人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究——细胞形态、生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的 :建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法 :采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养 ,通过光镜、透射电镜、生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果 :两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显差别 ,传代培养时牙龈成纤维细胞有接触抑制现象 ,而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长 ,牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显 ,生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龈成纤维细胞 ;碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的差别。结论 :体外培养的两种细胞在形态及排列上相似 ,但在细胞亚型的组成上存在差异。     

两种体外培养人牙周韧带成纤维细胞方法比较

目的探索一种在体外短时间内简便、可靠获取大量人牙周韧带成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPLF)、建立稳定的体外培养体系的方法。方法采用酶消化法和组织贴块法进行HPLF体外原代培养及传代培养的对比研究。通过细胞形态学、超微结构观察及波形蛋白和角蛋白免疫组化染色等对细胞进行定性研究;测定细胞生长曲线了解细胞生长基本规律及其增殖能力。结果采用酶消化法和组织贴块法均可成功的进行HPLF连续传代培养。最高传代数为30代。培养的细胞具有成纤维细胞的典型形态,波形蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,生长稳定期倍增时间为48~72h。组织块培养法需培养时间长,原代培养获取的细胞量较少,较难传代。酶消化法可短时间内获取大量细胞,细胞产量高,但操作手续复杂易污染,细胞易受损伤。结论成功建立了一个稳定的HPLF体外培养体系。除常用的组织块法外,胰蛋白酶及胶原酶联合消化法不失为一种简便、快速、可靠的组织原代分离培养方法。     

EGFR在人牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的研究

成纤维细胞是人牙龈及牙周膜中的主要细胞类型 ,在维持牙龈组织的结构完整、牙周膜的更新、牙周组织损伤后的再生及牙周组织自身结构的稳定等方面具有重要作用。两种部位来源的成纤维细胞虽然形态相似 ,但功能上明显不同 ,目前尚无明确鉴定它们的细胞标记物。为此 ,我们研究了表皮生长因子受体 (ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＧＦＲ)在人牙龈成纤维细胞 (ｇｉｎｇｉｖａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＧＦ)和牙周韧带细胞 (ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｃｅｌｌ,ＰＤＬＣ)中的不同表达。一、材料与方…     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的比较研究

目的：研究人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的差异。方法：用组织块法培养同一患者的牙龈和牙周韧带成纤维细胞，取第4-8代细胞用矿化培养液长期培养，倒置显微镜下观察矿化情况，von Kos-sa染色显示钙盐沉积，生化法测定各组碱性磷酸酶活性，扫描电镜及X线能谱法分析矿化结节中钙磷比例。结果：倒置显微镜下观察牙周韧带成纤维细胞可呈复层生长，形成肉眼可见的白色结节，von Kossa染色显示结节内有钙盐沉积，碱性磷酸酶活性测定表明随着矿化培养时间的延长牙周韧带成纤维细胞组ALP活性比牙龈成纤维细胞组增高明显，扫描电镜下表明结节处电子反射增强，X射线能谱分析显示钙化结节内的钙磷比例与矿化组织相似；牙龈成纤维细胞及对照组体外不能形成钙化结节。结论：人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力不同。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周细胞生物学活性的影响

目的：观察基因重组入碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF)牙龈成纤维细胞（GF）、人牙周韧带成纤维细胞（PDLF）及人牙槽骨细胞（ABC）的增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白含量及对3种细胞矿化结节形成能力的影响。方法：采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶测定法、考马宙蓝法及茜素红染色法。结果bFGF能促进3种细胞的增殖,但对PDLF和ABC的ALP活性,蛋白含量及矿化结节的形成有抑制作用。结论bFGF可促进细胞的增殖,抑制细胞的分化成熟,从而促进牙周再生。     

