游离NgR促进新生大鼠背根神经节突起体外生长

目的 观察生物合成的游离NgR对新生大鼠原代背根神经节(DRG)神经元突起生长的影响.方法 以ViraPowerTM慢病毒将NgR(310)ecto基因转染人培养的骨髓基质细胞,收集培养上清获得游离NgR.分离新生大鼠DRG神经元并分为两组,对照组直接将神经元种植到经含中枢神经系统(CNS)髓鞘蛋白包被的培养皿中培养;实验组先将骨髓基质细胞培养上清加入含CNS髓鞘蛋白的培养皿中,孵育4 h后再植入DRG神经元.两组细胞均在培养24 h后固定,进行βⅢ-tubulin免疫组织化学染色,图像观察神经元及其突起生长情况.结果 基因修饰的骨髓基质细胞,转染后48 h间接免疫荧光的方法检测可见胞浆内荧光表达.种植24 h后对照组DRG细胞很少有突起长出;而实验组DRG细胞中60%的神经元长出突起,且突起较长.结论 游离NgR能够竞争性结合脊髓损伤后局部分泌的轴突生长抑制因子,从而保护生理性NgR,可能是促轴突再生和脊髓功能恢复的一种新策略.     

玻璃酸钠联合物理疗法治疗膝骨关节炎疗效分析

目的 比较多种方法治疗膝关节骨性关节炎(KOA)的临床疗效.方法 将143例217膝KOA患者随机分为三组,对照组(A组)43例68膝仅给予膝关节玻璃酸钠(SH)治疗,治疗组(B组)50例76膝予SH联合超短波治疗,疗组(C组)50例73膝行SH联合超声波导入双氯芬酸钠治疗,治疗前、治疗后1周及6月后分别采用Lysholm膝关节功能评分对患者进行膝关节功能评分.结果 三组患者关节疼痛程度较治疗前明显改善,临床疗效治疗后1周治疗组(B、C)Lysholm评分显著优于A组,差异具有统计学意义(P<0.05),C组在治疗后6月疗效优于A组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 无论单纯使用SH或SH联合超短波治疗、SH联合超声波导入双氯芬酸治疗KOA早期均能改善KOA患者的膝关节功能,治疗后6月SH联合超声波导入双氯芬酸治疗能更好地促进惠膝关节功能的康复,超声波导入双氯芬酸治疗KOA优于单纯SH注射治疗的疗效.     

Foxo3a在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

目的 探讨大鼠坐骨神经夹伤后Foxo3a在腰段背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)中的表达变化及其意义.方法 将42只成年SD大鼠完全随机分为正常对照组和实验组.对实验组行坐骨神经夹伤术.运用Western blot及免疫荧光染色,观察大鼠坐骨神经夹伤对腰段DRG中Foxo3a表达的影响及其与生长相关蛋白的表达变化.结果 Western blot结果表明,坐骨神经夹伤后1 d,腰段DRG中Foxo3a蛋白表达开始明显下降,第2天达到最低值,随之逐渐升高,于4周后接近正常水平.坐骨神经夹伤后2 d细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和神经元生长相关蛋白(GAP-43)在DRG中的表达均开始上调,在7 d达到最高点,GAP-43则保持较高水平.免疫荧光染色结果表明,Foxo3a表达下降主要存在于神经元和神经胶质细胞内,并且PCNA与神经元细胞几乎无共定位,与神经胶质细胞共定位明显.结论 大鼠坐骨神经损伤后,Foxo3a在腰段DRG中的表达减少可能与神经胶质细胞增殖和轴突再生密切相关.     

肉碱棕榈酰转移酶1对60Co γ射线照射大鼠小肠上皮细胞IEC-6增殖的影响及相关机制研究

目的探索60Co γ射线诱导大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)中CPT1A和CPT1B蛋白表达变化, 并进一步研究肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)变化对受照细胞增殖的影响及相关分子机制。方法 IEC-6细胞经棕榈酸、血清饥饿以及血清饥饿联合棕榈酸处理后, 给予0、5、10或15 Gy60Co γ射线照射, 照射后24 h收集细胞并提取蛋白, 利用Western blot方法检测CPT1A和CPT1B蛋白的表达水平变化;ETO是CPT1的小分子抑制剂, 利用克隆形成率实验和CCK-8实验分析ETO抑制CPT1对60Co γ射线照射IEC-6细胞存活及增殖的影响;利用Western blot方法检测5 Gy60Co γ射线照射ETO处理IEC-6细胞48 h后细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达及磷酸化水平变化。结果棕榈酸处理组中, CPT1A蛋白在15 Gy γ射线照射后表达量显著增加(t=-2.82, P<0.05)。血清饥饿处理组中, CPT1A蛋白在5、10和15 Gy γ射线照射后表达量明显升高(t=-3.28、-8.72、-8.67...     

