Ⅰ类整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性研究

目的研究整合子在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布及耐药性情况。方法用PCR法检测铜绿假单胞菌中I类整合子基因,对整合酶阳性菌株与铜绿假单胞菌PU21行转移接合实验,采用琼脂对倍稀释法分析整合酶阳性菌株及接合转移成功菌株的药敏情况。结果 57株铜绿假单胞菌经PCR法30株检测含有I类整合酶,药敏结果显示I类整合子阳性菌株较阴性菌株耐药率明显升高,I类整合子阳性菌株21株转接成功,转移接合子与I类整合子阳性菌株比较,对亚胺培南、复方新诺明和环丙沙星的耐药性有所降低。结论铜绿假单胞菌中有I类整合子的分布,I类整合子阳性菌株及转移接合子较阴性菌株对多种抗生素更易产生耐药。     

I类整合子与铜绿假单胞菌耐药的相关性研究

目的 研究I类整合子在铜绿假单胞菌临床分离株中的分布及耐药性情况。方法 PCR法检测铜绿假单胞菌中 I 类整合子基因,对整合酶阳性菌株与铜绿假单胞菌PU21行转移接合实验,采用琼脂对倍稀释法分析整合酶阳性菌株及接合转移成功菌株的药敏情况。结果 57 株铜绿假单胞菌经PCR法检测30株含有 I 类整合酶,药敏结果显示 I 类整合子阳性菌株较阴性菌株耐药率明显升高（P<0.05）,I 类整合子阳性菌株21株转接成功,转移接合子与 I 类整合子阳性菌株比较,对亚胺培南、复方新诺明和环丙沙星的耐药性有所降低。结论 铜绿假单胞菌中有 I 类整合子的分布,I 类整合子阳性菌株及转移接合子较阴性菌株对多种抗生素更易产生耐药。     

一株多重耐药铜绿假单胞菌的双整合子基因结构分析

目的 检测临床多重耐药铜绿假单胞菌的整合子,并进行结构及定位分析.方法 PCR扩增耐药基因和整合子、电泳胶回收DNA片段并进行序列比对分析.结果 在一株多重耐药铜绿假单胞菌(PAVim2)中检测到双整合子,其中一个为Ⅰ类整合子,一个为Tn402样的Ⅰ类整合子,两者基因结构为5'CS-IntI-sul1-3'CS和5'CS-IntI-Vim2-Rh506.结论 双整合子结构的发现为铜绿假单胞菌多重耐药研究有临床意义.     

产金属酶铜绿假单胞菌携带Ⅰ类整合子的研究

目的 研究产金属酶铜绿假单胞菌携带Ⅰ类整合予及其基因盒的情况.方法 收集铜绿假单胞菌68临床株,进行金属酶IMP-1、VIM基因的PCR检测,选取阳性株再作第Ⅰ类整合酶基因的PCR检测,然后选取整合酶基因阳性株进行Ⅰ类整合子相关基因盒的PCR检测.结果 PCR检测出68株铜绿假单胞菌中的1株同时含有IMP-1基因和Ⅰ类整合子基因盒;55株含有VIM基因,其中26株含有Ⅰ类整合酶基因,在这26株中只有18株含有Ⅰ类整合子基因盒,根据电泳条带可分为5种类别.结论 首次在中国西南地区发现产IMP-1并同时带有Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌.Ⅰ类整合子在产金属酶铜绿假单胞菌中分布广泛,基因盒携带率为69.2%,对细菌的耐药性传播具有重要意义.     

一株携带多种耐药基因的铜绿假单胞菌研究

目的了解铜绿假单胞菌的多重耐药情况和有关机理。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、耐消毒剂和磺胺基因（qacE△1—sul1）的检测。并对CARB基因进行了测序。结果PCR显示CARB、TEM型β-内酰胺酶基因，aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ AMEs基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因和耐磺胺基因扩增阳性，oprD2基因扩增检测呈缺失型。CARB基因扩增产物测序，经BLAST程序分析（WWW．ncbi．nlm．nih．gov）为CARB-3型。结论铜绿假单胞菌存在多重耐药基因，管壁涂有季胺类、双胍类消毒剂和磺胺的Ⅱ代导管的抑菌效果需重新评价。     

