柱前衍生化RP-HPLC法测定肌肽的含量

目的建立简单、快速测定肌肽含量的方法。方法采用2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法。衍生化试剂:2,4-二硝基氯苯;色谱柱:DiamonsilTM C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.15 mol.L-1乙酸钠缓冲溶液(体积比1∶5);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:360 nm。结果肌肽质量浓度在2.0~20.0 mg.L-1(r=0.999 4)内与其衍生化物峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为96.8%,RSD为0.8%(n=9)。结论2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法可用于测定肌肽含量。     

柱前衍生HPLC法测定丙戊酸钠的血药浓度

目的 建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠(VPA) 血药浓度的方法.方法 选择ε-溴苯乙酮为衍生化试剂,环己烷羧酸为内标,Hypersil ODS-C18柱(250mm×4.6mm,5μm) 为分析柱;流动相为甲醇-水(80∶20) ,检测波长为248nm,流速1mL·min-1,柱温室温.结果 内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别7.7min、13.3min,丙戊酸钠(VPA)血药浓度在15～200mg·L-1范围内呈良好线性关系(r=0.9996),平均相对回收率和绝对回收率分别为99.6%、82.4%,日内、日间RSD均＜3.5%.结论 本法快速、简便、准确,适合临床常规监测需要.     

优化柱前衍生-HPLC法测定血清中丙戊酸的血药浓度

目的：优化柱前衍生-高效液相色谱法监测血清中丙戊酸浓度的方法。方法：以乙腈为蛋白沉淀剂,以弘溴苯乙酮为衍生化试剂进行测定。色谱柱为ANAX丙戊酸专用分析柱,流动相为乙腈-水（70：30）,柱温为40℃,流速为0．7mL·min-1,检测波长为266nm。结果：丙戊酸血药浓度在4．88-139．46μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0．9996）,平均回收率为100．01％,日内、日间RSD均〈3％。结论：本法可简便、快速、稳定地测定血清中丙戊酸的浓度,能满足临床监测的要求。     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC法测定氨肽素的氨基酸含量

目的用二硝基氟苯 (DNFB)柱前衍生化RP HPLC法测定氨肽素中氨基酸的含量。方法采用二硝基氟苯为衍生试剂进行衍生 ,ODS(KromasilC18,4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱分离 ,以乙腈 0 0 5mol·L-1乙酸钠水溶液为流动相 ,梯度洗脱 ,3 60nm检测 ,在 3 0min内 ,测定氨肽素的氨基酸组成与含量。结果线性范围 (总氨基酸 1 4种 )为 0 1 5～ 0 75 g·L-1;回收率为 94 8%～ 1 0 3 5 % ;RSD为0 2 6%～ 1 47% (n =5 )。结论DNFB柱前衍生化RP HPLC法可有效控制产品质量     

柱前衍生化法测定血浆中醋酸精氨酸的浓度

目的:建立柱前衍生化高效液相色谱法测定血浆样品中醋酸精氨酸浓度的方法。方法:衍生剂为2,4—二硝基氟苯,色谱柱为氨基酸分析专用ODS色谱柱,流动相为50%乙腈-0.1mol/L醋酸钠溶液(29∶71),流速为1.2ml/min,检测波长为360nm,柱温为30℃。结果:醋酸精氨酸检测浓度线性范围为10~160μg/ml(r=0.9 998),高、中、低3种浓度血浆样品的回收率分别为(96.64±9.69)%、(90.94±4.70)%、(92.72±4.48)%,精密度<3.91%。含药血浆在冰冻条件(—24℃)下至少可以稳定15d。结论:本法简便可行,适用于醋酸精氨酸的血药浓度监测及其药动学研究。     

柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度

目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠血药浓度。方法血清用环己烷提取,以环已烷羧酸为内标,2-溴苯乙酮为衍生化试剂,用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度。采用Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(82∶18);检测波长为248 nm;流速为1.0 ml.min-1;柱温:30℃。结果血清中丙戊酸钠线性范围为12.5～150mg.L-1,平均回收率98.74%,日内RSD<5%。结论该法快速、灵敏、准确,适用于临床常规监测需要。     

高效液相色谱-柱前衍生化法测定丙戊酸血浓度

目的　 建立高效液相色谱法测定血清中丙戊酸浓度。 方法 　血清用正己烷提取 ,经α 溴苯乙酮衍生后浓缩进样。 结果 　丙戊酸的线性范围为 1 76～ 176 0 μg/ml,平均回收率大于 97% ,日内及日间RSD小于5 %。 结论 　本法快速、简便、准确 ,可应用于临床丙戊酸血药浓度测定     

柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度

目的建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠(VPA)血药浓度的方法.方法选择2-溴-对硝基苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,Nova-pak C18柱(150 mm×3.9 mm,4μm)为分析柱;流动相为甲醇-水(7723,V/V),检测波长为262nm,流速1 mL·min-1,柱温25℃.结果内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为3.0 min和4.5 min,线性范围为20～180mg·L-1,平均回收率为100.2%,日内、日间RSD均＜3.5%;230例服用VPA的癫癎患者应用本法监测,有77.8%的患者血药浓度在有效浓度范围之内,还有22.2%的患者血药浓度低于或高于有效浓度.结论本法快速、简便、准确,适合临床常规监测需要.     

柱前衍生化RP-HPLC拆分酮洛芬对映异构体的研究

摘 要 目的：建立酮洛芬对映异构体的拆分方法。方法: 采用柱前衍生化RP HPLC法,以L-丙氨酸-β-萘胺（L-Ala-β-NA）为手性衍生化试剂,色谱柱：Hypersil ODS-2柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：乙腈-0.025 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（40∶60,v/v）,流速：1.0 ml·min^-1,检测波长：245 nm,柱温：25℃,进样量：10μl。结果: 酮洛芬对映体衍生物获得较好的基线分离,S-(+) 对映体和R-(-) 对映体衍生物的色谱峰保留时间分别在24.2 min和26.0 min处。右旋酮洛芬在0.025~0.125 mg质量范围内线性关系良好（r=0.998 1）,平均回收率为90.93%（RSD=4.10%,n=9）。结论:该方法简便、准确、快速,为酮洛芬的光学异构体的测定提供了参考依据。     

柱前衍生-固相萃取高效液相色谱法快速测定丙戊酸血药浓度

目的:建立柱前衍生-固相萃取高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度分析方法,去除过量未反应的衍生试剂。方法:选择2-溴-对硝基苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,采用 Accubond SPE C_(18)小柱处理反应液,Nova-pak C_(18)柱(4μm,3.9mm×150mm)为分析柱;甲醇-水(77:23)为流动相,检测波长为262nm,流速1 mL·min~(-1),柱温25℃。结果:反应液中90%以上未反应的衍生试剂被去除,内标及丙戊酸衍生物被保留和纯化。内标环己烷羧酸和丙戊酸的保留时间分别为3.0和4.5min,线性范围为16.6～265μg·mL~(-1),相关系数为0.9998。平均回收率为99.85%,日内日间误差 RSD 均小于5.16%。结论:本法快速简便、结果准确,非常适合临床常规监测需要。     

HPLC法测定丙戊酸的血药浓度

目的：建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸（VPA）血药浓度的方法。方法：选择ω-溴苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,Hypersil ODS-C18柱（250mm×4．6mm,5μm）为分析柱;流动相为甲醇-水（75：25,V／V）,检测波长为248nm,流速为1．0ml／min。血样经酸化后以二氯甲烷提取。结果：内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为8．0min和12．8min,线性范围为25～200μg／ml,平均回收率为100．61％,日内、日间RSD均小于4．19％。结论：本法快速、简便、准确,适合临床常规监测需要。     

HPLC法测定人血浆中白消安的浓度

摘 要 目的:建立柱前衍生HPLC法测定人血浆中白消安浓度。方法: 以1,5 戊二醇二甲磺酸酯为内标,经二乙基二硫代氨基甲酸钠(DDTC)衍生化处理后,采用HPLC-紫外法进行测定。色谱柱：NovaPak C¹⁸柱(150 mm×3.9 mm,4 μm),柱温：30℃,流动相：甲醇-水(74∶26),流速：0.9 ml·min^-1,检测波长：280 nm,进样量：30 μl。结果:白消安血药浓度的线性范围为0.050～3.500mg·L^-1(r=0.999 7),定量下限为0.050 mg·L^-1,低、中、高 3个浓度的日内RSD分别为1.65%,2.95%,6.26%,日间RSD分别为5.61%,5.71%,12.41%,提取回收率分别为82.59%,84.19%,86.70%。应用本法测定 1 例采用白消安静滴方案患者的血药浓度,并将结果与LC-MS/MS法测得的数据进行比较,得到直线回归方程为Y=0.945X+13.237,r=0.992 2。结论:本方法简便可靠、专一性好,适用于白消安的血浆浓度测定,能满足白消安药动学研究需求。     

