尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡Caspase信号途径的影响

目的探讨尼莫地平(NMDP)对阿糖胞苷(Ara-c)诱导HL-60细胞凋亡机制的影响。方法取对数生长期HL-60细胞,分为未加任何药物的HL-60细胞组(对照组)、NMDP(0.001～0.100g/L)组、Ara-c(0.005～0.500g/L)组、NMDP+Ara-c组,各组HL-60细胞均处理24h。采用ATP化学发光法检测细胞增殖抑制率,AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡,化学发光法检测各组细胞Caspase 8活性。结果与对照组比较,不同浓度NMDP组及Ara-c组细胞增殖抑制率差异均有显著性(F=12 231.563、6 404.210,P<0.01);当Ara-c浓度为0.010g/L、NMDP浓度为0.050g/L时,细胞增殖抑制率最高,差异有显著性(F=916.836,P<0.01)。当Ara-c浓度为0.010g/L、NMDP浓度为0.050g/L时,Ara-c组及NMDP+Ara-c组细胞凋亡率明显高于对照组、NMDP组,以NMDP+Ara-c组凋亡率为最高(F=148.02,P<0.01)。与对照组及NMDP组相比,Ara-c组与NMDP+Ara-c组Caspase 8活性均明显升高,以NMDP+Ara-c组增高最显著(F=732.84,P<0.01)。结论 NMDP能增强Ara-c诱导的HL-60细胞凋亡,其机制可能与增强Caspase 8活性有关。     

阿糖胞苷对HL60细胞凋亡及其Bcl-2蛋白表达的影响

目的　探讨阿糖胞苷对白血病细胞的作用及其机制。方法　以人急性早幼粒白血病细胞HL6 0为淋巴细胞 ,分别应用HE染色和透射电镜观察Ara C对HL6 0细胞形态学的影响及其超微结构的变化 ;应用流式细胞术及免疫细胞化学研究Ara C对细胞凋亡和Bcl 2蛋白表达的变化。结果　细胞形态不规则 ,核深染 ,染色质聚边等多种形态改变。电镜下可见典型的凋亡特征。流式细胞仪分析结果显示 ,细胞凋亡率随药物浓度增加和作用时间延长而增加 ,Bcl 2蛋白的表达则下降。结论　Ara C能诱导HL6 0细胞凋亡 ;下调Bcl 2蛋白的表达 ,这可能是Ara C诱导细胞凋亡的机制之一。     

RNA干扰Survivin基因对Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响

目的:研究RNA干涉Survivin基因表达对人宫颈癌Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:将Sur-vivin SiRNA片段通过脂质体的介导转染宫颈癌Hela细胞系;RT-PCR检测Hela细胞中Survivin mRNA的表达,Western Blot检测Survivin蛋白表达;确定转染成功使干扰组细胞Survivin表达下调后,以流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;细胞计数后绘制生长曲线观察细胞增殖能力变化;MTT法检测细胞对抗肿瘤药物的敏感性变化.结果:与对照组相比,两个Survivin基因干扰组的mRNA和蛋白表达抑制率分别为55%,60%和42%,55%,表达均下降(P<0.05);细胞凋亡率分别为19%和22%,较对照组高(P<0.05);生长曲线显示干扰组的细胞增殖能力下降;同一剂量药物作用下,各组细胞对抗肿瘤药物的敏感性均有提高,其中NVB组和PDD组有统计学意义(P<0.05).结论:Survivin SiRNA片段转染进入Hela细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达水平均下降,Hela细胞的凋亡率增加,对抗肿瘤药物的敏感性增加.     

小剂量阿糖胞苷诱导HL-60细胞分化的作用

目的观察小剂量阿糖胞苷对HL 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法阿糖胞苷 (10 8M)作用HL 6 0细胞 2 6天 ,观察细胞生长 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3、P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRNA表达水平的改变。结果小剂量阿糖胞苷可诱导HL 6 0细胞向单核 /巨噬细胞分化 ,抑制HL 6 0细胞的增殖 ,使细胞停滞于G1期 ,P5 3,P2 1蛋白和P5 3mRNA表达明显增强。结论小剂量阿糖胞苷对HL 6 0细胞具增殖抑制和诱导分化作用 ,该作用与G1期阻滞及P5 3,P2 1表达增高有关。     

