适配体靶向肿瘤的纳米递送系统的研究进展

核酸适配体是一类能特异性地靶向特定抗原的单链寡聚核苷酸。较之常用的抗体等靶头向性配体,适配体体积相对较小、免疫原性较低且易于体外筛选。目前,以适配体靶向肿瘤的纳米递送系统通常有3类：第1类将适配体修饰于脂质体、纳米粒、胶束等纳米载体上,形成适配体靶向的纳米载体;第2类直接将适配体与药物/荧光物质相连,形成适配体-药物/荧光物质共轭物;第3类将适配体自身作为药物的靶向载体。本文就近期以适配体靶向肿瘤的纳米递送系统的研究进展进行概述。     

一种核酸适配体高敏检测方法的建立及应用评价

本文建立一种基于免疫印迹的核酸适配体高敏定量分析的检测方法,并探讨其在适配体药物靶向性研究中的应用价值。首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸适配体的分离,然后利用电转的方法将凝胶上的核酸适配体转移至PVDF膜上,先后孵育Rabbit Anti-Biotin和HRP-Streptavidin抗体,最后利用化学发光仪进行成像。结果显示核酸适配体可以通过该方法进行定量检测分析,且该方法检测灵敏度高,能够识别荧光染料法检测不到的浓度范围。此外,该方法只识别被生物素修饰的核酸适配体,特异性强。结果提示,核酸免疫印记法可以作为核酸适配体药物靶向性研究的一个定量检测手段。     

白血病细胞表面分子抗原的靶向治疗

靶向药物治疗是当今肿瘤治疗的一次革命。造血细胞癌变后其细胞表面表达特征性抗原分子,依此作为“靶点”,应用特异性单克隆抗体(单抗)与其结合,通过抗体介导的细胞毒作用(ADCC)或补体介导的细胞毒作用(CDC)及诱导细胞调亡的机制杀灭肿瘤细胞,产生“生物导弹”样效应。近年来,抗CD20单抗(美罗华、Zevalin)治疗B细胞非霍杰金淋巴瘤的成功经验引发了应用单抗治疗白血病的研究热潮。     

具有肿瘤靶向及穿膜效应的壳聚糖胶束的制备

在壳聚糖(CS)表面修饰疏水基团辛基形成辛基壳聚糖(OC),然后再修饰亲水基团聚乙二醇(PEG)、肿瘤靶向配体氨基葡萄糖(DG)和穿膜肽九聚精氨酸(9R),形成DG和9R共同修饰的、同时具有肿瘤靶向性及穿膜效应的壳聚糖纳米胶束(DG/9R-PEG-OC)。核磁共振光谱分析及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果证实了DG/9R-PEG-OC的成功制备;测得壳聚糖纳米胶束的粒径为151.8 nm左右、Zeta电位约为16.5 mV;透射电子显微镜照片显示该壳聚糖纳米胶束为均匀的球形结构;紫外分光光度法测定该载体的荧光素载药量约为28.2%,包封率约为75.0%,释药实验表明壳聚糖胶束具有良好的缓释作用;荧光显微镜观察显示,该DG/9R-PEG-OC胶束对肿瘤细胞尤其是葡萄糖受体高表达的肿瘤细胞HepG2具有较好的靶向性及细胞穿膜效应。故DG/9R-PEG-OC胶束可作为脂溶性抗肿瘤药物的载体用于肿瘤的靶向化学治疗。     

四碘甲腺乙酸对耐药性人胃癌细胞系体内和体外增殖的抑制作用

目的：研究四碘甲腺乙酸(Tetrac)对阿霉素(Dox)抵抗性人胃癌细胞系SGC-7901/R体内及体外扩增的抑制作用及作用机制。方法：体外实验分为SGC-7901与SGC-7901/R两组,分别与不同浓度的Tetrac和Dox共同培养4 d。MTT法检测其细胞活性,以不同药物浓度下的肿瘤细胞存活率来表示;Western blotting检测2组中相关耐药基因P-gp、SOD和GST的表达。分别将Dox、依拉泊苷(Etop)、顺铂(Cisp)3种药物单独或联合Tetrac作用于SGC-7901/R细胞系,用MTT法、衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-b-Gal）染色法与凋亡相关的烟酸已可碱（Hoechst）染色法检测肿瘤细胞活性、衰老及凋亡情况,检测结果以染色阳性细胞比例表示。体内实验中,腋部皮下注射SGC-7901/R细胞（10⁶ /100 μL）的裸鼠被分成4组（每组7只）：生理盐水对照组、Tetrac治疗组（30 mg/kg）、Dox治疗组（2 mg/kg）和Tetrac（30 mg/kg）+Dox（2 mg/kg）联合药物治疗组,检测各组小鼠肿瘤生长情况。结果：体外实验中,2组肿瘤细胞均随Tetrac浓度的升高而坏死明显加快,在100 mg/L时全部死亡;P-gp转运子仅在SGC-7901/R细胞中过表达;Dox、Etop、Cisp与 Tetrac联合用药时,SGC-7901/R细胞存活率较单独用药明显降低(P<0.001);Dox与Tetrac联合用药时,SGC-7901/R细胞衰老、死亡较单独用药明显增加(P<0.05)。体内实验中,Dox与Tetrac联合用药可以明显抑制肿瘤生长。结论：Tetrac可能通过降低药物转运子P-gp表达来促进SGC-7901/R细胞的衰老和凋亡,对于治疗Dox抵抗性肿瘤是一种有效的化疗药物。     

