5,7-二甲氧基黄酮增强TRAIL诱导肝癌干细胞凋亡的研究

目的研究天然源性化合物5,7-二甲氧基黄酮(5,7-dimethoxyfl avone,5,7-DMF)是否具有增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)凋亡的作用。方法采用干细胞条件培养基超低黏附板悬浮培养得到肝癌肿瘤球形成细胞;Western blot检测肿瘤干细胞标志物CD133、CD44和ALDH1蛋白表达状态;ELISA和Annexin V/PI染色流式细胞术检测肝癌球形成细胞凋亡率。结果第3代肿瘤球细胞的单个细胞成球的百分率(73.4%)相对第5代原代培养细胞的肿瘤球形成百分率(18.7%)显著提高,且其肿瘤球大小亦有差异。源自复发性肝细胞癌的第3代球细胞高表达肿瘤干细胞标志物CD133、CD44和Oct4。亚细胞毒性浓度5,7-DMF(1.0μmol·L-1)明显增强TRAIL(10.0 ng·m L-1)诱导LCSCs的凋亡作用。结论本研究证明,5,7-DMF具有增强TRAIL诱导LCSCs凋亡的作用。     

GSH 耗竭介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导肺癌A 549 细胞凋亡

目的探讨5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用是否涉及细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）耗竭。方法体外培养A549细胞,分光光度法测定细胞内GSH含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 DMF以浓度依赖方式诱导A549细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂。DMF显著降低A549细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。500μmol·L-1GSH预孵育1h,能有效阻断DMF诱导细胞内GSH耗竭,并减弱DMF触发细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论细胞内GSH耗竭是DMF诱导人肺癌A549细胞凋亡作用机制之一。     

活性氧介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导结肠癌HT- 29 细胞凋亡

目的研究5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导体外培养人结肠癌HT-29细胞凋亡作用及其机制。方法以HT-29细胞为研究对象,利用ELISA法测定细胞DNA断裂,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧（ROS）水平。结果DMF激活HT-29细胞ROS生成（P〈0．05）,呈浓度依赖性。DMF以浓度依赖方式促进HT-29细胞DNA断裂（P〈0．05）,同时,诱导细胞凋亡率增高（P〈0．05）;10μmol．L^-1N-乙酰半胱氨酸预孵育30min,能有效阻断DMF诱导ROS生成和细胞凋亡作用（P〈0．05）。结论DFM通过促进结肠癌HT-29细胞ROS生成诱导细胞凋亡。     

TRAIL诱导非小细胞肺癌凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关的死亡受体配体(TRAIL)诱导非小细胞肺癌凋亡的效果。方法用20ng／ml—160ng／ml TRAIL处理体外培养的非小细胞肺癌NCI-H460细胞,8h后测定细胞Caspase3活性变化,并于24h后用荧光显微镜和流式细胞学方法观察TRAIL处理对NCl-H460细胞核的影响。结果TRAIL处理后8h NCl-H460细胞的Caspase3活性提高,24h后处理组细胞出现不同程度的细胞核固缩、碎裂等形态学改变。随TRAIL浓度的提高,上述形态学变化愈加明显,流式细胞学亦显示亚二倍体细胞比例提高。结论TRAIL可在体外有效诱导非小细胞肺癌NCl-H460细胞株的凋亡。     

白藜芦醇促TRAIL诱导PC-3细胞凋亡的作用

目的研究白藜芦醇（Res）促进肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白诱导人前列腺癌细胞PC-3凋亡的作用。方法实验分为TRAIL蛋白组以及联合应用白藜芦醇和TRAIL蛋白的联合用药组;采用CCK8法检测细胞增殖情况,确定白藜芦醇的用药浓度;通过CCK8法、流式细胞术检测TRAIL蛋白组、联合用药组细胞增殖和凋亡情况;分光光度法检测两组细胞caspase-8、caspase-3活性。结果 CCK8结果提示白藜芦醇的用药浓度为50μmol/L;联合用药组PC-3细胞的增殖率明显低于TRAIL蛋白组（P〈0.05）;流式细胞术检测结果显示,联合用药组PC-3细胞的凋亡率明显高于TRAIL蛋白组（P〈0.05）;caspase活性检测结果显示,联合用药组PC-3细胞caspase-8、caspase-3的活性明显高于TRAIL蛋白组（P〈0.05）。结论白藜芦醇能够促进TRAIL蛋白诱导的PC-3细胞凋亡,为肿瘤的生物学治疗提供新的材料。     

