急性髓细胞白血病患儿骨髓单个核细胞中miR-126的表达水平及临床意义

目的:探讨急性髓细胞白血病(Acute myeloid leukemia,AML)患儿的miR-126表达水平及临床意义.方法:选取2017年8月～2019年8月在我院诊治的56例AML患儿为AML组,同期48例骨髓穿刺检查的非血液系统肿瘤患儿作为正常组,采用实时荧光定量PCR法检测AML组及对照组骨髓单个核细胞中mi...     

血浆miR-221在急性髓细胞白血病中的表达及意义

目的:探讨血浆miR-221在急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的表达及意义.方法:收集38例成人AML患者,其中初发患者12例(M2 1例,M3 3例,M4 6例,M5 2例),复发患者8例(M2 2例,M3 3例,M4 2例,M5 1例),完全缓解(complete remission,CR)患者18例(M2 2例,M3 6例,M4 6例,M5 4例)及3例正常人的外周血血浆标本.采用基于SYBR Green荧光染料法的茎环实时定量PCR(qRT-PCR),以U6为内参照,用2(-ΔCt)方法计算miR-221的相对表达量,分析血浆miR-221的表达情况.结果:qRT-PCR结果显示,较之CR组和正常对照组,AML初发组和复发组中血浆miR-221的表达量明显升高,差异均有显著性(P＜0.05).初发组和复发组之间无统计学差异(P＞0.05).CR组比正常对照组的表达量高,但两组差异并无统计学意义(P＞0.05).结论:血浆miR-221在AML初发和复发患者中的表达量高,在CR患者及正常对照中的表达量低,提示血浆miR-221与AML肿瘤负荷呈正相关,微创的血浆miRNAs检测可作为临床微小残留病检测的新方法.     

应用实时荧光定量PCR技术检测儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病

本研究旨在应用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RQ-PCR)技术检测儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病(minimal residual disease,MRD),采用B系ALL18对引物、T系ALL8对引物进行PCR反应扩增Ig/TCR基因重排,以Ig/TCR基因重排作为追踪的分子标记,应用SYBR Green I染料法对儿童ALL-MRD水平进行定量。研究结果表明:9例B-ALL患儿中有8例重排,找到患儿重排标记(marker)的机率为88.8%;并对诱导化疗后(第33天)骨髓MRD检测发现,其MRD水平明显下降。结论:本研究证实Ig/TCR基因重排可作为检测儿童ALL MRD标记,SYBR green I实时荧光定量PCR是一种可靠的、相对敏感的、并且比较容易的作为常规检测。     

163例儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学特征

目的:了解儿童急性淋巴细胞白血病的细胞遗传学特征。方法:通过骨髓染色体核型分析和荧光原位杂交检测,对163例初诊急性淋巴细胞白血病儿童(0-17岁)进行细胞遗传学分型。结果:本组病例细胞遗传学异常率87.7%(143/163)。倍体群分析显示,最常见高超二倍体(51-67条染色体)45例(27.6%),X染色体和21号染色体获得率为100%。特异性基因异常最常见t(12;21)ETV6/RUNX1(26例,16.0%),其次是t(1;19)TCF3/PBX1(13例,8.0%),t(4;11)MLL重排和t(8;14)IGH/MYC(各6例,3.7%),t(9;22)BCR/ABL(2例,1.2%)和i AMP21(1例,0.6%)。非典型结构异常率为:dup(1q)20.2%,del(6q)和del(9p)10.4%,del(12p)12.9%和del(13q)5.5%等。与西方儿童比较,t(12;21)、t(1;19)、t(9;22)和高超二倍体的发生率均较一致(P0.25)。与韩国儿童比较,t(9;22)的发生率似乎更低(1.5%vs 9.5%)(P0.005)。结论:本组急性淋巴细胞白血病儿童的细胞遗传学异常表现与西方儿童基本相似,风险可能不高。     

