赖氨酰氧化酶对荷胃癌裸鼠肿瘤形成和转移的影响

目的观察用β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对荷胃癌裸鼠肿瘤形成和转移的影响。方法 6周龄的裸鼠,随机分为BAPN预处理组和对照组,预处理组10只,对照组15只。BAPN预处理组每天用BAPN 100mg.kg-1腹腔注射,对照组每天用相同体积的无菌PBS腹腔注射。2周后,以人胃癌细胞SGC-7901 1×107.mL-1建立荷胃癌裸鼠模型。肿瘤细胞接种4周后,比较成瘤率、瘤重和转移率。结果 BAPN预处理组平均瘤重高于对照组,P<0.05;BAPN预处理组的成瘤率和转移率与对照组的差异无统计学意义。结论用BAPN预先抑制LOX活性后,肿瘤的重量明显增加,但对原发肿瘤形成和转移未见明显作用。     

赖氨酰氧化酶基因原核表达克隆的构建

目的 克隆编码人赖氨酰氧化酶(hLOX)的基因片段,并构建含有该基因的重组原核表达质粒,为制备基因工程化的重组hLOX奠定基础.方法 从人皮肤成纤维细胞中抽提RNA,通过RT-PCR扩增LOX编码序列(750bp),所得目的 基因插入原核表达载体质粒pET28a,转化大肠杆菌DH5a.重组质粒pET28a-hLOX经双酶切和核苷酸序列分析鉴定.结果 载体质粒pET28a中插入的基因片段与hLOX基因序列完全相同.结论 成功构建含有人LOX基因的重组表达质粒.     

赖氨酰氧化酶在纤维化疾病中的研究进展

<正>机体器官由实质和间质两部分构成。纤维化是指过量的结缔组织形成,实质细胞部分减少,可发生于全身多种组织器官当中,在肺、肝脏和肾脏最为常见,可致脏器结构的破坏及功能减退,严重时甚至可威胁生命。细胞外基质(extracellular matrix, ECM)主要由胶原蛋白、非胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖与氨基聚糖几种成分组成,内含大量的信号分子,参与控制细胞的生长与代谢等活动。胶原蛋白交联是纤维化基质稳定的必要过程,可促进纤维化发展[1]。     

赖氨酰氧化酶与压力性尿失禁的研究

女性压力性尿失禁(SUI)的发病机制尚不明确,当今研究表明,胶原蛋白作为盆底支持组织细胞外基质的主要成分,在维持盆底支持组织的弹性和韧性中起重要作用,其含量减少、结构不稳定会引起组织弹性降低,易于断裂,对尿道的支撑作用减弱,出现漏尿。赖氨酰氧化酶(LOX)是铜依赖性的单胺氧化酶,是胶原纤维发育成熟和保持内环境稳态的关键酶,能够影响局部组织中胶原蛋白的生成、结构及其功能,故推测其在女性SUI的发生、发展中可能起一定作用。     

赖氨酰氧化酶在乳腺癌中的表达及临床意义

目的研究赖氨酰氧化酶(LOX)在乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺良性病变组织中的表达,并与乳腺癌常规预后指标比较,探讨其与乳腺癌侵袭/转移的关系。方法逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测56例乳腺癌组织、56例正常乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX mRNA与低氧诱导因子1(HIF-1α)mRNA的表达;应用免疫组织化学技术检测相应组织中LOX蛋白及HIF-1α的表达,并行统计学分析。结果 LOX mRNA在乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺良性病变组织中的表达率分别为57.14%、32.14%、25.00%,乳腺癌组织中LOXmRNA的表达率明显高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织(P<0.01);LOX蛋白在乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺良性病变组织中的表达率分别为48.21%、26.78%、20.00%,乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织(P<0.05);LOX mRNA及LOX蛋白在不同临床分期及淋巴结转移中的表达率差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌LOX mRNA及LOX蛋白的表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期(P均<0.01),但在不同年龄及肿瘤大小患者的癌组织中LOX mRNA及LOX蛋白的表达率差异无统计学意义(P>0.05);LOX蛋白的表达与HIF-1α呈正相关(r=0.368)。结论 LOX蛋白及LOX mRNA在乳腺癌组织中的表达率高于正常乳腺组织及乳腺良性病变组织,LOX与乳腺癌的发生可能有关;LOX高表达的乳腺癌其恶性程度更高,更易发生远处转移;HIF-1α与LOX在乳腺癌的侵袭/转移过程中具有协同作用。     

