17-β雌二醇对培养人脐静脉内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨缺氧对培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤及17-β雌二醇(E2)对其保护作用。方法胰蛋白酶灌流消化法培养原代人脐静脉内皮细胞,建立细胞缺氧模型。随机分为五组:对照组、缺氧12h组、缺氧24h组、E2+缺氧12h组、E2+缺氧24h组。对照组为常氧下培养的HUVECs,缺氧组按缺氧模型予缺氧下培养HU-VECs,E2+缺氧组予预先加入17-βE2后再缺氧下培养HUVECs。收集各组细胞培养液,Greiss反应测定一氧化氮(NO),放射免疫法测内皮素-1(ET-1);收集各组HUVECs,进行细胞计数,细胞骨架染色观察细胞形态。结果缺氧12h,内皮细胞数由对照组(4.33±0.24)×106/ml减少至(3.23±0.21)×106/ml(P<0.01),形态无明显变化;其分泌NO由对照组(19.28±2.08)nmol/106cell下降至(12.77±1.90)nmol/106cell(P<0.01),ET-1由对照组(95.7±11.32)pg/ml上升至(138.3±10.37)pg/ml(P<0.01)。缺氧24h,内皮细胞数由对照组(4.33±0.24)×106/ml减少至(2.73±0.19)×106/ml(P<0.01),形态变长体积变小;其分泌NO由对照组(19.28±2.08)nmol/106cell下降至(10.76±1.57)nmol/106cell(P<0.01);ET-1由对照组(95.7±11.32)pg/ml上升至(150.1±15.41)pg/ml(P<0.01)。经预先17-βE2处理后能有效抑制上述改变(P<0.01)。结论缺氧可使内皮细胞结构和功能均受损,17-βE2对这种缺氧损伤有保护作用。     

OX-LDL及17β-雌二醇对体外人脐静脉内皮细胞ACE2 mRNA表达的影响

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）及17β-雌二醇（E2）对体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管紧张素转化酶II（ACE2）表达的影响。方法以不同浓度的ox-LDL（20,40,80mg/L）及E2（2,10,50nmol/L）分别单独刺激HUVECs 24h并以40mg/L的ox-LDL与不同浓度的E2（2,10,50nmol/L）共同刺激HUVECs 24h。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测ACE2 mRNA的表达情况。结果与对照组比较,ox-LDL单独刺激组ACE2 mRNA表达分别降低为0.74±0.08,0.52±0.07和0.31±0.06（均P<0.01）,E2单独刺激组ACE2 mRNA表达分别增加为1.54±0.19,2.43±0.28和2.89±0.26（均P<0.01）;40mg/L的ox-LDL与2,10,50nmol/LE2共同刺激组,ACE2 mRNA表达分别为40mg/Lox-LDL单独刺激组的1.95±0.38,2.56±0.32和3.22±0.37（3组间均P<0.05）。结论ox-LDL呈浓度依赖性下调ACE2 mRNA表达;E2呈浓度依赖性上调ACE2 mRNA表达,且E2呈正向量效关系抑制ox-LDL引起的ACE2表达下调。     

17β-雌二醇对牛视网膜毛细血管内皮细胞eNOS mRNA及NO调控的实验研究

目的探讨17β-雌二醇(E2)在不同氧(O2)环境下对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRECs)一氧化氮合酶(eNOS)mRNA及NO的影响。方法在正常O2及缺O2环境下,采用不同生理浓度(10-12、10-10、10-8mol/L)的17β-E2及雌激素受体拮抗剂他莫昔芬处理培养的BRECs。采用RT-PCR检测eNOS mRNA,硝酸还原酶法测定NO。结果①低O2条件下BRECs的eNOS mRNA、NO表达较正常O2条件下明显增多(P<0.05)。②正常O2及低O2条件下,不同生理浓度17β-E2作用24 h后,17β-E2均呈浓度依赖性促进BRECs的eNOS mRNA、NO表达(P<0.05);10-8mol/L 17β-E2作用8、24 h,eNOS mRNA表达量呈时间依赖性增多(P<0.05)。结论生理浓度的17β-E2使BRECs的eNOS mRNA、NO表达呈浓度、时间依赖性增加。     

