利用噬菌体裂解法快速检测结核分支杆菌

目的　研究噬菌体裂解法在结核分支杆菌快速检测及鉴定中的价值。方法　应用噬菌体裂解法和涂片法、L -J培养法检测 2 70份临床确认的肺结核患者的痰标本以及 3株结核分支杆菌标准株、1 4株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌。结果　 3株结核分支杆菌标准株噬菌体裂解试验均为阳性 ,而 1 4株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌均为阴性。 81份L -J培养阳性和 1 89份L -J培养阴性的痰标本中 ,噬菌体裂解试验分别有 77份(95 1 % )、1 7份 (9 0 % )阳性 (P >0 0 5 )。涂片检查阳性仅 70份 (2 5 9% ) ,阴性 2 0 0份 (74 1 % ) ,而应用噬菌体裂解实验可以检测出 94份 (34 8% )阳性 ,其中有 2 5份为涂片阴性的标本 (P <0 0 5 )。结论　噬菌体裂解法可以简便、快速地检测结核分支杆菌 ,全程只需 2d ,并且具有较高的敏感性和特异性     

噬菌体生物扩增法与涂片法在快速检测结核分支杆菌的应用比较

目的研究噬菌体生物扩增法与涂片法对结核诊断价值的比较。方法对52份临床诊断为结核(包括肺结核、结核性胸膜炎、结核性腹膜炎、结核性脑膜炎)的患者的痰标本、胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液等标本以及COPD急性发作、肺癌、急性支气管炎患者的痰液16例同时进行噬菌体生物扩增法与涂片法检测。结果52份结核标本,有29份标本通过噬菌体生物扩增法检测结果为阳性,阳性率56%(29/52),显著高于涂片法染色的阳性率23%(12/52),(P<0.05),其中12例涂片法阳性的标本均为痰标本,而胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液等标本涂片法检测则均为阴性。噬菌体生物扩增法法对涂片阴性的标本的检出率高达48%(19/40)。16例非结核患者的痰液无一例为阳性。结论噬菌体生物扩增法与传统的涂片法相比,具有较高的特异性和敏感性,是一种值得推广和很有前景的结核分支杆菌快速快速检测方法。     

噬菌体裂解法与BACTEC-460法检测结核分支杆菌的应用比较

目的 :比较研究噬菌体裂解法与BACTEC - 46 0法在结核分支杆菌快速检测及鉴定中的价值。方法 :应用噬菌体裂解法和BACTEC - 46 0法检测 3株结核分支杆菌标准株、13株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌以及 2 70份临床确认的肺结核患者的痰标本。结果 :噬菌体裂解试验 3株结核分支杆菌标准株均为阳性 ,而 13株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌均为阴性 ;BACTEC - 46 0法 3株结核分支杆菌和 13株非结核分支杆菌均可生长 ;2 70份肺结核患者的痰标本应用噬菌体裂解法和BACTEC - 46 0法进行检测两者的阳性率相近 ,分别为 4 4.4 % (12 0 / 2 70 )和 4 6 .7% (12 6 / 2 70 ) ,二者差异无显著性 (p >0 .0 5 )。噬菌体裂解法检测的报告时间为 2d ;BACTEC - 46 0培养的阳性报告时间 2～2 7d、平均为 8.7d ,阴性报告时间为 4 2d。结论 :噬菌体裂解法与BACTEC - 46 0法相比 ,可以简便、快速地检测结核分支杆菌 ,全程只需 2d ,并且具有较高的敏感性和特异性 ,是一种崭新的结核分支杆菌快速检测方法。     

预培养时间对结核分支杆菌噬菌体试验结果的影响

目的:探讨研究预培养环节对分支杆菌噬菌体生物扩增法试验结果的影响。方法:对166例临床诊断为肺结核患者的标本,经液化处理后均进行过夜组(预培养24h)及不过夜组(室温放置6h后)分支杆菌噬菌体生物扩增试验,试验方法按结核分支杆菌噬菌体裂解试剂盒(FAST PlaqueTBTM)操作手册操作,对照分析二者的阳性率和污染率。结果:166例肺结核患者标本,过夜组分支杆菌噬菌体试验结果阳性率为59.0%;非过夜组分支杆菌噬菌体试验结果阳性率为57.8%,二者的阳性率接近,差异无统计学意义(x2=0.496,P>0.05),过夜组污染率为13.9%,明显高于未过夜组的7.2%,二者的差异有统计学意义(x2=3.86,P<0.05)。结论:分支杆菌噬菌体生物扩增法试验标本处理后室温放置6h比预培养1d效果好,可以提前一天报告结果,建议临床推广应用。     

