降钙素基因相关肽减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质tau磷酸化

目的:探讨外源性降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide,CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western Blotting和图像分析方法检测大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达、以及CGRP对缺血神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。结果:缺血再灌注顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白显著升高(P<0.05);CGRP组大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平显著低于缺血再灌注组,总tau也降低(P<0.05)。结论:CGRP明显减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质tau蛋白磷酸化程度,降低tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注致大鼠大脑皮质tau蛋白异常高度磷酸化

目的 探讨局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质神经元tau蛋白磷酸化的变化,及其与神经细胞凋亡的关系,以阐明脑梗死和阿尔茨海默病间的关系.方法 制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫印迹法检测局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质tau蛋白在Serl99/202、Ser396、Ser404和Tyr231位点磷酸化和不溶性磷酸化tau蛋白的变化;TUNEL法和免疫荧光双标法检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和磷酸化tau蛋白的关系.结果 缺血再灌注6 h后顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202、Ser396、Ser404和Tyr231位点发生异常高度磷酸化,不溶性磷酸化tau蛋白显著增加.脑缺血再灌注后3 d神经细胞的凋亡和tau蛋白高度磷酸化呈显著正相关关系.结论 脑缺血再灌注后发生阿尔茨海默病样病理变化,脑梗死可能促进了阿尔茨海默病的发生、发展.     

降纤酶对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的:观察降纤酶对大鼠脑缺血再灌注后脑细胞凋亡的影响。方法:96只雄性SD大鼠,随机分为降纤酶治疗1,2组和对照组1,2组,制造大鼠脑中动脉栓塞模型,降纤酶治疗1,2组于缺血3h经腹腔注射降纤酶治疗,对照1,2组在相同时间点给予等量生理盐水。降纤酶治疗和对照1组利用流式细胞仪检测缺血3h再灌注3h、6h、24h、72h后脑组织中凋亡细胞百分率。降纤酶治疗和对照2组利用Tunel方法检测神经元凋亡数目及利用免疫组化方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:降纤酶治疗和对照1组凋亡细胞率、降纤酶治疗和对照2组凋亡细胞数均随再灌注时间延长而渐增多,于24h达高峰,以后逐渐减少,2组6h、24h和72h差异均有统计学意义(P<0.05)。降纤酶治疗和对照2组bcl-2蛋白表达于24h明显减低,bax蛋白表达于24h升至最高,Bcl-2和Bax蛋白表达时相与神经细胞凋亡高峰基本一致,降纤酶治疗2组24hBcl-2和Bax蛋白表达较对照2组明显减少(P<0.05)。结论:降纤酶有降低大鼠脑缺血再灌注后脑细胞凋亡的作用,对脑组织有保护作用。     

雌二醇对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经生长因子蛋白表达的影响

目的：观察雌二醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经生长因子（NGF）蛋白表达的影响,探讨雌激素在脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用机制。方法：72只Wistar大鼠随机分为假手术组（n=8）、手术对照组（n=32）、雌二醇治疗组（n=32）,后2组又分为3、6、12、24h4个时点。手术对照组和雌二醇治疗组采用线栓法制作脑缺血再灌注损伤模型,假手术组仅分离血管,不插尼龙线。制作模型前,雌二醇治疗组腹腔注射17-β雌二醇7d,其余2组腹腔注射等量花生油7d。缺血2h分别再灌注3、6、12、24h后断头取脑,应用连续切片免疫组织化学方法检测脑组织中NGF蛋白的表达情况。结果：缺血2h再灌注6h及12h后,手术对照组脑组织NGF阳性细胞百分率较假手术组升高（P均〈0.05）;再灌注6、12、24h后雌二醇治疗组NGF阳性细胞百分率均高于假手术组（P均〈0.05）,且12、24h时亦高于手术对照组（P均〈0.05）。结论：雌二醇可以使脑缺血再灌注损伤后NGF表达增加,从而起脑保护作用。     

针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的:揭示针刺对脑缺血再灌注大鼠模型细胞凋亡的影响.方法:本实验以线栓法阻断一侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血再灌注的动物模型,从缺血区脑细胞凋亡的变化以及针刺的干预作用等方面进行系列动态研究.结果:与假手术组、针刺治疗组相比,对照组大鼠脑梗死体积、神经元缺失明显(P＜0.01).对照组、针刺治疗组大鼠大脑皮层均存在神经元凋亡,但针刺治疗组与对照组相比,脑梗死体积明显缩小(P＜0.01),阳性神经元数目明显减少(P＜0.01).结论:针刺"百会"、"风府"及"曲池"、"足三里"可以促进受伤神经元的恢复,有较好的抗脑缺血再灌注后神经元凋亡的作用.     