上调mir-7表达后肺腺癌细胞对吉非替尼敏感性的变化及其机制研究

目的 观察上调人肺腺癌A549细胞中mir-7的表达水平后,细胞对吉非替尼敏感性的变化及其可能机制.方法 取对数生长期A549细胞,随机分为对照组(NC组)、转染组(mir-7组)、吉非替尼组(吉非替尼处理细胞,G组)、联合组(转染mir-7后用吉非替尼处理细胞,G+mir-7组).MTT法检测吉非替尼对A549细胞的半数抑制浓度(IC50),Realtime PCR及Western blotting检测表皮生长因子受体(EGFR)、胰岛素样生长因子受体1(IGF-1R)、Raf1、细胞外信号调节激酶(ERK)的mRNA和蛋白表达水平.结果 G+mir-7组吉非替尼对A549细胞的IC50(8.57±0.61μmol/L)明显低于G组(15.63±0.82μmol/L,P＜0.01).Real-time PCR及Western blotting检测结果显示,G+mir-7组EGFR、IGF-1R、Rafl、ERK的mRNA及蛋白表达水平明显低于mir-7组、G组和NC组(P＜0.05).结论 上调mir-7表达可增加肺腺癌细胞对吉非替尼的敏感性,其机制可能与mir-7抑制EGFR及IGF-1R通路有关.     

CysLT2受体拮抗剂HAMI3379对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制

目的 探究半胱氨酰白三烯2(CysLT₂)受体拮抗剂HAMI3379对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其可能机制。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组与HAMI3379组，每组10只。模型组大鼠采用大脑中动脉阻断术(MCAO)构建脑缺血损伤模型，HAMI3379组在MCAO术前和术后30 min腹腔注射HAMI3379(0.2 mg/kg)。对脑缺血损伤后的大鼠行神经症状评分，TTC染色法观察大鼠脑梗死体积，免疫荧光染色法检测小胶质细胞活化标志物Iba1,Real-time PCR检测小胶质细胞M1/M2极化表型分子mRNA水平的变化，NeuN染色法观察神经元数量，Fluoro-Jade B染色法观察神经元变性情况，Western-blotting检测脑组织中CysLT₂蛋白和核因子κB相关蛋白Cα(PKCα)、NF-κB抑制蛋白(IκBα)、p65和p50蛋白的表达变化。结果 与假手术组比较，模型组大鼠神经症状评分、脑梗死体积均明显增高(P<0.05)；与模型组比较，HAMI3379组大鼠的神经症状评分、脑梗死体积明显降低或缩...     

小檗碱对DRG中PDN相关因子影响

目的探讨小檗碱对糖尿病并发症痛性糖尿病神经病变(PDN)发生过程中背根神经节(DRG)中PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、n NOS表达的影响。方法采用高糖及加入小檗碱处理原代培养的DRG神经元,Western blot及Real-time PCR法检测DRG中PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、n NOS的mRNA及蛋白表达水平。结果高糖培养组中PPARβ、TRPV4的蛋白和mRNA表达高于对照组(P<0.05),加入小檗碱后,mRNA水平下降;PAR-2、P2X3、n NOS mRNA表达低于对照组(P<0.05),加入小檗碱后,mRNA水平上升;PPARβ、PAR-2、PAR-2、P2X3、n NOS蛋白表达水平升高(P<0.05),加入小檗碱后,蛋白表达水平降低。结论小檗碱能使高糖引起的DRG的PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、n NOS的蛋白和mRNA水平的改变趋向恢复至正常,有助于维持神经元正常功能。     

