高胰岛素水平对血管平滑肌细胞NO生成的影响

培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC) ,检测高胰岛素 (HI)对VSMC膜蛋白激酶C(PKC)活性的影响 ;并采用硝酸还原酶法和免疫印迹法检测HI加或不加PKC抑制剂 -H7对脂多糖 (LPS) +γ -干扰素 (γ -IFN)诱导NO生成和一氧化氮合酶 (iNOS)表达的影响。结果 ,HI预处理的VSMC ,膜PKC活性明显高于对照 (P <0 .0 5 ) ;LPS +γ -IFN诱导NO生成显著低于对照 (P <0 .0 1) ,加H7培育 ,NO的生成量较HI处理组明显提高 ,但低于对照 (P <0 .0 1)。免疫印迹示HI处理的VSMC ,iNOS表达下降。提示 :高胰岛素血症可能通过激活VSMC膜PKC ,部分抑制iNOS表达 ,减少NO产生。     

蛋白激酶C对脂多糖诱导的诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控作用

目的　探讨脂多糖 (LPS)诱导单核 巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达的分子机制。方法　用LPS刺激诱导RAW2 64 .7细胞 ,观察其对蛋白激酶C(PKC)的激活 ,用Griess还原法测定PKC抑制剂对LPS诱导的一氧化氮 (NO)生成作用 ,并用逆转录PCR(RT PCR)研究其对iNOS基因表达的影响 ;构建iNOS荧光素酶报告基因载体 ,用基因转染及报告基因检测等方法研究LPS刺激RAW2 64 .7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及PKC对其影响。结果　LPS刺激RAW2 64 .7细胞引起PKC磷酸化激活和膜移位 (P <0 .0 1 ) ;LPS刺激RAW2 64 .7细胞 1 2h后即可明显诱导NO生成 (30 .1μmol L± 5 .4μmol L ,P <0 .0 1 )和iNOS基因表达 ;PKC抑制剂H 7可抑制NO的生成 (P <0 .0 1 )和iNOS基因表达 ;LPS刺激诱导iNOS启动子的转录活性 [(2 5 .3± 4 .6)相对荧光素酶活性单位 ,P <0 0 1 ] ,用H 7和钙离子通道阻滞剂异搏定均可抑制其转录活性 (P <0 .0 1 )。结论　LPS刺激RAW2 64 .7细胞 ,通过引起细胞内钙增加和PKC激活诱导iNOS基因表达 ,使NO生成增加 ,这是内毒素休克时NO增加的一个重要的信号机制     

镁对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和一氧化氮合酶亚型的影响

目的：观察镁对人脐静脉内皮细胞一氧化氮（NO）和一氧化氮梧酶（NOS）不同亚型的影响。方法：镀铜镉还原法测定培养液中NO2^-/NO3^-含量，免疫组织化学法观察内皮细胞型NOS（eNOS)和诱导型NOS（iNOS)的表达。结果：与正常对照组相比，Mg^2 各剂量组NO2^-/NO2^-含量较高，差异具有显著性（P＜0．05）；H2O2＋Mg^2 各剂量组NO2^-/NO3^-含量高于H2O2组，差异具有显著性（P＜0．05）。与正常对照组相比，H2O2组iNOS和NF－κB P65平均灰度下降，eNOS平均灰度升高，且均具有显著性差异（P＜0．05），Mg^2 各剂量组eNOS平均灰度下降，具有显著性差异（P＜0．05）；与H2O2组相比，H2O2＋Mg^2 各剂量组iNOS和NF－κB P65平均灰度显著升高（P＜0．01），eNOS平均灰度下降（P＜0．05）；H2O2＋Mg^2 各剂量组eNOS和iNOS平均灰度低于相应的Mg^2 剂量组，且具有显著性差异（P＜0．05）。结论：镁的抗氧化作用机制可能涉及调控细胞转录因子和一氧化氮合酶不同亚型。     