GM-CSF与阿糖胞苷、高三尖杉酯碱联合诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

为了研究粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对化疗药物诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的影响，运用吖啶橙（ＡＯ）／溴乙锭（ＥＢ）染色法和ＤＮＡ电泳法检测了ＧＭ－ＣＳＦ对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的影响。结果提示同步作用时对Ａｒａ－Ｃ／ＨＨＴ诱导的细胞凋亡无影响，但在非同步时（前或后）对Ａｒａ－Ｃ／ＨＨＴ诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡有抑制作用。说明在化疗时运用ＧＭ－ＣＳＦ须选择适合的时间     

小剂量阿糖胞苷与重组人白血病抑制因子联合诱导HL-60细胞凋亡的作用

白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一类具有广泛生物学活性的细胞因子,对胚胎发育、神经细胞再生、关节软骨代谢、肿瘤细胞增殖等方面均有影响[1-3].阿糖胞苷(Cytosinearabinoside,Ara-c)是治疗白血病的重要药物.有研究认为,化疗药物是否能够有效地诱导白血病细胞凋亡是判断急性髓系白血病(AML)患者化疗敏感性的重要指标[4].资料显示,小剂量Ara-c及rh-LIF单用均可诱导细胞凋亡[5,6].最近,小剂量Ara-c与其它药物联合治疗白血病获得较好疗效[7,8].本文报道rh-LIF和Ara-c联合诱导HL-60凋亡的作用.     

靶向bcl-2基因的shRNA对肝星状细胞凋亡的影响

目的研究短发夹RNA(shRNA)重组载体介导抑制大鼠肝星状细胞(HSCs)bcl-2基因的表达,观察其对HSCs凋亡的影响。方法重组质粒载体pGPU6-GFP-shRNA由脂质体介导转染HSC-T6细胞株。荧光定量PCR和Western blotting鉴定bcl-2表达;CCK-8法观察质粒转染对HSCs生长和增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态学改变;流式细胞术及caspase-3和caspase-9酶活性检测分析转染后细胞凋亡情况。结果pGPU6-GFP-shRNA能抑制bcl-2 mRNA和蛋白表达;转染后HSC-T6体外生长明显受到抑制;转染后72 h时细胞凋亡率为33.34%,caspase-3和caspase-9酶活性显著增高。结论shRNA重组载体pGPU6-GFP-shRNA能有效地抑制HSC-T6中bcl-2的表达,抑制细胞生长并促进凋亡。实验为进一步探索肝纤维化基因治疗提供了实验依据。     

靶向bcl-2基因的shRNA对肝星状细胞凋亡的影响

目的 研究短发夹RNA(shRNA)重组载体介导抑制大鼠肝星状细胞(HSCs)bcl-2基因的表达,观察其对HSCs凋亡的影响.方法 重组质粒载体pGPU6-GFP-shRNA由脂质体介导转染HSC-T6细胞株.荧光定量PCR和Western blotting鉴定bcl-2表达;CCK-8法观察质粒转染对HSCa生长和增殖的影响;Hoechst 33258染色观察细胞形态学改变;流式细胞术及caspase-3和caspase-9酶活性检测分析转染后细胞凋亡情况.结果 pGPU6-GFP-shRNA能抑制bcl-2 mRNA和蛋白表达;转染后HSC-T6体外生长明显受到抑制;转染后72 h时细胞凋亡率为33.34%,caspase-3和caspase-9酶活性显著增高.结论 shRNA重组载体pGPU6-GFP-shRNA能有效地抑制HSC-T6中bcl-2的表达,抑制细胞生长并促进凋亡.实验为进一步探索肝纤维化基因治疗提供了实验依据.     

AsI_3-Tu与RNA诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的探讨新型砷剂配合物碘化砷-硫脲(AsI3-Tu)与RNA联用对HL-60细胞凋亡的影响。方法应用四唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖,倒置显微镜观察细胞形态学变化、凯氏定氮法测定细胞蛋白质的含量、流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果①1-16/μmol/LAsI3-Tu对HL-60细胞增殖均有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。②RNA能增强AsI3-Tu对HL-60细胞增殖的抑制作用。结论AsI3-Tu能有效诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡,RNA与AsI3-Tu联合应用能增强AsI3-Tu的作用。     