儿童急性淋巴细胞白血病的预后评估

目前危险指向性治疗使儿童急性淋巴细胞白血病的治愈率接近80％。白血病细胞的分子基因分析和宿主的遗传药理研究是进一步改善预后的基础。评估微小残留病的早期治疗效应以综合反映白血病细胞的药物反应和宿主的遗传药理学，是调整治疗强度最可靠的指标。基因组和蛋白质组学技术有望鉴定个体化治疗的分子靶向。本文综述目前用于儿童ALL预后评估的危险因素及评估系统。     

儿童急性淋巴细胞白血病患者p73基因异常表达的研究

目的 探讨儿童急性淋巴细胞因病（ALL）发生及发展的机制。方法 应用RT－PCR技术检测61例ALL细胞系和53例儿童ALL患者的p73基因mRNA表达情况，并结合患者的临床资料进行分析。应用DNA甲基化酶谱测定、亚硫酸氢钠修饰的PCR和PCR产物测序等技术对61例ALL细胞系p73基因第1外显子的甲基化进行检测。结果 61个ALL细胞系中p73mRNA阴性表达率为31．1％（61个中19个）；53例原发性儿童ALL患者中，p73 mRNA阴性表达率为26．4％（53例中14例），p73 mRNA阴性表达与ALL无病生存期、总生存期的降低有明显关系。61个ALL细胞系中，39．3％存在p73基因的高甲基化。正常淋巴细胞和不存在p73基因高甲基化的细胞系表达p73 mRNA，大多数高甲基化的细胞系不表达p73 mRNA。结论 儿童ALL患者中p73 mRNA存在较高的阴性表达，其主要机制为p73基因高甲基化，p73基因失活在ALL的发生及发展中起重要作用，p73 mRNA检测对判断儿童ALL患者的预后有一定临床意义。     

成人与儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学大样本对比分析

本研究对566例成人急性淋巴细胞白血病（aALL）和586例儿童急性淋巴细胞白血病（cALL）的细胞遗传学进行对比分析。对所有患者均进行了细胞遗传学分析,部分患者进行了FISH检测。结果表明：aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。aALL中异常核型占62．0％,染色体异常较多见的为t（9;22）（q34;q11）、亚二倍体、超二倍体（47—50）、abn（6q）、abn（9p）、-7等,预后不良的占多数。cALL中异常核型占39．2％,染色体异常较多见的为高超二倍体、亚二倍体、TEL／AML1（＋）、＋8、超二倍体（47—50）、＋21等,预后良好的占多数。其中异常核型、总亚二倍体、总超二倍体（47—50）、t（9;22）（q34;q11）、-7、abn（7q）、abn（14q32）、＋Ph在aALL中的发生率明显高于eALL;cAu．正常核型（N）、高超二倍体、＋8、＋21＊2、TEL／AML1（＋）的发生率明显高于aALL。Ph（＋）在aALL中的检出率为20．5％,伴有附加异常的占63．8％。Ph（＋）aALL附加异常中＋Ph、-7、i（9q＋）、9p-、＋8、＋21、＋x、6q-、abn（14q32）、＋14出现的比例较高。Ph（＋）在cALL中的检出率为4．4％,明显低于aALL（P：0．000）,伴有附加异常的占42．3％,附加异常中abn（9p）、abn（7p）、-7、17p-、＋21出现的比例较高。结论：本组病例染色体数目异常及结构异常几乎涉及到每一条染色体,复杂核型多见。aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。     