铜绿假单胞菌中整合子的分布与结构及其与耐药的关系

目的了解分离于青岛骨伤医院临床标本的铜绿假单胞菌对15种常用抗生素的耐药率;明确整合子基因盒结构及其在耐药基因播散中的作用。方法采用微量肉汤稀释法检测70株铜绿假单胞菌的对15种常用抗生素耐药率;采用煮沸法提取70株铜绿假单胞菌基因组DNA;PCR扩增Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子基因,通过测序分析其所携带耐药基因。结果 70株铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦(CPZ/SB)耐药率为1.43%,对其他抗生素的耐药性在20.00%~67.14%之间;检出Ⅰ类整合子阳性28株(40.0%),包括aacA4、aadA1、catB8和dfrA17四种基因盒。未检测到Ⅱ、Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌株对头孢吡肟、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦等10种抗生素的耐药率明显高于整合子阴性菌株。结论铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药性因临床株而异,其中Ⅰ类整合子阳性的菌株耐药率高,提示该整合子在铜绿假单胞菌多重耐药中发挥重要作用。     

1株泛耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的了解1株泛耐药铜绿假单胞菌（PDRPA）耐药基因携带状况。方法采用PCR检测该株PDRPA菌44种基因。结果该株PDRPA菌携带TEM-1、OXA．10、PER-1、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、ant（3”）-Ⅰ、rmtB、sull、cmlA、intⅠ1、merA基因,且伴有oprD2缺失。结论该株PDRPA菌携带多种耐药基因是泛耐药原因。     

临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与ISCR1研究

目的 了解临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单保菌Ⅰ类整合子与插入序列共同区1(ISCR1)的分布情况.方法 2010年1月至2013年12月共收集我院126株多重耐药鲍曼不动杆菌和89株多重耐药铜绿假单胞菌,采用PCR法扩增Ⅰ类整合酶、Ⅰ类整合子基因盒、ISCR1、ISCR1可变区.Ⅰ类整合基因盒和ISCR1可变区的PCR产物分别用HinfⅠ、RasⅠ进行酶切,相同类型酶切图谱的PCR产物随机挑取一例进行测序,测序结果在GenBank中用BlastN进行核酸序列同源性搜索.结果 在多重耐药鲍曼不动杆菌中,检出79例Ⅰ类整合酶,67例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有6种类型;59例ISCR1阳性,其中9例ISCR1可变区阳性.在89株多重耐药铜绿中,检出41例Ⅰ类整合酶,36例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有10种类型;9例ISCR1阳性,其中4例ISCR1可变区阳性.有8株鲍曼不动杆菌和2株铜绿假单胞菌同时携带Ⅰ类整合子和ISCR1可变区结构.结论 在多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中,Ⅰ类整合子和ISCR1分布较广.     

整合子与金属酶介导的铜绿假单胞菌耐药性研究进展

整合子与金属酶的出现使铜绿假单胞菌的耐药机制更趋复杂，给临床抗感染治疗带来极大威胁。笔者就整合子的分类、基本结构、基因盒的捕获和在耐药基因传播中的作用，以及获得性金属酶的出现和其在铜绿假单胞菌多重耐药机制中的作用作一综述。     

整合子系统与铜绿假单胞菌多重耐药性

多重耐药性铜绿假单胞菌是临床抗感染治疗中的一个棘手的问题,除了外排系统,外膜通透性障碍等天然耐药机制之外,整合子介导的多重耐药基因也是造成铜绿假单胞菌多重耐药的主要原因之一。本文就整合子的结构与分类、基因盒的种类与表达以及与铜绿假单胞多重耐药性的关系进行综述。     

Identification and distribution of the clinical isolates of imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa carrying metallo-β-lactamase and/or class 1 integron genes

To investigate the distribution of the genes of two major metallo-β-1actamases （MBL;i.e.,IMP and VIM） and class 1 integrons （intI） in the clinical imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa, a total of 65 isolates, from a university hospital in Sichuan between December 2004 and April 2005 were screened for MBL genes by PCR using primers specific for blaIMP-1, blaVIM and blaVIM-2 genes. The MBL-positive isolates were further assessed for class 1 integrons by PCRusing specific primers. The nucleotide sequences of several PCR products were also determined. The results revealed that the blaVIM gene was found in 81.5% （53/65） of all isolates, blaVIM-2 gene was found in only 1 isolate and the intl gene was observed in 45.3% （24/53） of blaVIM-positive isolates. One isolate carried simultaneously both blaIMP-1 and intl genes, and to the best of our knowledge this is the first report of such isolate in southwest China. These observations highlight that the genes for VIM β-1actamase and class 1 integrons were predominantly present among the imipenem-resistant P. aeruginosa tested, confirming the current widespread threat of imipenem-resistant, integron-borne P.aeruginosa.     

