从贮存20年的微量细胞中提取DNA并做PCR分析的实验研究

目的:探讨从二十年前贮存的食管拉网微量细胞涂片中提取DNA并进行食管癌基因检测的方法和可行性,比较P53基因的突变在食管癌前期病变和正常食管上皮中的差异。方法:利用螯合型的离子交换树脂Chelex100作为介质,一步法从食管拉网脱落细胞提取DNA,应用PCR-SSCP方法和PCR-RFLP方法进行p53基因第5外显子及第7外显子的突变检测。结果:48例标本P53基因检测均获成功。食管上皮重度不典型增生细胞中发现有5例突变发生,均为p53基因第7外显子,而第5外显子未发现突变;正常食管鳞状上皮拉网脱落细胞中均未发现突变。检测到的5例突变中,其中有3例分别在10年、12年和14年后转变为食管癌。结论:Chelex100法能从微量细胞涂片中提取DNA,使对20年前食管拉网细胞涂片标本进行分子水平的检测成为可能。为食管癌前期病变的研究提供一种新的方法。p53基因的突变使食管上皮癌前期病变细胞具有了癌变趋势。     

食管脱落上皮细胞中p53基因突变的检测

目的 探讨在食管拉网细胞中进行食管癌基因检测的方法及可行性,了解食管癌前期病变细胞中p53基因的突变与癌变的关系。方法 对四川省盐亭县1982年进行食管癌普查的食管拉网脱落细胞涂片标本,应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,检测其p53基因第5外显子及第7外显子的突变情况。结果 全组48例标本中,食管正常上皮和重度不典型增生上皮各24例,p53基因检测均获成功。食管重度不典型增生上皮细胞中有5例检测到突变,均为p53基因第7外显子突变,而第5外显子未检测到突变;正常食管鳞状上皮拉网脱落细胞中未发现突变。检测到突变的5例食管上皮重度不典型增生者,有3例分别在10年、12年和14年后转变为食管癌。结论p53基因突变的食管上皮不典型增生细胞具有明显的癌变趋势;对食管拉网脱落细胞涂片标本进行微量DNA的提取、扩增和基因检测,可作为研究食管癌前期病变的一种新方法。     

食管鳞状上皮细胞癌中P53基因突变的PCR-SSCP检测

应用PCR－SSCP银染技术检测了40例食管鳞状细胞癌p53基因第5、6、7和第8外显于的突变情况。结果显示：13例（32．5％）有p53基因突变，突变主要发生在第5和第8外显子，与癌分化程度无明显关系，但伴淋巴结癌转移病例中p53基因的突变率明显高于无转移者（P＜0．05）。本研究提示，p53基因突变存在于中、晚期食管癌中，并可能与食管鳞癌的进展与转移有关。     

DHPLC检测林州市高龄组和低龄组居民食管癌p53基因外显子突变谱的比较研究

目的:研究我国食管癌高发区林州市居民高龄食管癌患者与低龄食管癌患者中抑癌基因p53全部编码外显子基因突变谱的情况,比较两组患者中p53基因突变的差异。方法:留取林州市>70岁和<40岁、低年龄组食管癌患者食管癌新鲜标本51例,提取DNA,PCR扩增p53第2～11外显子。DHPLC进行突变的筛查。突变样本进行DNA纯化测序分析。结果:51例患者中,p53至少有1个外显子基因突变的36例,突变率为70.6%。高年龄组突变率为63.3%(19/30),低年龄组突变率为80.9%(17/21),两者比较无统计学意义(P>0.05)。p53有2个外显子基因突变的10例,突变率为17.6%。高年龄组突变率为26.7%(8/30),低年龄组突变率为9.5%,两者比较无统计学意义,P>0.05。结论:p53基因突变是林州市居民食管癌发生过程中的一个发生频率很高的事件。林州市居民的p53外显子突变谱中,共有15种突变类型,共计59个突变位点,其中最多的突变类型是插入碱基C。在p53基因第2～8外显子与内含子交界的非编码区有大量的基因突变。     

DHPLC检测林州市高龄组和低龄组居民食管癌p53基因外显子突变谱的比较研究

目的：研究我国食管癌高发区林州市居民高龄食管癌患者与低龄食管癌患者中抑癌基因p53全部编码外显子基因突变谱的情况，比较两组患者中p53基因突变的差异。方法：留取林州市〉70岁和〈40岁、低年龄组食管癌患者食管癌新鲜标本51例，提取DNA，PCR扩增p53第2～11外显子。DHPLC进行突变的筛查。突变样本进行DNA纯化测序分析。结果：51例患者中，p53至少有1个外显子基因突变的36例，突变率为70．6％。高年龄组突变率为63．3％（19／30），低年龄组突变率为80．9％（17／21），两者比较无统计学意义（P〉0．05）。p53有2个外显子基因突变的10例，突变率为17．6％。高年龄组突变率为26．7％（8／30），低年龄组突变率为9．5％，两者比较无统计学意义，P〉0．05。结论：p53基因突变是林州市居民食管癌发生过程中的一个发生频率很高的事件。林州市居民的p53外显子突变谱中，共有15种突变类型，共计59个突变位点，其中最多的突变类型是插入碱基C。在p53基因第2～8外显子与内含子交界的非编码区有大量的基因突变。     