体外研究胰岛素及磷脂酰肌醇3-激酶途径对一氧化氮生成的影响

目的探讨胰岛素及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)途径对NO生成的影响。方法检测胰岛素、葡萄糖以及PI3-K活性不可逆的抑制剂(Wortmannin)对培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)PI3-K表达以及NO、超氧阴离子(O_2~-)产生和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响。实验分为对照组、10 mU/L胰岛素组、100 mU/L胰岛素组、甘露醇组、5 mmol/L葡萄糖+10 mU/L胰岛素组(5 mmol/L G1组)、25 mmol/L葡萄糖+100 mU/L胰岛素组(25 mmol/L G2组)、50 nmol/L Wortmannin组(50 nmol/L W组)、50 nmol/L Wortmannin+10 mU/L胰岛素组(50 nmol/L W1组)和50 nmol/L Wortmannin+100 mU/L胰岛素组(50 nmol/L W2组)。结果与对照组比较,不同浓度胰岛素组eNOS活性及NO水平显著升高(P<0.01);25 mmol/L G2组、50 nmol/L W组、50 nmol/LW1组和50 nmol/L W2组eNOS活性及NO水平均显著降低,O_2~-生成明显增加(P<0.01);与对照组比较,不同浓度胰岛组、50 nmol/L W组、50 nmol/L W1组和50 nmol/L W2组PI3-K蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论 PI3-K信号途径对于促进NO产生、维持血管内皮细胞的正常功能具有重要作用,在高糖、高胰岛素状态下该条途径受损并由此引发内皮功能障碍。     

盐酸小檗碱对高糖、高脂联合诱导内皮细胞分泌TNF-α的干预作用

目的 观察盐酸小檗碱(黄连素)对高糖、高脂联合诱导下血管内皮细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)的干预作用及对内皮细胞的保护作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,建立Glu+ ox-LDL损伤HUVECs模型.实验分组:对照组:DMEM培养液+l0％胎牛血清;模型组:Glu40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L;黄连素低组:Glu 40 mmol/L+ox-LDL 100 mg/L+黄连素1.25 μg/ml;黄连素中组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素2.5 μg/ml;黄连素高组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素5μg/ml.检测细胞培养液中的内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)和TNF-α水平.结果 细胞增殖率:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L(模型组)培养HUVECs 24 h,与对照组比较细胞存活率降低(P＜0.01),说明造模成功,同时应用1.25 ～5.0 μg/ml黄连素治疗,细胞存活率明显提高(P＜0.01).NO:模型组NO水平显著低于对照组(P＜0.01),黄连素处理组NO水平显著高于模型组,以5μg/ml剂量组作用最显著(P＜0.01).ET-1:模型组ET-1比对照组显著增高(P＜0.01),黄连素各治疗组比模型组明显降低(P＜0.01).TNF-α:对照组与模型组间内皮细胞培养液中TNF-α水平差别有统计学意义(P＜0.01),黄连素各治疗组比模型组内皮细胞培养液中TNF-α水平明显降低(P＜0.01),但仍高于对照组(P＜0.01).结论 黄连素通过调节内皮NO/ET-1平衡、抗炎作用,改善Glu、ox-LDL联合诱导的内皮细胞损伤.     

