牙龈卟啉单胞菌对兔血管平滑肌细胞分泌IL-1β、IL-6的影响

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)上清液对体外培养的兔血管平滑肌细胞分泌IL-1β、IL-6的影响。方法:组织块法培养兔腹主动脉血管平滑肌细胞,并对其细胞来源进行鉴定。用4.3×106 CFU/mL的Pg上清液刺激细胞12、24、48 h后,通过ELISA检测IL-1β、IL-6的水平;同时用RT-PCR检测其mRNA表达的情况。结果:Pg上清液刺激24 h和48 h时能促进血管平滑肌细胞分泌IL-6,分别与同一时间点的对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),而且24 h时,IL-6表达最强,而IL-1β的表达最低,明显低于相同时间的对照组和其他时间点的实验组(P<0.05)。RT-PCR检测显示,4.3×106 CFU/mL的Pg上清刺激血管平滑细胞12、24、48 h后细胞内均有IL-1β、IL-6的基因表达,在24 h时,血管平滑肌细胞的IL-1β基因表达减少,而IL-6基因表达增加。结论:Pg上清液可促进细胞合成和分泌IL-6,在动脉粥样硬化的发生发展过程中可能发挥一定作用。     

牙龈卟啉单胞菌感染对大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277感染对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 建立体外牙龈卟啉单胞菌感染大鼠VSMC模型,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ICAM-1基因的表达。结果 牙龈卟啉单胞菌感染VSMC 8、16、24 h后,ICAM-1表达明显增多,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。感染16 h达高峰,感染8 h与感染16、24 h比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌感染可引起VSMC ICAM-1高表达,这提示牙周致病菌可能参与血管壁的炎症反应,在动脉粥样硬化的发生、发展中有重要的意义。     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞LOX-1 mRNA表达的影响

目的研究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）感染对血管内皮细胞（vein endothelial cell,VEC）血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1）mRNA表达的影响。方法建立P.g感染VEC的体外模型,采用Real Time-PCR技术检测P.g381菌株感染人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）细胞株EA.hy926不同时间后,LOX-1 mRNA表达的变化。结果 P.g381侵入HUVEC促进LOX-1 mRNA的表达,与对照组相比较（△Ct值为3.78±0.16）,2 h时开始升高（△Ct值为3.60±0.33,P=0.240）,8 h达高峰（△Ct值为2.72±0.35,P=0.000）,12 h后显著回落（△Ct值为3.22±0.17,P=0.001）,至24 h时恢复至最初水平（△Ct值为3.65±0.24,P=0.390）。结论 P.g感染促进HUVEC表达LOX-1 mRNA。     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞LOX-1mRNA表达的影响

目的 研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)感染对血管内皮细胞(vein endothelial cell,VEC)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)mRN...     

牙龈卟啉单胞菌感染血管平滑肌细胞的超微结构观察

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对大鼠胸大动脉平滑肌细胞黏附及入侵情况,探讨Pg对血管平滑肌细胞的损伤途径,为牙周病在动脉粥样硬化发病机制中的研究提供依据.方法:用感染复数(multiplicity of infection,MOD为100∶1 Pg感染大鼠胸大动脉平滑肌细胞,分别于8、16 h TEM观察Pg对血管平滑肌细胞的黏附和入侵能力.结果:Pg感染大鼠胸大动脉平滑肌细胞16h时,Pg能利用表面菌毛黏附于血管平滑肌细胞表面并入侵胞质内.结论:Pg能够黏附于大鼠胸大动脉平滑肌细胞,并入侵细胞质,定植于细胞内.     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞产生sICAM-1的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对人类脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)的影响。方法：应用厌氧袋法培养P.gingivalis，并用其感染HUVECs，采和酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定培养上清中sICAM-1的含量，结果：HUVECs基础表达少量的sICAM-1;P.gingivalis剂量依赖性增强HUVECs产生sICAM-1蛋白的水平；紫外线、超声波和65℃的热处理都不能抑制P.gingivalis的作用；sICAM-1蛋白水平在P.gingivalis刺激后的4h未见改变，增高的作用从刺激后的8h开始，在12h,16h和20h继续增加。结论：活的和灭活的P.gingivalis都剂量依赖性和时间依赖性地增强HUVECs产生sICAM-1,P.gingivalis可能同样诱导牙龈血管内皮细胞表达sICAM-1，升高的sICAM-1可能参与调节牙周病炎症反应和免疫反应过程。     