胶质瘤协同诱导分化的免疫组化研究

目的 探索诱导分化在脑胶质瘤治疗中的用途。方法 应用SP免疫组化染色法，检测9顺式维甲酸及干扰素－γ（9－cisRA／IFN－γ）协同诱导分化处理前后脑胶质瘤细胞Ki－67及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗原的表达变化。结果 9－cisRA／IFN－γ协同诱导分化可使脑胶质瘤细胞Ki－67LI水平显著下降（P＜0．01）。而GFAP蛋白的表达显著增加（P＜0．01）。结论 协同诱导分化能有效逆转脑胶质瘤细胞的恶性增殖表型，并促使其进一步分化。     

牛磺酸对细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡的影响

目的：观察牛磺酸对白细胞介素－1β（IL-β）、肿瘤坏死因子（TNF）和γ－干扰素（IFN－γ）诱导的胰岛细胞凋亡的影响。方法：应用体外单层培养的Wistar大鼠胰岛细胞,分别检测IL－1β、TNF和IFN－以及牛磺酸对胰岛细胞凋亡细胞百分率,培养液中NO含量及NOS活性以及DNA片段的影响。结果：IL－1β、TNF和IFN－γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率及DNA片段明显增加,同时NO含量和NOS活性亦明显升高（P＜0．01）;牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用（P＜0．01）,且有剂量依赖性。结论：NO可能是介导上述细胞因子引起胰岛细胞凋亡的重要途径之一。牛磺酸能够改善细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡,其机制可能与抑制NOS活性从而减少NO的生成有关。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的巨噬细胞极化改变的影响

目的：探讨白藜芦醇对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞极化表型改变的影响。方法体外培养的RAW264．7小鼠巨噬细胞在六孔板孵育12 h ,分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS（100 ng／mL）组、LPS（100 ng／mL）＋白藜芦醇（30μmol／L）组,LPS＋白藜芦醇组在加入LPS前预先加入白藜芦醇孵育12 h;上述细胞在LPS刺激12 h后分别收集细胞和培养上清液;实时定量PCR（RT‐qPCR）检测经典的炎症活化型巨噬细胞（M1）型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA表达,以及替代活化巨噬细胞（M2）型相关基因IL‐10、PPARγ和Arg‐1 mRNA表达,Western blot检测细胞iNOS、Arg‐1蛋白表达,ELISA检测培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、IL‐10和 TNF‐α的水平。结果 RT‐qPCR检测结果显示,与LPS组相比,M1型相关基因iNOS、TNF‐αmRNA较LPS＋白藜芦醇组显著上升（P＜0．05）,而M2型相关基因IL‐10、PPARγ、Arg‐1 mRNA表达显著下调（P＜0．05）。Western blot检测发现,LPS组iNOS蛋白水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而Arg‐1蛋白水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。ELISA检测发现,LPS组培养上清液中炎性因子IL‐12 p40、TNF‐α水平显著高于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）,而IL‐10和水平显著低于LPS＋白藜芦醇组（P＜0．05）。结论白藜芦醇可能促进了LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞向M2型极化改变。     

脂多糖对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)诱导型一氧化氮合酶( iNOS)基因表达及一氧化氮(nitric oxide,NO)合成的影响.方法细胞培养、RNA印迹分析和亚硝酸盐含量测定.结果 LPS是iNOS的强效诱导物,可在转录水平上诱导VSMC iNOS mRNA表达,促进NO的合成,其作用强度与LPS剂量呈正相关;刺激12 h后,VSMC iNOS的表达活性最高,24 h开始下降.结论 LPS对iNOS表达的诱导作用与其浓度和作用时间有关.     

