应用M-FISH和CGH技术研究肺腺癌基因组变化

[目的]分析肺腺癌中染色体异常变化和基因改变，探讨肺腺癌细胞遗传物质的改变与肺腺癌发生发展之间的关系。[方法]应用M-FISH技术，检测3株肺腺癌细胞株的染色体数目及结构畸变情况．应用CCH技术对50例肺腺癌组织提取的全基因组DNA进行检测，以了解肺腺癌全基因组的变化。[结果]M-FISH结果显示肺腺癌细胞中存在许多复杂的染色体重排，5、6、11、12、17号染色体最频繁参与染色体间的易位。CGH发现，在50例肺腺癌标本基因组中，最常见的扩增区域是1q、2p、3q、5p、5q、7p、8q、11q、12q、14q、16p、17q、19q、20q、21q、22q。最常见的缺失区域是2q、3p、4p、5q、7q、8p、9p、13q、14q、17p。其中最常见的扩增位点是16p13，阳性率达50％，最常见的缺失位点是8p22，阳性率达38％。[结论]M-FISH和CGH技术是研究肺腺癌基因组变化的强有力工具，该实验中发现的基因可能代表了与肺腺癌的病理、诊断相关的候选基因。     

非小细胞肺癌P63基因的表达与3q27-q29变化的关系研究

目的　研究p63基因在非小细胞肺癌中的蛋白表达水平及与 3号染色体长臂 3 q2 7 3 q2 9区域改变的关系。方法　采用组织芯片技术构建 12 2例原发性非小细胞肺癌石蜡包埋标本组织芯片 ,并应用免疫组织化学方法检测 p63基因蛋白表达情况。应用比较基因组杂交 (CGH)技术分析 70例原发性肺鳞癌和肺腺癌标本染色体的改变。同时分析p63基因的蛋白表达与 3号染色体长臂末端改变的关系。结果　 12 2例非小细胞肺癌 p63免疫组化染色结果显示 :5 9例鳞癌中 5 1例 ( 86.44 % ) p63免疫组化染色为阳性 ;3例大细胞肺癌中 2例 ( 66.66% )为阳性 ;60例腺癌仅有 1例 ( 1.67% )为阳性。p63蛋白的阳性表达率与患者的年龄、性别、肿瘤的分级、肿瘤的转移以及预后生存率无关 (P >0 .0 5 )。 70例非小细胞肺癌CGH分析结果发现有3 2例 3 q2 7 q2 9区域出现DNA扩增 ,3 0例鳞癌中 2 4例出现 3 q2 7 q2 9区域DNA拷贝数目的增加 ,40例腺癌仅 8例发现 3q2 7 q2 9区域DNA获得。p63免疫组化阳性率与 3q2 7 q2 9区域的改变比较分析结果显示 :2 4例鳞癌 p63阳性者中 ,2 3例 ( 95 .83 % ) 3 q2 7 q2 9区域有显著的获得 ,1例 p63基因蛋白表达呈阳性的腺癌患者的 3 q2 7 q2 9区域有DNA拷贝数目的增加。 结论　研究结果提示 p63免疫组化阳性     

前列腺肿瘤高密度allelotype初步分析

目的：探讨原发性前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤（PIN）22条常染色体等位基因杂合性缺失及其意义采用显微切割技术提取前列腺癌及高级别前列腺上皮内肿瘤各10例的DNA，然后采用PCR及微卫星多态性技术，对22条常染体上的382个微卫星标志位点进行高密度allelotype分析。结果：10例原发性前列腺癌在染色体1p,1q,2p,2q,6q,8p,8q,10q,11q,13q,16p,17p等部位存在高频杂合性缺失（LOH），前列腺上皮内肿瘤则在染色体2p,2q,6q,8p,10q,1q等区易检测到LOH.结论：前列腺癌患者2q14,8p12-21,10q23-24,13q14等区域存在高频的LOH，位于这些区域的抑癌基因在前列腺癌发生，发展过程中起着重要作用。     

采用比较基因组杂交方法分析原发性食管癌染色体异常

背景与目的:有研究表明原发性食管癌常有染色体的改变,包括染色体基因组异常扩增和缺失.比较基因组杂交技术可以显示这些染色体的异常变化.本实验采用比较基因组杂交技术研究和分析原发性食管癌染色体基因组的变化特点及其与预后的关系.方法:采用比较基因组杂交技术检测16例食管癌组织中染色体的异常改变,并分析染色体异常与预后的关系.研究的病例中7例食管癌术后2年内死亡(对照组),9例术后生存3年以上(生存组).结果:食管癌患者中多数染色体基因组发生改变,最常见的染色体基因组高扩增频率发生在1q/p,2q/p,3q,5q/p,8q/p,9q/p,11q/p,17和20q/p染色体区段上,在染色体1q/p,4p,9p,18q和xp中常见染色体基因缺失.染色体7q/p和19扩增频率和染色体4q/p和18q缺失频率,生存组与对照组间存在显著性差异.结论:食管癌患者染色体区段基因易发生异常扩增和缺失,生存组与对照组存在明显差异.     

p53基因缺失和248位密码子点突变与肺癌发生和预后间关系的研究

以野生型p53cDNA片段作探针，采用DNA分子印迹杂交（Southernblot）技术检测20例原发性肺癌和10例肺良性病变p53基因缺失与重排。肺癌组阳性率为30％；肺良性病变组均为阴性。同时采用聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）检测20例原发性肺癌，2例肺转移癌以及它们相应的非癌肺组织p53基因248位密码子点突变。结果发现，4例原发性肺癌和2例肺转移癌有p53基因248位密码子点突变，非癌肺组织均为阴性。P53基因缺失和突变与肿瘤大小、分期、非小细胞肺癌病理分型无关（P＞0．05），与肿瘤转移有关（P＜0．05）。提示：p53基因缺失和突变与肺癌的发生和预后密切相关。     