人参皂苷Rg1对冈田酸所致大鼠脑片tau蛋白磷酸化的影响

目的：观察人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病（Alzhei mer＇s disease,AD）样tau蛋白磷酸化大鼠脑片模型中磷酸化tau蛋白（phosphorylatedtau protein,P-tau）、蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）及tau蛋白表达的影响,以研究其对tau蛋白磷酸化的抑制作用机制。方法：将5周龄雄性Wistar大鼠脑片（含皮层和海马）随机分为空白对照组、模型组和低、中、高浓度人参皂苷Rg1组,每组10张脑片。脑片置于人工脑脊液中培养。人参皂苷Rg1组培养液中首先加入人参皂苷Rg1使其浓度分别为60、120和240μmol/L,作用2h。模型组和3个浓度人参皂苷Rg1组培养液中分别加入冈田酸（okadaic acid,OA）,使其浓度分别为1μmol/L,作用3h,空白对照组不加任何处理。采用免疫组织化学染色、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-tau、PP2A和tau蛋白的表达水平。结果：与空白对照组比较,模型组P-tau蛋白的表达增加（P〈0.01）,PP2A和tau蛋白的表达水平降低（P〈0.01,P〈0.05）;3个浓度人参皂苷Rg1组与模型组比较,P-tau蛋白的表达减少（P〈0.01）,PP2A和tau蛋白的表达增加（P〈0.01,P〈0.05）,其中以高浓度人参皂苷Rg1效果最佳。结论：人参皂苷Rg1可以上调AD样tau蛋白磷酸化大鼠脑片模型中PP2A的表达从而促进P-tau的去磷酸化,以此途径抑制tau蛋白磷酸化。     

电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层神经生长因子表达的影响

探讨针刺对缺血性脑损伤的保护作用。【方法】SD大鼠36只,随机分为假手术组、缺血模型组和电针组, 每组又分为2周和5周两个时间段组;除假手术组外,其他组均采用热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型,采用免疫组化法观察缺血2周和5周后缺血区皮层神经生长因子(NGF)的变化规律以及针刺对其影响。【结果】两个假手术组大鼠手术侧皮层只见到很少的NGF免疫阳性细胞;两个缺血组大鼠脑缺血区皮层NGF免疫活性细胞的表达与假手术组比较显著增多(P<0．01),缺血5周组与缺血2周组相比缺血区皮层NGF阳性细胞的数量下降(P<0．01);电针组在2周时缺血区皮层NGF免疫阳性细胞的表达增高,与缺血2周组、假手术2周组相比差异具有显著性意义(P<0．01);电针5周组大鼠脑缺血区皮层NGF免疫阳性细胞表达虽呈下降趋势,但仍高于同时间段的缺血组大鼠(P<0．01)。【结论】电针可以增加大鼠脑缺血区皮层NGF的分泌和表达时程,这可能是其保护缺血性脑损伤的机制之一。     

Aβ杏仁核注射对大鼠异常磷酸化tau蛋白表达的影响

目的：观察AD对异常磷酸化tau蛋白表达的影响。方法：本研究采用Aβ5～35片段单侧杏仁核注射，建立SD大鼠痴呆及记忆障碍动物模型。通过Morris水迷宫试验、放射免疫法、免疫组化法等观测大鼠空间学习记忆能力、胆碱能系统、tau蛋白异常磷酸化的改变。结果：模型大鼠的空间学习记忆能力明显障碍；ChAT活性及M受体Rt值均显著降低；海马及额皮层异常磷酸化tau蛋白AT8表达显著增高。结论：Aβ杏仁核单侧注射可诱导大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统功能损害，同时伴有皮层、海马部位tau蛋白的异常磷酸化。AB是AD发生、发展的关键因素。     

针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的研究针刺对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响。方法建立大鼠中动脉阻塞再灌注模型（MCAO）,应用TUNEL法观察神经元凋亡,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白表达。结果脑缺血再灌注后应用针刺疗法能够降低大鼠神经细胞受损后出珊的Caspase-3蛋白表达,并能减轻神经细胞凋亡。结论针刺疗法能通过有效的抑制脑缺血再灌注后大鼠神经细胞的凋亡起到脑保护作用。     