赖氨酰氧化酶在子宫内膜癌中的表达及意义

目的：探讨赖氨酰氧化酶（ LOX）在子宫内膜癌组织、子宫内膜良性增生组织中的表达规律及其与子宫内膜癌预后指标的相关性。方法应用免疫组化法检测53例子宫内膜癌、90例子宫内膜单纯性增生及复杂性增生组织中 LOX 蛋白的表达,比较 LOX 蛋白在良、恶性子宫内膜病变组织中表达的差异,分析 LOX 蛋白的表达与子宫内膜癌的临床分期、是否存在淋巴结转移及细胞分化程度等预后指标的相关性。结果LOX 蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率为52．8％,在子宫内膜复杂性增生组织中的表达率为32．5％,子宫内膜单纯性增生组织中的表达率为24．0％。子宫内膜癌、子宫内复杂性增生及子宫内膜单纯性增生组织中 LOX 蛋白表达率差异有统计学意义（P ＝0．008）。子宫内膜癌组织中 LOX 蛋白的表达与临床分期、细胞分化及淋巴结转移有相关性。Ⅰ～Ⅳ期子宫内膜癌阳性表达率分别为31．6％、50．0％、78．6％和75．0％,组间差异有统计学意义（P ＝0．006）。在高、中、低分化组的阳性表达率分别为32．0％、60．0％、84．6％,组间差异有统计学意义（P ＝0．007）;有淋巴结转移及无淋巴结转移组的阳性率为78．6％及43．7％,差异有统计学意义（P ＝0．025）。结论子宫内膜癌组织中LOX 表达明显高于子宫内膜复杂性增生及子宫内膜单纯性增生,LOX 参与子宫内膜癌的侵袭及转移的病理过程。     

结直肠癌患者赖氨酰氧化酶检测的临床意义

目的 探讨赖氨酰氧化酶(LOX)在结直肠癌(CRC)患者组织及外周血中的表达情况,并分析其关系和临床意义.方法 选取2014年1～12月于河北省人民医院行CRC切除术的96例患者作为CRC组,其中行根治性手术者74例(根治组),非根治性手术者22例(非根治组);同时选取体检健康者60例作为对照组.取CRC患者肿瘤及癌旁正常黏膜组织,采用免疫组织化学染色检测LOX表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组外周血LOX、癌胚抗原(CEA)、糖链抗原19-9 (CA19-9)表达水平.结果 CRC组织中LOX阳性率(75.00％)高于癌旁正常黏膜(26.04％),且非根治组肿瘤组织LOX阳性率(95.45％)高于根治组(68.92％),差异均有统计学意义(P＜0.05).CRC患者外周血LOX、CEA及CA19-9水平均高于对照组,非根治组患者外周血LOX水平高于根治组,差异均有统计学意义(P＜0.05).CRC患者肿瘤组织LOX表达水平与外周血LOX水平呈正相关(r=0.75,P＜0.05).CRC患者外周血LOX与CEA水平呈正相关(r=0.42,P＜0.05);CRC患者外周血LOX与CA19-9水平无明显相关性(r=0.12,P＞0.05).结论 CRC患者外周血及肿瘤组织中LOX表达水平增高,且与肿瘤转移有关,检测外周血LOX水平对预测CRC转移有意义.     

