液氮冻存时间对605份脐血造血干细胞质量和临床移植效果的影响

目的 探讨液氮冻存时间对脐血造血干细胞质量和临床移植效果的影响.方法 对上海脐血库已经应用于临床移植的605份脐血进行研究,脐血平均冻存时间为820(88～ 2651)d,测定脐血复苏之后的有核细胞、CD34+细胞数量、细胞回收率、细胞活力,粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM),结合脐血冻存时间、临床移植效果进行统计分析.结果 复苏后细胞回收率、细胞活力与冻存时间无显著相关性,CFU-GM平均(109.6～ 105.7)个/1×105,随冻存时间延长逐渐降低(P=0.011).临床移植患者的造血重建时间、植入失败率、急性移植物抗宿主病、总体生存率与脐血冻存时间长短无显著相关性.结论 深低温冻存时间长短对脐血复苏后细胞回收率、细胞活力、临床移植效果无显著影响,冻存时间较长的脐血复苏后CFU-GM在正常标准范围内略有下降,保存3～7年的脐血仍能维持正常细胞活性和功能、达到良好的临床移植效果.     

脐血造血干细胞短期冻存效果的评价

为了探讨脐血造血干细胞在液氮中短期冻存复苏后的效果，分别将各自为8例冻存6个月、1年、2年的脐血千细胞进行复苏，观察造血干细胞活性。有核细胞(NC)计数采用自动血细胞分析仪测定，CD34^ 细胞采用流式细胞技术测定，用体外造血细胞培养技术分析粒一巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)产率，台盼蓝染色法判断造血细胞存活率。结果表明：脐血造血干细胞在液氮中冻存6个月、1年、2年后解冻，其有核细胞、CD34^ 细胞、细胞活率、CFU-GM产率在3个不同冻存时间的差异无显著性。结论：脐血干细胞于液氯中短期冻存，其干细胞数量和细胞活性没有明显的变化，冻存效果较好。     

脐带血造血干细胞-196℃保存20年后质量分析

目的 探讨脐带血造血干细胞经液氮冻存20年后的质量情况.方法 对山东省脐带血造血干细胞库于2000年冰存的合格的脐带血200例出库进行检测,检测其母血、脐带血的乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝病毒抗体(抗-HCV)、梅毒螺旋体抗体(抗-T P)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)和巨细胞病毒(CM V)-IgM抗体;检测脐血的有核细胞数(TNC)、细胞活性、粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、CD34+细胞数量,以及血培养(细菌/真菌)检测,检测指标与冻存前指标进行比对,同时分析复苏后的检测指标是否符合现有的质量标准.结果 母血、脐带血的HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV和CMV-IgM抗体与入库时结果完全一致,均无反应性;脐带血的细菌/真菌培养无菌生长;冻存前T NC、细胞活性、CFU-GM、CD34+细胞数量分别为(11.2±4.8)×108、(99.5±1.3)％、(1.9±0.8)×106和(3.1±2.3)×106;冻存后的TNC、细胞活性、CFU-GM、CD34+细胞数量分别为(10.1±4.0)×108、(75.4±2.4)％、(1.4±0.6)×106和(2.4±2.1)×106,冻存后与冻存前比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 脐带血造血干细胞经过液氮冻存20年后,TNC、细胞活性、CFU-GM、CD34+细胞数量均有所下降,但是脐带血的多项指标仍然符合质量标准,细胞仍具有很强的增殖活性,能够满足临床需要.     

