Survivin基因RNAi对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响

目的：观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响。方法：随机将BALB/c裸鼠分4组,分别注射转染携survivin RNAi重组质粒的HeLas2细胞、转染阴性对照质粒细胞HeLaNC、转染空质粒细胞HeLaU6 neo及宫颈癌HeLa细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型。观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组化法检测移植瘤组织中survivin蛋白的表达和微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响。结果：成功建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型, HeLas2组裸鼠瘤重明显小于其他3组（P<0.05）;肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织中survivin蛋白表达显著下降; MVD值也显著降低（P<0.05）;HE染色、TUNEL染色结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织细胞凋亡明显增多（P<0.05）,AI值达(22.73±137)%。结论：Survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达和降低其MVD抑制移植瘤生长并促进其凋亡。     

反义HIF-1α基因联合血管抑素基因对人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究反义缺氧诱导因子-1α（antisense hypoxia inducible factor-1α,aHIF-1α）基因联合血管抑素（angiostatin）基因对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的协同治疗作用。方法：使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立裸鼠皮下移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为4组,分别注射空质粒PcDNA3、PcDNA3-Angiostatin、PcDNA3B-aHIF-1α、PcDNA3-Angiostatin＋PcDNA3B-aHIF-1α。观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤组织Angiostatin、血管内皮生长因子（VEGF）、HIF-1α的表达和微血管密度（MVD）,利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果：Angiostatin基因联合aHIF-1α基因治疗组裸鼠的肿瘤生长受到明显抑制,肿瘤组织中HIF-1α蛋白局部低表达,MVD（13.6±2.3）明显低于Angiostatin基因治疗组（24.5±2.7）,VEGF表达低于各单独治疗组和对照组,细胞凋亡指数（5.32±0.62）高于Angiostatin基因治疗组（2.89±0.45）、aHIF-1α基因治疗组（2.98±0.51）和对照组（1.56±0.41）。结论：Angiostatin基因联合aHIF-1α基因治疗卵巢癌裸鼠皮下移植瘤可以产生协同抑制作用,可在一定程度上解决肿瘤的抗血管生成治疗的耐药性问题。     

白桦脂酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制

目的 探讨白桦脂酸（BA）对人宫颈癌HeLa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法 将4×10⁶个HeLa细胞接种于裸鼠右肩背部皮下,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,24只荷瘤裸鼠随机分为BA高剂量（80mg／kg）、中剂量（40mg／kg）、低剂量（20mg／kg）组及空白对照组（含溶剂）,每组6只,隔日腹腔注射连续给药21d,停药24 h后处死裸鼠,测量裸鼠体重、移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;光镜下观察移植瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数;免疫组化法检测瘤组织内caspase-3、CytoC蛋白表达。结果 裸鼠处死后,BA处理组的移植瘤体积均明显小于空白对照组（P＜0.01）,其中高、中、低剂量组抑瘤率分别为56.2％、40.4％和24.6％ （P＜0.01）;HE染色法显示BA处理组小鼠的移植瘤组织出现明显凋亡及坏死改变;TUNEL检测对照组和BA低、中、高剂量组的凋亡指数分别为（8.36±2.78）％、（20.98±3.01）％、（28.74±4.77）％和（39.34±6.15）％（P＜0.05）;免疫组化法示BA处理组的肿瘤组织caspase-3、CytoC蛋白表达水平较空白对照组明显升高（P＜0.01）。结论 BA对人宫颈癌HeLa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调caspase-3、CytoC蛋白的表达及诱导细胞凋亡有关。     