IL-13Rα2在肿瘤研究中的进展

近年来对肿瘤的治疗,越来越倾向于靶向治疗.所谓靶向治疗,即是在细胞分子水平上,针对已经明确的致癌位点(该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子,也可以是一个基因片段)来设计相应的治疗药物,药物进入体内会特异地选择致癌位点来结合发生作用,使肿瘤细胞特异性死亡,而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞,所以分子靶向治疗又被称为"生物导弹".靶向治疗能高效并且选择性地杀灭肿瘤细胞,并且对正常组织的损伤很小.经过多年研究证实白介素13受体(IL-13R)α2在肿瘤细胞中高表达而在正常细胞不表达或者低表达[1-5],所以近年来IL-13R在细胞毒素靶向治疗中常作为特殊的肿瘤细胞表面标记物.     

BCNU与5—FU合并应用对人食管癌细胞(ECa109株)体外培养的观察 (二)对球体的杀伤作用

人体实体瘤生长缓慢,表现为生长比(GF)低,含有大量Go期细胞,因而对化疗药物不敏感。此与实验动物移植性肿瘤或体外培养肿瘤细胞有明显差异。国外有人提出假设,认为先用周期非特异性药物杀灭大量Go期细胞以提高生长比,可以增强对周期特异性药物的敏感性,提高杀伤能力,但缺乏不同给药方案的对比研究。要确定最佳给药方案,必须按照不     

氨基葡萄糖修饰多柔比星靶向性研究

为了提高多柔比星（Dox)体内靶向性,降低毒副作用,将2-脱氧-氨基葡萄糖（AG）对多柔比星进行靶向配体修饰,形成一种全新抗肿瘤药物。对产物进行¹H NMR、MS表征,运用近红外成像技术对产物靶向性进行研究,并通过MTT法比较产物与多柔比星对MCF-7细胞和U87MG细胞的药效作用。研究表明,与多柔比星相比,修饰过的产物靶向性和药效作用都有很大提高,具有很好的应用前景。     

急性白血病DNA倍体、合成期细胞百分比及增殖指数的研究

目的观察急性白血病患者骨髓或外周血DNA倍体的变化规律。方法采用流式细胞仪和DNA检测试剂盒检测急性白血病患者DNA倍体、合成期细胞百分比(SPF)、增殖指数(PI)并与DNA倍体分析对照组进行比较。结果52例急性白血病(AL)中,28例为二倍体,22例为异倍体,2例为可疑异倍体,异倍体检出率为42.3%,22例异倍体(1例近二倍体,5例四倍体,4例多异倍体和12例非整倍体)中,8例为急性淋巴细胞白血病(ALL),11例为急性髓系白血病(AML),3例混合细胞性白血病。ALL与AML异倍体检出率分别为42.1%(8/19)和36.7%(11/30)。异倍体组与二倍体组及与对照组两两比较,P<0.05或<0.01,差异具有统计学意义。结论DNA倍体分析可为急性白血病的临床诊断提供客观的实验室依据。     

