磷酸化MEK/ERK/核因子κB在寻常性银屑病皮损中高表达

目的 探讨MAPK信号转导通路中磷酸化MEK和ERK及核因子（NF）-κB 在寻常性银屑病发病中的作用。方法 采用免疫组化和Western印迹法检测30例寻常性银屑病皮损及15例正常人表皮中磷酸化MEK、ERK和NF-κB 的表达,并利用计算机图像采集与分析系统对免疫组化结果进行平均吸光度（A值）测定,并对免疫印迹测定结果进行灰度扫描、统计学处理。结果 免疫组化检测显示,寻常性银屑病皮损中磷酸化MEK、ERK和NF-κB的表达（A值分别为0.36 ± 0.03、0.36 ± 0.04和0.26 ± 0.04）明显高于正常人皮肤（A值分别为0.22 ± 0.02、0.18 ± 0.03和0.16 ± 0.03）,两组比较,P值均 < 0.01。Western印迹结果（两组比较,P值均 < 0.01）与免疫组化检测一致。结论 寻常性银屑病皮损中磷酸化MEK、ERK和NF-κB表达水平均增高,MAPK信号通路中上下游分子的异常激活可能参与了银屑病的发病。     

过氧化物酶增殖物激活受体β/δ在银屑病角质形成细胞中的表达

【摘要】 目的 探讨过氧化物酶增殖物激活受体β/δ（PPARβ/δ）在银屑病患者表皮角质形成细胞（KC）中的表达和调节因素。 方法 免疫组化方法检测PPARβ/δ在银屑病患者皮损及非皮损表皮中的表达。分离、培养银屑病患者非皮损区和皮损区的KC,以RT-PCR和Western印迹法分别检测银屑病患者皮损区和非皮损区KC中PPARβ/δ mRNA和蛋白质的表达水平。利用PPARβ/δ外源性激动剂GW501516及Ca2+刺激银屑病非皮损区KC,观察其对PPARβ/δ表达的调节影响。 结果 免疫组化显示,银屑病皮损区PPARβ/δ的表达强度显著高于正常对照组（t = 19.28,P < 0.01）和非皮损区（t = 23.26,P < 0.01）。银屑病皮损区PPARβ/δ mRNA和蛋白质的表达水平均高于正常对照组（P < 0.01）和非皮损区（P < 0.01）。10 ng/ml GW501516最大效能促进PPARβ/δ的表达（P < 0.01）;1.0 mmol/L Ca2+对KC中PPARβ/δ的表达促进效应最明显（P < 0.01）。 结论 PPARβ/δ在银屑病患者皮损区表达显著升高,GW501516 和Ca2+能够促进角质形成细胞PPARβ/δ表达水平。     

PI3K和磷酸化Akt在尖锐湿疣皮损中的表达

目的:检测PI3K/Akt信号转导通路中PI3K和磷酸化Akt在尖锐湿疣皮损中的表达.方法:采用免疫组化和蛋白印迹法检测30例尖锐湿疣皮损及15例正常对照者皮肤活检组织中PI3K和磷酸化Akt的表达,并利用计算机图像采集与分析系统对免疫组化结果进行平均吸光度(A值)测定和对免疫印迹测定结果进行灰度扫描.结果:尖锐湿疣皮损中PI3K和磷酸化Akt的表达明显高于正常皮肤.蛋白印迹结果与免疫组化检测一致(两组比较,均P＜ 0.01).结论:PI3K/Akt信号通路异常激活可能参与了尖锐湿疣的发病.     

银屑病皮损及正常人皮肤中Akt1,Akt2和Akt3的表达

目的探讨Akt三种亚型Akt1,Akt2和Akt3的表达在寻常性银屑病发病中的意义。方法采用免疫组化法检测30例寻常性银屑病皮损及15例正常皮肤中Akt1,Akt2和Akt3的表达,并利用计算机图像采集与分析系统对免疫组化结果进行平均光密度测定。结果免疫组化结果显示,与正常人表皮相比,寻常性银屑病皮损中Akt1(0.2170±0.0144)和Akt2(0.2157±0.0150)的表达差异无统计学意义(P>0.05),而Akt3(0.2990±0.0165)的表达却明显高于正常皮肤,差异有统计学意义(P<0.01)。结论寻常性银屑病皮损内Akt活性的升高可能与Akt3的表达增强有关。     

