β3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞粘附和迁移中的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对β₃整合素表达的影响及β₃整合素在PDGF促血管平滑肌细胞(VSMC)粘附、迁移和增殖中的作用。方法:用抗β₃整合素胞外域抗体封闭VSMCβ₃整合素后,通过-TdR掺入、细胞粘附、细胞迁移分析及RT-PCR等方法,检测PDGF对β₃整合素表达及对VSMC粘附、迁移和增殖的影响。结果:阻断β₃整合素与细胞外基质(ECM)蛋白相互作用后,可在一定程度上抑制PDGF刺激的VSMC增殖,使-TdR掺入率降低39%;在β₃整合素抗体浓度为10mg/L时,PDGF引发的细胞粘附和迁移受到显著抑制(P＜0.05);PDGF作用于VSMC6h,β₃整合素基因表达活性达到峰值,比对照细胞高87%。结论:PDGF可显著诱导β₃整合素在VSMC中表达;β₃整合素与ECM蛋白相互作用在PDGF促VSMC粘附、迁移方面发挥重要作用。     

胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞TGF β及其受体的调节作用

目的:从细胞增生、转化生长因子β₁和受体表达等方面,探讨胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR VSMC)和正常血压Wista-Kyoto大鼠血管平滑肌细胞(WKY VSMC)的影响异同。方法:采用组织移植法培养SHR和WKY大鼠胸主动脉VSMC|用细胞计数仪和流式细胞仪分别检测细胞增生情况|TGF β及其受体的mRNA水平利用定量RT-PCR技术进行检测。结果:(1)胰岛素加强SHR VSMC的增生,而不影响WKY VSMC的增生。胰岛素加强SHR VSMC的增生,且呈剂量依赖方式(2)以20%小牛血清培养基培养VSMC, SHR VSMC的S期百分率为31.44%,而WKY VSMC的S期百分率仅为19.86%|以2%小牛血清培养基培养VSMC,SHR VSMC的G₀／G₁和S期百分率分别为73.23%和9.35%,加入胰岛素后,SHR VSMC的G₀／G₁降低为67.58%,S期百分率则增加到15.64%。但是,加入胰岛素前后,WKY VSMC各期百分率无明显变化|(3)RT-PCR分析结果表明,生长静止的SHR VSMC和WKY VSMC均有TGF β₁、Ⅰ型和Ⅱ型TGF β受体的表达,但SHR VSMC的TGFβ₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量高于WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量,胰岛素加强了WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达(P＜0.01和P＜0.05),而削弱了SHR VSMC相应分子的表达(P＜0.01和P＜0.05),胰岛素不影响二株系大鼠VSMC Ⅱ型TGF β受体的表达(P＜0.05)。结论:胰岛素对SHR VSMC和WKY VSMC的TGF β和它的受体表达具有不同的调节作用,这种异常调节作用可能和胰岛素加强SHR VSMC的增生密切相关。     

整合素β3-粘着斑激酶信号途径的活化参与大鼠血管新生内膜的形成

目的： 观察整合素β₃-粘着斑激酶（FAK）等信号分子表达和活化与血管新生内膜形成之间的关系。方法：用球囊剥脱法制备血管狭窄模型；用Western印迹和免疫组化染色检测骨桥蛋白(OPN)、整合素β3和FAK等信号分子的蛋白水平及活化程度。结果：血管内皮剥脱后，OPN、整合素β₃和FAK蛋白水平均在血管内皮剥脱后3 d 明显增加；术后7 d 时达高峰，其中升高的FAK以磷酸化形式为主；14-21 d 时，有所回降，但仍高于正常。其表达峰值均出现在血管平滑肌细胞向内膜快速迁移和增殖期，而且伴有细胞外基质降解加快。 结论：细胞迁移是一个细胞和细胞外基质相互作用的复杂过程，整合素β₃-FAK信号途径在维系该过程的协调统一方面具有重要作用。     

