Ⅳ型胶原与糖尿病肾病

Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）是导致糖尿病肾病（DN）的重要病理基础，即细胞外基质增殖的主要成分，由于高血糖、血压节律紊乱、肥胖、胰岛素抵抗、缺氧、糖基化终末产物等多种因素影响导致Ⅳ-C代谢紊乱，促进DN的发生、发展。近年研究表明，测定尿中的Ⅳ-C含量对于DN早期诊断具有重要意义。     

Ⅳ型胶原与糖尿病肾病

Ⅳ型胶原 (Ⅳ C)是导致糖尿病肾病 (DN)的重要病理基础 ,即细胞外基质增殖的主要成分 ,由于高血糖、血压节律紊乱、肥胖、胰岛素抵抗、缺氧、糖基化终末产物等多种因素影响导致Ⅳ C代谢紊乱 ,促进DN的发生、发展。近年研究表明 ,测定尿中的Ⅳ C含量对于DN早期诊断具有重要意义。     

血清TGF-β1和Ⅳ型胶原与糖尿病肾损害

目的通过观察比较糖尿病肾病（DN组）患者血清转化生长因子β1（TGF-β1-）和Ⅳ型胶原（ST4C）水平变化及与单纯糖尿病（DM组）和正常人（NG组）血清水平差异，探讨TGF-β1和ST4C水平变化与DN损害的关系。方法TGF-β1和ST4C：ELISA法；尿白蛋白排泄率（UAER）：散射比浊法。结果DN组TGF-β1和ST4C水平明显高于DM组和NG组，差异有非常显著性（P〈0．01）；DN组TGF-β1、ST4C与UAER存在较高的正相关性（r=0．4882、0．7414，P均〈0、01）；DN组TGF-β1与ST4C有高度正相关性（r=0．6560，P〈0．01）；而DM组TGF-β1与ST4C相关性无显著意义（r=0．3419，P〉0．01）。结论血清TGF-β1、ST4C与DN肾损害高度相关，TGF-β1是DN的重要发病机制。     

灵芝多糖对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1和Ⅳ型胶原的影响

目的探讨灵芝多糖对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的影响。方法用不同浓度的灵芝多糖加入高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)中测不同时间TGF-β1、Col-Ⅳ蛋白的表达。结果高糖可使系膜细胞TGF-β1、Col-Ⅳ的表达明显增加(P<0.01),而灵芝多糖干预后TGF-β1、Col-Ⅳ表达降低,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论灵芝多糖可抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的TGF-β1、Col-Ⅳ过度表达,并呈剂量依赖性,这可能是其延缓及减轻糖尿病肾病的初步机制。     

Ⅲ型、Ⅳ型胶原在慢性胰腺炎组织中的表达

目的检测Ⅲ、Ⅳ型胶原在CP及正常胰腺组织中的表达水平,研究其在胰腺间质纤维化形成中的作用。方法免疫组织化学方法检测16例CP标本及6例正常胰腺组织中Ⅲ、Ⅳ型胶原的表达。结果16例CP中,Ⅲ型、Ⅳ型胶原表达均为轻度以上深染,其中重度深染50%（8/16）,中度深染31.25%（5/16）;而正常胰腺组织Ⅲ、Ⅳ型胶原表达均为浅染。正常胰腺组织中Ⅲ、Ⅳ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,Ⅲ型胶原以间质纤维表达最明显,Ⅳ型胶原以基底膜表达最明显。CP组织中Ⅲ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,以间质纤维最明显;Ⅳ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,以基底膜最明显。结论Ⅲ、Ⅳ型胶原的表达增强在胰腺纤维化的形成中可能有重要作用。     