儿童急性淋巴细胞白血病TEL-AML1融合基因的表达水平与临床特点、早期治疗反应的关系

为探讨儿童急性淋巴细胞白血病初诊时TEL-AML1融合基因表达水平与患儿的临床特点、早期治疗反应的关系,采用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）定量检测35例患儿（包括标危20例,中危15例）初诊TEL-AML1表达水平和诱导缓解治疗结束微小残留病（MRD）水平,比较MRD阴性与MRD阳性患儿的初诊TEL-AML1表达水平及临床特点,分析初诊TEL-AML1表达水平、MRD水平与临床特点、早期治疗反应的相关性。结果发现,初诊时TEL-AML1表达水平为1.63×104拷贝/104拷贝ABL（中位数）。诱导缓解结束时,16例（10例标危、6例中危）患儿未达到分子缓解,MRD水平分别为0.84-282.93拷贝/104拷贝ABL。初诊TEL-AML1表达水平与各临床特点及MRD水平缺乏相关性。MRD水平与泼尼松实验治疗第8天外周血幼稚细胞数显著相关。初诊时外周血白细胞计数〈25×109/L的患儿,MRD水平还与白细胞计数、幼稚细胞百分比显著相关。MRD阴性患儿初诊TEL-AML1表达水平显著低于MRD阳性者。结论：对于TEL-AML1＋儿童ALL,45.71%未能在诱导缓解治疗结束时获得分子缓解,说明了后续治疗的重要性。泼尼松实验治疗的效果预示了诱导缓解治疗结束时的MRD水平。初诊外周血白细胞计数、幼稚细胞百分比和初诊TEL-AML1表达水平均在一定程度上影响诱导缓解治疗结束时的MRD水平。     

T 细胞型急性淋巴细胞白血病患者HOX11L2 基因的表达及其临床意义

目的　研究T 细胞型急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）患者HOX11L2 基因的表达及其临床意义。方法　采用回顾性分析方法对50 例患者性别、年龄、白细胞数量、FAB 分类（L1,L2 and L3）、分子生物学特点以及生存时间进行分析,观察HOX11L2 基因表达与临床特点及预后关系。结果　50 例T 细胞型急性淋巴细胞白血病患者中,表达HOX11L2 基因患者为12 例（24%）,其中男性7 例（58.3%）,女性5 例（41.7%）,HOX11L2基因表达者在男女性别之间的比较,差异无统计学意义（χ2=0.119,P=0.730）。表达HOX11L2 基因患者年龄在5~10岁间居多,表达率为58.3%,与其它年龄组之间的比较,差异有统计学意义（χ2=11.577,P=0.018）。HOX11L2 基因表达患者中白细胞计数≤ 50×109/L 的患者10 例（83.3%）,白细胞计数>50×109/L 的患者2 例（16.7%）,两组比较差异有统计学意义（χ2=5.469,P=0.019）。FAB 分类中,有75% 的HOX11L2 基因表达患者为L1 型,与L2 和L3 组相比较,差异有统计学意义（χ2=8.766,P=0.008）。其中34 例获得随访资料的患者,HOX11L2 基因表达组比非表达组生存时间短（中位生存时间分别为8.0 个月和11.0 个月）,两组差异具有统计学意义（P<0.05）。结论　研究结果表明HOX11L2 基因主要表达于T-ALL 患者,且以L1 型儿童T-ALL 为主,HOX11L2 基因表达者预后不良,生存时间短。临床上通过HOX11L2 基因检测结果与常规细胞形态学、遗传学、荧光原位杂交等技术检测结果相结合,将对急性淋巴细胞白血病的鉴别诊断、分型、预后及微小残留病检测等具有十分重要的意义。     

982例儿童急性淋巴细胞白血病流行病学研究

目的:分析982例儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)临床病例,了解儿童ALL流行病学特征。方法:对本中心2008年4月至2015年5月收治的982例ALL患儿临床资料采用回顾性分析的方法,分析其性别、发病年龄、发病季节、发病相关危险因素及分子生物学特征等。结果:ALL患儿男女比例为1.5∶1,中位发病年龄5岁,发病年龄高峰为2-5岁。发病高峰季节为春季。出生和喂养史分析显示,足月产患儿占98.0%;55.9%患儿是顺产,44.1%患儿是剖腹产。母乳喂养者占79.8%,人工混合喂养儿占20.2%。中位出生体重3.5 kg,其中巨大儿占18.3%。有出生异常史者34例(3.5%),其中脐带绕颈者10例。发病近期有家庭装修史者占31.4%,中位装修环境暴露时间12个月。患儿一至三级亲属中,有血液系统疾病者44例(4.5%),有恶性肿瘤者53例(5.4%)。免疫表型分析结果显示,B-ALL占90.7%,T-ALL占9.3%。分子生物学检测中,TEL/AML1阳性者占21.0%,E2A/PBX1阳性者占5.2%,BCR-ABL阳性者占6.1%,MLL阳性者占2.5%。结论:本研究中儿童急性淋巴细胞白血病男性患儿较多,发病年龄高峰为2-5岁,发病季节高峰为春季,出生季节高峰为秋冬季,剖宫产术分娩、出生时为巨大儿及出生后非母乳喂养比例高于同期全国大部分地区婴儿的均值,有电离辐射及家居环境暴露史与亲属血液病、恶性肿瘤病史者比例较高。     