运动预处理影响线粒体形态变化以及相关因子表达干预力竭运动后大鼠额叶细胞凋亡

目的:从线粒体形态结构变化以及检测相关调控因子的表达,探讨运动预处理干预力竭运动后大鼠额叶损伤的可能机制。方法:36只雄性SD大鼠随机分为对照组(C组,n=12)、力竭运动组(EE组,n=12)、运动预处理组(EP组,n=12)。EP组进行持续4周的无负重60 min/day游泳训练后,EE组和EP组进行无负重一次性力竭游泳运动。运动结束后24 h,采用灌注取材和直接断头取材。用HE染色和透射电镜观察额叶神经元及神经元线粒体的形态结构;用TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI),分析各组大鼠额叶神经元凋亡情况;用Real-Time PCR和Western blotting检测线粒体分裂和融合相关因子——Drp1和Mfn2m RNA和蛋白表达水平。结果:一次性力竭运动引起了大鼠额叶神经元及神经元线粒体形态结构的异常。TUNEL法检测发现EE组大鼠大脑额叶神经元AI较EP组显著增加(P<0.05)。一次性力竭运动引起了Drp1和Mfn2 m RNA转录和蛋白的高表达,其中,EP组大鼠大脑额叶Mfn2表达强度较EE组显著升高(P<0.05),EP组大鼠大脑额叶Drp1表达强度较EE组显著下降(P<0.05)。结论:Drp1的表达水平与力竭运动后额叶细胞凋亡程度密切相关,而Mfn2的表达增加能够减轻力竭运动引起的脑细胞凋亡水平。4周的游泳训练运动预处理,能够相对减少Drp1表达而上调Mfn2基因表达,影响大鼠额叶线粒体的形态结构变化,增强脑对运动性缺血缺氧的耐受力,减轻一次性力竭运动造成的大鼠额叶缺血缺氧性损伤。     

老年女性膝骨关节炎患者膝屈伸等速肌力及其与BMI的相关性研究

目的:探讨膝骨关节炎患者(KOA)膝关节屈伸等速肌力特点及其与BMI之间的相关性。方法:利用等动肌力测试系统测试47名老年女性(KOA组25名、对照组22名)的膝关节肌力。另外,通过计算两组受试者的BMI,考察该指标与膝关节屈伸肌力之间的相关性。结果:KOA组膝关节伸展绝对峰力矩显著小于对照组(P<0.05),屈伸相对峰力矩均显著小于对照组(P<0.05),而KOA组的相对峰力矩屈伸比显著大于对照组(P<0.05)。两组受试者BMI与膝关节屈伸相对峰力矩呈显著负相关(P<0.01)。结论:膝骨关节炎可降低老年女性膝关节伸肌肌力和屈肌肌力,且对伸肌肌力的影响更甚。并且可显著影响膝关节的稳定性。无论有无膝骨关节炎,随着BMI的增加,老年女性膝关节肌力均下降,且膝骨关节炎患者下降更加明显。     

Ascl2表达抑制对结肠癌细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨肿瘤干性因子Ascl2对结肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 将Ascl2的shRNA干扰质粒转染至结肠癌HT-29和LS174T细胞,采用G418筛选建立稳定转染的细胞系,MTT及平板克隆形成实验观察Ascl2干扰对细胞增殖和克隆形成能力的影响,Real-time PCR和Western blotting检测Ascl2干扰对EMT相关蛋白E-钙黏蛋白和波形蛋白表达的影响.结果 MTT检测发现,转染Ascl2干扰质粒后72h和96h,HT-29和LS174T细胞的增殖速率明显降低(P＜0.05);平板克隆形成实验结果显示,干扰后的HT-29和LS174T细胞克隆形成数明显少于未转染及转染对照质粒的HT-29和LS174T细胞(P＜0.05).Real-time PCR和Western blotting检测发现,干扰后的HT-29和LS174T细胞E-钙黏蛋白mRNA和蛋白表达水平上调(P＜0.05),波形蛋白的mRNA和蛋白表达水平下调(p＜0.05).结论 Ascl2 RNA干扰可导致结肠癌HT-29和LS174T细胞增殖能力下降及EMT逆转.     

