吡非尼酮抑制转化生长因子β1诱导肺成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的:探讨吡非尼酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞胶原合成的影响及机制。方法 :以人胚胎肺成纤维MRC-5细胞为研究对象,用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号抑制剂SB203580和吡非尼酮处理TGF-β1诱导的肺成纤维细胞,MTT检测细胞增殖, Western blot检测细胞中Ⅲ型胶原酶(ColⅢ)、I型胶原酶(ColⅠ)蛋白表达和p38MAPK磷酸化水平。结果:TGF-β1诱导处理后的肺成纤维细胞增殖能力升高,细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化水平升高。吡非尼酮处理可以降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖能力,减少细胞中ColⅢ、ColⅠ和p38MAPK磷酸化蛋白表达。p38MAPK信号抑制剂SB203580处理具有协同吡非尼酮降低TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖和表达蛋白ColⅢ、ColⅠ及p38MAPK磷酸化水平的作用。结论:吡非尼酮通过抑制p38MAPK信号,从而抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞胶原合成。     

瘦素对人肾小管上皮细胞转分化和转化生长因子-β1表达的影响

目的观察瘦素(LP)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化及与转化生长因子-β1(TGF-βl)表达的影响,探讨其诱导转分化的机制。方法不同浓度LP(10、50、100ng/ml)刺激体外培养的HK-2细胞,以及LP作用不同时间(24、48、72h)进行分组,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;RTPCR法和Western blot法检测细胞α-SMA、E-cadherin、TGF-βl、FN的表达水平;ELISA法检测上清中TGF-βl蛋白表达量。抗TGF-βl抗体中和实验分析LP对HK-2细胞转分化及与TGF-βl的关系。结果 (1)LP可使HK-2细胞逐渐由椭圆形变成长梭形,类似肌成纤维细胞的形态;(2)LP可下调E-cadherin的表达,同时上调α-SMA、TGF-βl的表达,其作用呈一定的剂量及时间依赖性;(3)抗TGF-βl抗体能够逆转LP诱导的转分化作用。结论 LP通过诱导HK-2细胞发生转分化,参与肾间质纤维化的发生发展,其作用机制与上调TGF-βl的表达有关。     

转化生长因子-β1对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,同时观察TGF-β1对肾小管上皮细胞合成细胞外基质(ECM)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察TGF-β1诱导人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)合成CTGF、ECM、TIMP-1及α-SMA的情况.结果:在无TGF-β1刺激的情况下,HK-2细胞中有基础量的CTGF mRNA表达,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导HK-2细胞合成CTGF mRNA,其表达在24h时达高峰,同时TGF-β1可使HK-2细胞合成ECM、α-SMA增多,但在时相上均晚于CTGF.随着TGF-β1浓度的增加,HK-2细胞合成TIMP-1也随之增加,但较大剂量的TGF-β1(15ng/ml)方可使TIMP-1 mRNA的表达明显增加(P＜0.05).结论:TGF-β1可直接诱导体外培养的人近端肾小管上皮细胞表达CTGF,其表达转录水平要早于ECM、α-SMA的表达,提示CTGF可能介导了TGF-β1的促肾小管上皮细胞ECM合成和转分化的作用.     

TGF-β1与肝纤维化

肝纤维化是各种致病因子持续作用于肝脏,导致慢性肝损伤后的共同结果,多种细胞因子参与肝纤维化的发生,其中,转化生长因子β1(trarisforming growth factorβ1,TGF-β1)起关键性的作用.TGF-β1是具有多种生物学功能的细胞因子,可调节细胞的生长、分化、基质产生和凋亡;在胚胎生长发育过程中,对模型形成和组织特异性分化起重要作用;在成人,与组织修复和免疫系统调节过程有关.TGF-β1可以存在于所有的组织中,但在骨、肺、肾及胎盘组织中比较丰富.TGF-β1大多由实质细胞产生,亦可由浸润细胞,如淋巴细胞、单核细胞/巨噬细胞和血小板产生及释放.TGF-β1的信号转导由细胞膜上的是跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体介导,在胞质内信号由递质Smads介导转导至细胞核,影响特异性基因表达.本文从TGF-β1的细胞来源、信号转导、激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)、促进细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)沉积和活性调节方面对其在肝纤维化的发生机制中的重要作用作一综述.     