Suramin联合DDP对人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨suramin对人鼻咽低分化鳞癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立人鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）裸鼠移植瘸模型。将24只荷瘤裸鼠随即机分为4组；生理盐水对照组、suramin组、DDP组和suramin＋DDP组。每组6只。各组裸鼠分别经腹腔注射生理盐水、suramin（0．1mg／g·d^-1）、DDP（0．01mg／g·d^-1）、suramin和DDP（suramin0．1mg／g·d^-1，DDP0．01nag／g·d^-1），每天1次，连续10d后改为每周给药2次。共4w。将移植瘤完整切除。并称其重量。在光学显微镜和电子显微镜下观察移植瘤细胞形态变化，采用免疫组化法检测瘤组织中血管内皮生长因子（vascular endotheliai growth factor,VEGF）表达情况，TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡。结果腹腔分别注射suramin、DDP和suramin＋DDP后，人鼻咽癌BALB／C裸鼠移植瘤生长被抑制，各组抑瘤率分别为28．42％、57．52％和71．35％，与对照组相比有明显差异，suramin联合DDP其抑瘤率明显增加。对照组VEGF表达为（75．17±9．0）％。suramin组、DDP组和suramin＋DDP组的VEGF表达明显减少，分别为（43．83±7．5）％、（67．33±8．3）％和（35．50±6．8）％，与对照组相比。suramin组和suramin＋DDP组的VEGF表达有明显差异（P〈0．01）；suramin组和suramin＋DDP组的细胞凋亡率分别为（23．83±7．5）％和（35．50±6．8）％。与对照组（6．17±4．0）％相比有明显差异（P〈0．01）。结论suramin可抑制人鼻咽低分化鳞癌BALB／C裸鼠移植瘤的生长，suramin对人鼻咽低分化鳞癌BALB／C裸鼠移植瘤的生长抑制作用可能与其诱导癌细胞凋亡增加、抑制VEGF表达有关。suramin与传统化疗药物联用可起协同作用。     

TL对人胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用及抑制血管生成的研究

目的：探讨雷公藤内酯醇（TL）对人胰腺癌细胞SW1990移植瘤的生长及新生血管生成的抑制作用。方法：通过人胰腺癌裸鼠皮下移植实验，观察不同剂量TL对移植瘤生长抑制作用；应用免疫组化和RT-PCR研究裸鼠移植瘤组织VEGF表达变化，计算肿瘤组织微血管密度（MVD）。结果：各实验组（TL0．125、0．25和0．5mg·^-1kg·day^-1）抑瘤率分别达到66．16％、78．14％和89．92％，与对照组相比，肿瘤生长明显受抑，并具有剂量和时间依赖性。对照组和各实验纽瘤组织MVD分别为36．25±8．64、22．75±6．67、17．65±7．11和9．87±3．34（P〈0．01）；TL抑制移植瘤VEGF基因和蛋白表达．且VEGF基因下调与MVD的减少具有相关性（r=0．7424，P〈0．01）．结论：TL具有显著的抗胰腺癌移植瘤作用．其机制可能与抑制肿瘤新生血管生成有关。     

YH-16对宫颈癌Hela细胞及其裸鼠皮下移植瘤作用研究

目的：初步探讨YH-16（重组内皮抑素）对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤生长抑制作用及作用机制。方法：用MTY法检测YH-16对Hela细胞生长抑制作用；用透射电镜观察YH-16处理Hela细胞后的凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期；将Hela细胞移植至裸鼠皮下成瘤，观察不同浓度YH-16（0mg／kg、0．4mg／kg、0．75mg／kg和1．5mg／kg）对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响；TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡；免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度（MVD）。结果：YH-16具有体外抑制Hela细胞增殖的作用（P〈0．01）；能诱导Hela细胞凋亡；YH-16能有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.05）；YH-1615mg／kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其它治疗组明显降低（P〈0．05）。结论：YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用。     