17β-雌二醇和氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞产生炎性细胞因子的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对内皮细胞产生促炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF)的影响及17β-雌二醇的作用.方法 以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为模型,将ox-LDL与HUVEC孵育及HUVEC经它莫西芬(tamoxifen)和(或)17β-雌二醇预处理后,再与ox-LDL孵育,检测培养液中IL-6和TNF的活性.结果 ox-LDL可明显增加内皮细胞产生IL-6和TNF.ox-LDL 20 mg/L时,TNF为(0.72±0.08)μg/L,IL-6为(92.28±6.29)U/ml;经17β-雌二醇预处理后,细胞在ox-LDL作用后.IL-6和TNF活性与对照组比较,差异无显著性意义;它莫西芬和17β-雌二醇处理内皮细胞后,再加ox-LDL,结果显示IL-6和TNF活性增高,与对照组比较,差异有显著性意义.结论 ox-LDL可促进血管内皮细胞产生促炎性细胞因子IL-6和TNF.雌激素可明显抑制ox-LDL引起的内皮细胞产生IL-6和TNF,此作用可被它莫西芬拮抗.     

雌激素对血管内皮细胞一氧化氮合酶活性调控的受体机制研究

目的　观察 17β 雌二醇对大鼠肺血管内皮细胞一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响及雌激素受体在其中的作用。方法　用贴壁法和无酚红 16 40培养基培养大鼠肺血管内皮细胞 ,在不同浓度的 17β 雌二醇 (伴或不伴有雌激素受体拮抗剂代莫昔芬 )作用下 ,观察一定时间内内皮细胞的NOS活性及一氧化氮 (NO)的产量。放射配体结合分析技术检测内皮中的雌激素受体。结果　 (1) 1～ 10nmol的 17β 雌二醇作用 8～ 2 4h ,内皮细胞的NO产量显著增加 (vs对照 P<0 .0 5 ) ,10nmol的 17β 雌二醇作用 8～ 2 4hNOS活性显著增强 (与对照比 ,8h ,P<0 .0 5 ;16h ,2 4h ,P<0 .0 1)。 (2 )大鼠肺血管内皮细胞中存在雌激素受体。 (3)雌激素受体拮抗剂他莫昔芬能显著抑制雌激素的上述作用 (P <0 .0 1)。结论　 17β 雌二醇能增强大鼠血管内皮细胞的NOS活性和NO产量 ,该作用由雌激素受体介导 ,可能是雌激素降低血管阻力、抑制动脉粥样硬化作用的重要机理之一。     

雌激素对Aβ25-35致PC12细胞膜流动性改变的影响

目的观察可溶性Aβ25-35作用下PC12细胞膜流动性的改变及17β-雌二醇(17βE2)对此改变的影响。方法培养的PC12细胞分为空白对照组,Aβ损伤组及雌激素干预组,根据浓度梯度雌激素干预组再分为5个剂量亚组,采用荧光偏振法动态检测不同组PC12细胞不同时间膜流动性的改变。结果Aβ损伤组在加入5μmol/L可溶性Aβ25-35后各时间点,与空白对照组比较,其微黏度η值均明显升高(P<0.01);17βE2干预组在10-10mol/L浓度的条件下各时间点η值与Aβ损伤组比较差异无显著性(P>0.05);而在10-9~10-6mol/L浓度的条件下各时间点η值与Aβ损伤组比较均显著降低(P<0.01),且这种作用具有剂量依赖性,17βE210-91、0-8、10-7、10-6mol/L干预组与Aβ损伤组比较,在24 h时PC12细胞微黏度η值分别降低了36.4%、49.6%、60%及68.4%。结论可溶性Aβ25-35 5μmol/L使PC12细胞微黏度明显升高,膜流动性明显下降;雌激素具有改善膜流动性保护神经元的作用,且这种作用具有剂量依赖性。     