创面侵袭性感染组织病理制片方法的改进

探讨了中晚期大肠癌患者外周血单核细胞（PBM）分泌、膜受体的表达及信使传递介质的变化及PBM对NDV修饰的大肠癌细胞株杀伤活性。结果表明：（1）正常人单核细胞经诱导后均可释放和表达不同水平的INF和IL－2R，有明确的时间效价关系，其中以LPS＋INF－γ联合作用后效果最明显．LPS、LPS＋INF－γ能使胞内游离Ca2＋增高，但以LPS＋INF－γ对胞内Ca2＋的影响明显。PBM受A23187作用后胞内Ca2＋在极短时间迅速急剧增加。（2）LPS或INF－γ均不能诱导中晚期大肠场患者PBM释放TNF．也不能使其胞内游离Ca2＋水平发生改变，同时亦不受A23187的影响．经诱导的中晚期大肠癌患者PBM有IL－2R的表达，但IL－2R的表达率较正常人PBM则明显减少。仅在LPS＋INF－γ联合作用后可增加TNF的产量，提高IL－2R表达率和使胞内Ca2＋水平增高。提示；中晚期大肠癌患者PBM在分泌、膜受体表达及胞内Ca2＋的调节三层次均产生了不同程度的损害，但经适当的诱导可在一定程度上改善中晚期大肠场患者PBM的功能。（3）IFN－γ，TNF和IFN－γ＋TNF诱导的单核细胞均可对大肠癌细胞产生杀伤作用，但IFN－γ＋TNF联合激活单核细胞后细胞毒作用最强。提示：活化因素对单核细胞毒功能的重要性。（4）活化的单核细胞对NDV修饰的大肠场细胞杀伤作     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264.7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响

目的：观察氧化苦参碱（OMT））对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮（NO）释放量及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用LPS诱导RAW 264.7细胞建立细胞炎症反应模型。实验分组：空白对照组、LPS组（1μg/mL）、OMT组（100μmol/L）、LPS＋OMT小剂量组（20μmol/L）、LPS＋OMT中剂量组（50μmol/L）、LPS＋OMT大剂量组（100μmol/L）。采用Griess试剂法测定细胞培养液中NO释放量。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法测定RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达。结果：OMT显著减少LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）;同时减少LPS诱导的RAW 264.7细胞iNOS mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论：OMT可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达,减少NO的释放量而发挥抗炎作用。     

地塞米松对狼疮性肾炎患者外周全血培养细胞IL-12,IFN-γ分泌水平的影响

目的：探讨狼疮性肾炎（LN）患者外周循环IL－12，IFN－γ分泌水平的变化，以及肾上腺皮质激素对其分泌的影响。方法：选取16例活动性LN患者和10例正常人，采集静脉血标本分空白组，LPS／PHA刺激组及LPS／PHA＋DXM组作体外全血细胞培养，然后应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清IL－12，IFN－γ分泌水平，经扣除血浆基础细胞因子水平后作为该例标本的IL－12或IFN－γ分泌量。结果：LN患者的全分泌水平，经扣除血浆基础细胞因子水平后作为该例标本的IL－12或IFN－γ分泌量。结果：LN患者的全血培养细胞IL－12及IFN－γ的分泌量明显高于正常人（IL－12：P＜0．005，IFN－γ：P＜0．001）；而且两者均与系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDIA）呈不同程度的正相关关系；DXM对IL－12及IFN－γ分泌均有显著的抑制作用（均P＜0．01），而且在LN患者抑制作用更明显。结论：IL－12及IFN－γ分泌上调在LN的发病中起重要作用，抑制IL－12及IFN－γ的产生可能是它治疗LN中的机制之一。     

乌司他丁对脂多糖诱导的巨噬细胞NO释放和iNOSmRNA表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOS mRNA)表达的影响。方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10000U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOS mRNA的表达。结果 高浓度的乌司他丁(1000～10000U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P<0.05),下调iNOS mRNA含量(P<0.05);低浓度乌司他丁(100U/ml)对LPS诱导的RAW 264.7细胞NO、iNOS mRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOS mRNA表达,这种抑制与浓度相关。     

CaM抑制剂对LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响

目的观察钙调蛋白(Calmodulin,CaM)抑制剂对脂多糖/干扰素γ(LPS/IFN-γ)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其可能的作用机制。方法采用LPS/IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,钙调蛋白抑制剂(W-7,TFP)预处理细胞后,采用Griess试剂法测定NO释放量;采用Western blot法测定目的蛋白的表达;采用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达的变化。结果 CaM抑制剂可抑制LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO的释放(P<0.01);可抑制iNOS蛋白和mRNA的表达,早期可抑制IκBα的降解、磷酸化IKK(PIKK)和STAT1的蛋白(PSTAT1)表达。结论 CaM抑制剂可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO、iNOS蛋白和mRNA表达;可以通过抑制IκBα降解和磷酸化IKK蛋白表达而发挥抗炎作用。     