薄基底膜肾病患者基底膜Ⅳ型胶原α链的表达

目的：检测薄基底膜肾病（ＴＢＭＮ）患者基底膜中Ⅳ型的α链的表达,探讨其发病机制;并与Ａｌｐｏｒｔ 综合征（ＡＳ）比较,为鉴别ＴＢＭＮ和ＡＳ提供帮助。方法：用抗Ⅳ型胶原不同α链的单克隆抗这菌素亲生物素－过氧化连接法检测了６例ＴＢＭＮ、３例Ｘ锁型ＡＳ男性串必及２例正常对照肾脏组织基底膜中Ⅳ型胶原α１、α３和α５链的表达;采用间接免疫荧光法检测了３例ＴＢＭＮ、４例Ｘ链锁型ＡＳ男性患儿及４例正常对照皮肤     

MMP-1过表达抑制人肝星状细胞I型胶原表达

目的观察人肝星状细胞（LX-2）过表达基质金属蛋白酶-1（MMP-1）后,肝纤维化相关指标的变化。方法构建含MMP-1全长编码基因的表达质粒,并转染人肝星状细胞,荧光定量PCR与Western blot法分别检测MMP-1、I型胶原（collagenI）、TIMP-1基因与蛋白水平的表达。结果成功构建含MMP-1全长编码基因的表达质粒dl6-95-MMP-1;dl6-95-MMP-1转染LX-2细胞7d后,荧光定量PCR结果显示,MMP-1基因转录水平显著增加,而CollagenI、TIMP-1在基因转录水平无明显改变;Western blot结果显示转染7d后,MMP-1蛋白表达明显增加,CollagenI蛋白表达明显下降,而TIMP-1蛋白表达无明显变化。结论人肝星状细胞高表达MMP-1后显著抑制CollagenI蛋白的表达,其机制主要通过发挥其酶活性降解collagenI蛋白,而不影响collagenI基因水平的表达,同时也不影响TIMP-1在基因以及蛋白水平的表达。     

尿TGF-β1、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原与2型糖尿病肾病的关系

在182例2型糖尿病患者测定尿液转化生长因子β1(TGF-β1)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型型胶原排泄量，糖尿病患者的尿液TGF-β1、LN和Ⅳ型胶原排泄量增加，并与糖尿病肾病(DN)的严重程度有较好的相关性。尿TGF-β1可能为早期DN的指标、尿LN、Ⅳ型胶原可能为DN严重程度的指标。     

Ⅲ型、Ⅳ型胶原在慢性胰腺炎组织中的表达

目的 检测Ⅲ、Ⅳ型胶原在CP及正常胰腺组织中的表达水平,研究其在胰腺间质纤维化形成中的作用.方法 免疫组织化学方法检测16例CP标本及6例正常胰腺组织中Ⅲ、Ⅳ型胶原的表达.结果 16例CP中,Ⅲ型、Ⅳ型胶原表达均为轻度以上深染,其中重度深染50%(8/16),中度深染31.25%(5/16);而正常胰腺组织Ⅲ、Ⅳ型胶原表达均为浅染.正常胰腺组织中Ⅲ、Ⅳ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,Ⅲ型胶原以间质纤维表达最明显,Ⅳ型胶原以基底膜表达最明显.CP组织中Ⅲ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,以间质纤维最明显;Ⅳ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,以基底膜最明显.结论 Ⅲ、Ⅳ型胶原的表达增强在胰腺纤维化的形成中可能有重要作用.     

Alport综合征基膜Ⅳ型胶原α链表达异常的临床意义

目的：了解基膜Ⅳ型胶原α链在不同遗传类型Alport综合征（AS）薄基膜肾病、家族性IgA肾病中分布特点,探讨其与上述疾病的关联和临床意义。方法：运用针对Ⅳ型胶原不同α链单抗,采用间接免疫荧光法（iIF）检测皮肤和肾组织基膜Ⅳ型胶原α1、3、5链分布。结果：8例男性X伴性显性AS（XD－AS）患者α5（Ⅳ）链在皮肤和（或）肾组织基膜上IF为阴性,肾组织α3（Ⅳ）链IF变呈阴性。4例女性XD－AS患者表皮基膜上α5（Ⅳ）链IF呈不连续沉积。4例XD－AS女性、1例常染色体隐性遗传AS和所有常染色体显性遗传AS、薄基膜病、IgA肾病患者肾组织和皮肤IF均为阳性,与正常对照相同。XD－AS患者中,皮肤α5（Ⅳ）链表达程度赵低,发病年龄和出现肾衰的时间越早,听力累及频率范围越广,表现前锥形晶体越多。结论：不同遗传方式的ASⅣ型胶原α链表达异常存在显著差异,不同组织Ⅳ型胶原α链检测对AS诊断、鉴别诊断和遗传方式判断具有重要意义,α5（Ⅳ）链表达缺失的程度与疾病严重程度相关。     