细胞外信号调节激酶在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 探讨细胞外信号调节激酶（ERK1/2）及其上游相关激酶表皮生长因子受体（EGFR）、下游作用底物激酶转录激活因子ETS样蛋白-1（ELK-1）在寻常性银屑病皮损中的表达、激活状况,探讨细胞外信号调节激酶通路与寻常性银屑病的关系。方法 用免疫组化及蛋白印迹的方法,检测磷酸化ERK1/2、EGFR、ELK-1在寻常性银屑病和正常人皮肤中的表达状况。结果 寻常性银屑病皮损中磷酸化ERK1/2、EGFR、ELK-1的表达（IOD值分别为269.85 ± 57.96、136.88 ± 30.33、237.61 ± 56.29）均高于正常人皮肤（分别为140.24 ± 24.42、110.66 ± 28.99和119.04 ± 21.99）（P均 < 0.05）。银屑病患者磷酸化EGFR与ERK1/2表达呈正相关（r = 0.57,P < 0.05）,ERK1/2与ELK-1表达亦呈正相关（r = 0.72,P < 0.05）。结论 磷酸化EGFR→ERK1/2→ELK-1这条信号通路的传导增强可能在寻常性银屑病的病理生理过程中起一定的作用。     

甘露糖结合凝集素在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 检测甘露糖结合凝集素（MBL）在寻常性银屑病患者皮损中的表达,初步探讨皮肤中MBL蛋白与银屑病发病的关系。 方法 采用免疫组化法和Western印迹检测30例进行期寻常性银屑病患者皮损、非皮损区皮肤（皮损周围外观正常皮肤）及30例健康人对照皮肤中MBL的表达。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析,组间资料比较采用t检验。 结果 免疫组化检测显示,银屑病皮损区MBL呈现阳性表达（相对表达量为0.636 7 ± 0.515 1）,非皮损区及健康对照皮肤中MBL表达弱或几乎无表达（分别为0.416 3 ± 0.160 1和0.381 6 ± 0.310 9）,银屑病皮损区较非皮损区和健康对照皮肤显著升高（t值分别为2.24和2.32,均P < 0.05）,非皮损区与健康对照皮肤MBL表达水平间比较差异无统计学意义（t = 1.51,P > 0.05）。Western印迹检测结果显示,银屑病皮损区、非皮损区及健康对照皮肤中均有MBL蛋白表达,相对表达量分别为0.273 1 ± 0.129 4、0.186 3 ± 0.193 1、0.149 2 ± 0.268 7,银屑病皮损区较非皮损区及健康对照皮肤显著增高（t值分别为2.05和2.28,均P < 0.05）,非皮损区与健康对照皮肤表达差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论 银屑病患者皮损区MBL蛋白高表达,可能与银屑病的发病存在一定关系。     

寻常性银屑病患者表皮中DNA甲基化转移酶2和3a mRNA的表达

目的 检测寻常性银屑病患者表皮中DNA甲基化转移酶（DNMT2和DNMT3a）mRNA表达。方法 利用实时定量PCR技术检测2009年3月至2010年12月来自中国医学科学院皮肤病医院皮肤科及宜兴市人民医院皮肤科门诊的46例寻常性银屑病患者皮损和非皮损表皮以及来自中国医学科学院皮肤病医院皮肤外科的28例健康对照表皮中DNMT2和DNMT3a mRNA的表达。结果 在银屑病患者皮损、非皮损和对照组表皮DNMT2 mRNA表达水平（2-ΔΔCt值）分别是0.62 ± 0.02、0.36 ± 0.05和0.15 ± 0.11,皮损组明显高于非皮损组（t = 6.23,P < 0.01）,非皮损组明显高于对照组（t = 7.33,P < 0.01）;DNMT3a mRNA表达水平（2-ΔΔCt值）分别是0.85 ± 0.03、0.43 ± 0.04和0.18 ± 0.09,皮损组明显高于非皮损组（t = 5.66,P < 0.01）,非皮损组明显高于对照组（t = 8.62,P < 0.01）。结论 寻常性银屑病患者表皮DNMT2和DNMT3a mRNA均异常高表达。     