不同来源人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异

目的 比较不同来源的人造血干／祖细胞在NOD／SCID小鼠体内归巢能力的差异性，并探讨其体内归巢能力与膜表面归巢相关分子CXCR4表达水平的相关性。方法 采用流式细胞术（FACS）检测新鲜脐血、冻存脐血、动员后外周血（mPB）及骨髓来源的CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平；将荧光染料CFSE标记的人CD34^＋细胞移植人接受照射的NOD／SCID小鼠，移植后20小时检测已归巢于NOD／SCID小鼠骨髓及脾脏中不同来源的人CD34^＋细胞，计算其相应的骨髓及脾脏归巢效率；并将小鼠股骨制成组织切片，荧光显微镜下观察人CD34^＋细胞在小鼠骨髓腔内的分布。结果 新鲜脐血、冻存脐血、mPB和骨髓CD34^＋细胞膜表面CXCR4表达阳性率分别为（49.52±1．12）％。（46．12±2．29）％，（48．50±2．48）％和（65．39±1．27）％，CD34^＋细胞在NOD／SCID小鼠骨髓的归巢效率分别为（3．00±0．44）％，（2．84±0．46）％，（4．06±0．70）％及（5．76±0．52）％；在脾脏的归巢率分别为（1．88±0．12）％，（1．80±0．15）％，（1．90±0．22）％，（2．16±0．34）％。归巢的CD34^＋细胞主要分布于小鼠股骨的骨内膜区域。结论 脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和骨髓。经冻存复苏后脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平略有下调。脐血CD34^＋细胞在照射NOD／SCID小鼠的骨髓归巢效率低于mPB和骨髓。     

137例单份非亲缘脐血造血干细胞移植患者的临床研究北大核心CSCD

目的 分析单份非亲缘脐血造血干细胞移植（sUCBT）的预后影响因素及脐血深低温冻存时间长短与细胞活力、移植预后的相关性.方法 回顾性研究2007年3月15日至2013年12月26日使用上海脐血库提供的脐血进行sUCBT的来自28家医院的137例患者,脐血平均冻存时间为698（96～1 968）d,复苏后细胞活力平均为87.4％.结果 脐血冻存2年以下及2年以上两组患者,细胞活力及患者的造血重建天数、植入失败率、急性移植物抗宿主病（GVHD）发生率及总体生存（OS）率差异均无统计学意义,两组5年OS率分别为55.6％和67.9％ （P=0.124）.2011年以后移植的患者OS率显著高于2011年及以前移植的患者（79.6％对48.7％,P=0.001）.多因素分析中,年龄＞16岁（RR=2.830,P=0.027）及2011年及以前移植（RR=0.203,P＜0.001）是治疗相关死亡的危险因素.结论 近两年sUCBT预后明显改善,脐血复苏后细胞活力、移植临床预后与脐血冻存时间长短无关.     

rhG-CSF动员的骨髓和外周血干细胞混合移植物首次采集时供者外周血单核细胞计数反映混合采集物中CD34^＋细胞含量

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员的骨髓和外周血干细胞混合移植健康供者首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量与骨影外周血混合采集物中CD34^＋细胞数量的关系。对70名亲缘健康供者均皮下注射rhG-CSF5μg／（kg·d）,连续5天。第4天和第5天分别采集骨髓和外周血干细胞。首次干细胞采集时用EX2100血细胞分析仪检测供者外周血细胞计数,同时应用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34^＋细胞数量。结果表明：rhG—CSF动员的70例供者首次干细胞采集时外周血单核细胞的数量为（1．15±0．60）×10^9／L;骨髓和外周血采集物中的CD34^＋细胞总量分别是（5．854±2．93）×10^7和（1．33±0．77）×10^8;骨髓和外周血混合采集物的CD34^＋细胞总量是（1．92±0．86）×10^8。Pearson和Spearman分析显示首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数（×10^9／L）与骨髓采集物中CD34^＋细胞的总量（相关系数：r=0．265,P=0．027）、外周血采集物中CD34^＋细胞总量（r=0．340,P=0．004）以及混合移植物中CD34^＋细胞的总量（r=0．398,P：0．001）均存在显著的相关性;多因素分析表明,首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数与骨髓采集物、外周血采集物以及混合移植物中CD34^＋细胞的总量均呈正相关关系（P值分别为0．027、0．004和0．001）。首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量对混合移植物中CD34^＋细胞总量预测的敏感性是71％,特异性是70％（P=0．007）。结论：rhG-CSF动员的骨髓和外周血混合移植健康供者首次干细胞采集时外周血单核细胞计数可有效预测输注给受者的CD34^＋细胞总量即采集效果。     

