人外周血淋巴细胞化学发光测定的最佳实验条件探讨

本文采用正交设计对人外周血淋巴细胞(PBL)化学发光(CL)测定系统中的PBL、Luminol及ConA浓度进行分析比较,并探讨了新生牛血清(NCS)、牛血清白蛋白(BSA)、细胞保存温度与时间等对淋巴细胞化学发光(Ly-CL)的影响。结果表明,Ly-CL测定的最优实验条件为:(1)测定系统含1.0ml PBL悬液(1.4×10°/ml)、0.2ml Lumionl溶液(7×10~(-4)M)及0.2ml ConA溶液(700μg/ml);(2)分离的PBL悬于0.1％BSA-无酚红Hanks液中,4℃冰浴保存,2小时内完成测定。     

内毒素肺损伤时肺淋巴液中淋巴细胞化学发光的变化

中性粒细胞活化在急性肺损伤中的作用受到广泛重视，但淋巴细胞与肺损伤的关系则报道较少。本文应用内毒素肺损伤和化学发光技术，观察肺淋巴液中的淋巴细胞的活性，以探讨淋巴细胞在肺损伤中的可能作用。方法（一）绵羊肺淋巴瘘的制备和肺损伤模型复制：健康无孕雌性绵羊...     

丹参提取物对氧自由基引起的化学发光的抑制作用

观察了经调理的酵母多糖（ＯＺ）、Ｎ－ｆｏｒｍｙｌｍｅｔｈｉｏｎｙｌ－Ｌｅｕｃｙｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ（ｆＭＬＰ）Ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎｏｐｈｏｒｅ（Ａ２３１８７），等几种白细胞激动剂引起的大鼠腹腔中性粒细胞（ＰＭＮｓ）的化学发光和次黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶系统（ＨＯ－ＸＯ）产生的化学发光。观察到了具有抗炎作用的中药单体７６４－３对ＰＭＮ吞噬ＯＺ引起的化学发光及ＨＯ－ＸＯ系统产生的化学发光具有明显     

人T淋巴细胞化学发光测定

<正> 淋巴细胞化学发光(Ly-CL)技术常用于淋巴细胞活化、杀伤和氧化活性的研究。然而,目前所用的人外周血Ly-CL测定,其分离的淋巴细胞中除T和B细胞外,也包括少数单核细胞。Falck指出,在诱导细胞化学发光方面,有丝分裂原不像诱导淋巴细胞增殖反应那样具有选择性。因此,研究T或B细胞氧化活性时,还有赖于细胞亚群的纯化。本文报告建立人T淋巴细胞化学发光测定方法。     

氧化磷酸化、细胞骨架在淋巴细胞化学发光中的作用

本文阐述体外由植物血凝素（ＰＨＡ）激发的人外周血淋巴细胞化学发光的实验条件，并研究叠氮钠、松胞素Ｂ、秋水仙胺对淋巴细胞化学发光峰值的影响。结果表明，叠氮钠（１０，２０，４０ｍｍｏｌ／Ｌ。）能够通过抑制淋巴细胞膜ＮＡＤＰＨ氧化酶氧化磷酸化而减弱淋巴细胞化学发光（Ｐ＜０．０１）。松胞素Ｂ（１，５，１０μｇ／ｍｌ）和秋水仙胺（１，２，４μｇ／ｍｌ）分别破坏淋巴细胞的微管、微丝而抑制淋巴细胞化学发光（Ｐ＜０．０１）。由此可见，ＮＡＤＰＨ氧化酶氧化磷酸化，细胞骨架在淋巴细胞化学发光中起着重要的作用。     

肿瘤坏死因子β诱导淋巴细胞化学发光及其增殖的研究

目的：探讨活性氧参与ｒｈＴＮＦβ诱导淋巴细胞活化作用的机理。方法：采用化学发光（ＣＬ）和顺磁共振法（ＥＳＲ）研究ｒｈＴＮＦＢ诱导人外周血淋巴细胞产生活性氧（ＯＲ）的动态变化及其增殖作用。结果：①用１０－２０００Ｕ／ｍｌ的ｒｈＴＮＦβ处理１×１０６ｍｌ－１淋巴细胞均可诱发Ｌｙ－ＣＬ,其中以１００Ｕ／ｍｌ　ｒｈＴＮＦβ处理１８～２０ｍｉｎ的ＣＬ峰值（ＲＬＩ）为最高,所诱发的ＯＲ主要为ＯＨ·;②以１５～６２Ｕ／ｍｌ的ｒｈＴＮＦβ处理淋巴细胞７２ｈ,可明显地产生活化效应,这与ＴＮＦＢ诱发淋巴细胞早期产生Ｌｙ－ＣＬ的强度相一致。结论：适当剂量的ｒｈＴＮＦβ可诱导人外周血淋巴细胞产生ＯＲ并促进其增殖。     