石杉碱甲对急性低压低氧模型大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨石杉碱甲对急性低压、低氧模型大鼠空间学习与记忆能力的改善作用及其海马神经元细胞凋亡的缓解作用.方法 48只SD大鼠随机分为4组(n=12):平原组(对照组)、平原给药组、高海拔组(模拟6000m海拔)、高海拔给药组.各给药组在模拟低压、低氧实验前1d,按0.1mg/kg剂量给予石杉碱甲(配制成10mg/ml混悬液)灌胃给药.比较各组大鼠Morris水迷宫学习与记忆测试成绩.采用TUNEL法检测海马神经元细胞凋亡情况,Western blotting检测海马神经元细胞凋亡因子Bax及抗凋亡因子Bcl-2的表达.结果 与高海拔组比较,高海拔给药组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05),60s内穿越平台次数增多(P＜0.05),目标象限滞留时间延长(P＜0.05),海马CA1区神经元凋亡数量减少(P＜0.05),海马组织中促凋亡因子Bax表达降低(P＜0.05),抗凋亡因子Bcl-2表达增加(P＜0.05).高海拔给药组与平原对照组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 石杉碱甲对急性低压、低氧导致的大鼠大脑海马神经元凋亡具有缓解作用,可改善模型大鼠的空间学习与记忆能力.     

透明质酸钠配合微针刀及手法拉伸治疗膝骨关节炎疗效观察

目的探讨透明质酸钠配合微针刀及手法拉伸治疗膝骨关节炎(KOA)的方法和临床疗效。方法选取自2014年9月至2015年9月沈阳军区总医院中医软伤科收治的KOA患者156例,按随机数字表分法分为观察组(52例)、对照A组(52例)及对照B组(52例)。观察组患者采用透明质酸钠配合微针刀和手法拉伸,对照A组采用透明质酸钠配合微针刀治疗,对照B组采用透明质酸钠配合手法拉伸治疗,比较3组患者1个疗程后的临床疗效。结果观察组治疗有效率为96.2%,对照A组有效率为80.8%,对照B组有效率为73.1%,对照A组及B组与观察组临床治疗有效率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论透明质酸钠配合微针刀和手法拉伸可以通过改善关节腔内外环境、消除局部应力、恢复细胞通路和局部生物平衡促进关节腔吸收透明质酸钠,是临床治疗KOA的有效方法。     

siRNA真核表达载体对大鼠耳蜗前体细胞Notch3基因表达的影响

目的 构建Notch3基因的siRNA真核表达载体,探讨其对大鼠耳蜗前体细胞中Notch3基因表达的影响.方法 机械分离并胰酶消化新生大鼠耳蜗感觉上皮,悬浮培养基培养耳蜗前体细胞.根据Notch3基因序列设计并合成2对siRNA,插入pSilencer4.1-CMV neo载体,进行酶切及测序鉴定.采用脂质体法向大鼠耳蜗前体细胞转染重组质粒,采用Real time-PCR和Western blotting法检测重组质粒对Notch3基因的干扰效果.结果 经前体细胞标记物Abcg2染色鉴定证实原代培养的细胞球为耳蜗前体细胞.酶切及测序鉴定证实成功构建了siRNA真核表达载体pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2. Real-time PCR和Western blotting检测结果显示所构建的Notch3基因真核表达载体成功地干扰了目的基因的表达.与空白对照组比较,转染pSilencer-Notch3-S1和pSilencer-Notch3-S2的细胞Notch 3 mRNA和蛋白表达量均有明显减少,而转染空质粒的细胞与空白对照组比较无显著差异.结论 成功构建了大鼠Notch3基因的RNAi真核表达载体,该载体在大鼠耳蜗前体细胞中对Notch3基因的表达可发挥抑制作用.     

miR-34a调控HEK293细胞自噬作用的初步研究

目的探讨miR-34a对HEK293细胞自噬作用的影响。方法采用miR-34a模拟物(模拟物组)和miR-34a抑制剂(抑制剂组)分别转染HEK293细胞,并设空白对照(对照组)。采用定量PCR检测miR-34a、p53基因表达的变化,Western blotting检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ及p53表达的变化,并采用生物信息学方法分析miR-34a对自噬相关基因(Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等)的可能作用。结果定量PCR结果显示,模拟物组miR-34a表达显著上调(P<0.05),抑制剂组miR-34a表达显著下调(P<0.05)。与对照组相比,miR-34a模拟物可显著抑制HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05),而miR-34a抑制剂则显著上调HEK293细胞LC3Ⅱ蛋白的表达(P<0.05)。定量PCR和Western blotting结果显示,各组p53mRNA及蛋白表达无统计学差异。生物信息学分析显示,Atg6/beclin1、sestrin2、FoxO3等自噬相关基因是miR-34a潜在的靶基因。结论miR-34a能抑制HEK293的自噬作用,可能是通过直接抑制...     