磷酸化c-Jun氨基末端激酶和P38丝裂原活化蛋白激酶在寻常性银屑病皮损中的表达

目的 探讨磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和P38丝裂原活化蛋白激酶（p-P38MAPK）在寻常性银屑病皮损中的表达。 方法 收集30例确诊的寻常性银屑病患者皮损,同时收集30例健康人皮肤组织作为对照组。采用免疫组化及Western印迹法分别检测p-JNK和p-P38MAPK蛋白在寻常性银屑病皮损组织和正常人皮肤中的表达情况。 结果 免疫组化结果显示,寻常性银屑病皮损组织p-JNK和p-P38MAPK表达的平均吸光度（AOD）值分别为0.663 ± 0.016和0.436 ± 0.011,均明显高于对照组（0.333 ± 0.009和0.306 ± 0.010）,差异有统计学意义（t = 44.869、21.913,均P < 0.001）。Western印迹法同样显示,寻常性银屑病皮损p-JNK和p-P38MAPK蛋白相对表达量均显著高于对照组,差异均有统计学意义（t值分别为20.477和165.084,均P < 0.05）。结论 JNK和P38MAPK的活化可能参与了寻常性银屑病表皮细胞的过度增殖。     

银屑病及几种皮肤肿瘤皮损中PI3K的表达

目的 探讨PI3K亚单位P85及P110与银屑病发病的相关性。方法 采用免疫组化法检测寻常性银屑病、慢性湿疹、脂溢性角化、皮肤鳞状细胞癌、基底细胞癌皮损和正常人皮肤中P85和P110的表达，对免疫染色的强度进行吸光度测定，统计学处理采用方差分析。结果 上述各组表皮中，P85的表达差异无统计学意义，FP85 = 0.21，P > 0.05；P110的表达差异有统计学意义，FP110 = 35.64，P < 0.01。与各组比较，银屑病皮损表皮P110的表达均明显升高，差异均有统计学意义，其余各组间差异无统计学意义（P > 0.05）。各组皮损的浸润淋巴细胞中P85和P110的表达差异均有统计学意义，FP85 = 59.98，P < 0.01；FP110 = 323.23，P < 0.01；鳞状细胞癌组及银屑病组分别与其余各组比较，差异均有统计学意义；银屑病与鳞状细胞癌组相比，差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 P110表达的增强可能与角质形成细胞的增殖过速密切相关；而P110和P85的高表达是否与银屑病皮损内淋巴细胞的活化及增殖有关尚需进一步的研究。     

银屑病患者皮肤屏障功能受损的研究

目的 探讨银屑病患者皮肤屏障功能受损的实验依据,以指导临床辅助治疗银屑病。方法 60例银屑病患者运用无创性皮肤生理功能测试仪检测皮损角质层含水量、皮脂含量及经表皮水分流失（TEWL）。电镜观察皮损处细胞超微结构,同时运用免疫组化方法检测皮损处酸性神经酰胺酶的表达。结果 与正常皮肤比较,银屑病皮损角质层含水量降低（P < 0.01）,TEWL值增加（P < 0.01）,皮脂含量差异无统计学意义。电镜下,皮损颗粒层角质形成细胞中板层小体数量较正常对照组减少,分布紊乱,体积大小不等;免疫组化染色显示酸性神经酰胺酶表达明显减少。结论 银屑病皮肤屏障功能明显受损,因此,恢复皮肤屏障功能,加强保湿是银屑病重要的辅助治疗手段之一。     