不同剂量木糖醇对糖尿病大鼠肾小球Ⅳ型胶原表达的影响

目的 探讨不同剂量木糖醇对糖尿病大鼠肾小球Ⅳ型胶原表达的影响.方法 将40只大鼠随机分为5组(每组8只):正常对照组(NC组),糖尿病对照组(DC组),糖尿病5%木糖醇组(低剂量组),糖尿病10%木糖醇组(中剂量组),糖尿病20%木糖醇组(高剂量组).第8周末处死大鼠,用反相高效液相法(RP-HPLC)测定每组大鼠血清尿酸水平,取肾脏测定肾小球Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)免疫组化表达情况.结果 实验8周末糖尿病各组血清尿酸水平均较NC组升高(P＜0.05);低、中剂量组血清尿酸水平高于DC组(P＜0.05);高剂量组血清尿酸水平较DC组下降(P＜0.05).肾小球Col-Ⅳ表达比较:实验8周末糖尿病各组与NC组相比呈高表达(P＜0.05);低、中剂量组与DC组相比呈岛表达(P＜0.05),高剂量组则呈低表达(P＜0.05).结论 低、中剂量木糖醇致血尿酸水平升高,肾小球Col-Ⅳ的积聚增加,可加重糖尿病肾病.高剂量木糖醇可使血尿酸水平降低,肾小球Col-Ⅳ的积聚减少,使糖尿病肾病有所缓解.     

Alport综合征基膜Ⅳ型胶原α链表达异常的临床意义

目的了解基膜Ⅳ型胶原α链在不同遗传类型Alport综合征(AS)、薄基膜肾病、家族性IgA肾病中分布特点,探讨其与上述疾病的关联和临床意义.方法运用针对Ⅳ型胶原不同α链单抗,采用间接免疫荧光法(iIF)检测皮肤和肾组织基膜Ⅳ型胶原α1、3、5链分布.结果8例男性X伴性显性AS(XD-AS)患者α5(Ⅳ)链在皮肤和(或)肾组织基膜上IF为阴性,肾组织α3(Ⅳ)链IF亦呈阴性.4例女性XD-AS患者表皮基膜上α5(Ⅳ)链IF呈不连续沉积.4例XD-AS女性、1例常染色体隐性遗传AS和所有常染色体显性遗传AS、薄基膜病、IgA肾病患者肾组织和皮肤IF均为阳性,与正常对照相同.XD-AS患者中,皮肤α5(Ⅳ)链表达程度越低,发病年龄和出现肾衰的时间越早,听力累及频率范围越广,表现前锥形晶体越多.结论不同遗传方式的ASⅣ型胶原α链表达异常存在显著差异,不同组织Ⅳ型胶原α链检测对AS诊断、鉴别诊断和遗传方式判断具有重要意义,α5(Ⅳ)链表达缺失的程度与疾病严重程度相关.     