p53基因在人食管诱发癌中的突变

目的：了解抑癌基因p53在人食管癌及其癌旁组织中的突变和致癌作用。方法：采用PCR-SSCP和DNA序列分析等方法对24例人食管鳞状细胞癌术后标本和21例移植到重度完全性免疫缺陷(severe：comlbined immunocleficient，SCID)小鼠并用或不用N-戊基-N-甲基亚硝基胺(N-amyrl-N-methylnitrosamine，AMN)处理的人食管正常组织标本，进行了p53基因外显子4～8的突变研究分析。结果：在食管癌组织及癌旁组织均检测出p53基因突变，其中食管癌组织标本中有18个突变，癌旁组织标本中有10个(10／17，58．8％)突变，主要的突变为G-A转换。在14例用AMN处理的人食管正常组织标本中出现6个(42．9％)突变；其中密码子283的突变为G-A转换。在人食管癌及其癌旁组织中p53基因的突变概率差异无统计学意义。结论：环境因素或内源性AMN可能是河南林县食管癌高发的主要原因之一。     

软组织肉瘤中p53基因的突变和蛋白的表达研究

目的检测软组织肉瘤中p53基因的突变和蛋白的表达情况。方法应用PCR-SSCP和DNA测序的方法检测p53基因的突变,免疫组织化学技术Envision二步法检测p53蛋白的表达。结果 63例软组织肉瘤中检测到p53基因突变18例（28.6%）,突变位点主要在第6外显子和第7外显子,突变和组织学分级间无明显相关性;63例p53蛋白的表达44例,蛋白的表达与组织学分级间无明显相关性;且p53基因的突变与p53蛋白的表达无明显相关性。结论 p53基因的突变和p53蛋白的表达可能作为软组织肉瘤发生的一个重要因素。     

甲状腺癌p53基因甲基化的研究

目的 探讨甲状腺癌 p53基因甲基化状态.方法 用限制性内切酶HpaⅠ和MspⅠ酶切甲状腺癌及癌旁组织DNA,通过聚合酶链反应(PCR)扩增p53基因第5外显子,经琼脂糖凝胶电泳后,分析其电泳图谱.结果12例甲状腺癌中9例p53基因第5外显子出现高甲基化状态,而5例癌旁组织为低甲基化状态.结论p53基因高甲基化状态与甲状腺癌发生以及p53基因点突变有关.     

41例人脑胶质瘤组织中p53基因突变的研究

背景与目的:p53抑癌基因在细胞周期的调控、维持细胞基因组的完整性、诱导细胞分化和凋亡中起着重要作用。胶质瘤尤其是星形细胞肿瘤中,经常发生p53基因突变。本研究探讨人脑胶质瘤中p53突变及与胶质瘤发生发展的相关性。方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerase chainreaction-single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)及DNA测序技术对41例不同类型人脑胶质瘤p53基因突变进行检测。结果:通过PCR-SSCP检测发现在41例人脑胶质瘤组织中有17例(41.5%)呈现p53基因的单链构象多态性改变,均位于5～8外显子,突变例数依次为7(41.2%)、1(5.9%)、4(23.5%)、5(29.4%)。Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中p53基因突变率明显高于Ⅰ、Ⅱ级肿瘤(58.3%vs.17.6%,P<0.01);DNA序列分析显示,17例PCR-SSCP检测阳性的肿瘤p53基因相应外显子均存在基因点突变或缺失,其中错义突变13例,占76.5%;同义突变2例,占11.8%;移码突变2例,占11.8%;碱基突变以G→A或A→G最多,占55.6%。结论:胶质瘤中p53突变多发生于第5、8外显子,基因突变类型以错义突变为主,该基因的突变与胶质瘤的发生及恶性进展过程相关。     

中国南北方食管癌患者中 p53基因外显子突变谱的差异研究

目的：探讨南北方食管癌患者中抑癌基因p53全部编码外显子基因突变谱的差异。方法各选取揭阳居民食管癌患者42例,佛山患者52例,常规提取DNA, PCR扩增p53第2-11外显子全部编码区和附近的一部分非编码区,扩增产物用DHPLC进行突变的筛查。筛查出的突变样本进行DNA纯化测序分析,测序结果在NCBI网站进行p53突变位点的比对和定位。结果高、低发区组中p53至少有1个外显子基因突变的突变率分别为63．8％（28／42）和61．5％（32／52）,两者比较差异无统计学意义（P＝0．607＞0．05）; p53有2个外显子基因突变的突变率分别为14．3％（6／42）和15．4％（8／52）,两者比较差异也无统计学意义（P＝0．881＞0．05）。结论高低发区间可能具有相似的环境致癌物质,通过相同的p53基因突变机制导致了两地食管癌的发生。