TBLR1-RARα融合基因对K562细胞向红系分化的影响

目的:探讨融合基因TBLR1-RARα的表达对于白血病细胞系K562细胞向红系分化的作用及其可能的机制。方法:应用Tet-Off系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控TBLR1-RARα的条件性表达。将TBLR1-RARα融合基因与慢病毒目的载体p LVX-Tight-Puro连接,感染K562细胞并获得稳定克隆,Western blot证实TBLR1-RARα融合蛋白的表达情况。应用实时定量荧光PCR检测全反式维甲酸(all-trans retinoid acid,ATRA)处理的K562细胞红系分化的表面标志CD71以及α,ε,γ-珠蛋白的基因表达水平;流式细胞术(flow cytometry)分析细胞表面CD71和CD235a的表达情况,联苯胺染色观察血红蛋白的生成情况。结果:实时定量PCR显示,ATRA能够使这些细胞的红系分化相关的CD71及α,ε,γ-珠蛋白的基因表达水平上调;流式分析结果同样表明,ATRA促使红系分化早期标志CD71细胞所占比例增加。ATRA处理后,联苯胺染色证实这些细胞的胞浆出现蓝染,表明ATRA能够诱导表达TBLR1-RARα的K562细胞产生血红蛋白。结论:TBLR1-RARα融合基因表达,有利于ATRA诱导K562细胞向红系分化。     

白头翁皂苷A对K562细胞红系诱导分化作用的研究

目的:探讨白头翁皂苷A对K562细胞向红系诱导分化的作用。方法:应用不同浓度的白头翁皂苷A作用于K562细胞后,采用联苯胺染色阳性细胞计数、细胞内血红蛋白测定及流式细胞术检测细胞膜表面CD71及GPA分化抗原表达等方法评价白头翁皂苷A对K562细胞的诱导分化作用。结果:不同浓度的白头翁皂苷A均可提高K562细胞内血红蛋白的含量;上调K562细胞膜表面CD71及GPA分化抗原的表达。其中以4μg/ml的白头翁皂苷A的作用最为显著。结论:白头翁皂苷A可诱导K562细胞向红系分化。     

联合诱导法对K562细胞红系分化及其相关基因和膜蛋白表达的影响

目的优化K562细胞体外红系诱导分化条件,分析红系相关基因和膜蛋白的表达,探讨K562细胞的分化潜能。方法采用红系诱导联合培养法,优化丁酸钠、促红细胞生成素、氯化高铁血红素、枸橼酸铁等成分组合和剂量组合。鉴定指标选用红系血红素合成酶(eALAS)mRNA和粒系bcr/ablmRNA表达丰度分析、细胞形态学观察、联苯胺染色阳性率计数。红系分化进一步鉴定指标选用Real-timePCR检测10种红系分化相关基因的表达;流式细胞术测定红系细胞膜标志物。结果K562细胞诱导120h后,联苯胺染色阳性率达100%;α、β收缩蛋白(spectrinα、β)、带3蛋白(band3)、eALAS、整合素相关蛋白(CD47)、RhD血型抗原(RhD)、锚蛋白(ankyrin)、红细胞膜带4.2蛋白(EPB4.2)的mRNA水平为对照组的8.05、14.58、22.87、14.52、26.53、3.48、2.71、1.94倍,而bcr/ablmRNA水平为对照组的39%;红系膜蛋白CD47、band3、RhD水平明显增高(P<0.01),血型糖蛋白A(GPA)无明显差异。结论优化组合体外红系诱导分化法可使K562细胞稳定向红系分...     