miR-16 在 T 淋巴母细胞淋巴瘤 / 急性淋巴母细胞白血病中表达简

本研究探讨miR-16在T淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴母细胞白血病（T-LBL/ALL）中的表达及其与预后的关系.应用免疫组织化学法对宜共市人民医院血液科有详细随访资料的38例T-LBL/ALL石蜡标本进行CD3、cCD3、CD10、CD20、CD34、CD43、CD99、TdT、PAX-5、BCL-2和Ki67免疫组织化学标记检测,采用real-time RT-PCR方法检测miR-16的表达水平,以15例淋巴结反应性增生作为对照.结果表明：38例T-LBL/ALL中TdT阳性率最高（94.7％）,CD34阳性最低（22.1％）,PAX-5及CD20为阴性.在39.5％病例中Ki67大于80％.与淋巴结反应性增生相比较,miR-16在T-LBL/ALL中表达上调,其表达量是淋巴结反性增生的4.87倍（P＜0.05）.T-LBL中miR-16高表达组总体生存率下降（P＜0.05）.BCL-2蛋白表达阳性组预后优于阴性组预后（P＜0.05）.miR-16表达与BCL-2蛋白存在相关性（r=0.51,P＜0.05）.结论：在T-LBL/ALL中miR-16的高表达组总体生存率明显高于低表达组,提示miR-16可能与预后有相关性,而BCL-2蛋白表达阳性组预后好于阴性组,可能也是一种影响预后的因素.     

MicroRNA-223在淋巴细胞白血病原代细胞中表达及作用机制的研究

本研究旨在探讨急性淋巴细胞白血病（ALL）、慢性淋巴细胞白血病（CLL）原代细胞中MicroRNA-223与LMO2基因的表达水平及MicroRNA-223的作用机制。应用人淋巴细胞分离液分选ALL、CLL患者及正常人骨髓中淋巴细胞,在ALL、CLL患者骨髓淋巴细胞中转染MicroRNA-223的类似物靶向升高细胞中MicroRNA-223的表达,在正常人骨髓淋巴细胞中转染MicroRNA-223抑制物靶向敲低细胞中MicroRNA-223的表达。转染后培养72 h,用RT-PCR方法检测转染前后MicroRNA-223和LMO2表达量及其相关性,并用流式细胞术进一步观察细胞凋亡和细胞周期的变化。结果表明,转染MicroRNA-223类似物前,ALL、CLL患者中MicroRNA-223表达水平为（433.11±144.88）,LMO2水平为（807.10±238.41）,正常人转染MicroRNA-223抑制物前,MicroRNA-223表达水平为（949.59±267.39）,LMO2的表达为（455.32±176.83）;MicrRNA-223的表达在正常人中明显高于ALL、CLL患者（P〈0.05）,而LMO2的表达在正常人中明显低于ALL、CLL患者（P〈0.05）。转染后,ALL、CLL患者中MicroRNA-223表达明显增加（571.86±142.00）（P〈0.05）,而LMO2表达明显减少（651.97±230.12）（P〈0.05）;在正常人中MicroRNA-223表达明显降低（646.32±172.93）（P〈0.05）,LMO2的表达明显升高（541.27±158.86）（P〈0.05）。转染后细胞周期及细胞凋亡率的变化表现为,在ALL、CLL患者转染前细胞周期G1/G2细胞比例为（94.75±3.15）%,S期为（5.14±3.12）%;转染后G1/G2细胞比例明显增加（97.03±2.08）%（P〈0.05）,在S期明显减少（2.97±2.08）%（P〈0.05）;转染前细胞凋亡率为（54.47±8.72）%,转染后为（60.48±8.81）%,后者明显增加（P〈0.05）。正常人转染前细胞周期G1/G2细胞比例是（96.73±2.26）%,S期是（3.25±2.26）%;转染后G1/G2细胞比例明显减少（94.55±2.77）%（P〈0.05）,在S期明显增加（5.45±2.77）%（P〈0.05）,细胞凋亡率为（59.02±10.20）%,转染后明显减少（51.96±10.20）%（P〈0.05）。结论：淋巴细胞白血病原代细胞中MicroRNA-223表达降低,LMO2表达增高,导致淋巴细胞增殖周期及凋亡异常,这可能是淋巴细胞白血病的发病机制之一。     