冠心病患者血浆氧化低密度脂蛋白与血管内皮损伤程度的相关性

目的:探讨冠心病患者血浆氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)与内皮损伤程度的相关性。方法:选择80例冠心病患者(CHD组),21例正常人群(健康对照组),检测各组血浆ox-LDL、循环内皮细胞计数(CEC)、一氧化氮(NO)水平,并分析其相关性。结果:与健康对照组比较,CHD组患者ox-LDL水平[(350±173)μg/L比(687±169)μg/L]、CEC[(2.5±0.5)×10~6个/L比(9.0±1.7)×10~6个/L]明显增加,NO[(77.4±21.1)μmol/L比(52.3±16.6)μmol/L]水平明显降低(P0.05或0.01)。Spearman相关分析显示,ox-LDL与CEC呈明显正相关(r=0.793,P=0.019),ox-LDL,CEC与NO呈明显负相关(r=-0.782,-0.952,P=0.013,0.021)。结论:冠心病患者血浆氧化低密度脂蛋白与循环内皮细胞计数(血管内皮损伤程度)呈明显正相关,因此对于冠心病患者应重视抗炎和保护血管内皮细胞.     

睾酮对脂多糖损伤的血管内皮细胞功能的影响

目的探讨睾酮对脂多糖损害的血管内皮细胞功能的影响。方法将培养3代的人脐静脉内皮细胞分为7组,对照组细胞不处理;脂多糖组加脂多糖10 mg/L刺激;5个不同浓度睾酮组,在脂多糖刺激同时,分别加入3×10~(10)、3×10~(-9)、3×10~(-8)、3×10~(-6),3×10~(-5)mol/L浓度睾酮(依次为A、B、C、D、E组)。硝酸还原酶法检测NO含量,RT-PCR检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)与单核细胞趋化因子-1(MCP-1)mRNA水平;ELISA法检测MCP-1蛋白。结果与脂多糖组比较,B组、C组及D组NO含量和eNOS mRNA均显著增加(P<0.05,P<0.01);与对照组MCP-1蛋白(374.16±10.2)ng/L比较,A组明显增加[(424.50±11.3)ng/L,P<0.05];随睾酮浓度增加,MCP-1蛋白逐渐减少,E组MCP-1蛋白显著减少[(292.29±12.6)ng/L,P<0.01]。与对照组MCP-1mRNA比较,B组、D组、E组明显减低(P<0.05.P<0.01)。结论生理浓度睾酮通过促进NO合成,减少MCP-1表达、改善脂多糖损害的血管内皮细胞功能而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

雌激素水平对大鼠内皮功能的影响

目的:观察性激素对雌性大鼠血管内皮细胞(VEC)增殖的影响,比较成年雌性大鼠人工绝经前、后及补充不同剂量性激素后内皮功能的变化。方法:(1)以MTT法检测含不同浓度的17-β雌二醇(E2),孕酮(P)的培养基对细胞增殖的影响;(2)将48只成年SD雌性大鼠随机分为5组:假手术组、单纯去势组、去势+补充大剂量E组、去势+补充中剂量E组、去势+补充小剂量E组。观测各组血管壁一氧化氮合成酶(NOS)含量及血中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、前列环素(PGI2)、血栓烷A2(TXA2)的含量。结果:(1)3×10-8、3×10-7ME2可促进雌性大鼠VEC增殖,Tamoxifen可阻断E的这种作用;(2)与假手术组比较,单纯去势组大鼠血管壁NOs、血清NO含量降低;血浆ET含量、TXA2/PGI2比值增加(P<0.01)。与单纯去势组比较补充适量雌激素组或雌孕激素组可改善这一状况。结论:绝经后雌激素水平下降可引起内皮功能障碍,补充适量雌激素可改善这一状况。     