急性非淋巴细胞白血病中粒细胞与单核细胞的细胞化学染色特点分析

目的：应用细胞化学染色方法来鉴别急性非淋巴细胞白血病（ANLL）M4、M5a、M5b中的粒细胞与单核细胞方法：9种常用的细胞化学染色方法.结果：POX、SBB，原、早幼粒细胞染阴性或弱阳性，阳性物粗大．弥散分布，中幼粒以下阶段强度加大；原、幼单核细胞多为阴性．PAS，原、幼粒阳性物以细颗粒分布：原幼单较粒系强．酶型呈细、中、粗颗粒分布，可见珠、块状.CE，原、幼粒细胞多为细颗粒分布，强度以（＋）为主；原、幼单为阴性或弱阳性，为细颗粒状散在分布，α-NAE，原、幼粒细胞92％为（-），不被NaF抑制：原单大部分呈局灶型．幼单可呈阳性或强阳性，酶型呈细小颗粒弥散状，可被NaF抑制.α-NBE，原、幼粒多为阴性；原幼单多为弱阳性或阳性。酸性磷酸酶（ACP），对粒系无特异性，反应不一，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）阴性：单核为强阳性，酶型多为颗粒型．TRAP阴性。结论：POX、SBB、CE、PAS、α—NAE、α-NBE染色的阳性率、阳性指数和酶型分析对鉴别ANLL中的粒、单核细胞有很重要的意义，可以大幅度提高了对ANLL亚型M4、M5a、M5b分型的准确率，而ACP、TRAP对于鉴别粒、单核细胞意义不大     

SCL/TAL-1基因沉默对EPO诱导的K562细胞红系分化的影响

目的 通过RNA干扰技术降低SCL/TAL-1 mRNA的表达,探讨SCL/TAL-1在K562细胞红系分化中的作用.方法 以EPO诱导白血病细胞系K562细胞向红系分化为模型,将靶向SCL/TAL-1基因的特异性短发夹RNA(shRNA)慢病毒质粒pTRIP-dU3- RNAiTALh-EF1a-GFP转染K562细胞,RT-PCR检测其SCL/TAL-1和红系相关基因RhD、血型糖蛋白A(GPA,即CD253a)、CD47 mRNA表达水平变化,流式细胞术分析红系分化抗原CD71、CD253a的表达,并以空载体质粒pTRIP-dU3- RNAiluc-EF1-GFP转染的K652细胞为对照.结果 ①通过慢病毒转染系统将含SCL/TAL-1 shRNA的质粒及空载体质粒转染K562细胞48 h,绿色荧光蛋白(GFP)+细胞占总细胞的95%以上,表明感染率达到95%以上.②RT-PCR结果显示转染特异性shRNA的K562细胞SCL/TAL-1 mRNA表达水平比空载体对照明显下调(P<0.05),红系抗原CD47和RhD mRNA水平也比对照组明显下调(P<0.05),GPA有所下降,但没有CD47和RhD下降程度大.③流式细胞术检测到SCL/TAL-1低表达组红系分化抗原CD71、CD235a表达降低,表达率分别是10.4%、76.5%,而在对照组的表达率分别为94.3%、83.6%.结论 研究结果提示转录因子SCL/ TAL-1参与了红系定向分化.     

曲古菌素A诱导急性髓系白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86的研究(英文)

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)诱导急性髓系白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86。方法:应用流式细胞仪检测TSA诱导急性髓系白血病患者单核细胞、HL-60细胞和K562细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;应用RT-PCR分析CD80和CD86 mRNA表达情况;在75 Gy照射TSA诱导的HL-60细胞和K562细胞后,应用CCK-8检测共刺激分子表达提高后HL-60细胞和K562细胞对健康人单核细胞的增殖作用。结果:TSA上调HL-60细胞表达CD86,也可上调急性髓系白血病患者单核细胞表达CD86,但TSA不能上调K562细胞表达CD86,TSA诱导HL-60细胞和K562细胞后,提高表达CD86的HL-60细胞对健康人单核细胞有增殖作用,而K562细胞无此作用。结论:TSA诱导HL-60细胞和急性髓系白血病患者单核细胞表达共刺激分子CD86,促进健康人单核细胞的增殖作用。     