8Br-cAMP对人牙髓细胞NO表达的影响

目的探讨蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)信号通路激活剂8溴-环单磷酸腺苷(8 Br-cyclic adenosine monophosphate, 8Br-cAMP)与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙髓细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)表达的关系.方法采用RT-PCR、蛋白免疫印迹、硝酸还原酶法检测iNOS/NO表达. 结果 8Br-cAMP能够上调LPS诱导的人牙髓细胞iNOS/NO表达. 结论 PKA信号通路参与LPS诱导人牙髓细胞 iNOS表达的调节.     

巴马汀对LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO分泌及iNOS表达的影响

目的：观察巴马汀对脂多糖（LPS）诱导的RAW264．7小鼠巨噬细胞一氧化氮（NO）的分泌及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的作用。方法：采用LPS诱导RAW264．7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的巴马汀,采用Griess法测定NO的分泌量;采用Westernblot法检测iNOS蛋白的表达。结果：巴马汀能明显抑制LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO的分泌,以及iNOS蛋白的表达,并呈现出浓度依赖性。结论：巴马汀可通过抑制LPS诱导的RAW264．7巨噬细胞NO的分泌及iNOS的表达,从而发挥抗炎作用。     

血必净对LPS诱导血管内皮细胞NO产生和iNOS及核转录因子κB蛋白表达的影响

目的:探讨血必净对脂多糖( LPS )诱导血管内皮细胞（VEC）损伤的保护作用,研究在血必净干预下一氧化氮(NO)产生、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及信号转导机制。方法：将体外培养的VEC分为对照组、LPS(1 mg/L) 组、LPS(1 mg/L)+血必净( 25 g/L) 组、LPS( 1 mg/L )+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐( PDTC, 20 μmol/L ) 组,在给予LPS前预先用血必净和PDTC孵育1 h。采用Western blotting法检测iNOS和核转录因子-κB p65 (NF-κB p65)蛋白的表达情况,采用Griess法检测上清液中NO的水平。结果：与对照组比较,LPS组VEC中NO水平、iNOS和NF-κB p65蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与LPS组比较,LPS+血必净组VEC中NO水平、iNOS和NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与LPS组比较,LPS+PDTC组VEC中NO水平和iNOS及NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。LPS+血必净组与LPS+PDTC组比较,VEC中NO水平和iNOS蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),LPS+PDTC组VEC中NF-κB p65蛋白表达水平明显低于LPS+血必净组(P<0.05)。结论：血必净能抑制VEC中NO的产生和iNOS蛋白的表达,其机制可能是通过抑制NF-κB而抑制炎症反应。     

新精氨酸类似物对异丙肾上腺素诱导心肌细胞钙浓度改变的影响

目的 探讨新精氨酸类似物对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导心肌细胞内游离钙变化的影响.方法 培养乳鼠心肌细胞,白介素-6(IL-6)联合内毒素(LPS)诱导心肌细胞表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS),钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM及激光共聚焦显微镜检测精氨酸类似物对ISO诱导的心肌细胞内游离钙变化的影响.结果 IL-6联合LPS可以明显诱导心肌细胞表达iNOS,增加心肌中一氧化氮(NO)浓度;新精氨酸类似物可以降低炎症凶子刺激的心肌细胞中NO浓度,明显升高ISO诱导的心肌细胞内游离钙浓度.结论 新精氨酸类似物可以通过抑制心肌iNOS/NO途径,提高心肌对β受体激动剂的反应.     