异基因造血干细胞移植CD34^＋CD61^＋巨核系前体细胞与血小板植入的相关分析

本研究通过定量测定G—CSF动员后外周血及骨髓采集物的CD34^＋CD61^＋细胞，以探索巨核前体细胞CD34^＋CD61^＋亚群输注量与异基因外周血和／或骨髓移植后血小板恢复时间的相关性。24例不同血液病患者接受HLA全相合同胞、非血缘供者或单倍体相合同胞造血干细胞移植。20例可评估的患者依移植方法不同分为HLA全相合组和单倍体相合组，HLA全相合组采用PBSC移植方案，单倍体相合组采用PBSC＋BM联合移植方案，对外周血干细胞和骨髓样本CD34^＋CD61^＋亚群通过流式细胞仪立即测定或隔夜保存后测定。结果表明，单倍体相合组输注CD34^＋、CD34^＋CD61^、CD34^-CD61^＋细胞数中位值分别为6．24×10^6／kg（1．53—20．48）、66．19×10^4／k（8．16—493．83）、34．38×10^6／kg（14．71—109．16）；HLA全相合组中位值分别为4．88×10^6／kg（1．00—8．24）、14．16×10^4／kg（11．63—96．87）和13．50×10^6／kg（1．74—35．61）。中性粒细胞计数（ANC）〉0．5×10^9／L和血小板计数〉20×10^9／L的中位时间，单倍体相合组分别为18．5（11．00—29．00）和16．5（9．00—35．00）天；HLA全相合组为14．5（9．00—24．00）和10．5（6．00—37．00）天，血小板的植入时间在两组差别无显著性，中性粒细胞植入时间在HLA全相合组和单倍体相合组差异有显著性（p=0．048），对于两组中CD34^＋细胞量〉2×10^6／kg的受者血小板的植入时间分析，两组差别有显著性（p=0．006）。CD34^＋CD61^＋亚群与血小板植入的相关性明显优越于CD34^＋细胞，可评估20例（r=-0．449p=0．047CD34^＋细胞群），单倍体相合组12例CD34^＋CD61^＋亚群（r=-0．768p=0．004），HLA相同纽8例CD34^＋CD61^＋亚群（r=-0．747p=0．033），CD34^＋CD61^＋亚群与血小板的植入时间呈负相关关系，输注CD34^＋CD61^＋亚群细胞量大，血小板的植入时间缩短。结论     

淋巴细胞免疫表型质控品的初步研究

目的研究液氮冻存对外周血单个核细胞（PBMCs）CD4^＋T和CD8^＋T百分比的影响，探索冻存PBMCs作为淋巴细胞免疫表型质控品的可行性。方法收集健康成人抗凝全血，用淋巴细胞分离液分离PBMCs后液氮冻存。定期复苏PBMCs检测CD4^＋T和CD8^＋T百分比，计算细胞存活率、回收率。并分析不同厂家试剂、复苏方法、固定时间等因素对CD4^＋T和CD8^＋T百分比的影响。结果液氮冻存0～12个月、12～24个月的PBMCs CD4^＋T和CD8^＋T百分比均保持在稳定水平。冻存12个月PBMCs CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均变异系数（CV）分别为14．5％和9．8％，细胞存活率为85．4％～94．3％，回收率33．3％～97．8％；冻存12-24个月PBMCs的CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均CV值分别为7．1％和6．5％，细胞存活率为88．3％～98．5％，回收率52．3％～101％。不同复苏方法和检测试剂的结果相对稳定，CD4^＋T和CD8^＋T百分比的平均CV值分别为8．1％和6．4％。复苏后的PBMCs经多聚甲醛固定可在48h内检测。结论液氮冻存的PBMCs有望作为淋巴细胞免疫表型测定的质控品。     