低氧诱导因子-1α与马桑内酯点燃SD大鼠难治性颞叶癫痫耐药模型耐药性的相关性研究

目的 探讨难治性颞叶癫痫中低氧诱导因子-1α (HIF-1α)在不同脑区表达水平的变化及其与耐药蛋白MDR1/Pgp表达的关系.方法 以SD大鼠作为研究对象,设置点燃组和对照组.点燃组处理方法:以马桑内酯(CL)0.4ml/kg肌注,1次/72h,在给药1～5次期间判定点燃模型是否构建成功,选择符合标准的大鼠继续给药,1次/6d,共30次;最后点燃组共存留7只大鼠.对照组5只大鼠,在同时间点给予0.4ml/kg生理盐水肌注.取大鼠脑组织标本,制备后采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)、免疫组织化学(IIHC)和Western blotting三种方法分别检测HIF-1 α、MDR1/Pgp在脑组织中的表达情况.结果 IHC显示,HIF-1α在点燃组主要表达于大鼠海马、颞叶皮质等部位的神经元和神经胶质细胞,在对照组仅见微弱表达.Pgp的分布及表达情况与HIF-1 α一致.RO-PCR显示,点燃组HIF-1αmRNA在海马中的表达为对照组的1.741倍,在颞叶中的表达是对照组的1.395倍.Pgp mRNA在海马及颞叶的表达分别为对照组的2.297倍和1.474倍.Western blotting显示,点燃组海马HIF-1 α蛋白表达(1.284±0.166)较对照组(0.763±0.117)明显增高(p＜0.05),且点燃组颞叶皮质中HIF-1α蛋白(1.350±0.105)亦较对照组(0.941±0.078)明显增高(P＜0.05).Pgp的表达与HIF-1α表达呈一致变化,即点燃组海马和颞叶中Pgp的表达(0.831±0.086,0.919±0.129)较对照组(0.441±0.053,0.643±0.095)明显增高(P＜0.05).另外,点燃组Pgp蛋白和mRNA在海马中的表达较颞叶高(P＜0.05).结论 HIF-1α在大鼠颞叶癫痫耐药模型的海马和颞叶皮质中的表达较正常大鼠高,且与Pgp表达的空间分布一致.HIF-1 α与PgP表达的相关性提示HIF-1 α可能与难治性颢叶癫痫的耐药性相关.     

基于Toll样受体信号通路威灵仙总皂苷对类风湿关节炎大鼠踝关节病理学改变影响

目的 基于Toll样受体信号通路探讨威灵仙总皂苷(TSC)对类风湿性关节炎(RA)大鼠踝关节病理学改变的影响。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、RA模型组、阳性药物对照组以及TSC低、中、高剂量组,每组各10只。除空白对照组外,其余5组大鼠均采用足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制RA模型,建模成功后,TSC低、中、高剂量组分别给予50、100、200 mg/kg/d TSC灌胃,阳性药物对照组给予甲氨蝶呤0.051 mg/ml灌胃,空白对照组及RA模型组均给予等体积生理盐水灌胃。灌胃15 d后,观察各组大鼠踝关节滑膜、关节腔、软骨及周围软组织病理变化情况。采集大鼠腹主动脉血,酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子水平;Western blot法定量分析各组大鼠关节滑膜组织内Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白(MyD88)、激活核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达量及NF-κB p65磷酸化(p-NF-κB p65)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠关节滑...     

