毛细管电泳-激光诱导荧光检测装置的研制及应用

目的　自行组建高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置。方法　以波长 5 4 3.5 nm He- Ne激光为激发光源 ,滤色片 -单色仪分光 ,光电倍增管检测 ,用计算机采集和处理电泳图谱。结果　优化了毛细管电泳 -激光诱导荧光检测装置的设计和分析参数 ,用该装置获得了高信噪比毛细管电泳谱。对罗丹明类荧光试剂 (Sulforhdam ineB)溶液的检出限为 10 - 9m ol/ L,线性范围为 1× 10 - 6～ 1× 10 - 9mol/ L。采用该装置检测了分枝杆菌 DNA的 PCR扩增产物、酶切产物以及人血清白蛋白。结论　所组建的高效毛细管电泳 -激光诱导荧光分析装置结构合理 ,灵敏度高 ,成本低、光路校准方便 ,分离效能明显高于常规琼脂糖电泳 ,能作为研究生物样品中 DNA片段和蛋白质含量的有效检测手段。     

微流控芯片电泳免疫法检测β_2微球蛋白

目的:建立一种基于微流控芯片电泳技术的快速微量蛋白检测方法。方法:用过量FITC-β2-MG抗体,与分析体系中β2-MG发生非竞争性免疫反应,FITC-β2-MG抗体和免疫反应形成的荧光免疫复合物通过微流控芯片电泳实现分离,激光诱导荧光检测荧光信号。结果:分别考察了电泳缓冲体系、pH值等对芯片电泳行为的影响,结果表明pH8.33、45mmol/LTBE缓冲液分离效果较好,在此基础上实现了β2-MG标准品的分析,建立了微流控芯片电泳免疫分析方法。结论:微流控芯片电泳免疫分析方法可在2min内完成一次样品的电泳分析,且试剂和样品消耗少,灵敏度高,改善了常规免疫分析的不足,显示出较好的应用前景。     

双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分

目的　建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法　针对转基因大豆基因组中被导入的 35 S启动子、NOS终止子和 CP4 - EPSPS抗草甘膦基因等外源基因 ,自行设计了两对引物 ,采用双重 PCR同时扩增上述基因 ,用 8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质 ,在 5 0 cm× 10 0μm i.d.涂壁毛细管中 ,于 - 10 k V电压下用激光诱导荧光 -毛细管电泳检测转基因大豆的 PCR扩增产物。结果　在优化的 PCR反应和毛细管电泳条件下 ,本法可以同时检测出转基因大豆样品中三种外源基因 ,双重 PCR扩增产物经测序证实与原基因序列完全一致 ,表明本研究设计的引物合理 ,扩增结果可靠。毛细管电泳进样量仅需 5 nl,分析时间为 2 4 min,迁移时间的相对标准偏差≤ 3.2 %。结论　本方法较常规琼脂糖凝胶电泳特异性高 ,分析时间短 ,重现性好 ,检测灵敏 ,适合于大豆中转基因成分的快速检测     

芯片毛细管电泳法测定盐酸阿霉素注射剂中盐酸阿霉素含量

目的 建立用微流控芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测盐酸阿霉素注射剂中盐酸阿霉素含量的方法.方法 以荧光素钠为内标物,20 mmol/L的Na2B4O7 -NaOH缓冲溶液(pH 10.0)作为电泳缓冲液,采用夹流进样和分离方式,进样电压500 v,分离电压1800 V.结果1.5 min内即可完成进样和分离,盐酸阿霉...     

毛细管电泳法检测肝细胞癌微卫星基因表型的影响因素

目的：分析影响肝细胞癌微卫星—自动毛细管电泳检测结果的技术因素。方法：应用MegaBACE500毛细管电泳测序仪对一组高度多态性微卫星PCR扩增产物进行电泳，应用Genetic Profiler软件进行基因表型分型，比较PCR扩增产物在不同处理条件下对基因分型的影响。结果：PCR反应体系残留混合物(dNTP、引物和盐离子的浓度等)对基因分型的结果有明显的影响，当PCR体系中益离子和DNA的浓度比＞10000：1时可使等位基因片段分析系统评分出现偏差而导致结论错误，基因组DNA—PCR样品浓度在50ng/μl时较为合适。结论：毛细管电泳测序体系中PCR反应体系残留混合物的浓度是影响基因分型结果的一个重要因素。     

毛细管电泳-激光诱导荧光检测大鼠脑组织多巴胺含量

目的: 采用毛细管电泳-激光诱导荧光法建立检测大鼠脑组织多巴胺含量的方法。方法: 低温匀浆大鼠脑组织离心后,取上清用pH11.010mmol/L硼砂缓冲液,在室温下衍生反应10h连接上FITC荧光基团;毛细管电泳分离条件为pH10.3100mmol/L硼酸-Tris缓冲液。结果: 在选定的实验条件下,方法检测限(S/N=3)达2.1nmol/L水平,批内相对标准差(RSD)为3.4%,回收率达96.05%,在10-8~10-10mol/L范围内呈良好线性关系。结论: 应用毛细管电泳-激光诱导荧光法可检测鼠脑组织多巴胺含量。     