双份脐血间CD34^＋细胞与CD3^＋细胞相互作用对分化增殖能力的影响

目的双份脐血移植的植入动力学机制目前尚无定论,推测双份脐血中的淋巴细胞与优势份脐血的产生相关。本实验将双份脐血的CD34^＋细胞与CD3^＋细胞混合培养,观察CD3^＋细胞对CD34^＋细胞的增殖分化有无影响。方法建立液体和半固体培养体系,将免疫磁珠分选纯化的双份脐血间的CD34^＋细胞和CD3^＋细胞混合培养6d和14d。以流式细胞计数观测CD34^＋细胞培养后的分化指标（CD33,CD41,CD71）;计数集落形成单位（GM—CFU、BFU-E、GEMM—CFU）分析CD34^＋细胞的增殖情况。结果液体共培养后各份CD34^＋细胞表面分化指标的变化。脐血CD34^＋细胞分选富集的纯度为（98．70±0．72）％。3d实验组和对照组的各项分化指标无差异（P〉0．05）;6d的CD33、CD71实验组明显低于对照组,而CD41明显高于对照组（P〈0．05）。半固体共培养后CD34^＋细胞增殖能力的变化。实验组的红系集落形成单位（BFU—E）及粒单细胞集落形成单位（GM—CFU）数低于对照组（P〈0．05）,而混合细胞集落形成数（GEMM—CFU）高于对照组（P〈0．05）。结论将两份脐血的CD34^＋细胞和CD3^＋细胞体外混合培养对CD34^＋细胞的增殖分化能力有影响,推测双份脐血间的相互作用可部分地通过CD3^＋细胞介导。     

-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响

目的探讨-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响。方法对-80℃下分别冻存1、2、3、4、8、16、32 w的脐血细胞进行复苏,比较各组间有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率的差异。结果脐血细胞在-80℃下保存1、2、3、4、8 w后,各组的有核细胞数和CD34^＋数的差异无统计学意义,而在冻存16、32 w后较1 w的差异有统计学意义（P〈0.05）。台盼蓝拒染率在8、16、32 w较1 w的差异均有统计学意义（P〈0.05）,1、2、3、4 w各组间的差异无统计学意义。结论-80℃直接冻存对于短期（〈8 w）脐血细胞的活性（有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率）无明显影响,但对于需要长期保存的脐血细胞的效果有影响。     

脐带血重建造血潜能的母体及新生儿因素分析

脐带血作为一种备选的移植用造血干细胞,能否成功植入与输入受者体内的总有核细胞（total nucleated cells,TNC）数、CD34＋细胞数及粒-巨噬细胞集落形成单位（colony-forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM）有关。本研究探讨影响脐带血造血潜能的母体及新生儿因素。按照广州脐血库标准化操作常规（SOP）,对脐带血样本进行筛选、处理、检测及冷冻,回顾性分析已保存的4615份脐带血样本的造血细胞参数及其与母体及新生儿特征的相关性。结果表明：脐带血采集量（Mean±SD：95.23±22.42ml;Median：91.85ml）与处理前TNC[Mean±SD：（1.34±0.49）×109;Median：1.25×109]及处理后TNC[Mean±SD：（1.21±0.42）×109;Median：1.14×109]、CD34＋细胞数[Mean±SD：（5.14±4.55）×106;Median：4.08×106]、CFU-GM[Mean±SD：（9.72±8.66）×105;Median：7.53×105]三者均显著相关（p〈0.001）。在供者因素中,只有婴儿出生体重与脐带血采集量及造血细胞参数均呈显著正相关（p〈0.001）,较大婴儿的脐带血在采集量、TNC、CD34＋细胞数及CFU-GM方面均呈现优势（p〈0.001）。母亲年龄与上述各项参数均无显著相关。孕龄与处理前/后TNC正相关（p〈0.001;p〈0.001）,与CD34＋细胞数呈负相关（p=0.04）,而与采集量及CFU-GM均无显著相关。剖宫产时采集的脐带血量虽然高于阴道分娩（Mean±SD：97.05ml±22.23mlvs.92.53ml±22.43ml;Median：94.08mlvs.88.82ml;p〈0.001）,但各细胞参数均低于阴道分娩（p〈0.001）。男婴脐带血的采集量和CD34＋细胞数高于女婴（Mean±SD：96.41ml±22.31mlvs.93.95ml±22.47ml;Median：93.27mlvs.90.14ml;p〈0.001）;[Mean±SD：（5.28±5.04）×106vs.（5.00±3.94）×106;Median：4.18×106vs.3.94×106;p=0.042]、但处理前TNC及处理后TNC均低于女婴[Mean±SD：（1.31±0.50）×109vs.（1.37±0.47）×109;Median：1.22×109vs.1.28×109;p〈0.001];[Mean±SD：（1.18±0.42）×109vs.（1.24±0.41）×109;Median：1.10×109vs.1.17×109;p〈0.001],二者CFU-GM的差异无统计学意义。结论：本研究数据有助于优化脐带血供者筛选及提高脐血库资源利用率。脐血库应侧重选择体重较大、阴道分娩的新生儿供者,优先处理采集量大、TNC高的脐带血样本。     