大蒜素对TRAIL诱导SKOV-3细胞凋亡影响的作用研究

目的研究大蒜素对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人卵巢癌细胞SKOV-3凋亡的作用机制。方法体外培养的人卵巢癌细胞SKOV-3,以大蒜素和重组人TRAIL蛋白单独及联合作用后MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测大蒜素作用后细胞死亡受体DR4、DR5表达变化;Caspase活性检测试剂盒检测大蒜素作用后细胞Caspase-3、8活性变化。结果 （1）单独应用12.5、25、50、75mg/L的大蒜素、单独应用25、50、100、200ng/ml的TRAIL蛋白以及50mg/L的大蒜素联合100ng/ml的TRAIL蛋白处理SKOV-3细胞24、48、72h后,随着药物浓度和作用时间的增加,抑制率增高。各组抑制率与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。（2）大蒜素作用48h后SKOV-3细胞TRAIL死亡受体DR4、DR5表达上调,DR4、DR5的FI值分别由用药前的1.78、1.94升高到2.27、2.58。用药前后DR4、DR5表达变化比较有统计学意义（P〈0.05）。（3）大蒜素作用48h后,SKOV-3细胞Caspase-3、8活性明显上调,Caspase-3、8活性的OD试验组/OD空白组的比值分别是对照组的2.49、2.08倍,用药前后Caspase-3、8活性变化比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 （1）SKOV-3细胞是大蒜素和TRAIL敏感细胞株。（2）大蒜素可以增强TRAIL诱导细胞凋亡作用。（3）大蒜素上调死亡受体4、5的表达,提高Caspase-3、8活性是其增强TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的重要机制。     

汉黄芩素增强A549细胞对TRAIL诱导凋亡敏感性的研究

目的研究汉黄芩素对TRAIL诱导的A549细胞增殖抑制及凋亡的影响。方法将不同浓度的汉黄芩素和/或TRAIL作用于人肺癌细胞系A549细胞,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术Annexin V-FITC检测细胞凋亡。结果 IC50浓度的汉黄芩素联合TRAIL(100 ng/mL)及单药TRAIL分别作用于A549细胞24 h,联合组细胞增殖率明显低于TRAIL单药组(34.56%±0.52%vs 94.32%±3.28%,P<0.01);联合组细胞凋亡率明显高于TRAIL单药组(28.72%±3.66%vs 7.62%±1.05%,P<0.01)。结论汉黄芩素能够增强A549细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性。     

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与死亡受体结合后，可启动凋亡信号的转导。它对肿瘤细胞的高效杀伤作用使其成为最具有潜力的肿瘤治疗药物，但在TRAIL的研究领域中仍然存在许多热点问题有待解决。本文综述了近年来TRAIL认几诱导肿瘤细胞凋亡的胞内机制、抗肿瘤活性及安全性问题的研究进展。     

7- 二氟甲氧基-5, 4′- 二- 正辛烷氧基金雀异黄素诱导肺癌A549 细胞凋亡

目的研究7二氟甲氧基-5,4＇二正辛烷氧基金雀异黄素（7-difluorom＋hoxyl-5,4＇-di-n-octylgenistein,DFOG）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用。方法体外培养A549细胞。二氟甲基化或烷基化得到一系列金雀异黄素衍生物。MTT法测定细胞活力;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 9个金雀异黄素衍生物较先导化合物GEN具有更强的抗肿瘤活性。其中DFOG对A549细胞活性显示最强的抑制作用,IC50为3.9μmol·L^-1。DFOG（2.0、4.0和8.0μmol·L^-1）作用48h的细胞凋亡率依次增高。8.0μmol·L^-1DFOG处理A549细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。8.0μmol·L1DFOG处理A549细胞6h、12h和24h,Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达上升。结论 DFOG诱导A549细胞凋亡作用与其增高Bax/Bcl-2比值有关。     