应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分支杆菌

目的：建立双重ＰＣＲ技术快速鉴定的结核与非结核分支杆菌。方法：通过试验选择双重ＰＣＲ最佳反应条件,检测引物Ａ１,Ａ２和Ｂ１,Ｂ２扩增分支杆菌的特异性及扩增结核分支杆菌的敏感性,并对３４例结核分支杆菌和非结核分支杆菌临床分离株鉴定。结果：引物Ａ１,Ａ２能扩增所试２４种分支杆菌,Ｂ１,Ｂ２仅扩增结核分支杆菌复合体菌种,两对引物扩增１２种非分支杆菌均为阴性。     

结核分支杆菌rpsL基因突变的快速检测

目的建立快速检测结核分支杆菌rpsL基因突变的方法。方法用聚合酶链反应(PCR)直接从结核分支杆菌基因组扩增rpsL基因,并直接进行测序鉴定。结果用引物P1,P2扩增H37Rv DNA获得约460bp片段,经序列测定后,显示与GeneBank中公布的序列一致(同源性99％)。28株结核分支杆菌耐SM分离株中,20株rpsL基因突变位于43住密码子,另8株分离株未出现rpsL基因突变。结论rpsL基因突变是SM耐药性的重要分子机制,本研究为进一步研究链霉素作用方式和耐药机制提供了有力手段。     

结核分支杆菌利福平耐药基因检测

利福平是结核病治疗的一线药物，但在临床上也常出现结核分支杆菌对利福平的耐药。目前检测耐药的方法较多的是采用改良的罗氏培养法加药敏试验，但由于培养基不同。检测方法不同，判定标准不一，国内目前尚缺乏有说服力的统一标准，由于药敏试验是建立在细菌培养基础上的，因此结核杆菌培养阴性的结核病患者无法做药敏试验，近年来，国内外学者不断报道较传统PCR更为灵敏、     

研究噬菌体裂解法对肺结核病的诊断应用价值

目的 比较研究噬菌体裂解法、涂片法、BACTALERT 3D培养法(以下简称培养法)对肺结核病的诊断应用价值.方法 选取新入院患者129例,应用噬菌体裂解法、涂片法、培养法对其痰标本进行检测.结果 114例肺结核患者痰标本:22例涂片阳性、培养阳性的标本中,噬菌体裂解法检测阳性18例(81.8%);19例涂片阴性、培养阳性的标本中,噬菌体裂解法检测阳性13例(68.4%);66例涂片阴性、培养阴性的标本中,噬菌体裂解法检测阳性25例(37.9%);7例涂片阳性、培养阴性的标本中嘴菌体裂解法检测阳性4例(57.1%).15例非肺结核患者痰标本中,1例已证实为非结核分支杆菌菌株标本涂片和培养检测为阳性,噬菌体裂解法检测为阴性;其余14例标本涂片、培养均为阴性,而噬菌体裂解法检测出现4例阳性反应.结论 噬菌体裂解法与涂片法,培养法相比,可以快速、简便、灵敏地检测结核分支杆菌,有助于肺结核病的初步诊断,但因存在假阳性和假阴性,需结合其他诊断方法.     