窄谱中波紫外线对寻常性银屑病血管调节因子的作用机制研究

目的 探讨窄谱中波紫外线（NB-UVB）对寻常性银屑病患者皮损中微血管密度（MVD）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）以及血清中VEGF的影响。方法 采用葡聚糖聚合物标记免疫组化法对15例寻常性银屑病患者NB-UVB治疗前后的皮损标本中MVD以及VEGF、MMP-2的表达水平进行测定,采用ELISA法测定血清VEGF水平,以10份正常人皮肤标本和15份正常人血清作为对照;在NB-UVB治疗前后对银屑病皮损进行PASI评分。结果 寻常性银屑病患者治疗前皮损组织中MVD为20.52 ± 5.02（单位：个/400倍镜下）,明显高于治疗后（7.33 ± 1.24）和正常人对照组皮肤组织（4.26 ± 0.79）（F = 97.57,P < 0.05）,且治疗后PASI评分较治疗前显著降低（t = 13.35,P < 0.01）;治疗前血清中VEGF表达水平为307.55 ± 121.65 ng/L,明显高于治疗后（163.92 ± 95.57 ng/L）和正常人对照组（139.78 ± 79.06 ng/L）（F = 9.903,P < 0.05）,而治疗后VEGF表达水平与正常人对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05 ）;银屑病皮损中MMP-2阳性表达在治疗前、后以及和正常人对照组之间的差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。银屑病患者PASI评分、MVD、皮损及血清中的VEGF表达四者互为正相关关系（P < 0.05）;皮损中的MVD、VEGF表达、MMP-2表达互为正相关关系（P < 0.05）;皮损中的MMP-2与PASI评分、血清中VEGF表达无相关关系（P ＞ 0.05）。结论 NB-UVB可以降低寻常性银屑病患者血清中VEGF的表达水平及其皮损中真皮浅层微血管增生状态;组织中VEGF、MMP-2可能共同参与了微血管的增生过程,但MMP-2没有参与NB-UVB对寻常性银屑病的治疗机制。     

Hyper-induction of skin ornithine decarboxylase activity in psoriatic patients

Ornithine decarboxylase activity was measured in skin from 14 normal and 24 psoriatic subjects (with stable plaque type psoriasis vulgaris) using punch biopsies carried out immediately (0 h) and 6 h after stimulation by cellotape stripping. At 0 h, no significant difference was found between normal and involved or uninvolved psoriatic skin, but a significant increase was measured 6 h after tape stripping. This increase was significantly greater in uninvolved and involved psoriatic skin compared with normal skin. Preliminary results indicated that these changes were localized in the epidermis.     

comparison between DNA synthesis and mitosis in uninvolved and involved psoriatic epidermis and normal epidermis

Biopsies have been taken from the involved and uninvolved skin of eleven patients with psoriasis and the normal skin of six patients without psoriasis, 1 h after in vivo injection of 10 μCi of ³H-thymidine. Mitotic counts and counts of labelled cells (synesizing DNA) after autoradiography have been carried out. The ratio of mitoses to labelled cells was 1: 25 in clinical psoriasis, 1: 190 in uninvolved psoriatic epidermis and 1: 450 in normal epidermis. The number of labelled cells in clinical psoriasis was approximately 12 times greater than normal epidermis. However, the number of labelled cells in uninvolved psoriatic epidermis was approximately twice that of normal. These results imply an alteration in the components of the cell cycle in both involved and uninvolved psoriatic epidermis.     

CD69+T细胞在银屑病皮损中的表达及其临床意义

目的 探讨银屑病患者皮肤CD69+T细胞的表达及其与疾病活动性的关系.方法 免疫组化检测31例银屑病患者皮损和非皮损中CD69+T细胞在皮肤中的表达,与6例健康人进行对照.结果 CD69+T细胞主要分布于皮肤真皮.31例银屑病患者皮损和非皮损的真皮中,CD69+T细胞分别为(35.16±12.67)％和(8.70±3.29)％,皮损明显高于非皮损(t=12.5,P＜0.01).6例健康人对照皮肤中CD69+T细胞(8.71±2.55)％,明显低于银屑病皮损(t=5.03,P＜ 0.01),与非皮损相比,差异无统计学意义(t=0.05,P＞ 0.05).20例急性期与1 1例稳定期银屑病患者皮损中CD69+T细胞分别为(40.89±10.31)％和(24.46±9.49)％,急性期明显高于稳定期(t=0.36,P＜ 0.01).结论 银屑病患者皮损中CD69+T细胞表达增高,与疾病的活动性有关.     