L-氨基酸氧化酶对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响研究

目的:探讨L-氨基酸氧化酶(LAAO)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,为临床上寻找新的肺癌治疗方法提供参考。方法:将A549细胞制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液,根据LAAO干预浓度的不同,将其分为4组:2.41、4.82、9.64、19.28mg·mL-1干预组,各组均干预24、48、72h。镜下观察各组细胞形态学改变,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,原位末端标记法检测细胞凋亡指数,另设立阴性对照组进行比较。结果:LAAO对A549细胞增殖的抑制率随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05),凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加(P<0.05)。结论:LAAO可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。     

肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立

目的探讨肺癌A549耐药裸鼠移植瘤模型的建立方法,为克服肿瘤多药耐药新药的筛选提供体内研究的模型。为进行肿瘤的体内相关研究和抗癌药物的筛选提供实验基础。方法使用顺铂诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验检测细胞对顺铂的敏感性;皮下接种法建立裸鼠移植瘤模型;绘制移植瘤生长曲线,观察其增值特性。结果经过8个月的诱导建立了肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂约耐药8倍,并且A549/DDP耐药细胞建立的裸鼠移植瘤仍然保持对顺铂的耐药性;生长曲线结果显示A549/DDP细胞裸鼠移植瘤的增殖速度与A549细胞之间没有显著性差异。结论成功建立了肺癌A549/DDP耐药细胞裸鼠移植瘤模型,可为肺癌耐药的研究提供较理想的动物模型。     

利巴韦林对人肺腺癌细胞A549、人乳腺癌细胞Hela迁移和凋亡的影响研究

目的:研究利巴韦林对人肺腺癌细胞A549、人乳腺癌细胞Hela迁移和凋亡的影响。方法:以A549、Hela细胞为模型细胞,分别分为对照组和利巴韦林低、中、高剂量(20、40、80μmol/ml)组,作用24 h后检测各组细胞的存活率、迁移能力、凋亡情况、酸性膜泡积累情况、自噬标志蛋白LC3(以LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ为指标)的表达情况。结果:与对照组比较,利巴韦林能降低A549、Hela细胞的存活率(中、高剂量组差异均有统计学意义,P<0.05或P<0.01)和迁移能力,增加A549、Hela细胞的凋亡率(低、中、高剂量差异均有统计学意义,P<0.05或P<0.01)、酸性膜泡积累数量与剂量呈反相关,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(中、高剂量差异均有统计学意义,P<0.01),作用与剂量呈正相关。结论:利巴韦林可能通过诱导细胞自噬降低A549、Hela细胞的迁移并诱导其凋亡。     

Gallic Acid Hindered Lung Cancer Progression by Inducing Cell Cycle Arrest and Apoptosis in A549 Lung Cancer Cells via PI3K/Akt Pathway

This study elucidates the anti-cancer potential of gallic acid (GA) as a promising therapeutic agent that exerts its effect by regulating the PI3K/Akt pathway. To prove our research rationale, we used diverse experimental methods such as cell viability assay, colony formation assay, tumor spheroid formation assay, cell cycle analysis, TUNEL assay, Western blot analysis, xenograft mouse model and histological analysis. Treatment with GA inhibited cell proliferation in dose-dependent manner as measured by cell viability assay at 48 h. GA and cisplatin (CDDP) also inhibited colony formation and tumor spheroid formation. In addition, GA and CDDP induced apoptosis, as determined by the distribution of early and late apoptotic cells and DNA fragmentation. Western blot analysis revealed that inhibition of the PI3K/Akt pathway induced upregulation of p53 (tumor suppressor protein), which in turn regulated cell cycle related proteins such as p21, p27, Cyclin D1 and E1, and intrinsic apoptotic proteins such as Bax, Bcl-2 and cleaved caspase-3. The anti-cancer effect of GA was further confirmed in an in vivo mouse model. Intraperitoneal injection with GA for 4 weeks in an A549-derived tumor xenograft model reduced the size of tumor mass. Injection of them downregulated the expression of proliferating cell nuclear antigen and p-Akt, but upregulated the expression of cleaved caspase-3 in tumor tissues. Taken together, these results indicated that GA hindered lung cancer progression by inducing cell cycle arrest and apoptosis, suggesting that GA would be a potential therapeutic agent against non-small cell lung cancer.     

