乳头状腺癌 18例、滤泡癌 10例、未分化癌 5例、髓样癌 3例。标本均经 4%甲醛固定 ,常规石蜡包埋 ,5 μｍ切片 ,ＨＥ染色。据ＷＨＯ诊断标准 46份标本中 ,女性 41例 ,男性 5例。2 试剂和免疫组织化学染色 :一抗线粒体肌酸激酶(ＣＫ ｍｉｔ)为鼠抗人单克隆抗体 (免疫斑点法效价 1∶10 ,白求恩国际和平医院检验科制备[1] )。ｍｄｍ2为小鼠抗人单克隆抗体 ,ＳＰ工作液试剂盒及ＤＡＢ显色剂均为美国…     

卵巢癌中MSI2蛋白表达及与临床病理特征的关系

目的 探讨卵巢癌组织中RNA结合蛋白MSI2的表达及临床意义.方法 采用免疫组化及Western blot法检测卵巢癌组织及配对癌旁正常卵巢组织和输卵管组织中MSI2的表达部位和表达量,分析MSI2表达与卵巢癌临床病理特征的关系.利用Kaplan-Meier生存曲线评估患者的总生存率,Cox回归模型分析MSI2表达的临...     

hLMO4基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位

目的构建hLMO4真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位。方法提取人乳腺癌MCF-7细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hLMO4全长编码基因,亚克隆至pCDNA3.1-myc-hisA表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到胃癌细胞BGC823中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-LMO4在乳腺癌MCF-7细胞内定位。结果hLMO4全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-hisA中,酶切鉴定片段为500bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为23KD。pEGFP-LMO4在乳腺癌MCF-7细胞内定位以细胞核为主,在细胞浆内少量表达。结论成功的构建了hLMO4全长基因真核表达载体,pEGFP-LMO4蛋白定位于乳腺癌细胞质和核内。     

EZH2蛋白在食管癌组织中的表达

目的观察EZH2蛋白在食管鳞癌和腺癌组织中的表达,探讨EZH2蛋白与侵袭、转移程度不同的食管鳞癌及不同病理分级、组织类型食管癌之间的关系。方法采用免疫组织化学染色法、免疫印迹法,分析检测食管癌标本中EZH2蛋白的表达。结果食管癌组织标本均高表达EZH2蛋白,阳性染色定位于细胞核;部分正常组织、癌旁组织也有弱阳性着色。免疫印迹分析表明,食管鳞癌组织EZH2蛋白的表达明显高于癌旁及正常黏膜组织（P〈0．01）。癌旁组织高于正常黏膜组织（P〈0．05）。浸润、转移性食管鳞癌EZH2蛋白表达明显上调,与未发生浸润、转移的相比,差异有显著性（P〈0．05）。高分化鳞癌EZH2蛋白表达低于中、低分化者;但食管腺癌则相反,高分化腺癌的表达高于中、低分化者。结论EZH2蛋白在食管癌高表达,并与其组织类型、侵袭和转移特性密切相关。     

环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子在异位骨化组织中的表达

背景：研究发现环氧化酶2抑制剂具有预防肘关节周围异位骨化的作用。 目的：观察环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子在肘关节创伤后异位骨化组织中的表达,并分析其相关性。 方法：采用免疫组化SP法检测18例肘关节创伤后异位骨化组织及10例正常骨组织中环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子的表达水平,利用HPIAS-1000图像分析系统测定异位骨化组织与正常骨组织中环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子的平均吸光度和阳性区域面积百分率,并分析3种蛋白阳性区域面积百分率之间的相关性。 结果与结论：异位骨化组织中环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子呈高表达;正常骨组织中呈低表达或不表达。图像分析结果显示异位骨化组织中3种蛋白平均吸光度及阳性区域面积百分率显著高于正常骨组织(P < 0.01)。异位骨化组织中环氧化酶2与骨形态形成蛋白2、血管内皮生长因子的阳性区域面积百分率呈正相关(P < 0.01)。提示环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子在异位骨化的形成过程中起重要作用,环氧化酶2可能通过诱导骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子的表达从而促进异位骨化组织中的成骨和血管形成。     

人Plk3基因真核表达载体的构建及蛋白表达和定位

目的构建hPlk3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPlk3基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测其表达。最后利用激光共聚焦扫描显微镜观察pEGFP-hPlk3在COS-7细胞内的定位。结果hPlk3基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1941bp,并测序成功。Westernblot检测到了GFP-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为98kDa。pEGFP-hPlk3在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。结论成功构建了hPlk3基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk3蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。     

GFP-hERα重组质粒的构建及蛋白表达和细胞内定位的研究

目的 构建hERα真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内表达及定位.方法 以pcDNA3.1-flaghERα仅重组质粒(Dr.Muyan M馈赠)为模板,PCR扩增hER α全长编码基因,亚克隆至pEGFP-C1表达载体.将构建的重组质粒测序并转染到乳腺癌细胞MCF-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测.利...     