粘着斑激酶活化对平滑肌细胞粘附和迁移的影响

目的:研究粘着斑激酶磷酸化在细胞外基质成份诱导平滑肌细胞粘附和迁移中的作用。方法:通过纤粘连蛋白(FN)诱导培养的平滑肌细胞粘附迁移,以免疫沉淀和Western blolt方法检测粘着斑激酶(FAK)及其磷酸化的表达量。将FAK反义寡核苷酸(ODNs)经脂质体转染细胞,观察对FAK磷酸化、细胞粘附铺展和迁移的影响。结果:FN在显著诱导平滑肌细胞粘附和迁移时,FAK也呈明显表达,20 mg/L FN可使其磷酸化处于较高表达量。脂质体可有效地介导ODNs转染,转染效率为(86.7±4.5)%,FAK磷酸化表达量明显减少,5-60 mg/L不同浓度FN组,细胞铺展率减少17.89%-27.67%,10、20、40和60 mg/L FN组迁移细胞数也分别显著少23.26%、21.63%、19.31%、17.88%(P＜0.05)。结论:活化的FAK是细胞外基质诱导SMCs粘附和迁移的重要信号分子,由其介导的信号转导促进了这一过程,反义FAK ODNs可有效地对此进行抑制。     

低氧时肺癌细胞侵润和迁移特性的变化及分子基础

目的:探讨低氧对肺癌细胞侵润、迁移特性的影响及其机制。方法:将肺癌细胞株置常氧(空气、5%CO₂)、低氧(5%O₂、5%CO₂、90%N₂)、无氧(95%N₂、5%CO₂)的不同氧环境中培养48 h后,用划痕法测定各组细胞的迁移能力,用羊膜内皮细胞模型测定各组细胞的侵润能力。同时将处理的细胞接种于裸鼠背部皮下,观察其生长情况及转移特点。同时分析上皮钙粘附素、β1-整合素的表达量。结果:低氧组细胞迁移能力、侵润能力显著高于常氧组。无氧组成瘤率和肺转移率显著低于常氧组和低氧组。低氧组上皮钙粘附素表达显著低于常氧组而β1-整合素表达量显著高于常氧组,无氧组两者均显著低于常氧组。结论:适度低氧可以下调肺癌细胞上皮钙粘附素表达,增加β1-整合素表达,增强癌细胞迁移力和侵润力。但是严重低氧使癌细胞粘附分子表达下降,生长增殖能力、迁移力和侵润力下降。     

血管紧张素II及其受体在血管平滑肌细胞迁移中的作用

目的:探讨血管紧张素II(AngII)及其受体(ATRs)在局部血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用及其机制。方法:以体外培养VSMC为基础,采用细胞化学和改良Boyden'schamber的方法,观察AngⅡ干预VSMC后AngII受体的表达、VSMC迁移能力的变化、肌动蛋白纤维丝的动态组装变化,并探讨AT₁R拮抗剂、AT₂R拮抗剂对上述观测指标的影响。结果:AngII10^-7mol/L可以刺激VSMC发生迁移,该作用是通过影响VSMC内应力纤维动态组装而实现的;AngII干预VSMC后可使AT₁R表达上调,随着作用时间延长AT₁R表达水平下降。AT₁R拮抗剂可下调AT₁R表达。AngII通过AT₁R的介导发挥其影响VSMC迁移能力的生物学效应。AT₂R对此无明显影响。结论:AngII通过AT₁R介导来调节VSMC内肌动蛋白微丝的动态组装,进而改变VSMC的迁移能力,从而发挥其介导VSMC迁移的生物学效应。     

小鼠β2m正反义核酸表达载体转染NIH3T3细胞后的表达

目的:探讨小鼠β₂m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β₂mSN和pcDNA3-β₂mAN对NIH3T3细胞表达β₂m的影响, 为降低MHCⅠ类分子表达的研究提供新方法和实验依据。方法:本研究应用分子生物学技术,构建小鼠β₂m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β₂mSN和pcDNA3-β₂mAN,用脂质体转染NIH3T3细胞。经过RT-PCR及Western blot检测,观察正、反义核酸对细胞β₂m mRNA和蛋白表达的影响。 结果: 小鼠β₂m正、反义核酸表达载体成功导入NIH3T3细胞中,且有效表达,转染正义核酸的细胞β₂m mRNA和蛋白表达水平升高,而转染反义核酸则β₂m mRNA和蛋白表达水平降低。 结论:小鼠β₂m反义核酸表达载体pcDNA3-β₂mAN可以降低NIH3T3细胞β₂m基因的表达,本研究结果为降低MHCⅠ类分子的表达、解决同种异体排斥反应提供了新的研究方法和途径。     