Identification and Distribution of the Clinical Isolates of Imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa Carrying Metallo-β-lactamase and/or Class 1 Integron Genes

To investigate the distribution of the genes of two major metallo-β-lactamases (MBL; i.e., IMP and VIM) and class 1 integrons (intI) in the clinical imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa, a total of 65 isolates, from a university hospital in Sichuan between December 2004 and April 2005 were screened for MBL genes by PCR using primers specific for blaIMP-1, blaVIM and blaVIM-2 genes. The MBL-positive isolates were further assessed for class 1 integrons by PCR using specific primers. The nucleotide sequences of several PCR products were also determined. The results revealed that the blaVIM gene was found in 81.5% (53/65) of all isolates, bla gene was found in only 1 isolate and the intI gene was observed in 45.3% (24/53) of blaVIM-positive isolates. One isolate carried simultaneously both blaIMP-1 and intI genes, and to the best of our knowledge this is the first report of such isolate in southwest China. These observations highlight that the genes for VIM β-lactamase and class 1 integrons were predominantly present among the imipenem-resistant P. aeruginosa tested, confirming the current widespread threat of imipenem-resistant, integron-borne P. aeruginosa.     

铜绿假单胞菌的耐药特征及oprD2基因的检测

目的了解铜绿假单胞菌临床分离菌株的耐药特征及外膜通道蛋白oprD2基因的缺失情况。方法琼脂稀释法检测最低抑菌浓度（MIC）,聚合酶链反应（PCR）检测oprD2基因。结果铜绿假单胞菌检出率最高的是ICU病房和呼吸科病房,分别占50.8%和23.1%;65株铜绿假单胞菌对13种抗生素耐药率最低的是头孢哌酮/舒巴坦（30.8%）,其次是亚胺培南（38.5%）、美罗培南（40.0%）和阿米卡星（46.2%）;在25株耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPA）中,有19株oprD2基因缺失,缺失率为76.0%。结论铜绿假单胞菌耐药性严重;外膜通道蛋白oprD2缺失可能是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要原因之一。     

Detection of class 1 integron in Acinetobacter baumannii isolates collected from nine hospitals in Turkey

Objective

To investigate the antibiotic resistance genes inserted into class 1 and class 2 integrons in Acinetobacter baumannii (A. baumannii) isolates obtained from nine different cities in Turkey.

Methods

A collection of 281 A. baumannii clinical isolates were collected from nine diferent state hospitals in Turkey and were confirmed as A. baumannii by conventional biochemical, API testing and bla_-OXA-51 specific PCR. The isolates were examined by PCR for existence of class 1 and 2 integron gene cassettes.

Results

They were characterized by antimicrobial susceptibility testing and the highest resistance rates were determined for piperacillin (90.03%), ciprofloxacin (87.54%), cefepime and trimethoprim/sulfamethoxazole (81.13%). The lowest resistance rates was for cefotaxime (3.55%). class I integrons were detected in 6.4% (18/281) of A. baumannii strains and no class 2 integron was detected. The gene cassettes of class 1 integrons AacC1-AAC(3)I-aadA1, AacC1-aadA1, AAC(3)-I, AAC(3)-I -AAC(3)-I -aadA1, TEM-1, AAC(3)-I-aadA1 - AAC(3)-I -AAC(3)-I, AAC(3)-I -AAC(3)-I -AAC(3)-I -aadA1, AAC(3)-I - aadA1, AAC(3)-I-AAC(3)-I, AAC(3)-I-aadA1- AAC(3)-I-aadA1, AAC(3)-I- AAC(3)-I- aadA1-AAC(3)-I-aadA1 were detected in eighteen strains. The aac genes family were most frequently found integrated into the class 1 integrons and it was followed by aadA genes and TEM-1 genes.

Conclusions

This is an extensive study on the distribution of class 1 integron among A. baumannii in Turkey. In addition to these, two new alleles were observed. Their percentage rates of similarity to other cassettes are 95% aadA1 ( TKA18) and 89% aadA1 (ANKA3).     

对碳青霉烯耐药与敏感的铜绿假单胞菌耐药谱比较分析

目的了解耐碳青霉烯铜绿假单胞菌的分布,比较铜绿假单胞菌对碳青霉烯耐药与敏感菌株的耐药谱特性,以指导临床合理使用抗生素。方法采用稀释法对在2004年1月至12月间从临床分离的铜绿假单胞菌进行12种常用抗生素敏感性测定,采用卡方检验比较碳青霉烯耐药组与敏感组铜绿假单胞菌耐药性的差别。结果91株铜绿假单胞菌中有28株对碳青霉烯耐药,主要来源于痰标本(88．3%)；分别来自神经外科、呼吸科重症监护病房(RICU)、重症监护病房(ICU)等病区。碳青霉烯耐药株对包括头孢吡肟、头孢他啶、氨曲南、环丙沙星在内的其余9种抗生素的耐药率均明显高于敏感株(P值均＜0．01)。结论对碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌对大多数常用抗生素呈更强的耐药性,且其多重耐药状况非常严重,治疗时宜参考药敏结果合理选用抗生素。     