干扰素-ε联合阿糖胞苷诱导K562细胞凋亡的研究

目的：研究干扰素（IFN-ε）联合小剂量阿糖胞苷（Ara—C）对K562细胞的诱导凋亡作用。方法：IFN-ε、Ara—C单独和联合作用K562细胞72h后,用流式细胞术观察细胞凋亡水平,RT—PCR检测不同实验组Survivin基因的表达情况。结果：IFN-ε和Ara-C单独和联合应用K562细胞72h后,单独用药组和联合用药组均能促进细胞凋亡并下调Survivin基因的表达,且随着浓度的增加细胞凋亡、Survivin表达水平亦降低（P〈0．05）。两药联合后效果更加明显（P〈0．01）。结论：IFN-ε与Ara—C单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡,且存在剂量依赖性;通过SurvivinmRNA的表达下调可能是其诱导凋亡的机制。Ara—C可增强IFN-ε对K562细胞的杀伤作用。     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

Effect of Concurrent Use of rh-IL-3 and rh-GM-CSFon Apoptosis of HL-60 Cells Induced by Ara-C

Accordingtotherecentstudy,thechemotherapeuticagentswhichhaveeffectsondifferentlevels0fnucleicacidmetabolismcaninduceapopt0siswhichoc-curredinacuteleukemiccells.Thefinalef-fectofchemotherapeutantdepends0ntwofactors,thegenetoxicity0fdrugsandin-duction0fap0pt0sis.Ara-Cisachem0thera-peutantwh1chaffectstheSphaseincellcy-c1e.ItsuppressesDNAp0lymeraseandnu-cleoside-diph0phate-reductase.Italsoper-meatesam0nggen0t0xicityofDNAandkillstheleukemicceIls.Thehemopoieticgrowthfactors,namelyrh-IL-3andrh-…     

人VIGILIN的shRNA真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞周期影响的初探

目的构建靶向人高密度脂蛋白结合蛋白(VIGILIN)的shRNA真核表达载体,并初步探索VIGILIN与人肝癌细胞系HepG2细胞周期是否有关联。方法构建人VIGILIN的shRNA重组质粒,并将重组质粒pSIREN-VIG转染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western-blot检测HepG2细胞VIGILIN mRNA和蛋白的表达,并用流式细胞术检测细胞周期是否有所改变。结果1HepG2细胞转染pSIREN-VIG后,VIGILIN的表达被特异、有效地抑制。转染48h后,VIGILIN的表达从mRNA和蛋白的水平都有明显的减少;2VIGILIN表达抑制后,G2/M期细胞所占比例增加:相对于三个对照组(未转染组2.4%,脂质体转染组4.9%和转染pSIREN-GFP组6.5%),实验组(转染pSIREN-VIG组)G2/M期细胞增加到9.4%。结论我们成功的构建了能特异、有效的抑制人VIGILIN表达的shRNA表达质粒,人VIGILIN能够影响到细胞周期的正常运行,导致G2/M期阻滞。     

特异性shRNA干扰下调骨桥蛋白表达增强宫颈癌HeLa细胞对化疗药物的敏感性

目的 探讨短发卡RNA(shRNA)干扰沉默骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因对宫颈癌细胞株HeLa化疗敏感性的影响及其可能机制。方法 OPN shRNA真核表达质粒pGCsi3.0在脂质体介导下转染HeLa细胞(shOPN组),以转染空载质粒的细胞(shNon组)和未转染细胞(Con组)作为对照。分别用0、0.5、1、2 μg/mL顺铂和0、50、100、500 nmol/L紫杉醇处理各组细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡。蛋白质印迹分析检测下调OPN表达后细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bcl-x_L、Bcl-2和Bax表达的变化。结果 2 μg/mL顺铂处理后shOPN组细胞凋亡率为(44.53±2.78)%,与shNon组\[(15.34±2.18)%\]和Con组\[(15.37±1.03)%\]比较差异有统计学意义(P<0.05)。500 nmol/L紫杉醇处理后shOPN组细胞凋亡率为(51.46±1.49)%,与shNon组\[(19.16±1.87)%\]和Con组\[(17.03±2.37)%\]比较差异有统计学意义(P<0.05)。下调OPN表达后顺铂对cleaved caspase-3的活化作用增强(P<0.01),同时抗凋亡蛋白Bcl-x_L、Bcl-2的表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调。结论 OPN沉默后可通过促进宫颈癌HeLa细胞的凋亡进而增强细胞对化疗药物的敏感性,OPN的RNA干扰可能成为一种新的治疗策略应用于宫颈癌的新辅助化疗。     