TPA诱导K562细胞分化过程中线粒体铁蛋白表达情况研究

为了研究K562白血病细胞在十四烷酰佛波醇-乙酯（TPA）诱导分化过程中线粒体铁蛋白（MtF）、运铁蛋白受体Ⅰ（TfR1）和铁蛋白（Fn）mRNA表达水平的变化情况,并探讨MtF在白血病细胞增殖和细胞铁代谢方面的作用,采用TPA（终浓度16nmol/L）诱导K562白血病细胞向单核细胞定向分化,并于诱导分化后第1、3和5天收集细胞,用瑞氏染色法观察各时点细胞形态,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD64的表达水平,使用半定量RT-PCR方法检测各时点细胞MtF、TfR1和Fn mRNA表达水平,管家基因β-actin用作对照。结果表明,TPA（16nmol/L）可诱导K562细胞向单核细胞分化,细胞呈现单核细胞典型的形态学特征,在诱导培养第5天诱导分化率可达95%,细胞表面CD64表达水平显著增加。诱导分化前K562细胞具有一定水平MtF表达,但随着TPA诱导细胞分化的增强,MtF和TfR1 mRNA表达水平进行性下调,诱导分化第5天的表达水平分别为诱导分化前的50.3%和68.2%,而Fn mRNA表达水平则逐渐上调,诱导分化第5天表达水平为诱导分化前的1.97倍。结论：TPA诱导K562细胞向单核细胞分化过程中MtF和TfR1 mRNA表达下调,而Fn mRNA表达上调;这种协调变化有助于降低细胞通过TfR1介导的铁摄取,从而抑制或影响细胞增殖能力。     

shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化

目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA（shRNA）真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1（NCF1）、血清黏蛋白1（ORM1）以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、低氧诱导因子1α（HIF1α）mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制（P〈0.05）;K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高（P〈0.05）;CD11b表达升高（P〈0.01）;ERK1/2磷酸化水平升高（P〈0.05）,而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。     

人免疫球蛋白受体FcγRIIa的基因克隆及在K562细胞的表达

目的将外源人免疫球蛋白IgGFc段Ⅱ型受体CD32a分子表达于K562细胞表面,为构建人工抗原递呈细胞提供重要前提。方法自U937细胞RT-PCR得到CD32a的cDNA基因,与T载体连接后亚克隆入表达载体pcDNA3.1(+)。经测序后利用脂质体介导的转染将CD32a分子表达在K562细胞的表面。结果构建的T载体测序后,Genebank比对证实为CD32a的cDNA分子,免疫荧光和流式细胞仪结果均说明CD32a分子在K562细胞得到表达(96.9%)。结论获得的人工构建的表达人免疫球蛋白IgGFc受体的K562细胞,完成人工抗原递呈细胞制备的首要步骤。     

人类ERMAP-siRNA对Ara-C诱导K562细胞向红细胞系分化过程的影响

为探讨人类ERMAP基因在红细胞分化发育过程中的作用,本研究设计ERMAP—dsDNA,制备ERMAP—shRNA表达质粒,并建立稳定表达ERMAP—shRNA的K562细胞系（即ERMAP—shRNA／K562细胞系）,观察Ara-C诱导ERMAP—shRNA／K562细胞向红细胞系分化过程中,细胞形态、联苯胺染色细胞阳性率和细胞表面标记等的变化,同时以FQ—PCR检测K562细胞人类ERMAP基因表达量的变化。结果发现：经Ara-C诱导72小时,ERMAP—shRNA／K562细胞与对照组比较,体积较大,胞浆量较少,着色大部分呈深蓝色或蓝紫色,部分细胞仍可见1—2个核仁;联苯胺染色阳性率由1．17％增加至2．04％（P〈0．05）,但仍低于Ara—C诱导K562组（P〈0．05）;CD36^-／CD235a^＋细胞比例从8．83％增至11．28％,CD36^＋／CD235a^＋细胞比例从1．23％增至2．64％,CD36^＋／CD235a^-细胞比例从0．59％增至1．47％,均明显低于Ara—C诱导K562细胞组;与此同时,ERMAP—shRNA／K562细胞ERMAP基因的表达量从诱导前的2．52×10^-3缓慢增加至诱导72小时后的4．53×10^-3,明显低于K562细胞组。结论：ER—MAP—shRNA可抑制Ara—C诱导K562细胞向红系分化的过程,这进一步提示人类ERMAP基因与红细胞分化发育过程有关。     