脐血复温后细胞输入剂量对植入的预测作用分析

本研究探讨非血缘供者脐带血移植(unrelated cord blood transplantation,UCBT)中复温后供者细胞输入剂量对植入和造血重建的预测作用。回顾性分析1999年8月至2010年4月间接受单份UCBT的97例儿童恶性及非恶性疾病患者的临床资料,比较冷冻前和复温后检测的总有核细胞(total nucleated cells,TNC)、CD34+细胞及粒-巨噬细胞集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM)的输入剂量对受者的植入及造血重建速度的影响,供者脐带血均来自广州脐血库。结果表明,冷冻前TNC(/kg)(mean±SD:7.65×107±4.26×107;median:6.34×107)、CD34+细胞(/kg)(mean±SD:4.64×105±4.47×105;median:3.03×105)及CFU-GM(/kg)(mean±SD:0.79×105±1.09×105;median:0.57×105)与其对应的复温后TNC(/kg)(mean±SD:6.98×107±4.12×107;median:6.00×...     

Evaluation of hematological reconstitution potential of autologous peripheral blood progenitor cells cryopreserved by a simple controlled-rate freezing method

A novel and simple procedure for the controlled-rate cryopreservation of peripheral blood progenitor cells (PBPCs) was introduced. A freezing bag housed in a protective aluminum canister was placed on top of a styrene foam box in the -85 degrees C electric freezer. A second set of samples was kept in cryotubes placed in a double styrene foam box in the same electric freezer. Measurement of the freezing rate in the PB bags and cryotubes demonstrated that this simple method for PBPC cryopreservation provided optimal conditions for both large-scale and small-scale cryopreservation. Within several days after autologous peripheral blood stem cell transplantation, we thawed the cells in the small sample tubes and evaluated the cell viability, the cell recovery, and the recovery rates of hematopoietic progenitor cells (HPCs), such as CD34+ cells and colony-forming unit-granulocyte/macrophage (CFU-GM) colonies. The median duration of cryopreservation was 59 days (range, 14-365 days). According to our analysis, infusions of more than 2 x 10(6) CD34+ cells/kg body weight and 0.5 x 10(6) CFU-GM colonies/kg body weight after thawing had favorable influences on the neutrophil engraftment. We have therefore established a simple freezing method for cryopreservation of human PBPCs, which ensures the transplantability of hematopoietic progenitors even after thawing. In vitro HPC assay after thawing is important to evaluate the quality of cryopreservation procedures.     

Viable CD34+ stem cell content of a cord blood graft: which measurement performed before transplantation is most representative?

BACKGROUND: Patient survival in allogeneic cord blood transplantation is critically dependent on total nucleated cell (TNC) count or total CD34+ cell count per kg of body weight. Theoretically, viable CD34+ cell measurement at the time of infusion should give a better indication of the suitability of a certain transplant. The relation between measurements on different samples and viable CD34+ cell count on the graft itself was analyzed. STUDY DESIGN AND METHODS: Viable CD34+ cells were measured with a no-wash, single-platform technique with 7-aminoactinomycin D. Analysis was performed before freezing on the cord blood, after freezing and thawing on the cord blood unit itself, and on various samples. RESULTS: Cord blood volume correlated poorly with viable CD34+ cell content (r=0.24) as did initial TNC count and WBC count (r=0.57 and r=0.48, respectively). In contrast, viable CD34 cell content determined before freezing correlated well with viable CD34 cell content of the graft (r=0.91) but was on average 25 percent higher than after freezing and thawing. The best correlations with the CD34+ cell content of the cord blood unit were obtained with CD34 cell measurements on a separate cryovial (r=0.95). These CD34 cell measurements on frozen samples were found to be very reproducible (r=0.96). CONCLUSION: Viable CD34 cell count of the graft is both accurate and precise when measured on a separate sample frozen together with the cord blood unit. This measurement can be performed by the transplant center to exclude between-laboratory variability.     