PCR结合斑点杂交诊断肺结核

[[摘要] 目的 评价PCR结合斑点杂交诊断肺结核的临床应用价值。方法 应用PCR方法扩增呼吸道标本中结核分枝杆菌IS6110内的一段长度为188bpDNA片段,分别用地高辛随机引物标记DNA探针斑点杂交（PCR-斑点杂交）和琼脂糖凝胶电泳（PCR-电泳）检测扩增的PCR产物,通过比较,明确PCR-斑点杂交诊断肺结核是否优于PCR-电泳。肺结核的诊断以呼吸道标本结核分枝杆菌培养阳性作为诊断金标准。结果 PCR-斑点杂交方法检测临床可疑肺结核患者298例呼吸道标本（痰液246例,诱导痰52例）结果显示其诊断肺结核总的灵敏度90.6%,特异度93.8%, 而PCR-电泳方法总的灵敏度84.0%,特异度94.3%,经McNemar 检验,P〈0.05。结论 PCR结合斑点杂交能快速、敏感诊断肺结核,有助于临床及时治疗。 [关键词] 结核分枝杆菌; 肺结核; PCR 斑点杂交; 分子生物学诊断; DNA探针     

PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因:溺死诊断方法

目的 建立嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因PCR毛细管电泳检测方法,探讨它们在淡水溺死诊断中的应用价值.方法 提取人、18种浮游生物(白色念珠菌、嗜水气单胞菌及16种藻类),以及经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的30例尸体(其中生前淡水溺死28例,陆地自然死亡2例)的组织样本的DNA(肺、肝、肾各1份例),分别使用引物AH(gyrB基因)及引物Ah(16SrRNA基因)进行扩增,扩增产物用毛细管电泳法检测.结果 人、白色念珠菌、16种藻类DNA扩增后毛细管电泳检测结果均为阴性,而嗜水气单胞菌结果均为阳性,其产物大小分别为195 bp,350bp.分别利用引物AH和Ah对28例淡水溺死尸体样本肺、肝、肾进行PCR毛细管法进行检测,嗜水气单胞菌的检出率:AH分别为96.4％,71.4％,60.7％;Ah分别为75.0％,42.9％,32.1％,计算得到溺死者的体循环脏器中嗜水气单胞菌检验的总阳性率分别为82.1％,53.6％,2例陆地自然死亡案件尸体样本检测结果均为阴性.两对引物AH与Ah对嗜水气单胞菌检出率有显著性差异(P＜0.05).结论 PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB基因用于诊断淡水溺死灵敏度较高,可作为诊断的辅助性方法;联用16SrRNA基因可提高该菌的检出率,增强MD-VF-Auto SEM法诊断淡水溺死的证据力.     

荧光染料SYBR GreenⅠ及EB在定量PCR中敏感性比较

目的比较荧光染料SYBR Green I及EB在定量PCR诊断中检测DNA的敏感性.方法分别用琼脂糖凝胶电泳SYBR Green I染色及EB染色,检测26例21-三体综合征患者及20例正常人DNA PCR扩增产物,并进行光密度分析比较.结果SYBR Green I染色于24个循环PCR产物带型清楚,可准确定量检测;EB染色则在28个循环才能进行定量分析.结论荧光染料SYBR Green I染色较EB染色测量DNA敏感、快捷,在定量PCR技术中值得推广应用.     

毛细管电泳—安培检测联用在无机和有机小离子分析中的应用

毛细管电泳已经成一种广泛应用的分析技术.安培检测由于具有很多特有的优势如:快速,高灵敏度和检测器装置成本低常与毛细管电泳联用.用毛细管电泳分析无机和有机小离子是一个重要的研究领域,本篇文章主要介绍近年来应用毛细管电泳-安培检测技术分析无机和有机小离子的研究进展.     