牙龈卟啉单胞菌入侵血管内皮细胞的实验研究

目的:体外观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖的影响,观察Pg对HUVEC的入侵能力,从而探讨Pg对内皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)发病机制中的作用提供依据。方法:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1:10,1:100PgATCC33277分别干预HUVEC 4h、8h、12h、24h,未受Pg ATCC33277干预的HUVEC作为阴性对照组,倒置显微镜下观察HUVEC形态,CCK-8法测定HUVEC细胞的增殖情况,透射电镜下观察Pg ATCC33277对HUVEC的入侵情况。结果:在24h内,与对照组相比,受Pg ATCC33277感染的HUVEC的细胞形态未见明显影响,仍呈典型的"铺路石"单层贴壁生长,Pg ATCC33277对HUVEC细胞增殖未见明显影响,透射电镜下观察发现Pg ATCC33277可以黏附HUVEC细胞膜表面,入侵HUVEC,直接定植或以空泡的形式存在于细胞的胞质中。结论:Pg可以入侵内皮细胞,以在细胞内定植的方式逃避宿主的防御反应,内皮细胞的形态和增殖未见明显改变,从而形成第二次慢性感染过程,进一步影响内皮细胞正常功能的发挥。     

牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对牛主动脉内皮细胞存活的影响

目的:探讨牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白对体外培养牛主动脉内皮细胞(BAECs)存活的影响.方法:盐析法提取牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白;不同浓度的胞外蛋白(200、300、400、500、600μg/mL)分别作用于体外培养的BAECs 24 h,对照组为无细菌胞外蛋白作用的BAECs;另外,用400μg/mL胞外蛋白分别作用于BAECs 6、12、24、36h,对照组细胞同样培养6、12、24、36 h,比较实验组与对照组BAECs存活率的变化;采用台盼蓝染色法检测BAECs存活率.采用SPSS 10.0软件包对数据进行独立样本t检验.结果:当作用于BAECs的牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白浓度在200～600μg/ml.范围内时,BAECs存活率均低于对照组(P<0.05),且随细菌蛋白浓度增加而降低;在36 h内,随着时间的延长,实验组和对照组的BAECs存活率均有下降,但实验组降低的幅度大于对照组(P<0.05),显示细菌胞外蛋白对BAECs存活率的影响具有时间依赖性.结论:牙龈卟啉单胞菌胞外蛋白可导致体外培养的牛主动脉内皮细胞存活率降低,并呈现剂量和时间依赖性.     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞与单核细胞黏附的影响

目的：研究Pg感染对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与单核细胞黏附的影响。方法：建立Pg感染HUVEC细胞株EA．hy926的体外模型,虎红染色法观察Pg381和Pg33277菌株感染HUVEC 6 h和24 h后,HUVEC与人单核细胞株THP-1细胞黏附量的变化。结果：培养6 h时Pg381感染组的THP-1细胞黏附量相对值为0．210±0．025,高于Pg33277感染组（0．078±0．024,P＜0．05）和空白对照组（0．062±0．022,P＜0．05）,Pg33277感染组和空白对照组无差异。24 h时3组间无差异（P＞0．05）。结论：Pg381感染HUVEC后能显著促进其与单核细胞的黏附。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉血管内皮细胞cGMP生成的影响

目的:体外研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)cGMP水平的影响。方法:用Pg ATCC 33277分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)1∶10、1∶50、1∶250干预HUVEC,并以未受Pg ATCC 33277干预的HUVEC作为阴性对照,分别培养4、12、36 h,在倒置显微镜下观察各组细胞形态;125I cGMP放射免疫试剂盒检测各组HUVECcGMP的水平。结果:与对照组相比,Pg ATCC 33277分别以MOI 1∶10、1∶50、1∶250干预HUVEC 4、12、36 h后,实验各组HUVEC的细胞形态未见明显改变,仍呈典型的铺路石状单层贴壁生长;Pg ATCC 33277 MOI1∶250时可呈时间依赖性地降低HUVEC cGMP水平,而同一时间点内,各浓度组的cGMP水平并无明显差异。结论:短时间内,Pg ATCC 33277对HUVEC的细胞形态无明显影响,但可降低HUVEC cGMP的生成,HUVECNO生物利用度下降。     

牙龈卟啉单胞菌侵入对人血管内皮细胞分泌MCP-1影响的研究

目的　通过研究牙龈卟啉单胞菌（porphyrmonas gingivalis,P.g）侵入对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）分泌单核细胞趋化蛋白（MCP-1）的影响,了解P.g对其趋化功能的影响。方法　建立P.g侵入HUVEC的体外模型,采用酶联免疫吸附法（ELISA）研究P.g381和P.g33277菌株侵入HUVEC 6、24 h后的培养上清液中MCP-1浓度。结果　ELISA结果显示当P.g381侵入HUVEC 6、24 h和P.g33277侵入HUVEC 6 h时,HUVEC分泌的MCP-1水平升高（P＜0.01）;P.g33277侵入HUVEC 24 h时,HUVEC分泌的MCP-1水平恢复最初水平（P=0.46）;P.g381诱导HUVEC表达MCP-1的水平高于P.g33277（P＜0.01）。结论　P.g侵入HUVEC后可促进其表达MCP-1,从而上调其趋化功能,在牙周炎与心血管疾病的相关性中可能发挥作用。     