K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀瘤活性

目的 探讨经K562细胞-树突细胞(DC)融合瘤苗刺激的脐血源性细胞因子诱导的杀伤(CIK)/自然杀伤(NK)细胞在荷瘤NOD/SCID小鼠体内的杀伤效能及其安全性.方法 通过不同细胞因子的组合分别诱导脐血单个核细胞(MNC)成为DC和CIK/NK细胞,通过聚乙二醇(PEG)将灭活K562细胞与DC融合形成K562-DC融合瘤苗.以10:1比例在CIK/NK细胞培养体系中加入K562-DC融合瘤苗,制备K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞.小鼠均经尾静脉接种K562细胞1×106诱导荷瘤鼠;于接种肿瘤细胞后24 h按不同分组分别经尾静脉输注K562-DC融合瘤苗刺激的CIK/NK细胞1×107、CIK/NK细胞1×107,同时设相应的非荷瘤鼠对照.比较各组小鼠的生存率、存活时间;用流式细胞术检测小鼠外周血、肝、肺组织中人CD13+细胞和外周血人CD56+细胞.结果 在接种1×106K562细胞后未经处理的小鼠39 d内全部死亡,8只鼠中肉眼可见瘤块的小鼠5只,其中位于肝脏的4只、脾脏的1只.接种K562细胞后接受K562-DC瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的8只小鼠第65天时死亡1只,抗瘤有效率为87.5%;接受CIK/NK细胞治疗小鼠死亡2只,时间分别为接种K562细胞后第56天及第62天,抗瘤有效率为75.0%,均未发现肉眼可见瘤块.该两组小鼠存活时间分别为(69.4±1.8)d、(67.2±5.3)d,两组间差异无统计学意义(P＞0.05),均高于未予治疗的荷瘤对照组[(30.4±4.6)d](P＜0.01),荷瘤后接受K562-DC瘤苗刺激的和未经瘤苗刺激的CIK/NK细胞治疗的两组其余小鼠存活均超过70 d.经CIK/NK细胞治疗的两组存活小鼠外周血,肝、肺组织中人CD13+细胞率差异无统计学意义,均显著低于荷瘤未治疗组(P＜0.01),而治疗的两组存活小鼠外周血人CD56+细胞率与输注不同CIK/NK细胞的非荷瘤对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 经过灭活肿瘤细胞预孵育的脐血源性CIK/NK细胞接种在动物体内具有抗瘤活性,无致瘤性.     

hermap基因对红细胞分化发育过程中信号转导通路p-STAT5等激酶的影响

目的 研究人类红细胞膜相关蛋白基因(hermap基因)对红细胞分化发育过程中信号转导通路关键激酶的影响,进一步揭示hermap基因对红细胞分化发育的作用.方法 分别建立稳定表达hermap 和 hermap-siRNA的K562细胞株,上调及下调K562细胞的hermap基因水平,并以阿糖胞苷(Ara-C)诱导K562细胞向红细胞分化发育,光学显微镜下观察诱导分化不同时间的细胞形态、联苯胺染色阳性细胞;FQ-PCR检测γ(Aγ、Gγ)珠蛋白基因和hermap基因表达量;流式细胞术(FCM)检测红细胞表面抗原CD36和CD235a,以及红细胞信号转导通路中关键激酶p-STATS、p-Akt、P-MAPK和p-c-JUN.结果 上调hermap表达后,随着培养时间延长,K562细胞体积、核质比例均逐渐减小,胞质由深蓝色逐渐转变为蓝紫色或浅红色,核染色质逐渐浓集、皱缩;联苯胺染色阳性细胞数(经Ara-C诱导24、48、72和96 h阳性细胞率分别为5.04%、20.42%、31.34%、48.88%,CD36+和CD235a+细胞数、γ(Aγ、Gγ)珠蛋白基因、hermap基因以及P-STAT5的表达量均逐渐增加;在培养的0、24、48、72、96 h,P-STAT5阳性细胞百分率分别为0.46%、4.54%、20.01%、23.65%、33.08%,与hermap基因表达量呈正相关(P<0.05).结论 hermap通过启动JAK/STAT5等一系列细胞转导信号,促进Ara-C诱导K562细胞向红细胞分化发育.