基于改善缺氧仿生纳米递送体系的构建及其体外评价

目的 制备pH敏感融合膜(MP)包覆的载多柔比星(Dox)的中空介孔二氧化锰(H-MnO2)纳米粒(MP@H-MnO2-Dox纳米粒),并在体外对其进行初步评价.方法 以固体实心二氧化硅为模板,用碱刻蚀的方法合成H-MnO2,制备载Dox的H-MnO2(H-MnO2-Dox),进行MP的包覆构建MP@H-MnO2-Dox纳米粒.对上述仿生纳米体系进行粒径、载药量、MP包覆载体比例的考察,用三(4,7-联苯-1,10-邻菲啰啉)二氯化钌(RDPP)探针进行产氧能力的评价,透析法考察药物体外释放,激光扫描共聚焦显微镜考察其胞内摄取分布情况.结果 成功制备了H-MnO2,其载药率和包封率分别为(79.0±8.7)％和(75.1±7.5)％,MP与H-MnO2质量比为1:1时能较好地包裹H-MnO2.MP@H-MnO2-Dox粒径为(178.0±9.5)nm,RDPP测定结果显示H-MnO2具有优越的产氧能力.体外药物释放结果显示,MP可以延缓Dox的释放,24 h时MP@H-MnO2-Dox(pH=6.5)的Dox累计释放量低于H-MnO2-Dox(pH=6.5)[(42.0±5.1)％vs(60.0±3.7)％].胞内摄取分布实验结果显示MP@H-MnO2-Dox纳米粒在pH=6.5条件下具有很强的细胞摄取能力.结论 成功构建了MP@H-MnO2-Dox纳米粒,该仿生纳米体系有望成为缓解缺氧并靶向乳腺癌的多功能药物递送载体.     

几种抗癌药对HL—60细胞在小鼠肾囊膜下生长的抑制作用

以纤维蛋白凝块为HL-60细胞支持物,将其接种于正常和免疫抑制小鼠肾囊膜下,观察其增殖特性和生长特点。结果HL-60细胞纤维蛋白凝块在免疫排斥反应出现前的正常小鼠肾囊膜下,体积增殖5倍左右;在免疫抑制小鼠肾囊膜下,增殖15倍左右。组织切片发现,在肾囊膜下生长6d细胞密度明显增加,生长细胞沿肾囊膜向四周侵润,肿瘤细胞切面面积明显扩大,且生长细胞仍保持HL-60细胞的形态特点。维甲酸(RA)、维胺酸(RⅡ)及三尖杉酯碱等药物可明显抑制HL-60细胞的生长。     

环孢霉素A抑制培养细胞的花生四烯酸代谢

以环孢霉素A预处理能抑制生物活性物质诱导的大鼠肝细胞和肾细胞的前列腺素合成,以及钙离子载体A_(23187)诱导的大鼠嗜碱细胞性白血病细胞和小鼠原始单核细胞性白血病细胞的前列腺素和白三烯合成。对于~3H-花生四烯酸标记的大鼠肝细胞,环孢霉素A可抑制12-0-十四脂酰佛波-13-乙酸(TPA)诱发的放射性物质的释放。提示环孢霉素A的抑制作用可能发生在花生四烯酸释放过程或之前。     

Rac1 regulates the release of Weibel-Palade Bodies in human aortic endothelial cells

Background The release of Weibel-Palade Bodies (WPB) is a form of endothelial cell activation. But the signal transduction pathway leading to WPB release is not yet defined. We hypothesized that small G-protein racl and reactive oxygen species (ROS) mediate the ligand induced release of WeibeI-Palade Bodies. Methods We tested this hypothesis by using wild-type and mutant adenoviral racl expression vectors, and by manipulating the production and destruction of superoxide and hydrogen peroxide in human aortic endothelial cells (HAEC). Results Thrombin (1.0 Unit, 30min) induced the increase of WPB release by 3. 7-fold in HAEC, and that H2O2 (0. 1mmol/L, 30 min) induced by 4. 5-fold. These results correlated with thrombin-stimulated activation of rac-GTP binding activity by 3. 5-fold, and increase of ROS production by 3. 4-fold. The dominant negative adenoviral rac-N17 gene transfer dramatically inhibited the release of WPB by 64.2% (control) and 77.3% (thrombin-stimulation), and decreased ROS production by 65.5% (control) and 83.6% (thrombin-stimulation) compared with non-infected cells, respectively. Anti-oxidants, catalase and N-acetyl-cysteine significantly decreased the release of WPB by 34% and 79% in control cells, and further decreased by 63.6% and 46.7% in rac-N17 transferred cells compared with non-infected cells. We also confirmed that racl was located upstream of ROS in the WPB release pathway. Conclusions Small G-protein racl medicates ligand-induced release of WeibeI-Palade Bodies in human aortic endothelial cells, and the signal pathway of WPB release is a racl-dependent ROS regulating mechanism.     