维甲酸对转化生长因子β1 诱导的HFL-I细胞Ⅲ型胶原、STAT3和PIAS3表达的影响

目的: 研究全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-I)中Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)和活化STAT3蛋白抑制剂(PIAS3)表达的影响。方法: 体外培养HFL-I细胞,5 μg/L TGF-β₁诱导0 h、6 h、12 h、24 h、48 h和72 h后,RT-PCR法检测collagen Ⅲ、STAT3和PIAS3 mRNA表达,诱导0 d、1 d、3 d和5 d后,Western blotting法检测STAT3和p-STAT3蛋白表达。不同浓度维甲酸干预,24 h后用RT-PCR法检测collagen Ⅲ、STAT3和PIAS3 mRNA表达,3 d后用Western blotting法检测STAT3和p-STAT3蛋白表达。结果: TGF-β₁诱导后,HFL-I细胞中collagen Ⅲ和STAT3 mRNA表达明显上调,PIAS3 mRNA表达明显下调,STAT3和p-STAT3蛋白表达明显上调(P< 0.05)。各浓度ATRA都下调TGF-β₁诱导的HFL-I细胞中collagen Ⅲ、STAT3 mRNA和STAT3、p-STAT3蛋白的表达,上调PIAS3 mRNA表达(P<0.05)。结论: ATRA可通过抑制TGF-β₁诱导的HFL-I细胞collagen Ⅲ和STAT3表达、上调PIAS3表达而起到抗肺纤维化作用。     

小鼠早期完整胚胎诱导子宫内膜白血病抑制因子和整合素β3表达并提高子宫容受性

目的: 探讨小鼠早期胚胎诱导子宫内膜容受性改变的空间结构,确定胚胎各个部分能否引起子宫内膜容受性中白血病抑制因子(LIF)和整合素β₃改变。方法: 选用6~8周昆明雌鼠,体外实验分为子宫内膜培养前组、子宫内膜单纯培养组、子宫内膜全胚胎共培养组、子宫内膜卵裂球共培养组、子宫内膜透明带共培养组,各组培养2 d后收集子宫内膜行下一步检测;体内实验分为胚胎移植前组、单纯培养液移植组、全胚胎移植组、卵裂球移植组、透明带移植组及正常妊娠未干预组,移植后2 d收集子宫内膜行下一步检测。荧光定量PCR检测整合素β₃和LIF mRNA表达;免疫组织化学及Western blotting检测整合素β₃和LIF的蛋白表达部位及表达水平。结果: 体外实验子宫内膜全胚胎共培养组中子宫内膜的整合素β₃ 和LIF表达显著高于其它组,体内实验正常妊娠未干预组的整合素β₃ 和LIF表达显著高于其它组。结论: 完整胚胎可显著提升小鼠孕早期子宫内膜容受性因子整合素β₃ 和LIF的表达,而单纯透明带或卵裂球则不能明显增加整合素β₃ 和LIF的表达。早期胚胎诱导子宫内膜容受性可能需要完整胚胎结构的存在。     

丹参单体通过下调粘着斑激酶诱导H2O2刺激的肝星状细胞凋亡

目的: 研究丹参单体IH764-3对H₂O₂刺激的肝星状细胞(HSCs)凋亡的诱导作用以及此过程中粘着斑激酶(FAK)的变化。方法: 通过直接细胞计数法测定HSCs增殖;光学显微镜及透射电镜技术观察凋亡细胞的形态学改变,并应用膜联蛋白(Annexin-V)/碘化丙啶(PI)联合标记法检测HSCs的凋亡率;运用RT-PCR方法观察FAKmRNA表达。结果: H₂O₂具有刺激HSCs增殖的作用;丹参单体IH764-3能够诱导H₂O₂刺激的HSCs凋亡,并呈剂量依赖关系:10mg/L、20mg/L、30mg/L及40mg/LIH764-3干预48h后各组凋亡率分别为6.35%、9.28%、15.10%、19.69%,而H₂O₂组为2.30%;30mg/LIH764-3干预HSCs不同时间(12h、24h、48h)的凋亡率分别是6.73%、10.34%、15.10%,呈时间依赖关系;RT-PCR分析表明FAK基因表达强度在加入IH764-3后2h即明显下调,10mg/L,20mg/L,30mg/L及40mg/L组分别比H₂O₂组低了68.71%、71.00%、86.72%、95.16%。结论: 丹参单体IH764-3可以诱导H₂O₂刺激的HSCs凋亡,下调FAKmRNA表达是其诱导HSCs凋亡的机制之一。     