铁剥夺对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁剥夺诱导HL 60细胞及对化疗药物诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :HL 60细胞与不同浓度的铁螯合剂 去铁胺 (DFO)、DFO加化疗药物、化疗药物、DFO加化疗药物及三氯化铁、三氯化铁共同培养 6h、12h、2 4h、48h。通过测定细胞活力 ,观察细胞形态学变化 ,应用流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡 ;通过亲和免疫组化方法检测c myc基因表达 ,从而确定DFO及DFO与化疗药物联合应用对HL 60细胞的作用。结果 :DFO单用可降低HL 60细胞活力 ,抑制HL 60细胞增殖 ,诱导HL 60凋亡 ,并可使c myc基因表达增加 ,其作用强度随培养时间延长及DFO浓度增加而增加 ;DFO与化疗药物联合时 ,可增加化疗药物HL 60细胞凋亡的作用 ,该作用可被等摩尔的三氯化铁抵消。结论 :铁剥夺可影响HL 60细胞DNA的合成 ,诱导其凋亡 ,并提高HL 60细胞对化疗药物的敏感性。因此 ,铁剥夺可作为临床上白血病治疗或辅助治疗的方法之一 ,不适当补铁或升高血红蛋白将影响化疗疗效     

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法：将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组（终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1）,对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10 μmol•L^-1）,计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1处理1~4 d 的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2~72 h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0 μmol•L^-1处理48和72 h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2 h后（P<0.01）。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48 h后,G₀/G₁期细胞百分比明显上升（P<0.05）,S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加（P<0.01）。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用（G₀/G₁期细胞56.11% ,S期细胞37.12%）。结论：氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡₀作用可能是通过甲羟戊酸途径介 导的。     

氟伐他汀对HL-60细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：研究氟伐他汀（Flu）对人早幼粒细胞白血病HL-60细胞（HL-60细胞）凋亡的诱导作用及可能的机制,为其临床应用提供理论依据。方法：体外培养的HL-60细胞分为空白对照组、阳性对照组［全反式维甲酸（ATRA）,10  μmol·L^-1］、Flu组（20  μmol·L^-1）和Flu（20  μmol·L^-1）加［甲羟戊酸（Mev）,100  μmol·L^-1］组。HL-60细胞被处理后,应用ACETM分析系统检测caspase-3活性以确定细胞凋亡,Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪分析细胞凋亡,DNA凝胶电泳评价DNA碎片阶梯状条带及透射电镜观察细胞的超微改变。结果：处理24 h后,Flu组HL-60细胞caspase-3活性（A405,30.68±1.57）显著高于对照组（12.05±2.15,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞caspase-3活性明显降低（14.62±1.36）,接近对照组细胞的水平（P>0.05）。Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞仪检测
,与对照组比较,Flu组HL-60细胞凋亡率明显增加（4.24%  vs  10.76%,P<0.01）,Flu加Mev组HL-60细胞凋亡率降低到5.11%,与对照组细胞凋亡率(4.24%)比较差异无显著性（P>0.05）。处理72 h后Flu组HL-60细胞在琼脂糖凝胶电泳图上可观察到DNA碎片梯状条带。透射电镜观察显示：Flu组HL-60细胞胞体缩小,胞质浓缩,核染色质凝聚,呈块状聚集于核膜内侧,胞膜及细胞器完好。结论：Flu能诱导HL-60细胞凋亡,这种作用是Mev途径依赖的,提示抑制Mev途径可能是Flu诱导HL-60细胞凋亡的分子机制之一。     

Survivin基因RNAi真核表达载体对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的 构建Survivin的shRNA表达质粒并将其导入白血病细胞株HL-60细胞以探讨PNA干扰对HL-60细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计、合成两对针对survivin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的裁体质粒pSINsi-Hu6中,将构建重组质粒命名为pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2.pSIN/shRNA1转染HL60细胞,应用四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 酶切分析和测序证实pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2构建成功.MTT测定显示转染重组质粒pSIN/shRNA1入HL-60细胞48、72和96 h后细胞增殖明显受到抑制,分别与阴性对照组、空白对照组组比较,差异有显著性(P＜0.05).流式细胞仪分析pSIN/shRNA1组胞凋亡率达(20.21±0.75)%,明显高于阴性对照组的(2.58±0.48)%和空白对照组的(1.26±0.30)%.结论 成功地构建了survivin基因RNAi真核表达栽体,且pSIN/shRNA1可序列特异性地抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,为白血病的基因治疗奠定基础.