miR-146a和miR-221在儿童急性T淋巴细胞白血病中的表达及其临床意义

目的:探讨急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)患儿外周血单个核细胞(PBMNC)中miR-146a和miR-221表达水平及临床意义。方法:选取海南省第三人民医院收治的初诊T-ALL患儿130例(T-ALL组)和体检健康者50例(对照组)。T-ALL患儿以治疗前作为初发组,诱导治疗d 33达完全缓解者作为缓解组(n=98),未完全缓解者作为难治组(n=32)。采用实时荧光定量PCR方法检测各组PBMNC的miR-146a及miR-221表达水平。ROC曲线分析miR-146a及miR-221对T-ALL的诊断价值,Pearson相关分析评价T-ALL患儿miR-146a及miR-221表达与白细胞计数的相关性。结果:T-ALL组PBMNC的miR-146a及miR-221表达水平均明显高于对照组(5.83±1.54 vs 0.96±0.17)(7.13±2.60 vs 1.64±0.51)(P<0.01)。难治组PBMNC的miR-146a及miR-221表达水平均明显高于缓解组和初发组(8.74±2.35 vs 1.70±0.63,5.83±1.54)(11.316±4.83 vs 2.62±0.85,7.13±2.60)(P<0.01)。miR-146a及miR-221表达水平与白细胞计数、危险度分型和MRD相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-146a及miR-221诊断T-ALL的最佳截值分别为3.90和5.28,2项联合诊断T-ALL的AUC(95%CI)为0.835(0.764-0.892),其敏感度和特异度分别为85.0%和77.2%。相关分析显示,T-ALL患儿PBMNC的miR-146a及miR-221表达水平与白细胞计数均呈正相关(r=0.705,r=0.653,P<0.01),miR-146a与miR-221呈正相关(r=0.784,P<0.01)。结论:miR-146a及miR-221在T-ALL患儿中表达上调,且与T-ALL患儿预后密切相关,2项联合检测对T-ALL诊断具有一定价值。     

T细胞急性淋巴细胞白血病免疫表型分析

本研究探讨T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）免疫表型特点。应用一组系列相关单克隆抗体和CD45/SSC设门的三色流式细胞术对140例T-ALL进行免疫表型检测。结果显示,白血病细胞表面T系抗原表达依次为CD7〉CD2〉CD3〉CD5,近20%患者CD10表达阳性。140例患者中12例带有B系抗原标记,阳性率达8.57%;136例中31例带有髓系抗原标记,阳性率达22.79%,所有病例均无CD14表达。干/祖细胞标记CD34表达阳性率31.06%,41例CD34＋T-ALL髓系抗原表达15例,阳性率36.59%,91例CD34-T-ALL髓系抗原表达14例,阳性率15.38%,二者具有统计学差异（p〈0.01）。儿童T-ALLCD3表达高于成人（p〈0.05）,而CD33表达明显低于成人（p〈0.01）结论：免疫表型分析是诊断T-ALL的重要手段,T-ALL免疫表型具有异质性。     