非对称二甲基精氨酸在氧化低密度脂蛋白诱导基质金属蛋白酶2蛋白表达中的作用及机制

目的初步探讨非对称二甲基精氨酸(ADMA)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达中的作用及可能机制。方法观察ox-LDL对内皮细胞的损伤作用和MMPs抑制剂多西环素对ox-LDL诱导的内皮细胞MMP-2蛋白表达及ADMA水平的影响;观察ADMA对内皮细胞MMP-2蛋白表达及内皮细胞活性氧(ROS)水平的影响。结果(1)ox-LDL降低内皮细胞生存率呈浓度和时间依赖性;(2)多西环素能明显抑制ox-L,DL诱导的细胞生存率的降低,并显著降低ox-LDL(50 mg/L)诱导的ADMA水平与MMP-2蛋白表达的升高(多西环素5μg/ml时P<0.05,多西环素10,20μg/ml时P<0.01);(3)ADMA降低内皮细胞生存率呈浓度依赖性(P<0.01),并可升高内皮细胞ROS与MMP-2蛋白表达水平(ADMA 3μmol/L时P<0.05,ADMA 10,30μmol/L时P<0.01)。L精氨酸和细胞内抗氧化剂(PDTC)均能拮抗上述作用(P<0.01)。、结论ox-LDL诱导内皮细胞MMP-2蛋白表达水平升高可能涉及ADMA途径;多西环素对MMP-2蛋白表达的抑制作用可能与降低ADMA水平有关;ADMA可能通过诱导氧化应激增加MMP-2蛋白表达。     

黄连素对高糖、高脂损伤内皮细胞内皮素、超氧化物歧化酶的干预作用

目的 观察黄连素对高糖、高脂联合诱导下血管内皮细胞内皮素-1(ET-1)超氧化物歧化酶(SOD)的干预作用及对内皮细胞的保护作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立Glu+ ox-LDL损伤HUVECs模型.实验分组如下:正常组:DMEM培养液+10％胎牛血清;模型组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L;黄连素低组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素1.25 μg/ml;黄连素中组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素2.5μg/ml;黄连素高组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素5μg/ml.检测细胞培养液中的ET-1、SOD.结果 模型组ET-1比正常组显著增高(P＜0.01),黄连素各治疗组比模型组明显降低(P＜0.01).正常组与模型组间SOD含量差别有统计学意义(P＜0.01),黄连素各治疗组比模型组SOD含量明显升高(P＜0.01),但仍低于正常对照组(P＜0.01);结论 黄连素通过抗氧化应激、调节内皮NO/ET-1平衡,提高Glu、ox-LDL联合诱导损伤的内皮细胞活性,并提高增殖率.     

黄连素对人脐静脉内皮细胞分泌一氧化氮的影响

目的 探讨黄连素对高糖、高脂损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌一氧化氮的影响及其保护内皮细胞的作用机制.方法 体外培养HUVECs,采用MTT法检测细胞生长存活率,并建立Glu+ ox-LDL损伤HUVECs模型.实验分组如下:正常组:DMEM培养液+10％胎牛血清;模型组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L;黄连素低组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素1.25 μg/ml;黄连素中组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素2.5μg/ml;黄连素高组:Glu 40 mmol/L+ ox-LDL 100 mg/L+黄连素5μg/ml.采用硝酸还原酶法检测培养HUVECs上清液中NO含量,比较各组细胞NO的分泌水平.结果 模型组NO水平显著低于正常对照组(P＜0.01),黄连素处理组NO水平显著高于模型组,以5 μg/ml剂量组作用最显著(P＜0.01).结论 高糖、高脂处理HUVECs,可以降低HUVECs存活率,减少NO释放;黄连素可以提高Glu、ox-LDL联合诱导的HUVECs损伤的活性,并提高增殖率;黄连素改善Glu、ox-LDL联合诱导的HUVECs损伤的作用机制与其促进NO释放有关.     

川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养人冠状动脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度川芎嗪为1μmol/L组、10μmol/L组、100μmol/L组。用RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因和蛋白表达;采用免疫荧光法观察NF-κB p65蛋白的核转位。结果与对照组比较,ox-LDL组MCP-1、ICAM-1基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,10μmol/L组、100μmol/L组MCP-1、ICAM-1基因表达明显降低(P<0.01),1μmol/L组、10μmol/L组MCP-1、ICAM-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。免疫荧光显示,1μmol/L组、10μmol/L组可抑制NF-κB p65亚基的核转位。结论川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