牙龈卟啉单胞菌对兔血管内皮组织中白细胞介素-33表达的影响

目的 用牙龈卟啉单胞菌感染兔建立动脉粥样硬化（AS）模型,观察感染兔主动脉血管内皮细胞中白细胞介素-33（IL-33）的变化,探讨牙龈卟啉单胞菌与AS的关系。方法 将24只新西兰大白兔分为对照组和实验组。实验组每周1次静脉注射牙龈卟啉单胞菌培养液,持续12周,建立感染兔AS模型;对照组每周1次注射等量生理盐水。实验13周处死实验动物,观察主动脉血管的组织结构;通过免疫组织化学染色、实时荧光半定量聚合酶链式反应和Western blot法检测兔主动脉血管内皮细胞中IL-33 mRNA和蛋白质的表达。结果 实验组血管内皮细胞IL-33 mRNA相对表达量为58.244±2.407,IL-33蛋白相对表达量为1.863±0.171,对照组IL-33 mRNA相对表达量为3.143±0.805,IL-33蛋白相对表达量为0.537±0.028;实验组IL-33的mRNA和蛋白的表达量均明显高于对照组（P<0.01）。结论 牙龈卟啉单胞菌感染能促进血管内皮细胞表达IL-33,可能对AS的发生发展有一定的调节作用。     

慢性牙周炎状态下牙龈卟啉单胞菌rag-1基因的表达变化

目的:分析不同牙周炎症状态下牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonal gingivalis,P.gingivalis)rag-1基因mRNA的表达规律.方法:收集150例慢性牙周炎患者的龈下菌斑,PCR法检测P.gingivalis和rag-1基因.对P.gingivalis rag-1基因阳性的菌斑样本,采用RT-PCR法检测rag-1 mRNA的表达水平,并比较不同炎症状态下的表达差异.应用SPSS11.0软件包对数据进行配对t检验和秩相关检验.结果:轻度组、中度组和重度组的rag-1基因mRNA的相对表达水平分别为1.19±0.06、0.46±0.05和2.22±0.10(P<0.05).结论:rag-1基因的mRNA表达水平随着牙周组织破坏程度及炎症状态的不同而改变.     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞表达ICAM-1影响的研究

在体外分别以P.gingivalis LPS和E.coli LPS刺激HAECs,实时荧光定量PCR技术检测ICAM-1基因表达,蛋白质印迹技术检测ICAM-1膜蛋白表达。采用SPSS18.0软件包中ANOVA对数据进行分析。结果:P.gingivalis LPS作用6h后开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14h达到高峰,22h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而E.coli LPS作用2h后即开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14h达到高峰,22h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。两种LPS均     

两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探究两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：采用组织块贴壁法培养人脐动脉平滑肌细胞。在厌氧条件下培养ⅠfimA、ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌,并与人脐动脉平滑肌细胞共同培养;在共培养2、8、24和48 h 时,采用 CCK-8法检测细胞生长状况。结果：ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌刺激人脐动脉平滑肌细胞后8 h,促增殖作用明显,但是24和48 h 平滑肌细胞增殖受到抑制（P ＜0．05）;ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞没有明显促细胞增殖或细胞毒性作用。结论：ⅠfimA 型和ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞的作用存在差异,ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌有明显的促平滑肌细胞增殖和细胞毒性作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞表达ICAM-1影响的研究

目的:分别观察牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)脂多糖(LPS)和大肠杆菌(E.coli)LPS对人主动脉内皮细胞(HAECs)在转录和翻译水平表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的影响。方法:在体外分别以P.gingivalisLPS和E.coliLPS刺激HAECs,实时荧光定量PCR技术检测ICAM-1基因表达,蛋白质印迹技术检测ICAM-1膜蛋白表达。采用SPSS18.0软件包中ANOVA对数据进行分析。结果:P.gingivalisLPS作用6 h后开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);而E.coliLPS作用2 h后即开始诱导ICAM-1 mRNA表达,14 h达到高峰,22 h仍有高表达,各时间点与未刺激组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。两种LPS均能在蛋白水平上调ICAM-1的表达,这种上调作用呈浓度和时间依赖,且P.gingivalisLPS的作用较之E.coliLPS要缓和。结论:P.gingivalisLPS能够在转录和翻译水平上调HAECs表达ICAM-1,提示P.gingivalisLPS在动脉粥样硬化(AS)的发生发展过程中可能发挥了重要作用。E.coliLPS可能与急性炎症性疾病有关而与AS无关。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞分泌IL-1β和IL-6的影响研究