供者特征对脐带血造血功能的影响

目的 分析可能影响脐带血造血功能的供者特征.方法 对广州脐带血库1998年6月至2008年12月保存的4 358份脐带血的供者特征(包括母亲年龄、分娩方式、妊娠期、婴儿体重、婴儿性别)和脐带血采集量及造血功能的指标(包括总有核细胞数、CD34+细胞、干细胞集落等)进行相关性分析.结果 婴儿体重、分娩方式及婴儿性别是影响脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs及CFU-GM的主要因素.随着婴儿体重的增加,脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs、CFU-GM均呈上升趋势(P=0.000).阴道分娩时脐带血的采集量虽然低于刮宫产(P=0.000),但总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs,CFU-GM均高于剖宫产(P=0.000).女婴脐带血中总有核细胞数含量高于男婴(P=0.000),但脐带血采集量(P=0.000)、CD34+细胞数(P=0.002)均低于男婴.随着妊娠期的延长,脐带血中总有核细胞数增加(P=0.000),但CD34+细胞数减少(P=0.001).结论 某些脐带血供者特征对脐带血造血功能指标有积极影响.     

抗TGF-β1单克隆抗体对脐血CD34^＋细胞体外扩增作用的研究

为了探讨TGF—β1单克隆抗体对脐血CD34^＋细胞的扩增作用,本研究将分离纯化的脐血CD34＋细胞分为3组：①空白对照组：当天分选的新鲜脐血CD34＋细胞;②对照组：含SCF、FLT3-L、IL-3、IL-6四种因子组合的无血清液体培养体系中培养3天的脐血CD34＋细胞;③实验组：条件同对照组,但加入了TGF—β1单克隆抗体。3组均检测单个核细胞（MNC）计数,流式细胞术检测CD34和c—kit,计数混合集落（CFU—GEMM）、红系爆式集落（BFU—E）、粒系集落（CFU—GM）。结果显示：实验组MNC、CD34＋细胞、CD34＋c—kit＋细胞计数分别为[（2．35±0．25）×10^5、（1．16±0．29）×10^5、（1．09±0．26）×10^5],明显高于对照组[（1．25±0．13）×10^5、（0．55±0．19）×10^5、（0．51±0．2）×10^5],（P均〈0．01）。实验组CD34＋c—kit -亚群计数为（12．95±3．17）×10^3,明显高于对照组（1．71±0．83）×10^3,二者相比有显著性差异（P〈0．01）。实验组中早期集落CFU—GEMM、BFU—E的产率[（16．3±4．72）×10^3,（65．0±20．96）×10^3]明显高于对照组[（5．0±2．58）×10^3,（16．25±7．93）×10^3]（P〈0．01）,相对较晚期集落CFU—GM的产率在对照纽[（4．0±2．28）×10^3]和实验组[（6．33±2.85）×10^3]均高于空白组[（0．75±0．29）×10^3],但在对照组和实验组之间无显著性差异（P〉0．05）。此结果表明,TGF—β1单克隆抗体促进了脐血MNC和CD34＋细胞的扩增,且早期细胞CD34＋c—kit -细胞扩增更为突出;提高了早期集落CFU—GEMM和BFU—E的产量,而对相对较晚期的髓系集落CFU—GM的产量无明显影响。结论：TGF—β1单克隆抗体能协同其它生长因子有效扩增脐血CD34＋细胞,并保留一定量更早期的造血祖细胞,减轻了造血祖细胞分化的压力。     