Abstract：

Objective To study the effects of hermap gene on kinases in erythroid signal transduction pathway and investigate the mechanism of hermap on erythroid differentiation. Methods The K562 cells expressing hermap and hermap-siRNA respectively were established for up- and down-regulating the expression of hermap gene. These K562 cells were then induced by Ara-C to erythroid differentiation and analyzed at 0, 24, 48 , 72 and 96 h, respectively, for cell morphology and biphenylamine staining positive cells, determination of CD235a, CD36, kinases p-STAT5, p-Akt, p-MAPK and p-c-JUN by FCM; and quantification of hermap gene and γ( Aγ,Gγ)globin gene by FQ-PCR. Results With up-regulating hermap gene and inducing by Ara-C, K562 cells were changing to low ratio of nucleus to cytoplasm, cytoplasm colour from basophilic to pinkish or amethyst tinge, increase of number of biphenylamine positive cells and expression of CD235a, CD36, γ( Aγ,Gγ)globin gene, hermap gene and p-STAT5 from 0 to 96 h. At 0, 24, 48, 72 and 96 h of culture, the positive rates of p-STAT5 cells were detected of 0. 46% , 4. 54% , 20. 01% , 23. 65% and 33.08% , respectively. This results demonstrated that there was a positive correlation between expression of p-STAT5 and hermap gene expression (P < 0.05). Conclusion hermap gene can stimulate erythroid differentiation of Ara-C induced K562 cells mainly through JAK/STAT5 signal transduction pathway.     

MicroRNA-193b对K562细胞C-KIT蛋白表达及生物学行为的影响

本研究探讨microRNA-193b（miR-193b）对K562白血病细胞系C-KIT蛋白表达及生物学行为的影响。采用HiPerFect转染试剂介导FAM荧光标记的miR-193b mimic或阴性对照分别转染过表达C-KIT的K562细胞系,采用流式细胞术检测FAM阳性细胞百分比以监测转染效率,采用Western blot检测C-KIT和磷酸化C-KIT蛋白表达水平,采用CCK-8试剂检测细胞生长曲线,采用AnnexinⅤ染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,采用流式细胞仪检测粒系分化标志CD11b和CD15阳性细胞百分比。结果显示,miR-193b或阴性对照转染的K562细胞中,FAM阳性细胞可达80%左右;与对照组相比,过表达miR-193b可明显抑制K562细胞中C-KIT、磷酸化C-KIT蛋白表达水平,同时,K562细胞的增殖受到抑制,凋亡细胞、CD11b阳性细胞、CD15阳性细胞的百分比均有增加。结论：miR-193b可抑制K562细胞C-KIT表达,并抑制细胞增殖;该增殖抑制作用可能与miR-193b诱导的细胞凋亡、分化有关,本研究为进一步分析miR-193b在白血病发生中的作用提供了实验依据。     

shRNA干扰IER3IP1基因表达对K562细胞增殖和红系分化的影响

目的 探讨靶向干扰IER3IP1基因对K562细胞增殖和红系分化的影响.方法 针对IER3IP1基因设计并构建小发夹状(shRNA)真核表达载体,转染K562细胞后用RT-PCR方法鉴定沉默效果.采用MTT实验、联苯胺染色、光镜和电镜观察、流式细胞术以及RT-PCR,观察抑制IER3IP1基因表达后对K562细胞的影响;采用0.2μmoL/L伊屿替尼诱导K562细胞2 d,观察诱导分化过程中IER3IP1基因表达变化情况.抑制IER3IP1基因表达后对红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ-globin以及细胞表面GPA蛋白表达的影响.结果 成功构建针对IER3IP1基因的shRNA真核表达载体,转染至K562细胞中,该基因mRNA表达水平明显降低,抑制率达76%(P<0.01).与对照组细胞相比,K562-shRNA-IER3IP1组bcr-abl mRNA表达升高(P<0.05);MTT检测结果显示细胞增殖能力增强(P<0.01);流式细胞术检测结果显示S期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少(P<0.05);电镜可见细胞常染色质增加、异染色质减少,内质网部分扩张,囊泡样结构滞留.0.2μmol/L伊马替尼作用48 h后,K562-shRNA-IER3IP1组联苯胺染色阳性率由作用前的(44.7±2.5)%降低至(22.7±1.5)%(P<0.01),且红系分化相关基因Gfi-1B、GPA和γ-globin的mRNA表达水平明显降低,细胞表面GPA蛋白表达水平降低.同时伊马替尼作用过程中IER3IP1基因在作用3 h时表达明显升高,6 h时降低,12～48 h表达水平基本不变.结论 干扰IER3IP1基因表达后,K562细胞增殖加快,红系分化过程受阻,提示该基因可能在K562细胞增殖和向红系分化过程中发挥作用.     

Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导K562细胞凋亡中的作用机制研究

本研究旨在探讨二烯丙基二硫化合物(diallyl disulfide,DADS)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及Fas/FasL信号转导通路在DADS诱导白血病K562细胞凋亡作用中机制。以K562细胞为研究外培养的细胞分为空白组(2组)及药物处理组(4组),共6小组。空白组包括细胞对照组及溶媒对照组,药物处理组加入不同浓度DADS,DADS终浓度为10、20、40、80mg/L。取对数生长期细胞进行实验。采用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度、不同时间DADS对K562细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测Fas、FasLmRNA表达变化。结果表明,DADS在浓度为10、20、40mg/L时,K562细胞以凋亡效应为主。K562细胞出现细胞核缩小,染色质凝集、核膜破裂等凋亡特征;同一时间组(作用细胞24小时),DADS浓度从10mg/L增至40mg/L,K562细胞的凋亡率由(2.10±0.25)%增至(37.94±0.87)%;同一浓度组(40mg/L),DADS作用时间从24小时增至72小时,K562细胞的凋亡率由(37.94±0.87)%增至(47.02±0.66)%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增高(p<0.01),呈现K562细胞的凋亡效用与药物浓度、时间明显依赖关系;作用48小时后,FasmRNA表达水平较对照组上调;FasLmRNA较对照组下调,差异具有统计学意义(p<0.05)。当DADS浓度为80mg/L时,K562细胞以坏死效应为主。结论 :DADS能够诱导K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,下调FasL,激活Fas/FasL死亡受体通路有关。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对HL-60细胞和K562细胞的抗肿瘤作用

为了观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸（VPA）、曲古抑菌素（TSA）对K562细胞和HL-60细胞的抗肿瘤作用以及它们同全反式维甲酸（ATRA）之间的协同效应,采用绘制细胞生长曲线,计算半数抑制浓度（IC50）以及集落抑制试验等方法观察VPA,TSA以及全反式维甲酸（ATRA）在不同浓度或不同组合条件下对HL-60细胞和K562细胞的增殖抑制作用.采用细胞化学染色、分化抗原检测、细胞周期测定、联合NBT与MTT还原试验计算A（NBT）/A（MTT）值等方法分析细胞的分化或凋亡特点.结果显示,在体外培养体系中,VPA对HL-60细胞的IC50值低于对K562细胞的IC50值.ATRA能明显增强VPA、TSA对HL-60细胞以及VPA对K562细胞集落形成的抑制.HL-60经VPA处理后出现粒系表型,NBT还原率增加,CD11b表达增强,而K562细胞未显示分化迹象.结论：VPA和TSA抑制HL-60细胞增殖,VPA诱导HL-60细胞向粒系分化,这些作用均能被ATRA增强;VPA和TSA对K562细胞增殖抑制作用较弱,不能诱导K562细胞分化.     