Bcl-2和Bax蛋白在人早孕胎盘绒毛和蜕膜组织中的表达

目的探讨Bcl-2和Bax蛋白在人早孕绒毛和蜕膜组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学ABC法检测Bcl-2和Bax蛋白在孕5~7周绒毛和蜕膜组织细胞中的表达,用真彩色病理图像分析系统4.0图像分析软件测定Bcl-2和Bax蛋白表达的积分吸光度值。结果Bc1-2蛋白主要分布于孕5~7周绒毛合体滋养层细胞、蜕膜细胞的细胞质和细胞核中,蛋白表达积分吸光度值依次降低,其差异无统计学意义(P>0.05)。Bax蛋白在孕5~7周绒毛细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中均未见表达;孕6周,Bax蛋白表达于极少部分蜕膜细胞的细胞质中。结论Bc1-2和Bax蛋白在人早孕过程中参与了绒毛滋养层细胞增殖和分化、子宫内膜蜕膜化的过程,在绒毛的发生、发育、胎盘形成和组织结构改建及功能完善等方面发挥着重要作用。     

人胚胎生长发育过程中Bcl-2和Bax蛋白在食管组织中的表达

目的探讨人胚胎食管发育过程中食管壁细胞增殖与凋亡的变化规律,以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)在食管生长发育中的表达意义。方法应用免疫组织化学ABC法检测第2、3、4月龄段人胚胎(共14例)食管壁组织内Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果第2、3、4月龄段,人胚胎食管壁肌间神经丛、黏膜下神经丛和黏膜层内均有Bcl-2蛋白阳性表达,在食管上皮Bax蛋白呈弱阳性表达。结论Bcl-2和Bax细胞周期调控蛋白与人胚胎食管的生长发育关系密切。     

胃癌组织中EZH2和p53蛋白的表达及临床意义

目的探讨EZH2和p53蛋白在胃癌组织中的表达,及其在胃癌发生、发展过程中的作用和临床病理学意义。方法采用免疫组化EnVision法检测EZH2和p53蛋白在199例胃癌、25例高级别上皮内瘤变、24例低级别上皮内瘤变、46例肠上皮化生、17例慢性萎缩性胃炎和23例正常胃黏膜组织中的表达情况。结果在胃癌和上皮内瘤变组织中EZH2蛋白表达明显高于肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎和正常胃黏膜组织。胃癌组织中EZH2蛋白的表达在进展期胃癌高于早期胃癌,差异有统计学意义。EZH2蛋白在胃癌组织中的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移、组织学分期和临床分期均有关;但与患者的性别、年龄、肿瘤的部位、肿瘤的类型和分化以及患者的病死率均无关。p53蛋白在胃癌组织中表达最高,几乎不表达于其他病变和正常胃黏膜组织。p53表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化、胃癌的类型和患者的生存情况相关。EZH2蛋白表达与p53蛋白表达之间呈正相关。结论 EZH2在胃癌中的表达增加与p53相关,提示胃癌中EZH2与p53可能相互协调,促进胃癌的发生、发展。     

p53蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨p53蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法分别对宫颈鳞癌切除标本和正常宫颈组织标本中的p53蛋白的表达状况进行检测。结果 p53蛋白在35例正常组织中不表达,在65例宫颈鳞癌组织中,p53蛋白阳性表达38例,阳性率为58.46%。癌组织中p53蛋白的表达率与正常组织比较差异有统计学意义（P〈0.05）。p53蛋白的阳性表达率与年龄及临床分期差异无统计学意义（P〉0.05）,即p53蛋白表达阳性与宫颈鳞癌患者年龄及临床分期无明显相关。p53蛋白的表达量与宫颈鳞癌的分化程度及局部淋巴结转移差异有统计学意义（P〈0.05）,即p53蛋白的表达量与病理分化程度及局部淋巴结转移有关。结论 p53蛋白的表达与宫颈鳞癌的发生发展有关,可作为宫颈鳞癌的早期诊断、治疗及预后评估的一项参考指标。     

p27kip1和Skp2在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化

为了探讨损伤后周围神经p27kip1和S期激酶相关蛋白2(Skp2)的定位表达和变化,本实验将成年SD大鼠随机分为正常对照组、夹伤组和切断组,运用Western blot结合免疫组织化学及免疫荧光双标,在大鼠坐骨神经损伤时,对p27kip1和Skp2表达的影响进行了研究。结果表明:(1)坐骨神经夹伤后,p27kip1蛋白表达先逐渐下降,后又逐渐上升;坐骨神经切断后,远侧段p27kip1蛋白表达持续下降,而近侧段p27kip1蛋白表达在切断后6h明显下降,后又逐渐升高至正常水平,而Skp2表达变化与之相反;(2)免疫组织化学染色结果显示,坐骨神经切断后1w,远侧段从断端到末端,p27kip1阳性信号逐渐增加,而Skp2阳性信号逐渐减弱;(3)免疫荧光双标显示,正常和损伤坐骨神经的雪旺氏细胞中都有p27kip1和Skp2表达。以上结果提示:周围神经损伤后影响雪旺氏细胞中p27kip1和Skp2的表达变化,为进一步研究它们在周围神经损伤和修复中的作用机制奠定基础。     

Tropic1808在PC12细胞中的表达

目的构建稳定表达tropic1808基因的PC12细胞株,并通过观察稳定株中高分子量神经丝蛋白（NF—H）的表达以初步观察该珐因的作用。方法构建重组真核表达载体pcDNA—HA—tropic1808,转染PC12细胞,经G418筛选、Western blot鉴定。采用RT-PCR,实时PCR,Western blot和细胞组织化学方法观察tropic1808稳定株中NF-H的表达。结果Western blot榆测表明．tropic1808基因稳定表达,RT-PCR,实时PCR,Western blot和细胞组织化学方法均观察到NF-H在tropic1808稳定株中的表达高于空载体对照。结论Tropic1808基因可以在PC12稳定表达且NF-H在tropic1808稳定株中表达上升。