多种粘附分子基因在原发性肝癌的表达及其临床意义

目的:探讨多种粘附分子基因在原发性肝癌中的表达及其临床意义。方法:取64例用RT-PCR法半定量检测肝癌粘附分子的基因表达情况,分析其临床意义。结果:(1)原发性肝癌各粘附分子的表达率分别为:E-钙粘蛋白 90.62%、细胞间粘附分子-1 93.75%、粘附分子CD44 50.00%、粘附分子CD_44V 96.88%、整合素α₅ 100%、整合素β₁ 100%,CD44与其他粘附分子表达率的差异显著。(2)肝癌组织各粘附分子E-钙粘蛋白 、细胞间粘附分子-1 、粘附分子CD44、粘附分子CD_44V 、整合素α₅、整合素β₁ mRNA的表达量分别为:1.24±0.54、0.96±0.37、0.62±0.73、0.86±0.33、 0.97±0.49、1.41±0.24,其中粘附分子CD44与E-钙粘蛋白、整合素β₁的表达量差异显著。(3)肝癌分期与粘附分子基因mRNA表达量的关系显示:E-钙粘蛋白、粘附分子CD44的表达量随分期增高而下降,其中粘附分子CD44Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著;细胞间粘附分子-1、粘附分子CD_44V,整合素α₅、整合素β₁的表达量随分期增高而增高,其中细胞间粘附分子-1Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著。(4)肝癌粘附分子基因mRNA表达量与临床病理生理特点相关分析显示:肝癌粘附分子基因mRNA表达量与肿瘤大小、有无转移、有无包膜和结节数目有关,与AFP水平、肝硬化情况、肝功能状况无关。结论:肝癌粘附分子基因mRNA的表达存在明显的差异,粘附分子CD44表达缺失率高。肝癌粘附分子基因mRNA的表达与肿瘤大小、有无转移、结节数目、有无包膜相关。     

脂氧素A4对肝细胞生长因子诱导HepG2肝癌细胞血管生成相关细胞因子表达的影响

目的: 探讨脂氧素A₄(LXA₄)对肝细胞生长因子(HGF)诱导的HepG2肝癌细胞血管生成相关细胞因子表达的影响。方法: 体外培养HepG2肝癌细胞,实验分为空白组、HGF处理组、HGF+LXA₄处理组、HGF+脂氧素受体激动剂BML-111处理组。RT-PCR检测脂氧素受体(ALX)表达情况,Western blotting检测COX-2、MMP-2、MMP-9、IκBα和NF-κB p65的表达量,ELISA检测TNF-α、IL-1β、VEGF和TGF-β分泌水平, 荧光素酶报告质粒检测NF-κB转录活性。结果: HepG2肝癌细胞表达ALX,LXA₄和BML-111下调COX-2、 MMP-2和MMP-9,抑制TNF-α、IL-1β、VEGF和TGF-β分泌,并且干扰NF-κB转位及其转录活性。结论: 脂氧素抑制HGF诱导HepG2肝癌细胞表达血管生成相关细胞因子,包括VEGF、COX-2、TNF-α、IL-1β、TGF-β、MMP-2及MMP-9,此效应可能通过干扰NF-κB活化实现。     

肾上腺髓质素拮抗转化生长因子β1的促纤维化作用及其机制

目的:探讨肾上腺髓质素(AM)在人肾小管上皮细胞系(HK-2)对转化生长因子β₁(TGFβ₁)促纤维化作用的影响及机制。方法:细胞总胶原的合成和分泌以[³H]-脯氨酸掺入量及培养液内[³H]-羟脯氨酸放射活性来判断;ELISA法检测培养液中纤维连接蛋白(FN)含量;FN、IV型胶原和组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA的表达采用RT-PCR法;信号蛋白Smad2及Smad6蛋白表达采用Westernblot法。结果:(1)AM在蛋白和mRNA水平均明显抑制TGFβ₁刺激的胶原和纤维连结蛋白的表达;(2)AM抑制TGFβ₁刺激的TIMP-1mRNA的上调;(3)AM(10^-8mol/L)本身对Smad2和Smad6的表达无明显影响,且对TGFβ₁刺激的Smad2的表达也无明显影响;但是可以明显上调被TGFβ₁抑制的Smad6的表达。结论:在HK-2细胞,AM通过上调抑制性Smad6的表达拮抗TGFβ₁的促纤维化作用。     