结核分支杆菌L型感染的临床研究

目的探讨研究肺结核患者结核分支杆菌L型致病情况的规律 ,提高痰菌阴性肺结核的诊断率。方法对痰结核菌阳性组 (无耐药组 )、痰结核菌阴性组和耐药组肺结核患者 ,分别于治疗前、治疗后 1个月、治疗后 3个月进行痰结核分支杆菌和痰结核分支杆菌L型培养 ,对结果进行对照观察。结果无耐药组 2 0例中结核分支杆菌L型阳性 1例 ,阳性率 5% ;痰结核菌阴性 2 0例中 ,L型阳性 2例 ,阳性率 1 0 % ;耐药组 2 0例中 ,L型阳性 4例 ,阳性率 2 0 %。结论耐药肺结核患者有较高的结核分支杆菌L型感染率 ;复治、病情进展恶化、耐药病例与结核分支杆菌L型感染有关     

几种方法检测结核分支杆菌的比较

目的：评价聚合酶链反应（PCR）,细菌培养,抗酸染色,荧光染色对结核病的诊断价值。方法：PCR检测43例临床标本中结核分支杆菌（MTB）DNA,并与常规细菌学检测作对比。结果：PCR检测法敏感性为48.8%,荧光染色法为44.2%。细菌培养为32.6%,抗酸染色法为25.6%。结果表明,PCR法检测结核分支杆菌较抗酸染色法更敏感。结论：PCR法具有简便快速的特点。对结核病有较高的诊断价值。     

含药血清作用巨噬细胞感染模型对抗结核药物活性的评价

目的: 建立含药血清作用结核杆菌感染巨噬细胞模型的抗结核杆菌药物活性检测方法,探讨该方法在评价抗结核杆菌药物活性中的应用。方法: 以结核杆菌感染小鼠腹腔巨噬细胞,加入低剂量或高剂量异烟肼给药小鼠的含药血清共同培养数天后,破碎巨噬细胞释放可能仍存活的细菌,体外培养后检查形成的菌落数,评价异烟肼的抗结核活性,并与传统最低抑菌浓度试验进行比较。结果: 培养数天后,低剂量和高剂量异烟肼含药血清组菌落生成数均低于空白对照组(P<0.05~P<0.01)。结论: 应用含药血清及感染巨噬细胞模型可对抗结核药物活性作出较客观的评价结果。     

结核分枝杆菌的荧光定量PCR快速诊断

目的传统的结核分枝杆菌鉴定方法敏感性差、鉴定时间长,影响诊断和治疗,本研究为克服传统方法的缺点,建立特异、敏感、快速的结核分枝杆菌检测方法。方法应用荧光定量PCR技术检测疑似结核病病人痰液中的特异性DNA片段,以达到对结核病病人的快速诊断。结果 PCR结果显示7例疑似结核病病人的痰液标本中检出目的基因片段,证明7例病人均为结核病病人。结论所建立方法可用于结核分枝杆菌的快速诊断。     

试管漂浮集菌法检测多种标本中的结核菌

目的探讨试管漂浮集菌法在多种标本中检测结核菌的应用价值。方法采用试管漂浮集菌法测定胸腹水、脑脊液、尿液标本中结核菌，并与涂片法和离心沉淀法对照；测定Ⅱ型肺结核患者静脉血中结核菌，同时设立疾病对照组和正常对照组。结果胸腹水、脑脊液、尿液标本检测阳性率均高于涂片法和离心沉淀法（Ｐ＜０刀５）．１０例Ⅱ型肺结核患者血标本均检出结核菌，对照组则为阴性。结论试管漂浮集菌法适用于多种标本的检测，快速、阳性率高，便于操作。     

利用荧光定量RT-PCR和PCR方法检测结核分枝杆菌复合群

目的 建立一种新的检测结核分枝杆菌复合群的荧光定量试验方法 （R/P分析）,探讨R/P分析检测临床标本中结核分枝杆菌复合群的应用价值.方法 根据结核分枝杆菌复合群基因保守序列设计引物和探针构建质粒标准品.运用R/P分析检测54例确诊结核病人临床样本,检测的结果 同时与培养法、荧光定量PCR法进行比较.结果 不同临床标本用R/P分析诊断结核病,其敏感性高于荧光定量PCR法和培养法,阳性检出率分别为96.3%、83.3%和55.6%.结论 R/P方法 是一种快速、特异的直接检测方法,它可以区分结核分枝杆菌复合群的死菌与活菌,因此可以更好的指导医生进行治疗,更准确地做出公共卫生决策.     