化学发光免疫法检测前列腺特异性抗原的临床应用

目的 利用化学发光免疫法定量检测前列腺特异性抗原(PSA),分析其在临床诊断前列腺癌中的应用情况.方法 将60例前列腺癌患者设为A组,60例良性前列腺增生患者设为B组,60例健康体检者设为C组,对三组受试者血清中总前列腺特异性抗原(tPSA),游离前列腺特异性抗原(fPSA)进行化学发光免疫法检测,并分析其水平差异.结果 经检测,A组和B组的tPSA含量显著高于C组,而且A组tPSA含量显著高于B组,差异显著,存在统计学意义(P＜0.05);另外A组fPSA/tPSA比值低于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对PSA进行化学发光免疫法检测,具有较高的临床诊断价值,可为前列腺癌临床诊断提供可靠的参考依据.     

血清真胰岛素化学发光免疫分析方法学研究

建立一种高灵敏度真胰岛素临床常规检测方法.采用两株特异的抗胰岛素单抗体,分别抗胰岛素肽链上两个不同的抗原决定簇,用一株制备固相抗体,另一株标记碱性磷酸酶C,以金刚烷衍生物为发光底物建立化学发光免疫分析(CLIA)法.结果表明本方法灵敏度为0.06μIU/mL,标准曲线量程为1.0～150μIU/mL,批内和批间CV分别为5.0%、7.8%,平均回收率为94.4%.分别测定了男、女成人空腹血清各100份,男性实测范围0.52～11.23μIU/mL,平均值为3.86μIU/mL,女性实测范围为0.75～10.66μIU/mL,平均值为3.62μIU/mL.真胰岛素CLIA法简便快速,能真实反应血清胰岛素的水平,对临床糖尿病的诊疗和病理生理研究具有实用价值.     

化学发光免疫法和放射免疫法对甲状腺激素检测的比较分析

本文应用化学发光免疫分析和放射免疫分析检测血清甲状腺激素。结果表明,两种分析技术测定值相关性良好,其相关系数（ｒ）分别为０．９８４,０．９７９,０．９６,０．９８３。化学发光法实现分析程序安全自动化,非常适宜大量样品的检测,试剂盒有效期长,在一定时期两种方法将相互补充。     

淋巴细胞亚群及免疫球蛋白在儿童过敏性紫癜的意义

目的 探讨外周血淋巴细胞亚群和免疫球蛋白在儿童过敏性紫癜的变化及其临床应用价值.方法 选取我院儿科住院并确诊为过敏性紫癜(HSP)的患儿43例为疾病组,选取健康体检儿童60例为健康对照组.分别进行淋巴细胞亚群分析及血清免疫球蛋白检测,应用SPSS19.0统计学软件进行差异显著性检验.结果 疾病组治疗前和健康对照组外周血CD3+ 、CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD3+ CD4+/CD3+ CD8+ 、CD3-CD(56+ 16)+、CD3-CD19+和IgG、IgA等指标的差异具有统计学意义(P＜0.05).疾病组治疗前外周血CD3+、CD3+ CD4+、CD3+ CD4+/CD3+ CD8+水平较健康对照组明显降低,而CD3+ CD8+、CD3-CD(56+ 16)+、CD3-CD19+和IgG、IgA水平则明显升高,IgM在两组间差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后外周血CD3+、CD3+ CD4+水平回升,而CD3+ CD8+水平回落,CD3+ CD4 +/CD3+ CD8+比值也随之升高;CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD3+ CD4 +/CD3+ CD8+治疗前后的差异具有统计学意义(P＜0.05),而CD3+、CD3-CD(56+16)+及CD3-CD19+的差异无统计学意义(P＞0.05).另外,免疫功能检测结果显示:IgG和IgA在疾病治疗前后的差异同样具有统计学意义(P＜0.05);治疗后IgG和IgA水平明显下降至正常;而IgM在两组间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD3+ CD4 +/CD3+ CD8+及血清IgG和IgA可作为HSP患儿疾病活动性的实验指标应用于临床,对观察疾病的发生和发展有着重要的意义.临床监测CD3+ CD4+ 、CD3+ CD8+、CD3+ CD4 +/CD3+ CD8+的变化,对临床症状缓解但机体免疫功能还未完全恢复正常的HSP患儿的后续治疗和随访观察有重要的临床价值.     