FAK-shRNA重组逆转录病毒载体的构建及稳定表达细胞株的筛选

目的: 研究利用RNA干扰技术,以黏附斑激酶(FAK)为靶基因,构建FAK-shRNA重组逆转录病毒载体,将其导入包装细胞Phoenix中,筛选出稳定产生FAK-shRNA病毒的细胞克隆,以病毒上清感染并筛选FAK表达沉默的细胞株,观察其对相关蛋白表达的影响。方法: 体外合成能转录产生靶向FAK短发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸并定向克隆入pSuper.retro逆转录病毒载体,以脂质体法转染Phoenix细胞株,待筛选稳定克隆成功后收获病毒上清,感染人肝癌细胞株HCC-LM3,以嘌呤霉素筛选得到抑制FAK表达的稳定细胞株后用Western boltting鉴定FAK表达的抑制效果及相关蛋白表达情况。结果: 构建了重组逆转录病毒载体pSuper-FAK并抑制了人肝癌HCC-LM3细胞内FAK蛋白的表达。在下调FAK表达的细胞株中p-Akt和p-MAPK1/2表达明显受到抑制。下调FAK的细胞株迁移和侵袭能力下降,细胞周期多被阻止在G₀/G₁期,细胞凋亡增多,增殖率明显下降。结论: 重组逆转录病毒载体pSuper-FAK转染包装细胞Phoenix后,其产生的FAK-shRNA病毒可以抑制HCC-LM3细胞内的FAK蛋白表达并抑制Akt及MAPK1/2磷酸化。下调FAK后可以对肿瘤细胞的生物学行为产生明显影响。     

单核巨噬细胞对肾小管上皮细胞的活化作用及其机制初探

目的:观察外周血单核巨噬细胞(MO/MAC)条件培养基(M-CM)对肾小管上皮细胞(RTEC)直接作用的生物学效应并探讨可能的作用机制。方法:应用正常人外周血M-CM刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2),以[³H]-TdR掺入法检测HK-2细胞DNA合成、Westernblot法检测骨桥蛋白(OPN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、间接抑制ELISA法检测纤连蛋白(FN)分泌。进一步采用白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β₁(TGF-β₁)中和抗体进行拮抗。结果:①M-CM可促进HK-2细胞DNA合成、α-SMA表达及FN分泌。②TGF-β₁中和抗体(5mg/L)与M-CM同时作用于HK-2细胞,其α-SMA表达和FN分泌均明显低于M-CM单独作用组。③IL-10(20μg/L)与M-CM同时作用组的HK-2细胞,α-SMA表达和FN分泌亦明显低于M-CM组;IL-10预孵育MO/MAC组,HK-2细胞α-SMA表达也明显低于M-CM组。结论:单核巨噬细胞可直接诱导肾小管上皮细胞增殖、表型转化以及分泌细胞外基质增加;其分泌的TGF-β₁及炎性细胞因子可能参与介导上述效应。     

OPN促进大鼠肝星状细胞黏附、迁移及黏着斑激酶活性

目的探讨细胞外间质(ECM)成分骨桥蛋白(OPN)和精-甘-天冬-丝氨酸(Arg-G ly-Asp-Ser,RGDS)四肽对大鼠肝星状细胞(HSCs)黏附、迁移与黏着斑激酶(FAK)活性的影响。方法应用体外细胞培养技术,MTT法检测HSCs增殖,甲苯胺蓝法检测HSCs黏附情况,并观察HSCs迁移;采用免疫沉淀和W estern b lot技术测定黏着斑激酶活性变化。结果①不同浓度OPN和RGDS四肽作用于HSCs 2 h后,8、16、32 mg/L OPN组细胞黏附促进率均高于对照组(P<0.05);25 mg/L~100 mg/L RGDS四肽不同浓度组细胞黏附率明显下降(P<0.05)。②不同浓度OPN干预细胞48 h后,促进HSCs增殖,而RGDS四肽组抑制HSCs增殖。③16 mg/L OPN作用12、24和36 h,细胞迁移距离显著高于对照组(P<0.05);而100 mg/L RGDS四肽组则显著性低于对照组(P<0.05)。④经OPN作用后各浓度组HSCs中磷酸化FAK均有显著表达;RGDS四肽干预后,磷酸化FAK表达量降低。结论①OPN促进HSCs增殖、黏附和迁移;RGDS四肽对HSCs增殖、黏附和迁移具有抑制作用。②OPN可以诱导FAK活化,RGDS四肽可抑制磷酸化FAK的表达。     

粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的影响

为研究粘着斑激酶反义寡核苷酸对平滑肌细胞粘附迁移和凋亡的调控作用 ,采用纤粘连蛋白 (fibronectin ,FN)诱导平滑肌细胞 (smoothmusclecells,SMCs)粘附迁移并活化粘着斑激酶 (focaladhesionkinase ,FAK) ,将FAK反义寡核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotides,ODNs)经脂质体转染细胞 ,观察对FAK磷酸化、细胞粘附迁移以及凋亡的影响。结果表明 ,FN在有效地诱导SMCs粘附迁移并活化FAK的同时 ,凋亡细胞数显著低于对照 ,(8 96± 1 2 ) %和(2 3 45± 9 6 ) %。脂质体可有效地介导ODNs转染 ,转染效率为 (86 7± 4 5 ) % ,FAK磷酸化表达量明显减少 ,不同浓度FN组 5～ 6 0mg L ,细胞铺展率减少 17 89%～ 2 7 6 7% ,10、2 0、40和 6 0mg LFN组迁移细胞数也分别显著减少2 3 2 6 %、2 1 6 3%、19 31%、17 88% ,凋亡细胞数比对照高 33 5 7% (P <0 0 5 ) ,也显著高于FN组。据此可以认为FAK活化及其介导的信号转导通路是细胞外基质诱导SMC粘附迁移并抑制其凋亡的重要因素。反义FAKODNs可有效地对此进行调控     

碱性成纤维细胞因子对人肾成纤维细胞的影响

目的:研究碱性成纤维细胞因子(bFGF)对人肾成纤维细胞(KFB)增殖、分泌I型胶原、表达整合素β₁的影响。方法:体外培养KFB, 分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、ELISA法、流式细胞仪检测KFB增殖、I型胶原分泌及整合素β₁表达水平。结果:25-50μg/L的bFGF可明显促进KFB细胞增殖(P<0.05vs对照)及分泌I型胶原(P<0.05vs对照), 同时显著增加KFB整和素β₁的表达(P<0.05vs对照).结论:bFGF可通过对整合素β₁表达的上调来促进KFB增殖及分泌I型胶原, 这可能是bFGF致肾间质纤维化的作用机制。     

过氧化氢对血管平滑肌细胞增殖和明胶酶A及其抑制因子基因表达的影响

目的:探讨过氧化氢(H₂O₂)对体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和明胶酶A(MMP-2)、及其抑制因子(TIMP-2)基因表达的影响。方法:先用四甲基偶氮唑(MTT)法筛选出H₂O₂对VSMC的毒性作用浓度和增殖作用浓度,在此基础上用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定H₂O₂对MMP-2、TIMP-2mRNA表达的影响。结果:H₂O₂浓度大于300μmol/L后显示出对VSMC的致死毒性作用;H₂O₂浓度在0.01-5.0μmol/L内可以刺激VSMC的增殖,且呈时间依赖性;1μmol/LH₂O₂、10μmol/LH₂O₂对MMP-2基因转录有明显的促进作用;不同浓度的H₂O₂对TIMP-2基因转录无明显促进作用。结论:适当浓度的H₂O₂可以促进VSMC的增殖和MMP-2mRNA表达,但对TIMP-2mRNA表达无明显作用,提示H₂O₂参与了血管重塑的不同病理环节。     

bFGF促进内皮细胞β1整合素表达及其意义探讨

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对血管内皮细胞β₁整合素表达的影响。方法:采用WesternBlot法结合图像处理分析,检测bFGF作用前后培养血管内皮细胞β₁整合素的表达。结果:bFGF处理组和对照组平均灰度值分别为166.11±9.86和175.32±5.12,两组免疫酶显色有显著差异。结论:bFGF能够诱导内皮细胞膜表面β₁整合素合成增加。推测bFGF通过上调内皮细胞β₁整合素表达,可能在促进血管生成方面有重要作用。