氨甲喋呤对映体药物对A549人肺腺癌细胞株增殖抑制作用及诱导凋亡作用

目的探讨氨甲喋呤对映体[（＋）MTX,（-）MTX]对A549细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法采用培养的A549细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶（PI）单染流式细胞术检测细胞周期;DNA梯度电泳检测凋亡。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,（＋）MTX和（-）MTX作用于A549细胞24,48,72h,均抑制细胞A549增值,但抑制强度为（＋）MTX〉（-）MTX,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变;用10μmol·L-1的（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞48h后,PI单染流式细胞术检测A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体干扰A549细胞DNA合成;DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中（＋）MTX最为明显。结论 （＋）MTX和（-）MTX对A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,（＋）MTX的抗A549细胞增殖作用明显强于（-）MTX。     

雷公藤内酯醇诱导非小细胞肺癌细胞凋亡及其机制初探

目的:研究雷公藤内酯醇(Triptolide,TPL)对非小细胞肺癌细胞A549细胞增殖抑制作用和促凋亡影响的分子机制。方法:以A549细胞为研究对象,采用MTT法测定细胞增殖;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色法检测细胞凋亡;Caspase3活性检测试剂盒分析其凋亡机制。结果:在6.25～100 ng·ml~(-1),12～72 h范围内,TPL对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01),48 h内其凋亡率随着时间延长而增加,Caspase3活性早期较对照组有显著提高(P<0.05),并于12 h达到最高值。结论:TPL能有效抑制A549细胞的增殖,这种抑制作用可能与TPL促进肿瘤细胞凋亡,激活Caspase3活性有关。     

芍药苷对肺腺癌细胞A549凋亡的诱导作用

目的:研究芍药苷对肺腺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法:以0(阴性对照)、5、10、20、40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,以MTT法检测A549细胞活力。上述浓度芍药苷培养A549细胞24 h后,酶标法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western blot法检测Bcl-xl、Bax、核因子κB p65(NF-κB p65)、磷酸化核因子κB p65(NF-κB pp65)蛋白表达。结果:与阴性对照比较,5~40μmol/L芍药苷培养A549细胞48 h后,细胞活力减弱;5~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Caspase-3活性、Bax蛋白表达增强;10~40μmol/L芍药苷培养细胞24 h后,细胞Bcl-xl蛋白表达减弱,NF-κB pp65蛋白表达减弱;以上差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:芍药苷可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与激活NF-κB信号通路、调节相关基因表达有关。     

Tetrazolium Violet Induced Apoptosis and Cell Cycle Arrest in Human Lung Cancer A549 Cells

Tetrazolium violet is a tetrazolium salt and has been proposed as an antitumor agent. In this study, we reported for the first time that tetrazolium violet not only inhibited human lung cancer A549 cell proliferation but also induced apoptosis and blocked cell cycle progression in the G1 phase. The results showed that tetrazolium violet significantly decreased the viability of A549 cells at 5-15 μM. Tetrazolium violet -induced apoptosis in A549 cells was confirmed by {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"H33258","term_id":"978675","term_text":"H33258"}}H33258 staining assay. In A549, tetrazolium violet blocked the progression of the cell cycle at G1 phase by inducing p53 expression and further up-regulating p21/WAF1 expression. In addition, an enhancement in Fas/APO-1 and its two forms of ligands, membrane-bound Fas ligand (mFasL) and soluble Fas ligand (sFasL), as well as caspase, were responsible for the apoptotic effect induced by tetrazolium violet. The conclusion of this study is that tetrazolium violet induced p53 expression which caused cell cycle arrest and apoptosis. These findings suggest that tetrazolium violet has strong potential for development as an agent for treatment lung cancer.