白血病K562/ADM细胞耐药性与白血病干细胞及耐药蛋白表达的关系

目的 观察白血病药物敏感和耐受细胞中白血病干细胞(ISC)、耐药蛋白表达和耐药性的关系.方法 以白血病多药耐药株K562/ADM细胞及其亲本K562细胞为模型,MTT比色法测定细胞的药物耐受性;流式细胞术检测细胞免疫标志、P-糖蛋白(P-gp)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达;甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖潜能.结果 K562/ADM细胞对阿霉素、柔红霉素和鬼臼乙叉苷高度耐受.K562/ADM细胞中CD34+、CD123+和CD34+CD38-细胞含量均显著高于K562细胞,LSC细胞相对含量是K562细胞的4.12倍;共表达P-gP和BCRP的K562/ADM细胞比K562细胞高11.25倍,其中CD34+ CD38- CD123+ BCRP+和CD34+ CD38- P-gp+ BCRP+细胞数量分别为K562细胞的3.66倍和11.37倍.K562/ADM细胞集落形成率是K562细胞的4.17倍,与LSC含量相当.结论 白血病K562/ADM耐药细胞中存在的高表达耐药蛋白的耐药性LSC是其多药物耐受性的根源.     

Clonal growth of human acute leukemia cells in serum-free methylcellulose medium

Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｌｅｕｋｅｍｉａｉｎｓｅｍｉｓｏｌｉｄｃｕｌｔｕｒｅｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｎｔｈｅｐｒｅｓ－ｅｎｃｅｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｓｅｒｕｍ．Ｓｅｒｕｍｉｓａｍｉｘ－ｔｕｒｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｌａｒｇｅｎｕｍｂｅｒｏｆｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｎｄｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｉｏ－ｌｏｇｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ［１］,ｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｎｕｔｒｉｅｎｔｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｆｏｒｔｈｅｃｅｌｌｇｒｏ…     

MTT法和LDH法检测T—AK细胞活性的研究

采用ＭＴＴ比色分析法和ＬＤＨ释放法检测了ＣＤ３单克隆抗体和白细胞介素－２共同激活的Ｔ－ＡＫ细胞的杀伤活生，并对检测方法进行了改良。     

A－LAK细胞与LAK细胞体外增殖及抗肿瘤作用的比较

本实验观察了Ａ－ＬＡＫ细胞的体外扩增及其抗肿瘤作用，并与ＬＡＫ细胞进行了比较。结果表明，Ａ－ＬＡＫ细胞在短期内大量扩增，在培养第７天时达到增殖高峰，Ａ－ＬＡＫ细胞增加１２．０２倍，而ＬＡＫ细胞增加２．６９倍，培养３周后Ａ－ＬＡＫ细胞增加５３．５０倍，而ＬＡＫ细胞仅增加４．４５倍。１８小时ＬＤＨ－Ｌ释放试验表明，Ａ－ＬＡＫ细胞对Ａｎｉｐ９７３和Ｋ５６２细胞均显示较高的杀伤活性，与ＬＡＫ细胞相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。通过ＦＡＣＳ细胞表型分析显示，Ａ－ＬＡＫ细胞大量表达ＣＤ１６、ＣＤ５６抗原，提示Ａ－ＬＡＫ细胞可能来源于ＬＧＬ－ＮＫ细胞群。     

CHANGES OF POLYAMINE METABOLISM IN HL-60 CELLS DURING THE INDUCTION OF DIFFERENTIATION BY RETINOIC ACID AND DIMETHYLSULFOXIDE

The polyamines putrescine, spermidine and spermine have been implicated in the regulation of cell proliferation and differentiation. In this study, the changes of intracellular polyamine contents and activity of ornithine decarboxylase, a rate-limiting enzyme in the polyamine synthetic pathway, were studied. The results showed that both retinoic acid (RA) and dimethylsulfoxide (DMSO) could elevate intracellular putrescine level by more than 2-fold over control value, then it declined gradually. In RA-treated cells, transient increase in spermidine and spermine levels was noted. In contrast, the spermidine and spermine levels in DMSO-treated cells declined to about 50% of the level of control cells at 96 h. The measurement of ornithine decarboxylase activity demonstrated that the increase of intracellular putrescine in RA and DMSO treated cells was due to the polyamine synthesis by inducing ornithine decarboxylase which reached 2 to 4-fold higher over basic level at 2 h, and above 6-fold at 16 h. These results suggest that the polyamine metabolism may be involved in RA and DMSO-induced granulocytic differentiation of HL-60 promyelocytic leukemia cells.     

塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖及血管新生的影响

目的探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞增殖的影响。方法采用MTT法检测塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制作用,采用免疫组化法检测塞来昔布作用急性白血病原代细胞后血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子-β(TGF-β)的表达情况。结果塞来昔布能显著抑制急性白血病原代细胞的增殖,免疫组化结果可见实验组VEGF、bFGF的阳性率较对照组均显著降低;但TGF-β阳性率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论塞来昔布能有效抑制急性白血病原代细胞分泌VEGF、bFGF,抑制白血病原代细胞的生长和增殖,其机制可能与抑制白血病血管新生有关。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.