临床分离铜绿假单胞菌耐药性分析与监控管理

目的回顾性分析临床分离的418株铜绿假单胞菌,观察其科室分布及耐药性特征,并对多重耐药铜绿假单胞菌采取有效控制措施。方法采用法国Vitek 2 compact全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行鉴定与药敏试验,参照CLSI 2012版标准判读结果,数据分析采用WHONE 5.6软件。结果418株铜绿假单胞菌主要来源于呼吸内科、重症监护病房、神经外科;标本以呼吸道痰液为主占78.72%;阿米卡星耐药率最低为4.79%,其次为头孢吡肟和头孢他啶,分别为25.36%和29.19%,其余抗菌药物耐药率均超过30%,其中氨曲南耐药率最高为50.72%。结论铜绿假单胞菌分离主要来自下呼吸道标本,其耐药性较高。临床应重视药敏试验并合理使用抗菌药物,同时加强铜绿假单胞菌的监控与感染管理。     

铜绿假单胞菌质粒介导的喹诺酮耐药机制研究

目的探讨铜绿假单胞菌对质粒介导喹诺酮类耐药（PMQR）机制,为控制其耐药性传播提供依据。方法筛选住院患者对环丙沙星耐药的69株铜绿假单胞菌,PCR筛选质粒介导的喹诺酮类耐药基因[qnr,aac（6''）-Ib-cr],阳性产物进行DNA测序,接合转移试验验证PMQR基因。结果69株受试株中,12株aac（6''）-Ib-cr基因阳性,经DNA测序、BLAST比对,3株携带aac（6''）-Ib-cr基因（含有Trp-102→Arg和Asp-179→Tyr突变）,另有3株为aac（6''）-Ib野生型;质粒接合转移试验结果阴性;未检出qnr基因。结论铜绿假单胞菌PMQR基因以aac（6''）-Ib-cr基因为主,未检出qnr基因,aac（6''）-Ib-cr基因介导低水平耐药。     

多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶相关耐药基因及氨基糖苷类修饰酶基因。方法采用MicroScan40微生物全自动鉴定系统微量肉汤稀释法测定菌株的耐药性。采用聚合酶链反应(PCR)方法检测β-内酰胺酶基因型及氨基糖苷类修饰酶基因型。结果 32株铜绿假单胞菌除对哌拉西林/他唑巴坦和替卡西林/克拉维酸耐药率分别为75.9%和93.1%外,对其余抗菌药物耐药率均为100%。氨基糖苷类修饰酶基因检出30株(93.7%),aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6)-Ⅰ、aac(6)-Ⅱ、ant(3)-Ⅰ和ant(2)-Ⅰ基因阳性率分别为9.3%、90.6%、12.5%、90.6%、90.6%和0,检出β-内酰胺酶基因28株(87.5%),TEM、DHA、OXA和IMP基因阳性率分别为62.5%、43.7、21.8%和3.1%,未检出VIM、SHV和CTX-M-9,检出OprD2基因缺失23株(71.8%)。结论广州地区多重耐药铜绿假单胞菌携带多种氨基糖苷类修饰酶基因和β-内酰胺酶基因。     

某院348株铜绿假单胞菌耐药性分析及多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因检测

目的研究该院检出的348 株铜绿假单胞菌（PAE）耐药性及多重耐药PAE 耐药基因检测。方法将血液科检出348 例PAE 菌株进行体外耐药监测,并对其中36 株多重耐药PAE 菌株进行耐药相关基因OprD2、VIM、GIM、SPM、IMP-1、TEM、VEB、PER、aac（3）-Ⅲ、aac（6）’-Ib-Cr 、TEM检测。结果多重耐药PAE 对妥布霉素、哌拉西林/ 他唑巴坦、美罗培南比较敏感,对其他临床常用抗生素均有明显的耐药性,PCR 基因分析结果显示, OprD2 和IMP-1 基因阳性率分别为97.22%和94.44%, aac（3）-Ⅲ和aac（6）’-Ib-Cr 阳性率分别为38.89%和27.78%,TEM 阳性率为75.00%, qnrA、qnrS和qnrD阳性率为50.00%、61.11%和47.22%,其他基因低于15.00%。结论PAE 耐药性较强,多重耐药PAE 耐药基因主要为OprD2 和IMP-1 基因。     

铜绿假单胞菌消毒剂磺胺耐药基因研究

目的 探讨铜绿假单胞菌（PA）消毒剂磺胺耐药基因存在状况。方法 对临床分离的96株铜绿假单胞菌采用PCR检测消毒剂磺胺耐药基因（qacE△1-sulⅠ）。结果 96株PAqacE△1-sulⅠ阳性42株（阳性率43．8％）。结论 铜绿假单胞菌qacE△l-sulⅠ携带率很高。