维A酸对体外培养的人牙周韧带细胞的生物学作用

目的:探讨维A酸对体外培养的人牙周韧带细胞的生物学作用。方法:体外培养人牙周韧带细胞。分别以不同浓度的维A酸作用于细胞,在倒置显微镜下观察不同浓度的维A酸对细胞形态与排列的影响;并通过MTT法、酶动力学方法及考马斯亮蓝法检测维A酸对细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性及蛋白质合成的影响。结果:维A酸能增强牙周韧带细胞的碱性磷酸酶活性,10-6mol／L浓度的维A酸对细胞的作用效果最明显(P<0.01);而对细胞形态与排列、增殖能力及总蛋白合成无影响。结论:维A酸可促进牙周韧带细胞向成骨样细胞方向分化。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞迁移和碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对体外培养人牙髓细胞迁移和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:以组织块培养法体外获得人牙髓细胞,采用Transwell培养法和ALP活性检测法,观察10 ng/mL bFGF对体外培养人牙髓细胞迁移和分化能力的影响。结果:bFGF可显著诱导体外培养牙髓细胞迁移,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),并能抑制细胞ALP活性(P<0.05),随着培养时间延长,该抑制作用更加显著(P<0.05)。结论:bFGF能促进牙髓细胞迁移,抑制ALP活性,在牙本质牙髓复合体修复中可能发挥重要作用。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

牙周韧带细胞与成骨样细胞的体外共培养

目的：探讨牙周韧带细胞(periodontal ligament cell，PDLC)和成骨样细胞的相互作用。方法：牙周韧带来源的PDLC和骨髓基质来源的成骨样细胞(osteoblast like cell，BC)进行体外套皿共培养，通过细胞增殖、蛋白质合成和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALPase)活性来分析细胞间相互作用。结果：PDLC较成骨样细胞增殖快，共培养条件对细胞增殖无显著影响；共培养对PDLC蛋白质合成没有影响，但对成骨样细胞蛋白质合成有影响；在共培养条件下，PDLC上调ALPase活性，成骨样细胞下调ALPase活性。结论：在共培养体系中，PDLC和成骨样细胞存在相互作用，两者的分化趋势受到相互诱导。     

牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞前列腺素含量分析

作者对体外培养的人牙龈成纤维细胞（ＧＦ）和牙周韧带细胞（ＰＤＬＣ）采用免疫组化ＡＢＣ染色及显微分光光度法分析，测定ＧＦ和ＰＤＬＣ中前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）、６－酮一前列腺素Ｆ１ａ．（６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ）和血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）含量，以探讨其与牙周炎的关系，结果表明ＧＦ的ＰＧＥ２吸光度为０．２５±０．０３，６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ的吸光度为０．２０±０．０３，与对照组相比均有非常显著性差异；ＰＤＬＣ的吸光度分别为ＰＧＥ２０．２１±０．０２、ＴＸＢ２０．１６±０．０３和６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ０．１３±０．０２，与对照组相比均有非常显著性差异。表明ＧＦ和ＰＤＬＣ均可分泌一定量的ＰＧＥ２、ＴＸＢ２和６－Ｋ－ＰＧＦ１ａ，但分泌的量略有差异，提示ＧＦ和ＰＤＬＣ可通过分泌ＰＧ，影响牙龈炎症变化和牙周组织再生。     

牙龈成纤维细胞及牙周韧带成纤维细胞细胞标记物的研究现况

发育中的牙周组织，间充质为疏松的结缔组织，含有大量的星网状细胞及丰富的细胞外基质，其星网状细胞为许多成熟牙周组织细胞的前体细胞。口腔上皮诱导胚胎期颌骨中间充质细胞形成具有成牙特性的细胞，牙滤泡的间充质则具有分化成成牙骨质细胞、成骨细胞和牙周韧带中的成纤维细胞(periodontal ligamentcell，PDLC)。     

静磁场对人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究不同磁路设计的磁性附着体所产生静磁场对人牙龈成纤维细胞酶学的相关作用.方法:使用自主设计的磁场加载系统,产生不同强度的静磁场,对体外培养的人牙龈成纤维细胞进行不同时间的磁场加载.通过与对照组的比较,探讨磁场对该类细胞碱性磷酸酶活性的影响.结果:改变加载强度(120 mT、10 mT、0mT)或加载时间(1、3、5个加载周期),静磁场对人牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性均无显著性影响(P＞0.05).结论:静磁场对牙龈成纤维细胞碱性磷酸酶活性没有影响,初步提示开放及闭合磁路系统磁性附着体所产生静磁场,对牙龈成纤维细胞的相关酶不存在生物学效应.     

牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞生长特性及其胶原表达的比较研究

利用体外细胞培养技术及四唑盐比色法观察了牙周韧带细胞(PDLC)和牙龈成纤维细胞(GF)在体外生长、增殖的情况,用免疫荧光法观察了其细胞外基质表达的差异。结果显示GF较PDLC更容易成活,其增殖速度更快,且GF中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达均较PDLC强,提示在相同生长环境下,GF较PDLC可能有更强的生长能力。     

α-平滑肌肌动蛋白在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中的表达及意义

目的 研究α—平滑肌肌动蛋白在体外培养的牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中的表达并探讨其意义。方法 利用细胞培养和免疫细胞化学技术检测α—平滑肌肌动蛋白在体外培养的牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中的表达。结果 α—平滑肌肌动蛋白在两种成纤维细胞中的免疫细胞化学染色均为阳性。结论 α—平滑肌肌动蛋白在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中稳定表达，可能在细胞收缩与基质改建中起重要作用。     

骨形成蛋白—2和碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞碱性磷酸酶活性的联合效应

目的了解重组人骨形成蛋白-2（rhBMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独和联合作用对人牙周膜细胞（PDLC）碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法体外培养人PDLC,分别用不同浓度的rhBMP-2和bFGF单独或联合作用,用酶动力学方法检测PDLC的ALP活性。结果50～200μg/L浓度的rhBMP-2可显著增强人PDLC的ALP活性（P<0.01）,而10μg/L浓度的bFGF可显著抑制人PDLC的ALP活性(P<0.01),rhBMP-2和bFGF联合作用仍可较明显地增强人PDLC的ALP活性（P<0.05）。结论rhBMP-2和bFGF联合应用可增强人PDLC的ALP活性。     

维甲酸诱导牙周韧带细胞分化的研究

目的研究并比较维甲酸对牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞向成骨样细胞分化潜能的影响。方法体外培养牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞,通过生化法、原位杂交及RT- PCR分别检测维甲酸作用前后碱性磷酸酶（ALP）活性的变化及其mRNA的表达情况。结果正常牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞的ALP活性有明显差别,前者高于后者;原位杂交及RT- PCR均检测到牙周韧带细胞有mRNA表达而牙龈成纤维细胞无表达。维甲酸作用后牙周韧带细胞ALP活性明显升高,mRNA表达信号相应增强,且在5×10- 6 mol/L组效果最明显;牙龈成纤维细胞ALP活性亦有升高,在mRNA水平仅RT- PCR检测到5×10- 6 mol/L组有较弱的表达,其他组及原位杂交均未见表达。结论牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞在向成骨方向的分化潜能上存在差异。     

体外培养的人牙髓细胞,牙周韧带细胞几种基质表达和碱性…

研究并比较培养５－７代人牙髓细胞和牙周韧细胞几种基质表达和碱性磷酸酶分泌的２。细胞培养，免疫组化，碱性磷酸酶活性分析。两种细胞均在培养的第９天进入生长静止期，两种细胞培养液中碱性磷酸酶活性在增殖期达到高峰，以后活性下降。     

Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的比较研究

目的比较人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在胶原基质合成方面的差别,并探讨其意义。方法采用组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞,利用免疫细胞化学技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原在两种细胞中的表达,通过图像分析探讨其表达的差异。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙周韧带细胞中表达阳性,在牙龈成纤维细胞中染色较弱。统计学分析显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的免疫细胞化学染色结果具有显著性差异(P<0.01)。结论牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞胶原基质的合成或分泌存在差异,这种差异可作为鉴别两种细胞的标志之一。     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。