目的:研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)上清液对人脐静脉内皮细胞(hu-man umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分泌IL-1β、IL-6的影响。方法:酶消化法原代培养HUVECs,并对细胞进行来源鉴定,用5×106CFU/mL的Pg上清液刺激HUVECs 6、12、18、24 h后,RT-PCR检测IL-1β、IL-6 mRNA的表达;同时ELISA方法测定IL-1β及IL-6蛋白的水平。结果:Pg上清液刺激HUVECs后,IL-1βmRNA水平在12、18 h时蛋白明显高于对照组(P<0.05);IL-6 mRNA水平在12 h的表达明显高于对照组(P<0.05)。IL-1β蛋白在18、24 h的表达明显高于对照组(P<0.05);IL-6蛋白在12、18、24 h 3个时点均明显高于对照组(P<0.05)。结论:5×106CFU/mL Pg上清液可促进人脐静脉内皮细胞IL-1β和IL-6的基因及蛋白表达,提示Pg感染可能在As的发生发展中起一定作用。     

牙龈卟啉单胞菌膜泡对牙龈上皮细胞MMPs基因表达的影响

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌膜泡对牙龈上皮细胞基质金属蛋白酶(MMPs)基因表达的影响,揭示牙龈卟啉单胞菌在牙周炎中的致病作用.方法:以Real-time RT-PCR法检测牙龈卟啉单胞菌膜泡刺激下牙龈上皮细胞MMP-1和MMP-3的mRNA表达水平.结果:牙龈卟啉单胞菌膜泡显著地上调MMP-1和MMP-3 mRNA表达水平.结论:牙龈卟啉单胞菌诱导牙龈上皮细胞发生细胞炎症反应,可能是牙周炎发生、发展的重要因素.     

牙龈卟啉单胞菌及其牙龈蛋白酶K对青少年牙龈健康的影响

目的：分析牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）及牙龈蛋白酶K（Kgp）对青少年牙龈健康的影响。方法???收集12~17岁青少年牙龈正常组（50例）、牙龈炎症指数Ⅰ级组（25例）和牙龈炎症指数Ⅱ级组（32例）的3组龈沟液标本,应用16S?rDNA?PCR技术检测各样本中的P. gingivalis及Kgp。3组P. gingivalis和Kgp阳性检出率的比较采用χ2检验;P. gingivalis和Kgp的相对含量与牙龈炎症指数之间的关系采用Spearman相关分析。结果???P. gingivalis在牙龈炎症指数Ⅰ级组的检出率大于牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅱ级组的检出率大于牙龈炎症指数Ⅰ级组和牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅰ级组、Ⅱ级组与牙龈正常组间有明显差异（P<0.01）,牙龈炎症指数Ⅰ级组与Ⅱ级组间差异具有统计学意义（P<0.05）。Kgp在牙龈炎症指数Ⅰ级组的检出率大于牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅱ级组的检出率大于牙龈炎症指数Ⅰ级组和牙龈正常组,牙龈炎症指数Ⅰ级组与牙龈正常组间差异具有统计学意义（P<0.05）,牙龈炎症指数Ⅱ级组与牙龈正常组间有明显差异（P<0.01）。P. gingivalis和Kgp的检出率随着牙龈炎症指数的增加而升高。结论???P. gingivalis和Kgp与青少年牙龈健康密切相关。     

黏性放线菌对牙龈卟啉单胞菌生长的影响

目的:研究黏性放线菌(Actinomyces viscosus,A.viscosus)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)生长的影响。方法:将细菌分为3组,即A.viscosus组、P.gingivalis组和2种细菌等量、等浓度混合组。3组细菌专性厌氧培养48h,绘制生长曲线;混合细菌组每隔2h取菌悬液梯度稀释,接种于BHI血琼脂平板,培养72h,计数P.gingivalis占菌落总数的百分比;制备P.gingivalis BHI血琼脂平板,将不同浓度的A.viscosus菌悬液及除菌后的上清液滴注于已经接种P.gingivalis的固体血琼脂平板,厌氧条件下培养72h,测量抑菌圈直径。实验数据采用SPSS10.0软件包进行单因素方差分析。结果:3组中,A.viscosus2h已处于对数生长期,8h达平台期;P.gingivalis在12h进入对数生长期,32h达平台期;混合细菌组在2h开始进入对数生长期,12h达平台期;混合细菌组前8h P.gingivalis所占总菌落数的百分比随时间延长呈下降趋势﹙P<0.05﹚,8h后平板上已经没有P.gingivalis的存在;1×109、108、107、106A.viscosus对P.gingivalis的抑菌圈平均直径(mm)为19.3、17.4、13.2和9.8,差异具统计学意义﹙P<0.05﹚;A.viscosus的上清液对P.gingivalis无抑制作用。结论:A.viscosus对P.gingivalis生长的抑制作用是由于前者生长速度快,造成营养性竞争所致。