赖氨酰氧化酶抑制剂对低氧诱导大鼠肺动脉高压血管重建的保护作用

目的 通过观察低氧时大鼠肺动脉赖氨酰氧化酶（LOX）以及细胞外基质胶原蛋白交联变化,探讨LOX抑制剂β-APN对低氧性肺动脉高压的逆转作用。方法 清洁级SD大鼠24只随机均分为常氧对照组、低氧组及低氧+β-APN干预组。测定平均肺动脉压右心室肥大指标RV/（LV+S）及肺动脉结构重建指标管腔面积/管总面积（WA/TA）及相对血管中膜厚度（MT/ED）。采用羟脯氨酸比色法测定可溶性及不可溶性胶原蛋白的含量评价胶原的交联,荧光光谱法检测LOX酶活性,Western blot法和荧光定量PCR分别检测肺动脉LOX蛋白、mRNA表达。结果 与常氧组比较,低氧组大鼠mPAP、RV/（LV+S）、WA/TA及MT/ED均明显升高,但均能被β-APN所抑制,差异有统计学意义（P均<0.05）。低氧组大鼠肺组织胶原交联、LOX酶活性以及肺动脉LOX mRNA、蛋白表达均显著高于常氧组,差异均有统计学意义（P<0.05）。β-APN干预组尽管不影响低氧大鼠肺动脉LOX mRNA、蛋白表达,差异无统计学意义（P>0.05）,但β-APN干预组大鼠肺组织LOX酶活性及胶原交联明显低于低氧组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论 低氧能诱导肺动脉LOX高表达,通过促进胶原合成及其交联,参与肺动脉高压的形成和结构重建。抑制LOX信号通路可能有助于延缓低氧性肺动脉高压的进展。     

沉默赖氨酰氧化酶改善食管癌术后吻合口狭窄

目的:研究赖氨酰氧化酶(LOX)对食管成纤维细胞参与瘢痕形成的影响。方法:选取食管癌术后患者吻合口狭窄处的活检组织,利用原代细胞培养技术制备原代食管成纤维细胞,并用细胞免疫化学鉴定。针对人LOX基因序列设计并合成siRNA,转染原代食管成纤维细胞;采用实时荧光定量PCR法和Western Blot法验证siRNA-LOX对LOX沉默效果,及其对基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和纤维粘连蛋白(FN)的影响;细胞划痕实验评价沉默LOX表达对食管成纤维细胞迁移能力的影响。结果:原代食管成纤维细胞培养成功,且细胞抗波形蛋白免疫荧光阳性。siRNA-LOX转染成纤维细胞后48 h后,LOX mRNA和LOX蛋白表达水平显著下调(P<0.05),且在mRNA和蛋白水平明显抑制了MMP2、MMP9和FN的表达(P<0.05),并抑制了食管成纤维细胞的迁移能力(P<0.05)。结论:沉默LOX表达有潜力抑制食管成纤维细胞所致的瘢痕形成。     

赖氨酰氧化酶体内外对乳腺癌增殖和侵袭作用的研究

目的 探讨赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对人乳腺癌细胞的生长增殖、侵袭及转移能力的影响及可能作用的机制.方法 构建LOX基因的特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),稳定转染至乳腺癌细胞MDA-MB-231,实验设3个组,即空白组(Con)、干扰组(RNAi)、阴性对照组(Mock),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验及流式细胞仪观察细胞生长及增殖情况,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭及迁徙能力改变;免疫组织化学法检测111例人乳腺癌组织、癌旁乳腺组织及20例乳腺良性病变组织中LOX、基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)的表达,并对LOX与临床病理资料及MMP-2、MMP-9的相关性进行分析.结果 转染72h后,MTT法显示干扰组细胞生长明显受抑制;细胞集落形成实验显示干扰组的细胞集落形成率明显低于空白组和对照组;Transwell侵袭和迁移实验结果显示RNAi组穿过Transwell小室滤过膜细胞数分别为47 +2和63 +2,差异有统计学意义(P=0.000);流式细胞仪测定细胞周期,3组之间差异无统计学意义.LOX蛋白在人乳腺癌、癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织中的表达率分别为48.64％ (54/111)、26.13％(29/111)、20.00％(4/20),乳腺癌组织中LOX蛋白的表达率明显高于癌旁乳腺组织及乳腺良性肿瘤组织(P =0.019).LOX蛋白在不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移的表达率存在显著差异.相关分析显示,LOX蛋白表达与MMP-2(r =0.262,P=0.005)、MMP-9(r =0.424,P=0.000)蛋白之间呈显著正相关.结论 LOX可以促进乳腺癌的侵袭转移;LOX和MMP-2、MMP-9转移因子可能具有协同促进作用,促进了乳腺癌的侵袭转移.     