17β-雌二醇对H_2O_2致血管内皮损伤的保护作用及机制的研究

目的探讨17β-雌二醇对H2O2引起的血管内皮损伤的保护作用和可能的机制。方法人脐静脉内皮细胞株在37℃、5%CO2,条件下正常培养至细胞形成致密单层时,分别进行干预。实验分为5组,空白对照组:细胞正常培养,含10%胎牛血清DMEM培养基培养;过氧化氢损伤组:将培养融合状态达到80%~90%的HUVEC,每孔加入终浓度为0.75 mmol/L的H2O2;H2O2损伤+17β-雌二醇保护组:H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组,17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L;单纯17β-雌二醇组:17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L;H2O2损伤+17β-雌二醇保护+渥曼青霉素组H2O2损伤浓度同过氧化氢损伤组,17β-雌二醇终浓度0.1 mmol/L,渥曼青霉素终浓度100 nmol/L。收集干预后的各组细胞,Western-blot法检测细胞内PI3K/Akt蛋白表达情况,用CCK-8法比较细胞活性,流式细胞技术测定细胞凋亡率,荧光探针标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果 17β-雌二醇可以明显提高氧化应激损伤组内皮细胞中PI3K/Akt的表达,17β-雌二醇可以明显提高H2O2损伤后血管内皮细胞的存活率,降低早期和晚期凋亡率,并且减少H2O2损伤后血管内皮细胞内的ROS含量,差异有统计学意义(P0.001),在加入PI3K/Akt通路的特异性抑制剂渥曼青霉素以后,17β-雌二醇抗氧化损伤的作用明显减弱。结论 17β-雌二醇通过上调H2O2导致的血管内皮细胞损伤后胞内PI3K/Akt蛋白的表达,提高细胞存活率,发挥抗氧化损伤和抗细胞凋亡作用,这可能是雌激素发挥心血管保护效应的重要途径之一。     

17β-雌二醇对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

背景门静脉高压时门静脉系统血管内皮广泛受损,除压力增高、血流冲击等因素外,体液因子的变化也是重要损伤因素之一.目的研究雌激素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和一氧化氮(NO)的影响,探讨其在门静脉高压血管内皮病变中的意义.方法以不同浓度17β-雌二醇和雌激素受体拮抗剂他莫昔芬单独或联合作用于体外培养的HUVEC,检测eNOS活性和NO含量变化.结果与对照组相比,1×10-9～1×10-7 mol/L 17β-雌二醇均可增加HUVEC eNOS活性,提高NO含量;1×10-8～1×10-6 mol/L他莫昔芬对HUVEC eNOS活性和NO含量均无明显影响;1×10-7 mol/L 17β-雌二醇对经1×10-6 mol/L他莫昔芬预处理的HUVEC eNOS活性和NO含量无明显影响.结论17β-雌二醇可显著增加HUVEC eNOS活性,提高NO含量,他莫昔芬则可阻断其作用.门静脉高压血管内皮病变的形成与雌激素的作用有一定关系.     

雌二醇影响MCA-38细胞增殖及雌激素受体表达的实验研究

目的研究雌二醇（E2）影响小鼠结肠腺癌细胞系MCA-38细胞增殖与凋亡及雌激素受体（ER）表达变化的特点与机制。方法将MCA-38细胞分为5个实验组（分别含E2浓度为0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L的培养液培养）和空白对照组,体外培养24 h。检测各组肿瘤细胞E2处理前后ERα和ERβ表达（Western blot法）、细胞增殖（MTT法）以及caspase-3表达（Western blot法）变化。结果 MCA-38细胞表达ERα、ERβ,后者是其主要ER。不同剂量的E2均影响ERα和ERβ表达,E2上调ERα蛋白表达,0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L浓度范围的E2作用最明显,与对照组相比分别使ERα蛋白表达量增加了4.7%、5.5%和5.9%（P〈0.05）。E2则使ERβ表达下降,0.1 nmol/L、1 nmol/L组最明显,分别使ERβ蛋白表达量下降了10.2%和3.9%（P〈0.05）;与对照组相比,0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L、10 nmol/L浓度E2使MCA-38细胞数目分别增加了20.47%、25.29%、37.59%和30.95%（P〈0.05）;经E2处理,MCA-38细胞的caspase-3蛋白表达量明显下降,其中以0.1 nmol/L和1 nmol/L组最为明显,分别降低20.2%和32.9%（P〈0.05）。结论 E2对MCA-38细胞的ERα和ERβ表达、细胞增殖及凋亡均产生影响,MCA-38细胞增殖和凋亡分别与ERα和ERβ表达变化密切相关。     