慢病毒介导的Ⅰ型胶原shRNA在大鼠系膜细胞中的表达

目的探讨慢病毒介导的Ⅰ型胶原(ColⅠ)短发夹RNA(shRNA)在大鼠系膜细胞的表达情况。方法利用三质粒合成法将表达质粒合成慢病毒表达载体,分别用感染增强剂(对照组)、空慢病毒载体(pSC-GFP组)和慢病毒表达载体(pSC-GFP/ColⅠ组)感染大鼠系膜细胞。采用流式细胞仪检测各组大鼠系膜细胞的转染效率,并采用RT-PCR和Western blotting方法检测各组ColⅠmRNA及ColⅠ蛋白表达情况。结果pSC-GFP和pSC-GFP/ColⅠ均能高效感染大鼠系膜细胞,其中pSC-GFP感染效率为72.42%,pSC-GFP/ColⅠ感染效率高达75.42%。RT-PCR检测提示pSC-GFP/ColⅠ组细胞ColⅠmRNA表达量较对照组、pSC-GFP组显著降低(P<0.05),其抑制效率为32.64%±0.12%,而后两组ColⅠmRNA表达差异无统计学意义。Western blotting检测显示,与对照组、pSC-GFP组比较,pSC-GFP/ColⅠ组蛋白表达明显降低(P<0.05),而对照组与pSC-GFP组之间ColⅠ蛋白表达差异无统计学意义。结论慢病毒载体能稳定、高效地将ColⅠs...     

白藜芦醇抑制膀胱癌细胞生长增殖及影响miR-34a表达的研究

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对人膀胱癌细胞T24生长增殖的影响,初步探讨miR-34a在Res影响T24细胞中的作用。方法不同浓度Res分别作用T24细胞24 h,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测p53蛋白水平,实时定量PCR(Real-time PCR)检测T24细胞miR-34a的基因表达。结果 Res剂量依赖性地抑制T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,明显增加p53的蛋白表达。此外,Res处理后T24细胞中miR-34a的基因表达亦显著升高。结论 Res能够有效抑制膀胱癌细胞生长增殖,可能与诱导细胞凋亡、上调miR-34a及p53表达有关。     

Twist过表达在人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的探讨twist在人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化中的作用。方法取HPMCs细胞,分别用50mmol/L右旋葡萄糖(高糖组)和5.6mmol/L右旋葡萄糖(对照组)刺激48h,采用Western blotting检测twist、E-钙黏素(E-cadherin)、成纤维细胞特异性蛋白1(Fsp1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。另采用质粒pcDNA3.1-twist(pcDNA3.1-twist组)和空载体pcDNA3.1(空载体组)分别转染常规培养的HPMCs,使HPMCs过表达twist后,采用qRT-PCR、Western blotting方法检测twist、E-cadherin、Fsp1和α-SMA mRNA及蛋白的表达情况。再采用质粒twist小干扰RNA(阳性转染组)和空载体pcDNA3.1(空载体组)分别转染50mmol/LD-葡萄糖培养48h后的HPMCs细胞,另选择未转染质粒的细胞作为亲本细胞组,采用Western blotting检测twist下调后,E-cadher-in、Fsp1、α-SMA蛋白水平的表达情况。结果与对照组相比,高糖组twist、Fsp1和α-SMA蛋白表达明显增加,E-cadherin表达减弱(P<0.05)。与空载体组相比,HPMCs过表达twist后,pcDNA3.1-twist组E-cadherin mRNA及蛋白表达减弱,Fsp1和α-SMA mRNA及蛋白表达增强(P<0.05)。用小干扰RNA使twist沉默后,与亲本细胞组及空载体相比,E-cadherin蛋白表达增加,Fsp1和α-SMA蛋白表达减弱(P<0.05)。结论 Twist过表达促进了HPMCs的转分化。     

MTX联合复方风湿宁对RA滑膜成纤维细胞IL-22的影响

目的观察甲氨蝶呤(MTX)和风湿宁对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞IL-22水平的影响,为其治疗机制的研究提供新靶点。方法分离、纯化、培养类风湿性关节炎患者滑膜组织成纤维样滑膜细胞,并分别加入MTX(MTX组)、复方风湿宁(复方风湿宁组)、MTX联合复方风湿宁(联合组)进行共培养,MTT法检测MTX和复方风湿宁对滑膜成纤维细胞增殖的影响;用RT-PCR方法检测各组滑膜成纤维细胞IL-22及凋亡相关基因caspase-3和caspase-9的mRNA表达。结果联合组的细胞增殖抑制率和caspase-3、caspase-9 mRNA表达水平明显高于其他两组(P<0.05),IL-22 mRNA表达水平明显低于其他两组(P<0.05),但MTX组和复方风湿宁组之间各项指标无显著差异(P>0.05)。结论 MTX和复方风湿宁均可降低类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞IL-22水平,抑制细胞增殖反应,且联合应用可发挥协同效果,增强疗效。