抑癌方对小鼠结肠癌移植瘤微血管及血管拟态形成的影响

目的探讨抑癌方对小鼠结肠癌移植瘤微血管（microvessel,MV）生成和血管生成拟态（vasculogen-ic mimicry,VM）形成的影响。方法用CT26结肠癌细胞建立小鼠结肠癌移植瘤模型,分生理盐水（nor-mal saline,NS）组,抑癌方高、中、低剂量组及化疗药组,分别灌服NS,抑癌方高、中、低剂量及腹腔注射5-氟脲嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）。处理后比较各组之间瘤体质量;采用血管内皮细胞CD34免疫组织化学法和CD34免疫组织化学法＋糖原蛋白过碘酸希夫氏双染法分别检测瘤组织中微血管密度（microvessel density,MVD）及血管生成拟态密度（vasculogenic mimicry density,VMD）。结果与NS组比较,抑癌方各剂量组及化疗组瘤体质量均显著降低（P〈0.05）;但抑癌方各组瘤体质量均显著高于化疗组（P〈0.05）。NS组癌巢间MV和VM丰富,与之相比较,抑癌方各剂量组和化疗组瘤组织中MVD和VMD均显著减少（P〈0.05）。结论抑癌方对小鼠移植瘤有一定的抑制作用,能够抑制结肠癌移植瘤中MV和VM的表达,这可能是抑癌方抗肠癌的作用机制之一。     

蛋白激酶D1甲基化对胃癌细胞株BGC-823增殖侵袭的影响

目的:检测蛋白激酶D1(PKD1)在胃癌细胞中的表达,并探讨其对胃癌细胞增殖侵袭的影响。方法:体外培养胃癌细胞系BGC-823,使用PKD1甲基化特异性阻断剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理胃癌细胞,Western Blot法检测胃癌细胞中PKD1蛋白的表达情况,MTT法检测胃癌细胞的增殖,Transwell实验检测胃癌细胞的侵袭力。结果:5-Aza-CdR作用后,胃癌细胞中PKD1蛋白表达明显增加(P<0.05),细胞增殖速度减慢,侵袭能力减弱(P<0.05)。结论:胃癌细胞中PKD1表达的下调在胃癌的发病过程中可能起重要作用,并可能与胃癌细胞增殖侵袭能力改变有关。     

Ki-67与血管生成拟态在原发性肝细胞癌中的表达及意义

目的：探讨 Ki-67与血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）在原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况。方法：取87例 HCC 石蜡标本,运用免疫组织化学染色法检测Ki-67的表达,并运用过碘酸雪夫（periodic acid-schiff stain,PAS）和 CD34双染色法进一步标记VM。结果：Ki-67高表达组VM阳性率高于Ki-67低表达组,差别具有统计学意义（P〈0.05）。结论：肝细胞癌组织内存在VM表达,且与癌细胞的Ki-67表达密切相关,Ki-67可能参与 VM的形成,是 VM形成的机制之一。     

参菝抗瘤液对人胃癌细胞株BGC-823及化疗药物协同作用研究

目的研究参菝抗瘤液对人胃癌细胞株BGC-823细胞增殖和凋亡的影响,以及同化疗药物联用对的人胃癌细胞株BGC-823细胞作用。方法运用MTT法观察参菝抗瘤液对人胃癌细胞株体外增殖的影响,流式细胞仪检测参菝抗瘤液对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响,对作用后细胞染色并在电镜下观察其细胞形态学变化。结果本研究实验结果显示,不同浓度参菝抗瘤液均能抑制胃癌BGC-823细胞增殖,抑制率高于正常对照组,差异具有统计学意义(P0.05),且具有诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的作用,凋亡率高于正常对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。抑制增殖和诱导凋亡的作用与浓度正相关,且存在时间依耐性。当100μg/m L剂量的参菝抗瘤液联合12.5μg/m L的紫杉醇时,抑制率和凋亡率均高于单纯化疗组,具有协同抑制胃癌BGC-823细胞增殖,诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的作用。结论参菝抗瘤液对人胃癌细胞株BGC-823具有较强的抑制增殖和诱导凋亡作用,联合化疗药物作用于人胃癌细胞株BGC-823具有协调增强抑制增殖和诱导凋亡作用。     

艾迪注射液对裸鼠人胃癌移植瘤的抑瘤作用研究

目的：观察艾迪注射液对裸鼠人胃癌移植瘤的抑瘤作用。方法：将人胃癌细胞BGC-823接种于裸鼠右腋皮下,建立荷瘤裸鼠模型;将荷瘤裸鼠随机分为5组：模型组、环磷酰胺组和艾迪注射液高、中、低剂量组,各组动物按相应药物和剂量给药,连续14d;末次给药后处死动物,剥取瘤块,称重计算抑瘤率并作组织学观察。结果：艾迪注射液高剂量组的抑瘤率为61.84%,光镜下可见大片状的坏死区。结论：艾迪注射液对裸鼠人胃癌细胞BGC-823具有抑制作用。     