1型糖尿病大鼠肾脏Ⅳ型胶原的表达及坎地沙坦的干预作用

目的 探讨1型糖尿病大鼠造模后肾脏Ⅳ型胶原的表达及肾小球病理形态改变及坎地沙坦的保护作用和机制.方法 雄性Wistar大鼠36只,随机分出正常对照组(NC组)12只,余24只腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,再随机分为糖尿病组(DM组)12只和坎地沙坦干预组(DMC组)12只;DM-C组给予坎地沙坦5 mg·kg-1·d-1灌胃.干预12 w后,检测各组大鼠的空腹血糖(FPG)、血压、24 h尿白蛋白排泄量(24 h UAE)、肌酐清除率(Ccr)、肾重指数(KI);光镜下观察肾小球病理形态改变,测定肾小球平均截面积(MGA)、肾小球平均体积(MGV)和肾小球系膜基质分数(MMF);免疫组化法检测肾小球Ⅳ型胶原的表达.结果 与NC组相比,DM组大鼠的FPG、24 h UAE、Ccr及KI均显著升高(P＜0.01),MGA、MGV及MMF显著增大(P＜0.01),肾小球Ⅳ型胶原的表达明显增加(P＜0.01);DMC组较DM组肾小球Ⅳ型胶原的表达明显减少(P＜0.01),FPG、24 h UAE、Ccr及KI均显著降低(P＜0.01),MGA、MGV及MMF显著减小(P＜0.01);三组间大鼠血压差异无统计学意义(P＞0.05).结论 糖尿病大鼠肾脏Ⅳ型胶原表达增加;坎地沙坦具有独立于降压以外的肾脏保护作用.     

色素上皮衍生因子抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞转化生长因子β1、纤连蛋白和Ⅳ型胶原的表达

随着葡萄糖浓度的增加,人肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、纤连蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达显著增加(P＜0.01).在30 mmol/L的高糖条件下,40～160 nmol/L的色素上皮衍生因子(PEDF)显著抑制TGF-β1表达,呈剂量依赖性(P＜0.01);5～40 nmol/L的PEDF也剂量依赖性地抑制FN和ColⅣ的表达(P＜0.01),提示PEDF可能通过其抗纤维化的作用延缓糖尿病肾病的进程.

Abstract：

The expressions of transforming growth factor β1 (TGF-β1), fibronectin (FN), and collagen Ⅳ in human mesangial cells were augmented with increased concentrations of glucose.Pigment epithelium-derived factor (PEDF) at concentrations of 40-160 nmol/L significantly inhibited TGF-β1 expression in a dose-dependent manner(P＜0.01).PEDF at concentrations of 5-40 nmol/L significantly decreased FN and collagen Ⅳ expressions in a dose-dependent manner(P＜0.01) ,suggesting that PEDF may play a salutary role in diabetic nephropathy by its antifibrogenic activity.     

氟伐他汀对糖尿病肾病患者血清Ⅳ型胶原与转化生长因子β1水平的影响及意义

近年研究表明，多种细胞因子分泌增多和细胞外基质(ECM)蛋白代谢异常在糖尿病肾病(DN)发病的各个环节中起重要作用。本研究观察氟伐他汀对DN患者血清Ⅳ型胶原(CⅣ)、转化生长因子β1(TGF—β1)水平的影响，探讨其治疗作用和机制。     

糖尿病肾病患者尿Ⅳ型胶原、TGF-β1与UAER相关研究

检测60例糖尿病肾病尿转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原、尿白蛋白排泄率(UAER),就三者之间的相关性进行了分析,方法Ⅳ型胶原、TGF-β1酶联免疫吸法,UAER散射比浊法.结果,糖尿病肾病患者尿中Ⅳ型胶原、TGF-β1、UAER三者之间具有较高的相关性(p＜0.01).结论尿中Ⅳ型胶原、TGF-β1水平变化与糖尿病肾病肾脏损害有关;糖尿病肾病患者原中转化生长因子β1、Ⅳ型胶原水平可以作为糖尿病肾病损害程度和监控的指标.     

老年糖尿病肾病血清Ⅳ型胶原变化及葛根素对其影响

目的　 老年糖尿病肾病 (DN)发生隐匿 ,为对其及早发现和治疗 ,我们测定了血清Ⅳ型胶原水平与DN早期的相关性研究 ,同时观察葛根素对血清Ⅳ型胶原及尿白蛋白的影响及临床治疗作用。　 方法 　老年糖尿病(DM )患者 46例 ,对照组 3 0例 ,测定血清Ⅳ型胶原及血液流变学 ;观察Ⅳ型胶原与病程、糖化血红蛋白 (HbA1c)、年龄、体质量指数的相关性 ;早期DN组给予葛根素 1个疗程治疗后 ,观察用药前后的尿白蛋白、Ⅳ型胶原 ,及血液流变学变化。　 结果 　老年DM患者Ⅳ型胶原水平明显升高 (P <0 0 5 ) ,早期DN组较正常白蛋白尿组Ⅳ型胶原水平明显升高 (P <0 0 5 )。　 结论 　Ⅳ型胶原水平是DN发生发展的重要标志之一。使用葛根素治疗前后可看到Ⅳ型胶原水平及血液流变学改善 ,尿白蛋白降低 ,因此葛根素对早期DN有治疗作用。     