儿童脑肿瘤致癌基因的扩增

脑肿瘤是儿童最常见的实质性肿瘤。儿童脑肿瘤的细胞遗传学和分子生物学研究通常只涉及髓母细胞瘤。髓母细胞瘤中染色体数量改变较少,但结构异常较为常见。其异常除了非相互易位及缺失外,还包括i(17q),t(8;11),22p+,11q+等。作者发现原发性及细胞系的髓母细胞瘤均呈有双细微染色体。由此说明上述肿瘤均有基因扩增。     

应用比较基因组杂交技术分析肺癌染色体异常

背景与目的:肺癌的发生是一个多基因、多阶段、多步骤的复杂生物学过程.研究肿瘤发生发展过程中的基因异常改变是肿瘤发生机制研究的一个热点.本研究应用比较基因组杂交技术分析肺癌的染色体异常,探讨染色体异常与肺癌不同病理类型和临床特征之间的关系.方法:收集胸外科2005年10月-2006年9月手术切除的新鲜肺癌标本30例,其中小细胞肺癌、腺癌和鳞癌各10例,应用比较基因组杂交技术(CGH)分析患者肺癌组织中全基因组的变化.结果:30例肺癌标本中CGH都发现有染色体异常改变,不同病理类型肺癌在1p11-p22、5p11-p14、16p11-p12、19q13、19p13、20p12和21q21等区域均有高频的扩增,在5q、6p24-pter、9p31-qter、13q21-qter和14q21-qter等区域均有高频缺失.同时不同病理类型肺癌的染色体异常表现也有一定区别.结论:遗传物质的异常改变在肺癌细胞中普遍存在,遗传物质异常是肺癌发生和发展的基础.不同病理类型肺癌在一些染色体区域的异常有所不同,这可以为三者的鉴别诊断提供一种遗传学标志.随着恶性肿瘤病程的进展,染色体畸变的复杂性也明显的提高.不同的致癌因素(如吸烟)可导致不同的染色体异常.     

原发性肺鳞状细胞癌染色体不平衡及其与吸烟的关系

背景与目的:染色体不平衡在肺癌发生中具有重要作用,并可能受不同致癌物的影响。本研究旨在探讨原发性肺鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)染色体不平衡特征及吸烟对其的影响。方法:采用比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)技术对39例原发性肺SCC的染色体扩增和缺失进行检测,并分析吸烟与肺SCC染色体不平衡之间的关系。结果:肺SCC染色体扩增常见于3q(74.4%,29/39),5p(66.7%,26/39),1q(43.6%,17/39),8q(41%,16/39),12p(42.6%,18/39),2p(38.5%,15/39)、18p(33.3%,13/39)等;最小扩增区位于3q26.2鄄29、5p14.3鄄15.3、1q41鄄44、8q23和12p13;38.5%和15.4%的病例发生3q和5p高拷贝扩增。染色体缺失主要见于3p(56.4%,22/39),5q(53.8%,21/39),13q(51.3%,20/39),8p(46.1%,18/39),4p(43.6%,17/39)、4q(43.6%,17/39)、1p(41%,16/39)、2q(38.5%,15/39),9q(35.9%,14/39)、13p(35.9%,14/39)、16p(35.9%,14/39),6p(33%,13/39)、6q(30.7%,12/39)等;最小缺失区位于3p14.2鄄21.2(51.3%,20/39)、5q15鄄22(51.3%,20/39)、13q14.2鄄21.2(48.7%,19/39)、8p21.1鄄22(44%,17/39)、2q32(36%,14/39)和16p12鄄13.1(33%,13/39)。与非吸烟患者相比,吸烟患者3q和8q扩增率显著增加(P<0.05);两者共同的染色体     

应用比较基因组杂交技术研究外阴鳞癌组织的遗传变异

背景与目的:外阴鳞状细胞癌约占女性外阴恶性肿瘤的80%～90%.但有关其遗传学研究却不多,本研究采用比较基因组杂交(comparative genomichybridization,CGH)技术分析外阴鳞癌组织的遗传变异,了解其遗传改变的特征.以期发现外阴鳞癌相关基因.方法:应用CGH技术检测21例外阴鳞癌基因组的不平衡性即其DNA的扩增或丢失.结果:外阴鳞癌常见的扩增染色体是3q,8q,12q.常见的丢失染色体是4p和3p.结论:外阴鳞癌细胞中存在多条染色体拷贝数的改变,由此引起相应癌基因的扩增和抑癌基因的丢失可能参与了外阴鳞癌的发生、发展.     

从门静脉癌栓建立肝癌细胞株及对其细胞遗传特征的研究

背景和目的：肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC)预后差的原因是术后复发率高和早期过门静脉转移。本研究建立门静脉癌栓肝癌细胞株,并探讨其分子细胞遗传特征。方法：从HCC患者门脉癌栓中获得取肝癌细胞进行细胞培养,对培养成功的细胞（H4M）进行染色体G带染色后分析其核型和对比基因组杂交（comparative genomic hybridization,CGH)结果;用差异PCR检测周期素D1基因。结果：H4M细胞核型为超3倍体,染色体数为71－78,其中有一条标记染色体含有一长的均染区（hsr)。H4M主要的细胞遗传学改变为8p缺失和11q13高拷贝数扩增。周期素D1基因CCND1明显扩增。结论：染色体8p丢失和11q13高拷贝数扩增与H4M细胞的转移特性相关。周期素D1基因CCND1扩增可能是染色体11q13扩增的原因。