SAg作用的银屑病T细胞对表皮c-myc bcl-2及P53蛋白的影响

目的探讨链球菌超抗原与银屑病的关系,揭示银屑病患者外周血T细胞的特殊活性。方法将银屑病患者和正常人外周血T细胞及链球菌超抗原(SAg)刺激的银屑病和正常人T细胞分别与皮肤组织共同培养,免疫组化法检测不同T细胞对表皮cmyc,bcl2及P53蛋白的影响。结果正常人皮肤、银屑病患者未受累皮肤受银屑病患者T细胞作用后,表皮cmyc,bcl2及P53蛋白与正常人T细胞作用组比较有显著性差异(P均<0.05);受SAg刺激的银屑病患者T细胞对表皮cmyc,bcl2及P53蛋白的影响与未受SAg刺激组比较差异无显著性(P均>0.05),SAg非特异性活化的正常人T细胞对表皮cmyc,bcl2及P53蛋白不能产生显著影响(P均>0.05)。结论银屑病患者T细胞在外周血已处于活化状态,其活性与链球菌超抗原多克隆激活的正常人T细胞在功能上有本质区别,这一特殊的活性,可能在诱导表皮动力学紊乱及银屑病发病中发挥重要的作用。     

窄谱中波紫外线治疗前后银屑病皮损中CD1a^＋DC、Ki-67的表达

目的探讨窄谱中波紫外线（NB—UVB）治疗对银屑病患者皮损中CD1a^＋树突细胞（CD1a^＋DC）及Ki-67水平的影响。方法采用免疫组化法分析寻常性银屑病患者NB—UVB治疗前后皮损中及非皮损中CD1a^＋DC及Ki-67的表达。采用银屑病皮损面积和严重性指数（PASI）进行病情严重程度评分。结果27例银屑病患者中,治疗前皮损中CD1a^＋DC及Ki-67表达水平（15±4;53±12）高于非皮损（9±3;22±6）及治疗后患者皮损的表达量（9±3;25±1）（P〈0．05）。银屑病皮损的严重程度PASI评分与Ki-67表达相关（r=0．29,P〈0．05）。银屑病皮损的严重程度PASI评分与CD1a抗原的表达量之间无相关性（r=-0．27,P〉0．05）。结论NB—UVB可以通过调节皮肤免疫系统达到治疗目的。银屑病患者皮损中Ki-67表达水平与银屑病皮损的严重程度PASI评分有关。     

Toll样受体2、4 和9在皮肤结核皮损中的表达

目的 研究Toll样受体2、4和9 （TLR-2、TLR-4、TLR-9）在寻常狼疮和疣状皮肤结核皮损中的表达,探讨其在皮肤结核发病中的作用。方法 经临床与病理确诊的皮肤结核（包括寻常狼疮和疣状皮肤结核）患者皮损标本18份,斑块状银屑病皮损15份为阳性对照,色素痣边缘正常皮肤10份为阴性对照。用免疫组化法观察TLR-2、TLR-4、TLR-9的表达情况。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,组间比较行t检验。结果 TLR-2在正常皮肤表达于除基底层外的表皮全层,而在皮肤结核和银屑病皮损表达于表皮的中上层,3组的表达强度均为高表达（A值分别为0.28 ± 0.03、0.25 ± 0.04和0.25 ± 0.05）,3组差异无统计学意义（P > 0.05）。TLR-4在正常皮肤和银屑病呈低或无表达（A值分别为0.07 ± 0.09和0.02 ± 0.05）,而皮肤结核（0.16 ± 0.07）呈低表达,其表达强度高于正常皮肤（t = 2.58,P ＜ 0.05）和银屑病皮损（t = 6.24,P ＜ 0.01）。TLR-9在正常皮肤和皮肤结核表达于表皮全层、附属器及血管壁,而皮肤结核的表达强度（A值为0.25 ± 0.05）高于正常皮肤（0.19 ± 0.05）,两组比较,t = 2.88,P ＜ 0.05。结论 TLR-2、TLR-4和TLR-9在皮肤结核皮损中均存在表达,其中TLR-4和TLR-9的表达高于正常皮肤,提示其在皮肤结核的免疫应答中可能起一定的作用。     

The keratin polypeptides of psoriatic epidermis

The polyacrylamide SDS electrophoretic pattern of protein extracted from the stratum corneum obtained by scraping the surface of involved skin of patients with psoriasis was different from that of uninvolved skin and normal controls. The pattern from superficial scales was similar to that of whole stratum corneum in the case of involved psoriatic epidermis but different in uninvolved and normal epidermis. These data indicate that the changes which are observed in the structural proteins during normal keratinization are not seen in involved psoriatic epidermis. In addition, the relative proportion of keratin polypeptides was different in involved psoriatic epidermis compared to normal skin. That these changes are not specific for psoriasis was shown by finding similar electrophoretic patterns with stratum corneum proteins from patients with other keratinizing disorders.