雷公藤多甙对DN大鼠肾组织中Ⅳ型胶原表达的影响

目的探讨治疗雷公藤多甙糖尿病肾病（DN）的效果及机制。方法将24只SD大鼠随机分为观察组、模型组及对照组各8只,观察组及模型组均经尾静脉注射STZ 65 mg/kg制备DN模型。制模成功后观察组予雷公滕多甙10 mg/kg＋2 ml蒸馏水灌胃,模型组及对照组予等量（约2 ml）蒸馏水灌胃,均为1次/d、连续8周。采用放免法测24 h尿白蛋白、尿肌酐（U）和血肌酐（P）、全部尿量V（ml）,按公式U×V/P（ml/min）计算内生肌酐清除率（CCr）。采用免疫组化法检测各组肾组织中Ⅳ-C表达。结果观察组和模型组CCr及24 h尿蛋白均显著低于对照组,其中观察组显著低于模型组（P均〈0.05）;模型组肾小球、肾小管中Ⅳ-C表达均明显高于对照组,观察组肾小球中Ⅳ-C表达显著低于模型组（P均〈0.05）。结论雷公藤多苷可改善DN大鼠肾功能,可能机制为降低肾小球组织中Ⅳ-C表达;此为DN治疗提供了理论依据。     

去甲斑蝥素不依赖钙调蛋白磷酸酶信号通路抑制高糖刺激肾小管上皮细胞细胞外基质的表达

目的:在证实去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)能减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾间质纤维化和抑制高糖刺激的肾小管上皮细胞细胞外基质表达的基础上,观察NCTD对高糖刺激的肾小管上皮细胞钙调蛋白磷酸酶(calcineurin,CaN)通路的影响,探讨NCTD抗DN肾小管间质纤维化与其抑制CaN的关系。方法:常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),转染CaN siRNA,细胞分五组:(1)正常糖组(D-glucose5.5mmol/L);(2)高糖组(HG,D-glucose30mmol/L);(3)高糖+CaN siRNA组;(4)高糖+CaN siRNA+NCTD(5mg/L)组;(5)高糖+NCTD(5mg/L)组。采用Western-blot、免疫荧光和实时定量PCR,观察NCDT对HK-2细胞CaN/NFAT通路的影响,明确CaN siRNA的干扰效果。采用Western blot,检测NCTD对转染CaN siRNA后的HK-2细胞纤维连接蛋白(FN),胶原蛋白IV(Collagen IV,Col IV)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。结果:高糖可促进HK-2细胞CaNmRNA及蛋白的表达,NCTD可在基因及蛋白水平抑制CaN的表达(P0.05)。免疫荧光发现CaN下游活化T细胞核因子(NFATc)在正常对照组中存在于胞质,高糖刺激后细胞核内开始表达,高糖刺激30min后发生明显的核转位,NCTD能在一定程度上抑制核转位的发生,并能减少高糖刺激后核内NFATc蛋白的表达。转染CaN siRNA后,高糖刺激后HK-2细胞中CaN mRNA以及蛋白表达均降低,而FN,Col IV以及TGF-β1蛋白水平表达都明显增强(P0.05)。NCTD可抑制转染CaN siRNA后高糖刺激的HK-2细胞FN,Col IV和TGF-β1的表达。结论:NCTD能下调肾小管上皮细胞CaN表达,阻断CaN/NFATc信号通路;但NCTD抑制高糖刺激后肾小管上皮细胞细胞外基质的表达,与其阻断CaN/NFATc信号通路无关。