RNA干扰HIF-1α增强宫颈癌BALB/c小鼠移植瘤放射敏感性

背景与目的：缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是一种重要的缺氧应答调控因子，在维持细胞能量代谢、肿瘤血管生成及转移、细胞增殖与凋亡等诸多方面起着重要作用。在子宫内膜癌、卵巢癌，食道癌等肿瘤中，国内外有大量研究报道，但均未有关于HIF-1α与宫颈癌移植瘤放疗敏感性关系的报道。本研究探讨RNA干扰乏氧诱导因子-1α增强宫颈癌BALB／c小鼠移植瘤放射敏感性的作用。方法：构建干扰HIF-1α质粒HIF-1α-shRNA，采用Western blot方法观察有氧与乏氧状态下RNA干扰HIF-1α蛋白的变化。将20只裸鼠分随机为两组．其中对照组接种含pGenesil-1空白质粒人宫颈癌HeLa细胞（命名为H0），实验组接种含HIF—1α-shRNA质粒的HeLa细胞（命名为H1），待裸小鼠右后大腿外侧皮下移植瘤长至直径8．0mm时，在两组中各取5只进行照射，计算两组裸鼠移植瘤长至14．0mm时的生长延缓时间。结果：①Western blot分析乏氧状态下对照组检测到HIF—1α蛋白质条带，常氧状态下实验组和对照组及乏氧状态下的实验组均未检测到HIF-1α蛋白质表达。②两组移植瘤从8．0mm生长到14．0mm时生长延缓时间分别为8d及14d（P〈0．05）。结论：RNA干扰H1F—1α可增强BALB／c小鼠宫颈癌移植瘤的放射敏感性。     

rmh-TNF协同顺铂抗小鼠Lewis肺癌血管生成的作用

目的：观察重组改构人肿瘤坏死因子（recombinant mutant human tumor necrosis factor，rmh-TNF）协同顺铂（cisplatin，又称DDP）抗小鼠Lewis肺癌血管生成的作用。方法：建立C57BL／6小鼠Lewis肺癌模型，随机分为4个治疗组：生理盐水对照组、rmh-TNF（150万U／kg）组、DDP（6．15mg／kg）组、联合用药组（DDP＋rmh—TNF）。接种肿瘤细胞后12d开始瘤内注射药物3d，RT-PCR法测定瘤组织中HIF—1α的表达，免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、激酶结构域受体（kinase domain region receptor，KDR）、微血管密度（microvascular density receptor，MVD）的表达，流式细胞术测定基质金属蛋白酶2（matrix metallopmteinase-2，MMP-2）的表达。结果：对照组、rmh-TNF组、DDP组和联合用药组小鼠肿瘤组织中的MVD数分别为（24．76&#177;1．28）、（18．95&#177;1．22）、（19．53&#177;1．15）、（10．43&#177;1．05），两单药组的MVD数明显低于对照组（P〈0．05）；联合用药组低于两单药组（P〈0．05）。HIF-1αmRNA相对表达水平分别为（0．171&#177;0．004）、（0．138&#177;0．006）、（0．134&#177;0．006）、（0．095&#177;0．006），两单药组较对照组明显下降（P〈0．05），联合用药组明显低于两单药组（P〈0．05）。肿瘤组织中MMP-2蛋白的荧光指数FI值依次为（1．000&#177;0．000）、（0．875&#177;0．020）、（0．848&#177;0．127）、（0．545&#177;0．107），单药组的MMP-2蛋白的（FI）值较对照组明显下降（P〈0．05），联合用药组明显低于两单药组（P〈0．05）。单药组VEGF、KDR表达均明显低于对照组（P〈0．05），联合用药组的表达均低于各单药组（P〈0．05）。结论：rmh—TNF能够增强DDP抗小鼠Lewis肺癌血管生成的作用。     