HPLC-UV法测定环磷酰胺血药浓度及其临床应用

目的：建立测定环磷酰胺血药浓度的高效液相色谱法。方法：血浆样品经碱性乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-水溶液（30∶70）为流动相,流速1.2 mL/min,采用XterraRP18色谱柱分离,在197 nm波长下进行检测,柱温30℃。结果：环磷酰胺在1.0～32.0 mg/L浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999,n=5）,提取回收率90.07%～91.44%,日内、日间精密度（RSD）均〈10%。血浆中环磷酰胺最低检测浓度为0.1 mg/L。结论：本文建立的方法灵敏度高,选择性好,简便、快速、准确,适用于临床样本环磷酰胺的血浆浓度测定和药代动力学研究,可为临床实施个体化给药提供参考。     

A novel pre-column fluorescent derivatization method for the sensitive determination of aristolochic acids in medicinal herbs by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection

Aristolochic acids (AAs) are a family of structurally related nitrophenanthrene carboxylic acids existing in Aristolochia, Bragantia, and Asarum species. AAs have been proven to have nephrotoxic and carcinogenic toxicity. In this study, a novel pre-column fluorescence derivatization procedure followed by high-performance liquid chromatography-fluorescence detection (HPLC-FLD) is developed for the analysis of AAs in medicinal herbs. The nitro group in the phenanthrene ring of AAs was removed by NaBH₄ in water–THF (2:1, v/v), resulting in the corresponding aristolic acids. The analysis of AAs in medicinal herbs was based of the sensitive fluorescence detection of aristolic acids after the chemical derivatization. Because the produced aristolic acids are highly fluorescent the limit of detection (LOD) of AAI and AAII were lowered to 0.06 and 0.04 ng/mL, respectively, which is at least an order of magnitude lower than those in the reported HPLC and LC–MS methods. Good linearity with correlation coefficients higher than 0.997 were obtained for AAI and AII in the calibration ranges of 0.2–800 ng/mL. The derivatization conditions such as reaction temperature, time and the amount of NaBH₄ were optimized. The developed method provided satisfactory intra-day and inter-day precisions with RSDs less than 1.4% and 3.8%, respectively. The relative analytical error was less than 7% for the analysis of AAI and AAII in spiked matrix samples.     

RP-HPLC法测定人血浆中血管紧张素Ⅱ的浓度

目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光法检测人血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的方法。方法:采用固相萃取法纯化血浆样本,以荧光胺柱前衍生后进样测定。以乙腈-10mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷盐缓冲液(pH8.5)作为流动相,梯度洗脱,流速为1mL·min-1,色谱柱为LunaC5,激发波长为273nm,发射波长为476nm。结果:血管紧张素Ⅱ血药浓度在10～200ng·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9995),最低检出限(S/N=3)为5ng·mL-1,日内、日间RSD分别为1.65%和4.20%。结论:本方法快速、灵敏、准确、重复性好,可用于血浆中血管紧张素Ⅱ浓度的检测。     

Simultaneous determination of Aprepitant and two metabolites in human plasma by high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometric detection

A method for the simultaneous determination of Aprepitant, I (5-[[2(R)-[1(R)-(3,5-bistrifluoromethylphenyl)ethoxy]-3(S)-(4-fluorophenyl) morpholin-4-yl]methyl]-2,4-dihydro-[1,2,4]triazol-3-one) and two active metabolites (II and III) in human plasma has been developed. The method was based on high-performance liquid chromatography (HPLC) with atmospheric pressure chemical ionization tandem mass spectrometric (APCI-MS-MS) detection in positive ionization mode using a heated nebulizer interface. The analytes and internal standard (IV) (Fig. 1) were isolated from basified plasma using liquid–liquid extraction. The organic extracts were dried, reconstituted in mobile phase and injected into the HPLC-MS/MS system.

The analytes were chromatographed on a narrow bore (50 mm×2.0 mm, 3 μm) Keystone Scientific’s Prism R.P. analytical column, with mobile phase consisting of acetonitrile (ACN):water containing trifluoroacetic acid with pH adjusted to 3 (40:60, v/v) pumped at a flow rate of 0.5 ml/min. The MS-MS detection was performed on a Sciex API 3000 tandem mass spectrometer operated in selected reaction monitoring mode. The precursor→product ion combinations of m/z 535→277, 438→180, 452→223 and 503→259 were used to quantify I, II, III, and IV, respectively, after chromatographic separation of the analytes. The assay was validated in the concentration range of 10–5000 ng/ml for I and II and 25–5000 ng/ml for III when 1 ml of plasma was processed. The precision of the assay (expressed as coefficient of variation, CV) was less than 10% at all concentrations within the standard curve range, with adequate assay accuracy. Matrix effect experiments were performed to demonstrate the absence of any significant change in ionization of the analytes when comparing neat standards to analytes in the presence of plasma matrix. This assay was utilized to support a clinical study where multiple oral doses of I were administered to healthy subjects to investigate the pharmacokinetics, safety, and tolerability of Aprepitant. Concentrations of the two most active metabolites, which if present in high concentrations would increase the neurokinin-1 (NK₁) receptor occupancy level and therefore potentially contribute to the antiemetic action of Aprepitant, were determined.     