羟基红花黄色素A抑制转化生长因子-β1诱导NIH/3T3细胞的活化作用

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导NIH/3T3细胞活化的作用。方法:NIH/3T3细胞分8组:正常对照组、HSYA对照组、TGF-β1组、TGF-β1+0.5μmol/L HSYA组、TGF-β1+1μmol/L HSYA组、TGF-β1+2μmol/L HSYA组、TGF-1+2μmol/L SB-431542和TGF-β1+SB-431542+2μmol/L HSYA组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖;细胞划痕实验观察细胞的迁移。结果:MTT法观察结果表明:与各时间点正常对照组相比,TGF-β1作用24,48及72小时后的OD 570nm值明显升高(均P<0.01),并且同时高于TGF-β1+HSYA各组(均P<0.05)和TGF-β1+SB-43154两组。在TGF-β1作用0,2,8,12及24小时后,与正常对照组相比,细胞迁移距离明显增加(均P<0.001),并且同时高于TGF-β1+HSYA组(均P<0.001)和SB-431542组。结论:HSYA可抑制TGF-β1诱导NIH/3T3细胞活化作用并且呈现时效关系和量效关系。     

TGF-β1诱导人胎肺成纤维细胞分泌血管内皮生长因子以及布地奈德的调控作用

目的 应用转化生长因子(TGF-β1)刺激人胎肺成纤维细胞(HFL-1)检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,并观察布地奈德(Budesonide)对HFL-1分泌VEGF的干预作用.方法 采用体外培养细胞法,实验组加入不同浓度TGF-β1刺激,孵育72 h后收集细胞培养上清液,经EIA法检测VEGF含量;同时在0.5 ng/ml TGF-β1刺激下,观察应用不同浓度布地奈德对VEGF的调控.结果 低浓度TGF-β1上调VEGF的表达,但与对照组比较无显著性差异;随着TGF-β1刺激浓度加大,VEGF含量也逐渐增加,当TGF-β1浓度为0.5 ng/ml时,VEGF相对含量与空白对照组相比具有明显差异(P<0.01).10-7 mol/L布地奈德不仅能明显阻断内源性VEGF的表达,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),还可明显下调TGF-β1诱导的VEGF分泌增加效应,与相同浓度单独TGF-β1刺激组比较,VEGF含量明显下降,二者比较具有统计学意义(P<0.01).结论 TGF-β1能够诱导HFL-1增殖及VEGF分泌增加,具有浓度依赖效应.提示TGF-β1诱导VEGF分泌增加可能是纤维化形成的重要原因之一;抑制VEGF生成及血管新生可能是布地奈德发挥抗纤维化作用的重要分子机制.     

TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞间质转化及其机制探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肺泡上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程及信号传导通路。方法体外培养肺腺癌细胞系A549细胞,以TGF-β1进行干预;采用Western blot免疫印迹法检测干预前后细胞标志物蛋白及信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1、Snail2的表达;采用RT-PCR检测干预前后细胞标志物mRNA表达;采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果 TGF-β1干预后,随着时间的延长,A549细胞上皮细胞标志物E-cad和CK19蛋白及mRNA表达下调(P0.05);间质细胞标志物α-SMA、Vimentin蛋白及mRNA表达上调(P0.05);信号传导蛋白P-Smad2/3、Snail1表达上调(P0.05);倒置相差显微镜观察TGF-β1干预后A549细胞由干预前的鹅卵石状变为梭形,如同肌纤维母细胞。结论 TGF-β1可诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,其机制可能与P-Smad2/3、Snail1信号传导通路有关;TGF-β1可能是通过诱导肺泡上皮细胞间质转化的细胞效应,最终导致肺泡上皮细胞凋亡和纤维组织形成。     