人参皂甙对内毒素休克大鼠NO/NOS系统的影响

目的：研究人参皂甙和非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L—硝基—精氨酸(L-NNA)对内毒素休克大鼠NO／NOS系统的影响。方法：大鼠腹腔注射大肠杆菌脂多糖(LPS，10mg／kg)后随机分为对照组、LPS组、L-NNA组与人参皂甙组，观察平均动脉压(MAP)、肌酐清除率(Ccr)、肾组织NO浓度，总NOS(tNOs)、诱导型NOS(iNOS)活性与iNOS／tNOS比值以及肾组织病理变化。结果：(1)LPS组MAP及Ccr显著降低，肾组织NO增高，tNOS与iNOS活性以及iNOS／tNOS比值升高。肾间质水肿伴炎症细胞浸润，部分小管上皮细胞变性、坏死并见管型，死亡率20％。(2)L-NNA组MAP升高，但肾功能与病理损害更著，iNOS／tNOS比值较LPS组更高，死亡率达32％。(3)人参皂甙可纠正低血压，改善肾功能及病理损害，减轻肾组织NO过度升高，tNOS与iNOS活性以及iNOS／tNOS比值均较LPS组明显下降，死亡率8％。结论：L-NNA虽能阻止LPS引起的低血压，但肾功能与病理损害恶化，死亡率增加，可能与其对结构型NOS(cNOS)的抑制较iNOS更著有关；人参皂甙可维持血压，改善肾功能，维持cNOS、抑制iNOS、调节NOS亚型的特异性作用。     

诱导型一氧化氮合酶选择性抑制剂对大鼠免疫性肝损伤的影响

目的探讨大鼠免疫性肝损伤模型中一氧化氮（ＮＯ）的作用及诱生规律,诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）选择性抑制剂的作用机制。方法采用原位ＰＣＲ法对免疫损伤性肝细胞ＮＯＳ基因表达进行原位检测,并观察细胞培养上清中ＮＯ生成量及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性的变化。结果用卡介苗（ＢＣＧ,１５、３０、５０ｍｇ／只静脉注射）单独投与或与炎性细胞因子配伍（ＣＭ,含白细胞介素１β,干扰素γ,肿瘤坏死因子α及细菌脂多糖）可引起培养上清ＮＯ浓度及ＬＤＨ活性明显升高（均Ｐ＜０．０５）,ＮＯ生成量与肝损伤程度成正比,而与ＢＣＧ剂量成反比;大鼠免疫损伤性肝实质细胞ＮＯＳ基因表达以可溶性胞浆型ｉＮＯＳ为主;ｉＮＯＳ选择性抑制剂氨基胍在明显抑制细胞培养上清中ＮＯ生成（８３．４％,Ｐ＜０．０５）的同时,减轻肝细胞损伤的程度（３６．０％,Ｐ＜０．０５）;而转录抑制剂放线菌素Ｄ则加重肝损伤（增加２５．５％,Ｐ＜０．０５）。结论在免疫刺激条件下诱导生成的ＮＯ主要参与肝损伤机制     

七氟烷后处理对脂多糖致急性肺损伤大鼠iNOS/NO通路的影响

目的: 探讨七氟烷后处理对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）致急性肺损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）/NO通路的影响及作用机制。方法： 将30只大鼠随机均分为5组,生理盐水组和脂多糖组分别于气管内滴注生理盐水(1 mL/kg)或脂多糖(5 mg/kg);七氟烷0.5,1,2 h组于气管内滴注脂多糖4 h后,即急性肺损伤发生,分别吸入2.4%七氟烷0.5,1,2 h,模拟“后处理”方案。6 h后处死大鼠,取肺组织,行HE染色,观察病理变化;免疫组织化学法测iNOS表达;硝酸还原酶法测NO含量。结果： 与生理盐水组相比,脂多糖组肺泡腔内有大量炎性细胞浸润,肺间质及肺泡腔有严重的水肿、出血,肺泡结构破坏严重。七氟烷组肺组织损伤较脂多糖组明显减轻。脂多糖组肺组织内iNOS蛋白表达和NO含量较生理盐水组明显升高(P均<0.01);七氟烷组iNOS蛋白表达和NO含量较脂多糖组明显降低(P<0.01或P<0.05),以七氟烷1 h组和七氟烷2 h组下降更明显(P<0.05)。结论： 七氟烷后处理可减轻脂多糖所致大鼠急性肺损伤,其机制可能与抑制iNOS/NO信号通路的激活,减轻炎症反应有关。