慢性髓系白血病患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测的临床意义

目的 研究不同分期慢性髓系白血病患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的变化特点,以及应用伊马替尼治疗后获得完全细胞遗传学反应(complete cytogenetic reponse,CCyR)患者淋巴细胞亚群表达情况.方法 选取我院诊治40例慢性髓系白血病患者,其中急变期9例,慢性期31例.采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞水平,并与正常对照组进行比较.结果 初治慢性期、急变期CML患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值均低于正常对照组,且急变期CD3+、CD4+T细胞百分率及CD4 +/CD8+比值下降尤为突出(P＜0.01);初治慢性期患者NK细胞百分率与正常对照组相比无差异,而急变期患者低于正常对照组(P＜0.05).与正常组对比,伊马替尼治疗首次获得完全细胞遗传学反应患者仅CD4+T细胞百分率降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);但获得完全细胞遗传学反应后应用伊马替尼治疗大于12月患者,CD3+、CD4+T细胞百分率及CD4 +/CD8+比值较正常对照组均有所下降(P＜0.05).与治疗前相比,治疗首次获得完全细胞遗传学反应患者CD3+、CD4+T细胞百分率升高(P＜0.05),而缓解后应用伊马替尼治疗大于12月患者T淋巴细胞亚群无改变(P＞0.05);各组的NK细胞百分比无差异(P＞0.05).初诊CML患者、急变期CD4+/CD8+的比值与BCR-ABLl/ABL1的比值呈负相关.结论 CML患者存在细胞免疫调节功能异常,且机体免疫功能与疾病分期密切相关.伊马替尼治疗初次获得完全细胞遗传学反应患者细胞免疫功能得到改善,但长期应用抑制患者细胞免疫功能.     

Chemiluminescence in Human Whole Blood: Modulation by the Cocarcinogens Phorbol Diester and Polychlorobiphenyls

A human whole blood chemiluminescence (CL) assay was established using zymosan as cell activator. Aroclor 1254 was found to inhibit this CL response in a direct linear relation to its concentration, (50% inhibitory dose, (ID₅₀) equal to 5 × 10^-4 M) in diluted blood samples of 10 normal human subjects. In comparison the ID₅₀ of other inhibitors was 1.3 × 10^-3 M for ethylenediamine tetraacetic acid, 3.3 × 10^-3 M for ascorbic acid, 4 × 10^-3 M for reduced glutathione, 1.2 × 10^-3M for ethanol, 2.5 × 10^-1 for methanol and 3.7 × 10^-1 M for dimethyl sulfoxide. Using 12-o-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate (TPA) as cell activator the CL response was likewise inhibited by Aroclor 1254 with an ID₅₀ of 4.5 × 10^-4 M. However, it was found that Aroclor 1254 alone has a stimulatory CL effect on otherwise unactivated cells. To compare the mechanisms involved in the CL elicited by the three stimulants zymosan, TPA and Aroclor 1254, the CL signal was measured in the presence of cytochalasin B. Cytochalasin B inhibited zymosan-induced CL, had a smaller inhibitory effect on TPA-induced CL but it could augment the CL response initiated by Aroclor 1254. This pattern of responses implicates Aroclor 1254 in the activation of eicosanoid metabolism as it matches the differential responses reported for arachidonic acid.     

化学发光检验线性评价与应用

探讨EP6-A、CAP-IRC和改良的Doumas等三种线性评价方法的区别和适用性及在化学发光检验中的应用。采用CAP-IRC、EP6-A、改良的Doumas等三种方法对8个化学发光检验项目进行线性评价,比较评价结果的异同。结果显示：在8个化学发光检验项目中,EP6-A方法和CAP-IRC方法均有5个可直接判断为线性,2个为临床可接受线性,1个为非线性;改良的Doumas方法有3个为线性,5个为非线性。结论：改良的Doumas方法不适用于临床化学发光检验线性评价。     

化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用

目的 探讨化学发光免疫分析法检测乙肝病毒感染性标志物的临床应用效果.方法 抽取我院2013年1月至2014年1月接收的疑似乙型肝炎病人800例,采用化学发光免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附试验法(ELISA)分别检测患者的乙肝病毒血清标志物.结果 HBsAg、HBeAg、HBeAb的检出率CLIA高于ELISA(P＜0.01),两种方法HBsAb、HBcAb的检出率无明显差异(P＞0.05);低水平HBsAg检测ELISA敏感性低于CLIA;ELISA检出的最低浓度为0.128IU/mL,CLIA法检出的最低浓度为0.0311U/mL.结论 采用CLIA检测乙肝病毒感染性标志物相比ELISA更准确,可有效应用于乙肝临床诊断和病情动态监测.     

Chemiluminescence assay for detection of anti-platelet antibodies

Summary A chemiluminescence (CL) assay for detection of antiplatelet antibodies was developed. Platelets sensitized with a xenogeneic antiplatelet serum or a potent anti-P1^A1 serum stimulated granulocytes to produce CL. Other antibodies detectable by⁵¹chromium release and immunofluorescent assays were not discerned by the CL assay.