多参数流式细胞术分析505例急性淋巴细胞白血病跨系列表达方式

跨系列抗原表达是白血病免疫表型的一个重要特征。对于急性淋巴细胞白血病（ALL）的跨系表达方式,目前国内尚缺乏大样本多参数的研究报道。本研究利用三色流式细胞术探讨505例ALL（431例B—ALL,74例T—ALL）患者23种系相关抗原的跨系表达方式。结果显示：全部ALL病例中,髓系抗原的表达率为56．4％,其中以CD13（32．7％）的表达最常见,其次为CD33（29．5％）、CD15（19．2％）和CD11b（7．7％）。CD13／CD33在CD34^＋病例中的表达高于CD34^＋病例。在B—ALL中,T系抗原CD4、CD5、CD7和CD2的表达率依次为6．3％、2．8％、1．9％和1．4％,并且CD7^＋、CD2^＋和CD4^＋病例通常共表达CDl3和（或）CD33。在T—ALL,B系抗原cCD79a、CD19和CD22的表达率分别为8．1％、6．8％、和2．8％,而全部CD19和CD22表达者均伴CD13／CD33表达。结论：ALL的跨系袁达多存在未成熟的阶段,以跨髓系抗原的表达最常见（B^＋M^＋,T^＋M^＋）,偶有B系、T系和髓系抗原的共表达（B^＋T^＋M^＋）,仅有B系和T系跨系表达的极少（B^＋T^＋M^-）。     

垂体瘤转化基因在急性淋巴细胞白血病患者中表达的研究

本研究旨在探索垂体瘤转化基因(pituitary tumor-transforming gene,PTTG)在急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblastic leukemia,ALL)患者中的表达及其与ALL发病机理的关系,同时探讨PTTG在Ph1染色体阳性和阴性ALL中的表达是否存在差异性。采用实时荧光定量PCR方法检测28例ALL患者及28例正常对照骨髓中PT-TG的表达水平。结果表明:ALL患者PTTG的表达水平(1.9428E5±1.8372E5)明显高于正常对照组(4.5766E3±1.1817E3)(P<0.05),一个周期诱导缓解治疗后达完全缓解(complete remission,CR)患者中PTTG的初始表达水平低于未缓解(non-complete remission,non-CR)患者;Ph1染色体阳性ALL(Ph1+ALL)患者中PTTG的初始表达水平高于Ph1染色体阴性ALL(Ph1-ALL)患者。结论:PTTG的过度表达可能和ALL的发生发展有关,可能与Ph1染色体阳性ALL的发生关系更加密切,这为ALL的发病机制及其基因靶向治疗的研究提供了新的思路。     

Cerebrospinal Fluid Metabolomic Profiles Associated With Fatigue During Treatment for Pediatric Acute Lymphoblastic Leukemia

ContextCancer-related fatigue (CRF) is one of the most distressing and persistent symptoms reported during pediatric acute lymphoblastic leukemia (ALL) therapy; however, information on the pathways underlying CRF severity is limited.ObjectivesWe conducted global metabolomics profiling of cerebrospinal fluid (CSF) samples to provide insight into the underlying mechanisms of CRF.MethodsFatigue in pediatric ALL patients (2012–2017) was assessed during postinduction therapy approximately six months after diagnosis. Postinduction CSF was collected from 171 participants, comprising discovery (n = 86) and replication (n = 85) cohorts. We also conducted secondary validation using diagnostic CSF from 48 replication cohort participants. CSF metabolomic profiling was performed using gas chromatography-mass spectrometry (MS) and liquid chromatography-MS/MS. Kendall's rank correlation was used to evaluate associations between metabolite abundance and CRF. False discovery rate was used to account for multiple comparisons.ResultsParticipants were 56% males and 59% Hispanic with a mean age at diagnosis of 8.5 years. A total of 274 CSF-derived metabolites were common to the discovery and replication cohorts. Eight metabolites were significantly associated with fatigue in the discovery cohort (P < 0.05), of which three were significant in the replication cohort, including false discovery rate-corrected associations with gamma-glutamylglutamine (P_combined = 6.2E-6) and asparagine (P_combined = 3.5E-4). Notably, the abundance of gamma-glutamylglutamine in diagnostic CSF samples was also significantly associated with fatigue (P = 0.0062).ConclusionThe metabolites identified in our assessment have been implicated in neurotransmitter transportation and glutathione recycling, suggesting that glutamatergic pathways or oxidative stress may contribute to ALL-associated CRF. This information could inform targeted therapies for reducing CRF in at-risk individuals.