脐带血干细胞制备的检测分析

目的对脐带血干细胞制备进行检测,为临床安全、有效地应用提供依据。方法测定母体和脐带血标本的人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)、梅毒螺旋体(TP)、巨细胞病毒(CMV)、内毒素、支原体和病原微生物。应用体外分离纯化试剂盒,分离干细胞,计数提取后单个核细胞数,经台酚兰染色检测干细胞活力。应用流式细胞仪检测CD34干细胞、淋巴细胞亚群。结果提取后有核细胞数为(5.4±1.09)×107,脐血的量和提取干细胞数成正相关。干细胞活力检测分离的活性率为(98.7±1.3)%。流式细胞仪测得脐血干细胞CD34+为(1.55±0.67)%(n=19)。淋巴细胞亚群检测结果显示,脐血CD3细胞数较少,CD4和CD8细胞数之和明显高于CD3细胞数,且选择脐血CD4/CD8小于1.3,这也是脐血移植时GVHD表现轻微的一个重要原因。结论脐血干细胞制剂的制备,符合细胞治疗的相关安全性指标。     

Effects of cell concentration,time of fresh storage,and cryopreservation on peripheral blood stem cells: PBSC fresh storage and cryopreservation

IntroductionPeripheral blood stem cells are widely used in autologous or allogeneic transplantation. The quality of the product directly impacts clinical outcomes, and the cell quality and/or functionality may be influenced by the storage conditions as time, temperature, total nucleated cells (TNC) concentration and cryopreservation requirement.ObjectiveTo verify the effects of time, cell concentration, and cryopreservation/thawing in the viability and functionality of stem cells for transplantation.MethodsWe evaluated TNC, CD45⁺ viable cells, CD34⁺ viable cells, and cell viability and functionality of 11 samples. Measurements were performed immediately and 24 h, 48 h, 72 h, and 96 h after sample collection at high and low TNC concentrations. The same parameters were also evaluated after cryopreservation and thawing of the samples.ResultDuration of storage and TNC concentration exhibited a negative effect on cell quality (CD45⁺ viable cells, CD34⁺ viable cells and functionality). Moreover, the association of these parameters increased the negative effect on graft quality. Cryopreservation and thawing also negatively affected the collected sample regarding viable CD34⁺ cells (recovery 66.2 %), viable CD45⁺ cells (recovery 56.8 %), and 7-AAD viability. No significant losses in viable CD45⁺/CD34⁺ cells and functionality were observed in the first 24 h in both TNC conditions.ConclusionThese results emphasize the importance to consider carefully the storage conditions until transplantation, measuring TNC/μL until 24 h after collection (diluting the product when TNC > 300 × 10³/μL) and infusing fresh graft as soon as possible.     

抗氧化剂在保护造血干细胞生物学功能方面的作用简

在外周血造血干细胞移植中,骨髓造血干细胞（bone marrow hematopoietic stem cells,BMHSC）的动员及其在外周血液高氧环境中的循环都增加了活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生,这对BMHSC的生物学功能起到了抑制性的作用.本研究在BMHSC的培养中,应用维生素C的衍生物——抗坏血酸磷酸酯盐（ascorbic acid 2-phosphate,AA2P）来抑制ROS产生,并模仿其在外周血造血干细胞移植中的氧环境,通过体外增殖实验、流式分选技术、活性氧测定、CD34＋造血干细胞移植等实验来评价上述培养方法对BMHSC生物学功能的保护作用.结果表明：体外培养的BMHSC的ROS水平明显高于新鲜分离的BMHSC;同时,扩增的AC133＋ CD34＋早期红系细胞集落形成单位（BFU-E）、粒-单核细胞集落形成单位（CFU-GM）、粒-单核细胞混合集落形成单位（CFU-GEMM）的数量、细胞迁移率、人重症联合免疫缺陷鼠（SCID）移植重建细胞的数量都要明显高于在不含AA2P的环境中培养的造血干细胞.结论：抗氧化剂的干预是在外周血造血干细胞移植过程中保护HSC生物学功能的一种有效手段,并能够提高外周血造血干细胞移植的治疗效果.