miRNA-496通过mTOR影响宫颈癌HeLa细胞的恶性生物学行为及裸 鼠移植瘤的生长

目的：探讨miR-496是否通过靶向mTOR影响宫颈癌HeLa细胞的周期、增殖、迁移、侵袭以及裸鼠移植瘤的生长。方法：选取2020年12月至2021年12月期间于河北医科大学第四医院接受手术的74例宫颈癌患者的肿瘤标本和癌旁组织标本,qPCR、WB法和免疫荧光法检测宫颈癌组织中 miR-496 和 mTOR 在 mRNA 和蛋白水平的表达。利用TargetScan数据库预测miR-496的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。将HeLa细胞按转染物不同分为对照组、miR-496 mimic组和miR[1]496 mimic+pMIR-mTOR组,CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测miR-496和mTOR对HeLa细胞增殖、周期、迁移和侵袭的影响。将对照组、miR-496 mimic组HeLa细胞接种至BALB/c裸鼠皮下构建宫颈癌裸鼠移植瘤模型,21 d后处死小鼠,剥离小鼠肿瘤组织并称取瘤质量,免疫荧光法和WB法检测miR-496过表达对移植瘤组织中mTOR和Ki67表达的影响。结果：在宫颈癌组织中,miR-496呈低表达,而mTOR mRNA和蛋白呈高表达。miR-496能够靶向结合mTOR mRNA的3’-UTR。与对照组和miR-496 mimic+pMIR-mTOR组相比,miR-496 mimic组HeLa细胞的miR-496水平和S期细胞比例均显著升高,而增殖水平、迁移和侵袭细胞数均显著降低（均P<0.01）。成功构建宫颈癌裸鼠移植瘤模型,接种21 d后,miR-496 mimic组移植瘤质量、移植瘤组织中mTOR和Ki67的表达水平均显著低于对照组（均P<0.01）。结论：miR-496在宫颈癌组织中呈低表达,miR-496过表达可通过靶向调控mTOR抑制HeLa细胞的恶性生物学行为和裸鼠移植瘤的生长。     

雷帕霉素抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用及其机制北大核心CSCD

目的探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对人宫颈癌HeLa裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其可能的机制。方法裸鼠皮下接种HeLa细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组、RAPA低剂量组(1.5 mg/kg)、RAPA高剂量组(4.5 mg/kg)。RAPA治疗过程中,检测肿瘤的体积、质量,免疫组织化学法及RT-PCR法检测低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)mRNA、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA的表达及肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果 RAPA低剂量组、高剂量组肿瘤生长曲线均减缓;RAPA低剂量组及高剂量组裸鼠皮下移植瘤平均体积、重量与对照组比较显著减小(P<0.01);低剂量组与高剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。RAPA低剂量组及高剂量组VEGF蛋白、VEGF及HIF-1α含量、MVD与对照组比较显著减少(P均<0.01),低剂量与高剂量组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 RAPA对裸鼠皮下移植瘤生长(体积、重量)具有明显的抑制作用,其可能机制是通过抑制HIF-1α的表达抑制VEGF的合成,进而抑制肿瘤组织的血管形成。     

生存素反义核酸联合泰素帝治疗荷耐药结肠癌移植瘤裸鼠的初步观察

 目的 探讨生存素（survivin）反义基因与化疗联合应用提高耐药结肠癌疗效的可行性。方法 以泰素帝、survivin反义核酸及survivin反义核酸联合泰素帝分别对荷LoVo／Adr结肠癌鼠模型进行干预治疗，观察肿瘤生长情况，并检测肿瘤组织survivin蛋白表达变化及凋亡变化。结果 单用泰素帝对LoVo／Adr移植瘤无明显抑制作用，survivin反义核酸能有效抑制移植瘤生长，survivin反义核酸联合泰素帝对肿瘤抑制作用最明显。泰素帝对肿瘤组织survivin蛋白表达无明显影响，survivin反义核酸能显著降低肿瘤组织survivin蛋白的表达，survivin反义核酸联合泰素帝对肿瘤组织survivin蛋白降低作用最为明显。各组肿瘤组织凋亡指数分别为（7．0±1．83）％、（21．50±2．38）％和（43．5±3．87）％，前者与对照组（6．5±1．29）％相比差异无统计学意义（P〉0．05），后两者与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 survivin反义核酸对泰素帝具有明显增效作用，两者联合应用能发挥对耐药结肠癌的协同治疗效应。     

靶向survivin基因siRNA对宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验 

 目的 探讨survivin表达对宫颈癌放射敏感性的影响。 方法 RT-PCR和Western blot法分析survivin基因mRNA和蛋白的表达, 平板集落形成实验检测细胞 增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。 survivin siRNA转染HeLa细胞,比较survivin siRNA对细胞凋亡、增殖以及放射敏感性的 影响。 结果 在宫颈癌HeLa细胞中存在survivin的表达,survivin siRNA可诱导HeLa细胞凋亡并抑制增殖 。 结论 survivin siRNA可通过影响细胞凋亡和增殖来增加HeLa细胞的放射敏感性     

HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢（P〈0.05）。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为（0.59±0.28）g,明显轻于空白对照组[（1.90±0.18）g]和无意义序列转染组[（1.66±0.24）g,P〈0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.45±0.04）%和（24.56±5.83）%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.32±0.02）%和（29.08±3.99）%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组（P均〈0.05）。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。     

TAT-OSBP-MKK6（E）抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤恶性生物学行为的研究

目的 探讨TAT-OSBP-MKK6（E）对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长、侵袭及转移等恶性生物学行为的影响。方法 18只裸鼠随机分为实验组［TAT-OSBP-MKK6（E）］、阴性对照组［TAT-OSBP-MKK6（E）+SB202190］和空白对照组（生理盐水）,每组6只,细胞接种法建立人卵巢癌腹腔移植瘤模型,每2天测量腹围。4周后解剖裸鼠,观察裸鼠成瘤情况,测定腹水量,统计肿瘤播散器官数及瘤结节数,称量瘤体重量并计算抑瘤率。采用HE染色分析移植瘤的病理形态学特点;采用TUNEL法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（AI）;免疫组化SP法检测各组移植瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达;Western blotting检测各组移植瘤组织中p38蛋白表达。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,实验组裸鼠腹围增长明显滞后（P＜0.05）,腹水量明显减少（P＜0.05）,肿瘤播散器官数、瘤结节数及瘤体重量均明显减少（P均＜0.05）,抑瘤率达70.99％。实验组的AI为（20.44±1.20）％,显著高于阴性对照组的 （4.94±0.24）％和空白对照组的（4.00±0.79）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组VEGF蛋白的阳性表达率为21.2％,显著低于阴性对照组的81.4％和空白对照组的85.7％,差异均有统计学意义（P＜0.05）;实验组p38蛋白的相对表达量为0.40±0.01,显著高于阴性对照组的0.22±0.01和空白对照组的0.20±0.01,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 TAT-OSBP-MKK6（E）能显著抑制人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的生长、侵袭及转移。     

Survivin expression and its relation with proliferation, apoptosis, and angiogenesis in brain gliomas

BACKGROUND: An unbalance of cell proliferation and cell apoptosis is an important mechanism in carcinogenesis, and angiogenesis also plays a crucial role in tumorigenesis. Recently, survivin has been identified as an important member of the inhibitor of apoptosis protein (IAP) family. Although it has been shown that survivin is highly expressed in gliomas, and is associated with tumorigenesis, progression, and poor prognosis of gliomas, as yet the relation of survivin expression with proliferation, apoptosis, and angiogenesis of gliomas it is still unclear. METHODS: Eighty-three cases of brain glioma were chosen and protein expressions of survivin and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in glioma cells and Factor VIII-related antigen (FVIII-RAg) in vascular endothelial cells were investigated by immunohistochemistry. Apoptotic cells of brain glioma were screened by TdT-mediated dUTP nick end-labeling (TUNEL), and survivin immunoreactivity score (IRS), proliferative index (PI), apoptotic index (AI), overall daily growth (ODG), and microvessel density (MVD) in brain gliomas were measured. RESULTS: The survivin IRS, PI, AI, ODG, and MVD of brain gliomas were 3.75 +/- 3.89, 28.39 +/- 19.49%, 1.00 +/- 0.80%, 12.19 +/- 10.21%, and 62.75 +/- 31.50, respectively, and all of them increased markedly with an increase in the pathologic grade of brain gliomas (P < 0.001 for all). PI, ODG, and MVD in the survivin-positive group were significantly higher than those in the survivin-negative group (P < 0.001 for all). PI, ODG, and MVD were positively correlated with survivin IRS (P < 0.001 for all). Although there was no significant difference between AI in the survivin-positive group or in the survivin-negative group (P = 0.108), AI was inversely correlated with survivin IRS (P = 0.005). CONCLUSIONS: Survivin is overexpressed in brain gliomas, which may play an important role in malignant proliferation, antiapoptosis, and angiogenesis of brain gliomas.     

pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的抑制

目的:研究靶向hTERT基因的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA对人结直肠癌SW480细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。方法:于裸鼠右侧腋下皮下注射人结直肠癌SW480细胞建立结直肠癌移植瘤动物模型,随机分为生理盐水组(NS组)、pGPU6/GFP/Neo-NC-shRNA组(NC-shRNA组)和pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA组(hTERT-shRNA组),各组连续进行相应治疗6次后,观察肿瘤的生长状况,测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,H-E染色观察肿瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测移植瘤组织中hTERT蛋白的表达,TUNEL法检肿瘤组织中细胞凋亡情况,RT-PCR法检测瘤组织中hTERT mR-NA的表达。结果:与NC-shRNA组和NS组比较,hTERT-shRNA组移植瘤体积增长速度减慢;hTERT-shRNA组移植瘤组织中见肿瘤细胞形态明显改变,凋亡细胞数明显增多[(36.30±5.05)%vs(5.25±1.06)%、(6.95±1.07)%,P<0.01];hTERT-shRNA组hTERT的mRNA和蛋白表达均明显受到抑制(171.42±30.94 vs 146.89±21.43、137.35±25.49,P<0.01;0.39±0.09 vs 0.81±0.335、0.750±0.206,P<0.05)。结论:重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA通过下调hTERT mRNA和蛋白水平的表达促进肿瘤细胞的凋亡,抑制结直肠癌移植瘤的生长。     

靶向IGF1R的siRNA抑制人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤的实验研究

背景与目的:利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法.本研究探讨人胰岛素样生长因子1类受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)的短发夹环RNA对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的抑制作用.方法:设计并合成特异性靶向IGFIR的siRNA片段,构建SMMC7721-IGFlR-siRNA表达质粒,将其转入SMMC7721细胞.通过G418筛选出稳定株,移植裸鼠成瘤.同时设立对照组.根据体积的均数值绘制肿瘤生长曲线,以HE染色法观察质粒处理后瘤组织的病理改变,Western blot检测肿瘤组织中IGF1R的表达变化,免疫组化SP法检测检测瘤组织内微血管密度,原位末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果:SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤体积与SMMC7721-IGF1R-mutation组、SMMC7721组相比差异有统计学意义(P＜0.05).病理学检查及TUNEL检测发现,SMMC7721-IGF1R-siRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞凋亡指数[(50.2±6.4)%]明显高于SMMC7721.IGF1R-mutation 组[(5.4±1.0)%]和SMMC7721组[(6.0±2.1)%](P＜0.05).SMMC7721-IGF1R-siRNA组与SMMC7721-IGF1R-mutation 组、SMMC7721相比,瘤内IGFIR蛋白表达明显下调.SMMC7721-IGF1R-siRNA组微血管密度(11.3±4.4)与SMMC7721-IGF1R-mutation组(36.7±7.6)、SMMC7721组(28.4±6.5)相比明显下降(P＜0.05).结论:构建的SMMC7721-IGF1R-siRNA具有RNA干扰作用,能抑制SMMC7721细胞裸鼠移植瘤的生长.     

RNA干扰survivin基因对卵巢癌细胞生长凋亡及药物敏感性的影响

目的 探讨下调survivin基因对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的影响.方法 构建survivin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体pSilencer-survivin,用脂质体方法转染SKOV3/DDP细胞株,另设未转染组和转染pSilencer-control组作为对照.显微镜下观察转染前后细胞的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测survivinmRNA及蛋白的表达,二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化.各组细胞加入DDP,检测其对DDP药物敏感性的影响.结果 survivin siRNA可明显下调SKOV3/DDP细胞中survivin mRNA及蛋白表达水平.SKOV3/DDP细胞生长受到明显抑制,生长曲线低平.转染48 h后,转染pSilencer-survivin组细胞凋亡率为19.1%,明显高于末转染组(2.6%)和转染pSilencer-control组(3.5%),G1/G0期细胞所占的比例增高,而G2/M期细胞所占的比例降低.转染pSilencer-survivin组细胞的IC50明显降低,为1.16 μg/mi.结论 survivin siRNA可下调SKOV3/DDP细胞中survivin的表达,使细胞生长减慢,凋亡增加,对DDP的药物敏感性增强.