诱骗RNA靶向阻断RNA结合蛋白E2诱导K562细胞向粒系分化

目的 应用诱骗RNA(decoy RNA)靶向阻断RNA结合蛋白E2(hnRNP E2)调节CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)基因异常翻译的作用,诱导白血病细胞株K562细胞向粒系分化,并初步探讨其分子机制.方法 将已构建的hnRNP E2 decoy RNA表达质粒经阳离子脂质体的介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达细胞株,用RT-PCR和Western blot方法检测该细胞株C/EBPα和粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)的表达,通过瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态,免疫细胞化学法分析细胞粒系分化抗原CD13、CD15的表达.结果 筛选到稳定表达细胞株pG细胞,与未转染的K562细胞相比,其C/EBPα mRNA水平无改变,但相对分子质量42×103的C/EBPα蛋白(42kD-C/EBPα)水平升高了(49.7±5.5)%(P＜0.05);G-CSFR mRNA水平升高了(42.1±3.6)%(P＜0.05),其蛋白水半也.升高了(37.4±6.2)%(P＜0.05);细胞形态学方面观察到pG细胞出现中、晚幼粒细胞甚至成熟粒细胞的特征,且免疫细胞化学法检测显示粒系分化抗原CD13、CD15表达增高[阳性细胞百分比分别为(18.7±2.5)%和(15.2±2.6)%].结论 hnRNP E2 decoy RNA能够诱导K562细胞向粒系分化,G-CSF对其分化过程有促进作用,其作用机制可能与decoy RNA靶向阻断hnRNP E2,调节C/EBPαmRNA翻译,恢复42kD-C/EBPα表达,上调42kD-C/EBPα下游分化基因G-CSFR的表达有关.     

Wnt3a促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化

背景:Wnt信号通路是细胞增殖分化的关键调控环节,但与骨髓间充质干细胞神经分化的联系并不十分明确.目的:寻找促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的Wnt信号分子.方法:首先体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞并传代,行形态学观察,并以流式细胞学方法检测细胞表型CD44,CD9,CD34和CD45.采用碱性成纤维细胞生长因子分别联合Wnt3a或Wnt5a的方案诱导分化,应用免疫组化和反转录-聚合酶链反应方法比较Wnt3a和Wnt5a对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响.结果与结论:骨髓间充质干细胞为长梭形,CD9,CD44高表达,CD34,CD45低表达.Wnt3a诱导组的巢蛋白和神经元特异烯醇化酶呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白无明显表达,诱导后细胞的活力良好.Wnt5a诱导组巢蛋白呈弱阳性表达,而神经元特异烯醇化酶及胶质纤维酸性蛋白阴性.反转录-聚合酶链反应结果显示,Wnt3a诱导组巢蛋白在诱导前后均有表达,神经元特异烯醇化酶在诱导后5 d可见明显的扩增条带,10 d后更加明显.胶质纤维酸性蛋白在诱导10 d后出现较弱的扩增条带.Wnt5a组、对照组骨髓间充质干细胞在诱导后10 d巢蛋白有微弱表达,神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白几乎无表达.提示Wnt3a分子能够促进体外培养的骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化.     

苦参碱处理的K562细胞中IER3IP1基因表达及其对细胞增殖的影响

目的 研究苦参碱诱导K562细胞分化过程中IER3IP1基因的表达，以明确IER3IP1基因表达与苦参碱作用的量效及时效关系，并初步探讨该基因在K562细胞中的功能。方法 锥虫蓝染色分析苦参碱对K562细胞的生长抑制作用；用RT—PCR半定量方法观察K562细胞在不同时间、不同剂量苦参碱作用下IER3IP1基因的表达情况；对IER3IP1基因重组质粒转染的K562细胞（K562／eYFP—IER3IP1）作细胞形态学及细胞增殖变化的观察，同时进行细胞周期检测以及超微结构观察。结果 苦参碱对K562细胞有增殖抑制作用，在苦参碱作用3h后IER3IP1基因表达可升高3—4倍，并呈剂量依赖性，其后6～48h表达下降，低于非苦参碱处理组。K562／eYFP—IER3IP1细胞的增殖速度显著减缓，G0／G1期细胞数升高（P〈0．05）；且苦参碱作用24h后在光镜和电镜下均可见红系分化细胞增多。结论 苦参碱抑制K562细胞生长，同时使IER3IP1基因表达以剂量依赖的方式瞬时升高，转染了IER3IP1基因的K562细胞对苦参碱敏感性增高，提示该基因可能参与了苦参碱作用于K562细胞的早期反应，并在后续的红系分化中发挥作用。