四氢生物喋呤对内皮细胞产生一氧化氮和超氧阴离子的影响

目的探讨四氢生物喋呤(BH4)对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮(NO)和超氧阴离子(O-2)的影响.方法在培养液中分别加入不同浓度的D-葡萄糖、胰岛素和BH4,24 h后取细胞培养液分别测定一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、NO和O-2浓度.结果BH4(10、100、500μmol/L)使内皮细胞NOS活性增高,500 μmol/L BH4使内皮细胞NO产生增加,10或100 μmol/LBH4对内皮细胞产生NO有增加的趋势,但与对照组比较无显著性差异(P＞0.05);25 mmol/L葡萄糖+BH4(10、100、500 μmol/L)对内皮细胞产生NO与对照组比较无显著性差异(P＞0.05);高浓度胰岛素(10、100、1 000 mU/L)+BH 4(10、100、500 μmol/L)使内皮细胞NOS活性增强,NO产生增加.BH4(10、100、500μmol/L)对内皮细胞SOD活性无明显影响,但可以改善25 mmol/L葡萄糖对内皮细胞SOD活性的影响;胰岛素+BH4对内皮细胞SOD活性无明显影响(P＞0.05).BH4(10、100、500 μmol/L)使内皮细胞产生O-2减少,并可以改善25 mmol/L葡萄糖对内皮细胞产生O-2影响;胰岛素+BH4组O-2浓度明显低于对照组和不同浓度胰岛素组(P＜0.01).结论BH4可以增加培养的人脐静脉内皮细胞NOS活性,使NO产生增加而使O-2水平下降.     

p38MAPK在ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤中的作用研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法人脐带静脉血管内皮细胞HUVEC-12分为对照组、ox-LDL组、实验1组、实验2组、实验3组。ox-LDL组、实验1组、实验2组、实验3组细胞分别用ox-LDL诱导处理,实验1组、实验2组、实验3组用不同浓度(5μmol/L、15μmol/L、30μmol/L)的p38MAPK抑制剂预处理。Western blot测定各组细胞中p38MAPK磷酸化水平,二硝基苯肼法、硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化法分别测定培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和匀浆液中超氧化物歧化酶(SOD)含量,流式细胞术测定各组细胞凋亡情况,Western blot法测定各组细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平,比色法测定培养液中一氧化氮(NO)含量,ELISA法测定培养液中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果 ox-LDL组细胞中p38MAPK磷酸化水平明显高于对照组(P0.05)。实验1组、实验2组、实验3组细胞中p38MAPK磷酸化水平明显低于ox-LDL组(P0.05)。ox-LDL组培养液中LDH、MDA含量明显升高,匀浆液中SOD水平明显降低,Caspase-3介导的细胞凋亡明显增多,培养液中NO含量明显降低,同时培养液中ICAM-1、IL-1β含量明显升高,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P0.05)。实验1组、实验2组、实验3组细胞培养液中LDH、MDA含量明显降低,匀浆液中SOD水平明显升高,Caspase-3介导的细胞凋亡明显减少,培养液中NO含量明显升高,同时培养液中ICAM-1、IL-1β含量明显降低,与ox-LDL组相比,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 ox-LDL诱导血管内皮细胞p38MAPK磷酸化,而抑制p38MAPK后可以减少ox-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤,减少细胞凋亡。