高效液相色谱－质谱联用测定人血浆中奥美拉唑的浓度

目的：建立高效液相色谱－质谱联用法测定人血浆中奥美拉唑的浓度。方法以泮托拉唑为内标,血浆样品经乙腈沉淀、取上清稀释后,进样,经HPLC－MS／MS分析。采用Ultimate XB－C18（2．1 mm ×150 mm,3μm）,流动相甲醇（0．1％甲酸）∶水（0．1％甲酸）＝（70∶30,V／V）;流速：0．2mL? min －1,柱温：40℃,电喷雾离子源（ESI）,以多离子反应监测方式（MRM）进行正离子监测,奥美拉唑和内标泮托拉唑的定量分析离子对分别为m／z 346．2→m／z 198．0和m／z 384．0→m／z 200．0。结果奥美拉唑的线性范围为5．00～2000．00μg? L－1,定量下限为5．00μg? L －1。方法回收率在96．4％～107．9％,日内和日间精密度（RSD）均小于15％。结论该方法操作简便、灵敏、准确、快速,适用于奥美拉唑的人体药代动力学研究。     

反相高效液相色谱法测定人体血浆中表阿霉素的含量

采用反相高效液相色谱法(以柔红霉素为内标)测定血浆中表阿霉素的含量,流动相为5mmol/LH3PO4-甲醇-异丙醇-乙晴(6∶9∶7∶2,pH2.9),YWGC18不锈钢色谱柱,荧光检测波长λex=450nm,λem=530nm.血浆中样品经氯仿-甲醇-异丙醇=5∶2∶3抽提液抽提处理后进样测定.血浆中表阿霉素的浓度在0.03～2.4mg/L范围内峰面积与柔红霉素的峰面积之比呈线性关系(r=0.9998),方法对表阿霉素的平均回收率为89%～90.7%.最低检测浓度为0.01mg/L.本法灵敏度高,线性范围大,符合临床用药的血药浓度监测和药代动力学研究的分析方法要求,并用于40例已服用表阿霉素的癌症病人的血浆药物含量的测定.     

柱前手性衍生化-反相高效液相色谱法拆分布洛芬对映异构体

目的：建立一种柱前手性衍生化-反相高效液相色谱紫外法检测布洛芬的异构体。方法：以N′N-羰基二咪唑（CDI）作为活化剂活化布洛芬的羧基基团,再以（R）-（+）-1-（1-萘基）乙胺（R-NEA）作为手性衍生化试剂进行反应。选用Kromasil C18色谱柱,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,以乙腈-0.05%磷酸（68∶32）为流动相,检测波长225 nm。结果：布洛芬的非对映异构体色谱峰的保留时间分别为25.6 min和27.9 min。结论：本方法操作简单,条件温和,衍生化产物稳定,且衍生化试剂价格便宜,更准确地实现了对布洛芬对映异构体的分离检测。     

柱前衍生化HPLC测定大鼠血浆中的盐酸美金刚胺

目的 建立测定大鼠血浆中盐酸美金刚胺浓度的方法.方法 采用柱前衍生化HPLC-UV法,色谱柱为Luna C_(18)柱(150 mm ×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水-三乙胺(70:30:0.5,磷酸调pH7),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为225nm;以盐酸金刚烷胺为内标,采用液-液萃取法,经衍生化后进样测定.结果 大鼠血浆中的内源性成分对美金刚胺的测定无干扰;美金刚胺0.14～9.20μg·mL~(-1)与峰面积线性关系良好(r=0.9950),低、中、高浓度样品的平均提取同收率分别为83.46%、80.34%、82.77%,平均方法回收率分别为112.01%、99.96%、99.10%,日内RSD分别为10.24%、8.97%、6.94%,日间RSD分别为12.10%、8.77%、4.60%.结论 所建方法灵敏、准确,可为盐酸美金刚胺的体内研究提供参考.