消癥活络方药对TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化的影响

目的通过离体细胞实验研究消癥活络方药含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。方法体外培养人肾HK-2,应用不同浓度消癥活络方药含药血清处理经TGF-β1诱导活化的HK-2细胞,噻唑兰(MTT)法检测细胞增殖,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果 TGF-β1可刺激HK-2细胞增殖,消癥活络方药含药血清可明显抑制TGF-β1引起的HK-2细胞增殖。TGF-β1可引起HK-2细胞α-SMA及CTGF表达上调,消癥活络方药含药血清可抑制其上调。结论消癥活络方药对TGF-β1诱导的HK-2的增殖及α-SMA、CTGF的表达具有抑制作用,可拮抗TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化作用,抑制TGF-β1刺激HK-2分泌细胞外基质可能是其抗纤维化形成的机制之一。     

乙酰半胱氨酸抑制人肺成纤维细胞增殖及胶原合成机制的初步探讨

目的 研究乙酰半胱氨酸(NAC)抑制人肺成纤维细胞增殖和胶原合成的机制.方法 分离培养人肺成纤维细胞,并以肺泡上皮来源的细胞系A549作为对照.将细胞分为对照组(不加任何处理)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)组(TGF-β_1为5μg/L)、NAC组(NAC为20 mmol/L)和联合组(5μg/L的TGF-β_1刺激24 h后换用不同浓度NAC继续作用24 h).用不同浓度NAC处理后,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;采用TGF-β_1刺激后加用NAC刺激,逆转录-PCR法检测Ⅰ型前胶原mRNA表达的变化,Western blot法检测cyclin E、α-肌动蛋白及信号转导与转录激活因子-3(STAT-3)蛋白的表达.结果 5、10、20、40 mmol/L的NAC对人肺成纤维细胞生长均有明显抑制作用,呈剂量依赖关系,而20 mmol/L的NAC对A549细胞无明显作用.10、20、40 mml\L的NAC可使G_0/G_1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低.经TGF-β_1刺激后,成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达明显增加,而NAC可抑制TGF-β_1诱导或未经诱导的Ⅰ型前胶原表达.TGF--β_1可诱导cyclin E和α-肌动蛋白的表达,其相对密度分别为0.98±0.09和1.56±0.23,20 mmol/L的NAC能明显抑制cyclin E的表达,其相对密度为0.52±0.04,但却小能抑制α-肌动蛋白的表达.TGF-β_1组和NAC组α-肌动蛋白的表达(相对密度分别为1.56 ±0.23和1.63±0.20)无明显差别.结论 NAC能够抑制人肺成纤维细胞cyclin E蛋白的表达,使细胞增殖阻滞于G_1期,从而抑制成纤维细胞发生增殖,抑制其胶原合成.对TGF-β_1刺激前后α-肌动蛋白的表达无明显抑制作用.     

利拉鲁肽对转化生长因子β1诱导上皮间质转化的作用及其机制

目的研究利拉鲁肽(Li)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的上皮间质转化(EMT)的作用及其可能机制。方法本研究为实验研究。培养人Ⅱ型肺泡上皮(A549)细胞, 药物处理分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+Li(125 nmol/L)组和Li组(125 nmol/L)。采用Transwell实验检测细胞迁移能力;显微镜下观察并分析细胞形态学变化;免疫荧光观察细胞内紧密连接蛋白1(ZO-1)、Vimentin表达情况;Western blot检测各组ZO-1、Vimentin和Fibronectin表达及p-p38、p38、p-Erk、Erk蛋白含量。结果 Transwell实验结果显示, Li可以抑制TGF-β1诱导的A549细胞迁移;细胞形态学结果显示, Li可以减轻TGF-β1诱导的A549细胞伸长, 呈间充质化细胞的"纺锤样"形态;免疫荧光双标结果显示, Li抑制TGF-β1诱导的A549细胞ZO-1荧光强度下调以及Vimentin荧光强度的上调;Western blot结果显示, Li可以减少TGF-β1诱导的A549细胞表型转化标志物ZO-1的下调, 显著抑制Vim...