人参皂甙Rg3对胰腺癌裸鼠皮下移植瘤血管生成拟态的研究

目的 本实验通过建立胰腺癌SW-1990细胞株皮下移植瘤模型,探讨人参皂甙Rg3对胰腺癌皮下移植瘤血管生成拟态的影响。 方法 首先建立人胰腺癌细胞裸鼠模型,后给予不同药物浓度的人参皂甙Rg3(0、5、10、20mg/kg)处理裸鼠,观察人参皂甙Rg3对裸鼠移植瘤生长的影响,免疫组化-PAS双染观察人参皂甙Rg3对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤血管生成拟态和血管内皮因子CD31的影响,并用荧光定量PCR和Western blot法分别检测MMP-2、MMP-9在mRNA和蛋白水平的表达。 结果 人参皂甙Rg3能够抑制胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生长,其中20mg/kg人参皂甙Rg3组最明显;Western blot法和荧光定量PCR示用药组与空白组比较,MMP-2、MMP-9在蛋白和mRNA水平的表达下降,且差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化-PAS双染后发现血管拟生(+)和CD31(+)数量均较空白组减少。 结论 通过体内实验笔者证实人参皂甙Rg3能够通过降低MMP-2、MMP-9的表达来抑制胰腺癌血管生成拟态的形成。     

胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响*

目的研究胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞的凋亡作用及其作用机理。方法 MGC-803细胞分别用不同浓度的胃复春胶囊提取物处理。CCK-8法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 胃复春胶囊提取物（浓度为0～100 μg·mL-1）可以浓度和时间依赖性地降低MGC-803细胞的活力。Hoechst 33258染色显示胃复春胶囊提取物处理后的MGC-803细胞膜通透性增高。流式细胞检测结果显示胃复春胶囊提取物作用于MGC-803细胞后可以诱导细胞凋亡,细胞凋亡率分别为（20.4 ± 2.7）%（25 μg·mL-1）、（41.3 ± 6.2）%（50 μg·mL-1）、（68.8 ± 5.8）%（100 μg·mL-1）,明显高于对照组凋亡率（3.8 ± 1.6）%（0 μg·mL-1）（P<0.05）。MGC-803细胞经过不同浓度胃复春胶囊提取物处理24 h后,处于G0/G1期细胞比例升高,而G2/M期和S期细胞比例下降;免疫印迹实验结果表明胃复春胶囊提取物（浓度为25,50,100 μg·mL-1）处理组 MGC-803 细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和Bax表达量升高,而Bcl-2表达量降低,且呈剂量依赖性。结论 胃复春胶囊提取物能抑制MGC-803细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与下调Bcl-2基因的表达,上调Bax基因的表达以及增加Caspases活性有关。     

竹节香附素A对人胃癌细胞株BGC-823细胞周期及STAT3信号通路的影响

目的?研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)在体外对胃癌细胞BGC-823的周期阻滞作用及对STAT3信号通路的影响。方法?应用MTT法检测RA对人低分化细胞BGC-823细胞的增殖影响,应用流式细胞仪检测RA对BGC-823细胞周期的阻滞作用,细胞划痕实验检测RA对BGC-823迁移、侵袭能力的影响,应用Western blot检测其对STAT3信号通路的影响。结果?RA在给药12、24、48h后,与对照组相比,对BGC-823细胞的增殖抑制有显著效果,呈现时间-浓度依赖关系。流式细胞周期结果显示,RA作用于人胃癌细胞BGC-823 12h后,S期比例与对照组相较显著上升,而G₂/M期比例下降,表明细胞被阻滞于S期。在浓度为8、16μmol/L时,镜下显示迁移过去的胃癌细胞数目均明显低于对照组,Western blot结果显示RA能下调p-STAT3蛋白的表达。结论?RA能有效抑制人胃癌细胞的增殖并阻滞其细胞周期于S期,并且抑制STAT3信号通路中p-STAT3的表达。