Establishment of a multiplex PCR system to diagnose tuberculosis and other bacterial infections

BactirialinfectiousdiseasesareverycommoninchildrenofChina.Manysevereinfectionssuchaspu-rulentmeningitis,tuberculousmeningitisandsepsisstillthreatenchildren'shealthandeventheirlives.Bacterialcultureisaclassicmethedtodetectthepathogensofinfectiousdiseases,butithastotakeseveraldaysforgeneralbacteriaandeven4to8weeksfortuberclebacillus(Tb).ltcouldbringsomeperplexitiesfordoctorstodeterminetheeffectivetherapy.So,arapid,specificandsensitivemethodisrequiredfordiagnoslngbacterialinfections,speciallydif…     

痰中结核杆菌检查方法的比较

目的分析比较痰涂片、痰培养及FQ-PCR检查结核杆菌对肺结核的诊断价值。方法痰直接涂片和浓集涂片找抗酸杆菌;痰结核杆菌培养;FQ-PCR检测痰中TB-DNA。结果浓集法较直接法阳性率有大幅提高,培养阳性率较低,FQ-PCR法敏感度最高,三种方法检测结果具有很好的相关性。结论涂片检查结核杆菌应提倡浓集法,FQ-PCR法检测TB-DNA可列入TB实验诊断的常规项目,涂片、培养及FQ-PCR同时对结核杆菌进行检测可从不同方面满足临床的需要。     

307例抗酸染色阳性病例的临床分析

目的通过对307例抗酸染色阳性病例的临床分析．探讨结核病的发病率及流行趋势．为结核病的防治提供流行病学依据。方法统计2003年1月～2005年12月我院所做抗酸染色的全部病例，结合病例的临床资料．获得近年来结核痛的发病率及其流行趋势变化。结果3年共做抗酸染色14060例．阳性307例．阳性率为2、18％．2003、2004和200j年的阳性检出率分别为1．12％（55／3876）、2．14％（98／4580）、2．75％（154／5604）．经统计学分析差异有统计学意义．P〈0．05。其中．经临床及实验室确诊为免疫功能受损或低下患者1151例．抗酸染色阳性55例，阳性率为4．78％．2003、2004和2005年的阳性率分别为2．83／（9／318）、4．76％（17／357）、6．09％（29／476），统计学分析差异有统计学意义．P〈0．01。结论结核杆菌的感染率呈逐年上升趋势．尤其是免疫功能受损或低下患者的感染率明显上升．结核病的防治将面临严重的挑战。     

聚合酶链反应快速诊断中枢神经系统感染性疾病

应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）对１０６例中枢神经系统感染性疾病进行单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ┐Ｉ）、巨细胞病毒（ＣＭＶ）及结核杆菌（ＴＢ）３项基因检测结果。ＨＳＶ┐Ｉ阳性１０例，ＣＭＶ阳性１３例，ＴＢ阳性１９例，３种病原体总检出率为３９．６％（４２／１０６）。该试验具有特异性强、敏感性高、简便快速等优点，有利于早期诊断，早期治疗     

结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因LiPA检测研究

目的利用LiPA技术检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因,评价LiPA技术临床应用的可行性。方法应用比例法确定80株结核分枝杆菌临床分离株其耐药性,用katG基因PCR扩增产物进行DNA测序,然后用LiPA检测技术检测结核分枝杆菌katG基因的突变,对比3种方法的检测结果,评估LiPA检测技术的准确性。结果在80株结核分枝杆菌中,35株为异烟肼敏感株,45株为异烟肼耐药株。敏感株katG基因扩增阳性率为100％,耐药株为91．1％（41／45）。耐异烟肼茵株katG的缺失率为8．9％。41株扩增阳性耐药株中有26株检测到315位密码子的突变,分别为ACC（60．97％,25／41）,ATC（2．44％,1／41）,无突变（36．58％,15／41）。LiPA技术检测、药物敏感性试验和基因测序的结果基本一致。结论结核分枝杆菌katG基因突变的LiPA技术敏感性高,特异性强,可用于结核分枝杆菌的快速药物敏感性试验评价。