神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注小脑神经细胞凋亡的影响

目的 观察神经生长因子(NGF)对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡的影响。方法 采用闭塞大鼠四动脉建立全脑缺血模型，应用光镜、电镜及末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL染色法)观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血30min再灌注7d小脑皮层神经细胞凋亡的情况。结果 模型组小脑皮层神经细胞有明显形态学损伤，蒲肯野细胞凋亡明显。NGF组(1000u／kg，2000u／kg)神经细胞结构损伤明显减轻，凋亡细胞明显减少。结论 NGF对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡有明显抑制作用。     

全脑缺血再灌注后大鼠耳蜗组织内巢蛋白与神经生长因子的表达

目的:观察大鼠全脑缺血再灌注后耳蜗组织细胞巢蛋白(neuroepithelial stem protein, nestin)与神经生长因子(NGF)的表达.方法:66只健康SD大鼠随机分成正常组、假手术组、脑缺血再灌注组.采用四动脉闭塞法制作大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,在脑缺血30 min再灌注后设置6h、1 d、3 ...     

局部脑缺血再灌注大鼠下丘脑CRH和NGF的动态表达

［摘 要］ 目的：探讨局部脑缺血对大鼠下丘脑的促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和神经生长因子(NGF)以及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的影响。方法：选用正常老龄Wistar大鼠32只,雌雄各半,随机分组,每组4只大鼠。分假手术组和实验组,实验组分为缺血15 min组、缺血15 min再灌注1 h、6 h、1 d、2 d、4 d、9 d组。采用免疫组化方法对老龄大鼠局部脑缺血下丘脑的CRH和NGF表达进行动态观察。结果：假手术组下丘脑有少量CRH和NGF表达,实验组在缺血再灌注1 h内下丘脑CRH和NGF表达均无变化,此后缺血再灌注6 h下丘脑CRH和NGF均有短暂一过性消失,随后缺血再灌注2 d二者在下丘脑的表达相继明显增加。结论：脑缺血后下丘脑CRH分泌细胞并非立刻进入活动增强状态;脑缺血后下丘脑后续阶段存在CRH分泌细胞的活动增强效应;NGF对维系HPA的活动可能具有重要作用。     

DSL对复灌性局部脑缺血大鼠脑电活动的影响

研究目的探讨蝙蝠葛苏林碱(DSL)对局部脑缺血-再灌注损伤的治疗作用。研究背景已确证某些钙通道阻断剂(如尼莫地平)有抗脑缺血作用。DSL是新近证明的、能选择性作用于神经细胞的钙通道阻断剂,它对脑缺血的影响尚未见研究报道。研究方法 40只wistar雄性大鼠随机分为5组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是低、中、高3个不同剂量DSL的实验组;Ⅳ为阴性对照组;Ⅴ为尼莫地干阳性对照组。用尼龙线经颈内动脉可逆性插入到大脑前动脉内,建立大鼠局部脑缺血再灌注模型。脑电图在双侧顶区记录。研究结果 MCA阻断后,缺血侧的EEG波幅降低,甚至成电平线,然后逐渐恢复,1小时后可恢复到50％以上。复通后1小时Ⅱ、Ⅲ及Ⅴ组的EEG波幅有明显增高,与阴性对照的Ⅳ组差异显著(P<0.05),且这3组动物的生存时间也明显延长。结论 DSL对局部脑缺血-再灌注损伤有一定的保护作用。     

经鼻给予NGF对大鼠局灶性脑缺血后脑内巢蛋白的表达

【目的】探讨经鼻给予神经生长因子治疗大鼠脑梗塞后脑内巢蛋白的表达。【方法】选用SD大鼠72只,随机分为3组：模型组（n=24）、对照组（n=24）和治疗组（n=24）,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,对照组经鼻给予等量生理盐水,治疗组于脑缺血后2h经鼻给予神经生长因子,每组又根据处死时间不同分为3、7、14、21d组,用Longa等评定方法检测大鼠行为、免疫组化方法检测脑内海马区巢蛋白的表达。【结果】神经功能评分在各时问点治疗组与模型组、对照组比较差异有统计学意义;大鼠脑缺血后各组问不同时相均有巢蛋向阳性细胞数,治疗组7d阳性细胞数量显著增加。【结论】经鼻给予神经生长因子可有效促进脑缺血后脑内巢蛋白的表达,有助于大鼠神经功能恢复。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中Caspase-3蛋白的表达