毛细管电泳-激光诱导荧光用于中药制剂中氨基酸成分的分析

目的:探讨毛细管电泳-激光诱导荧光在对中药制剂中的氨基酸成分进行分析过程中的实际效果。方法:收集经异硫氰酸荧光素衍生出的5种氨基酸试剂,分为观察组和对照组,每组检测需要进行50次。对照组使用常规的柱前衍生紫外检测的方法进行检测,观察组使用毛细管电泳-激光诱导荧光检测的检测方法进行检测,在检测完成后比较两种检测方法的分离效果以及分离时间。结果:两组检测方法均能够对于中药制剂中的氨基酸成分进行相应的检测以及分析,但观察组检测方式在检测时间以及分离效果方面均明显优于对照组的检测方式,差异有统计学意义(P0.05)。结论:在中药制剂中的氨基酸成分进行检测的过程中,通过使用毛细管电泳-激光诱导荧光的检测方式能够显著提升检测效果并减少检测时间。     

中药提取物对Hela细胞凋亡的毛细管电泳检测

目的：建立一种新型的细胞凋亡检测方法。方法：考察了毛细管电泳检测细胞凋亡的可行性，并与凝胶电泳法进行了对比，同时优化了毛细管电泳检测环磷酰胺、苦参碱和槐定碱致Hela细胞凋亡的条件。结论：毛细管电泳检测细胞凋亡方法操作简便，特别是具有细胞凋亡的动力学监测和定量检测的功能。     

毛细管电泳技术在核酸分析中的应用

毛细管电泳技术以其高效、快速、所需样品少等特点而广泛应用于核酸的分析。本文综述了近5年来毛细管电泳技术在核酸定性、定量和筛选研究中的应用,包括反义寡核苷酸的分析,适配体的筛选,基因突变的分析,此外对微芯片毛细管电泳技术及其在核酸分析研究中的应用进行了介绍,并对其前景进行了展望。     

毛细管电泳法测定玉米赤霉烯酮及其代谢物

目的 建立粮食样品中玉米赤霉烯酮及其代谢物的毛细管电泳测定方法。方法 样品经液－液超声波提取，C18小柱净化后，胶束电动毛细管电泳（MEKC）测定。结果 玉米赤霉烯酮（Zeralenone,ZON),α-Zearalenon (α-ZOL)，β-Zearalenol(β-ZOL），黄曲霉B1（Aflatoxin B1,FT B1)，赭曲霉A（Ochratoxin A,Och A)的检出限分别为：0.0084,0.081,0.14,0.0016,0.031μml。样品加标回收率77．9％－103．1％，相对标准偏差0．63％－1．98％。结论 该法灵敏，准确，可用于粮食样品中玉米赤霉烯酮等真菌毒素的测定。     

高效毛细管电泳法测定注射用维库溴铵的含量

本文考察了不同实验条件下维库溴铵的毛细管电泳行为。用50mmol／L硼砂溶液（pH9．2）为缓冲液，以盐酸伪麻黄碱为内标于205nm波长处测定注射用维库溴铵的含量，在0．5～3mg／ml浓度范围内呈良好线性，回收率为99．10％，RSD为1．5％（n＝5）。     

毛细管电泳法检测左旋普拉克索中右旋普拉克索杂质的研究

目的:建立毛细管电泳法,对左旋普拉克索中右旋普拉克索进行杂质检查。方法:分别以β-环糊精(β-CD)、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、硫酸酯-β-环糊精(SBE-β-CD)和二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)为手性选择剂,考察手性选择剂的浓度、pH、柱长和柱内径对分离选择性的影响,采用未涂渍熔融石英毛细管47 cm ×50 μm(有效长度40 cm),背景电解质溶液:40 mmol/L柠檬酸三钠缓冲液,含有0.5% SBE-β-CD,用磷酸调节pH值到4.0,柱温:30℃,检测波长254 nm,电压16 kV。 结果:2种旋光异构体的分离度良好(Rs>2.5),样品中右旋普拉克索的含量均小于0.5%。结论:所建立的方法简单可靠、专属性强,可以作为常规的杂质检查手段。     

丙烯酰胺改性毛细管柱性能考察及应用研究

使用丙烯酰胺改性毛细管柱，生物大分子样品柱效达１２５０００／ｍ，小分子样品柱效达１７００００／ｍ。峰形，选择性均较未改性柱有较大改善；连续５次操作迁移时间的相对标准偏差＜２％。在ｐＨ＜７下进样２８２次，性能未见明显降低。该改性柱可以用于拆分手性样品，并能对较复杂样品，如银环蛇毒素样品及中药提取液进行定性分析。     

高分子材料在无胶筛分毛细管电泳中的应用

毛细管电泳在对核酸、多肽、蛋白质等生物大分子的分离分析上极具优越性,其中无胶筛分毛细管电泳应用尤为广泛。本文综述了近年来国内有关无胶筛分毛细管电泳中高分子材料的运用和进展。     

毛细管电泳法分析血清中华法林对映体的浓度

建立了血中华法林对映体的毛细管电泳分析方法。电泳缓冲液由１４０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液和７ｍｍｏｌ／Ｌ的甲基β－环糊精组成（ｐＨ７．９）。工作电压１３ｋＶ，检测波长２１０ｎｍ。两种对映体Ｓ（－）－华法林及Ｒ（＋）－华法林达到基线分离，在０～５μｇ／ｍｌ范围内呈线性。血中华法林对映体最低检测浓度均为０．０２μｇ／ｍｌ，精密度及回收率均较好。