目的：观察局灶性脑缺血再灌注（FCIR）大鼠大脑皮质Caspase-3的表达。方法：雄性SD大鼠42只，分为假手术组和缺血再灌注（IR）组，IR组又分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h组，每组6只。IR组采用线栓法建立FCIR模型，假手术组仅插线1cm；于脑视交叉平面向后7～11mm处取脑组织。HE染色观察各个时间点细胞形态学变化，免疫组织化学SP法观察不同时间Caspase-3的表达，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：脑缺血2h再灌注6hCaspase-3表达升高，再灌注24h达到高峰，再灌注72h开始下降。凋亡细胞数的变化与Caspase-3表达变化一致。结论：Caspase-3参与了脑缺血再灌注神经元的死亡过程，该作用可能与细胞凋亡有关。     

急性局部脑缺血─再灌注对大鼠外周血糖的影响

目的观察急性脑缺血性大鼠外用血糖的变化,了解血糖与脑水肿之间的关系。方法动物被分为三个组。即对照组、假手术组和实验组。对实验阻断大脑中动脉30分钟后分别灌注30、60和120min。实验结束后各动物断头取血,在48小时内作血糖规定并作脑组织水含量的规定。结果动物脑缺血性损伤后血糖含量较对照组和假手术组有明显区别,且脑水肿的程度与血糖之间有一定关系。结论脑缺血后可人成精代谢的紊乱。在临床上,对脑缺血性损伤的病人要考虑糖代谢紊乱的可能,慎用升高血糖的药物,防治诱发或加重缺血后的脑水肿。     

脑低灌注触发脑内tau过度磷酸化和胆碱能神经损害

目的 探讨脑低灌注对脑内tau蛋白的过度磷酸化和胆碱能指标变化的影响.方法 40只SD大鼠随机分为低灌注组和假手术组,永久性阻断双侧颈总动脉制作脑低灌注模型;应用Y迷宫检测大鼠学习记忆能力,用免疫组化法检测大脑皮质和海马组织色氨酸404位点tau蛋白过度磷酸化(Pser404-Tau)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达,用考马斯亮蓝法检测海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)活性.结果 脑低灌注术后14 d和21 d,大鼠学习记忆能力明显减退,与假手术组相比差异有统计学意义(P＜0.01);大脑皮质和海马组织Pser404-Tau阳性细胞数较假手术组明显增加(P＜0.01);大脑皮质和海马组织ChAT阳性细胞计数较假手术组明显减少(P＜0.01);海马组织AChE活性较假手术组明显降低(P＜0.01).结论 脑低灌注后出现认知功能障碍,可能与脑缺血导致脑内tau蛋白过度磷酸化、损害胆碱能神经功能有关.     

急性局部脑缺血─再灌注对大鼠外周血糖的影响

目的观察急性脑缺血性大鼠外用血糖的变化，了解血糖与脑水肿之间的关系。方法动物被分为三个组。即对照组、假手术组和实验组。对实验阻断大脑中动脉30分钟后分别灌注30、60和120min。实验结束后各动物断头取血，在48小时内作血糖规定并作脑组织水含量的规定。结果动物脑缺血性损伤后血糖含量较对照组和假手术组有明显区别，且脑水肿的程度与血糖之间有一定关系。结论脑缺血后可人成精代谢的紊乱。在临床上，对脑缺血性损伤的病人要考虑糖代谢紊乱的可能，慎用升高血糖的药物，防治诱发或加重缺血后的脑水肿。     

甲状腺激素T3对大鼠脑缺血再灌注损伤后NGF和BDNF表达的影响研究

目的 探讨甲状腺激素T3对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制.方法 雄性SD大鼠分为假手术+生理盐水组、假手术+T3组、大脑中动脉栓塞(MCAO)+生理盐水组、MCAO+T3组.应用MCAO法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,分别于缺血后1 h及再灌注后6 h给予腹腔注射甲状腺激素10 μg/100 g,生理盐水为安慰剂.再灌注24 h后,观察不同组别大鼠神经功能损伤情况,梗死体积变化,以及缺血侧脑皮质中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的mRNA及蛋白表达水平变化.结果 与MCAO+生理盐水组比较,MCAO+T3组大鼠神经功能缺损表现减轻,脑梗死体积减小,NGF、BDNF的mRNA和蛋白表达上升(P<0.05).结论 甲状腺激素对大鼠脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制与增加脑缺血再灌注损伤中NGF、BDNF的表达相关.