TRAP1对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要：目的　探讨肿瘤坏死因子受体相关蛋白1（TRAP1）在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响。方法　通过Oncomine数据库分析TRAP1在结直肠癌组织和正常肠黏膜组织中的表达,Western blot检测TRAP1在结直肠癌组织及其配对癌旁黏膜组织、LOVO、HT29、HCT116、RKO、SW480、NCM460细胞中的表达及干扰TRAP1对细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白及PI3K/AKT通路的影响,CCK-8检测TRAP1对结直肠癌细胞增殖的影响,平板克隆实验检测TRAP1对结直肠癌细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测TRAP1对细胞周期及凋亡的影响。结果　生物信息学分析显示TRAP1在结直肠癌中的表达高于正常肠黏膜组织,Western blot结果显示TRAP1在结直肠癌组织和细胞中蛋白表达水平均高于正常组织和细胞（P＜0.05）,干扰TRAP1的表达可以显著抑制SW480细胞的增殖及克隆形成能力（P＜0.05）,并且将细胞阻滞在G0/G1期,增加细胞凋亡（P＜0.01）,细胞周期相关蛋白CyclinD1表达降低,凋亡相关蛋白Cleaved-Casp3表达增加,p-PI3K和p-AKT表达降低（P＜0.05）。结论　TRAP1在结直肠癌中高表达,干扰TRAP1的表达可以通过抑制PI3K/AKT通路的激活,从而降低结直肠癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡。     

MiR-34a通过调控Fra-1影响人胃癌细胞侵袭转移

目的 探讨过表达miR-34a对胃癌细胞侵袭转移增殖能力的影响,以及其可能的作用机制.方法 通过转染miR-34amimics上调其表达,利用划痕迁移实验、transwell侵袭实验和CCK8实验检测过表达miR-34a对SGC-7901,BCG-823细胞的迁移、侵袭和增殖能力的影响.采用生物信息学预测及双荧光素酶实验考察miR-34a对靶基因Fra-1的靶向调控机制.结果 转染miR-34amimics过表达miR-34a能显著抑制胃癌细胞SGC-7901,BCG-823的迁移、侵袭和增殖能力.miR-34a能够靶向负性调控Fra-1的表达,影响下游侵袭转移相关蛋白分子MMP9、Cyclin D1的表达.结论 过表达胃癌细胞系中miR-34a可靶向抑制Fra-1的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭转移增殖能力,影响胃癌进展.     

缺氧诱导因子-1α对结直肠癌细胞上皮间质转化及 侵袭迁移的影响

摘要： 目的 探讨缺氧是否能促进不同分化程度结直肠癌细胞上皮间质转化 （EMT）, 并分析缺氧对结直肠癌细 胞侵袭、 迁移的影响。方法 分别选取 HCT116（低度分化）和 HT-29（高度分化）结直肠腺癌细胞。观察 0、 10、 25、 50、 100 及 150 mg/L 氯化钴 （CoCl2） 诱导 2 种细胞 48 h 后的形态变化。分析 0、 10、 25、 50 及 100 mg/L CoCl2 处理 48 h 后缺氧诱导因子 （HIF） -1α蛋白表达变化, 筛选出 CoCl2诱导细胞缺氧的最适合浓度。MTT 实验检测不同时间点 （0 、 24 、 48 、 72 及 96 h） CoCl2诱导 2 种结直肠癌细胞的增殖情况, 筛选出 CoCl2诱导缺氧的最佳时间。最佳浓度和时间 条件下, 对 HCT116 和 HT-29 细胞分别进行缺氧 （缺氧组） 和常氧 （常氧组） 处理, Transwell 侵袭和划痕实验检测 2 组 2 种细胞的侵袭、 迁移情况; Western blot 实验和 RT-PCR 实验检测 2 组 HIF-1α、 E-cadherin 及 Vimentin 的蛋白及 mRNA 表达水平。结果 50 mg/L CoCl2作用 48 h 时 2 种细胞均出现明显的形态改变。2 组 HCT116、 HT-29 细胞的 HIF-1α蛋白表达水平随 CoCl2浓度增加均呈先增后减趋势, 50 mg/L 为最适宜浓度 （P < 0.05）。0~96 h 时 2 种细胞不 论有无缺氧, 细胞增殖能力均呈先增后减趋势 （P＜0.05）, 48 h 为最佳作用时间。HCT116 和 HT-29 细胞系中缺氧组 穿膜细胞数和细胞迁移率均明显高于常氧组 （P＜0.05）。HCT116、 HT-29 细胞系中缺氧组 HIF-1α、 Vimentin 的蛋白 和 mRNA 表达水平均高于常氧组, 而 E-cadherin 的蛋白和 mRNA 表达水平低于常氧组（均 P＜0.05）。结论 缺氧 能诱导不同分化程度结直肠癌细胞均发生 EMT, 并能增强 2 种结直肠癌细胞的侵袭、 迁移能力。     

长链非编码 RNA LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制

目的研究长链非编码 RNA(lncRNA)LINC01419调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的机制。方法收集漯河市中心医院 2015年 10月至 2018年 5月因结直肠癌手术切除的组织标本 20例,以距离结直肠癌边缘 ≥3 cm的癌旁正常组织标本 20例为对照。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419和微小 RNA-132-3p(miR-132-3p)表达。构建干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达的结直肠癌 SW620细胞, MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡, Transwell检测细胞迁移、侵袭,蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A(P21)、 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)蛋白、 Bcl-2相关 X(Bax)蛋白、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)蛋白表达。生物信息学预测结合双荧光素酶报告实验分析 lncRNA LINC01419和 miR-132-3p的靶向关系。 si-LINC01419和 anti-miR-123-3p共转染,观察抑制 miR-132-3p表达对干扰 lncRNA LINC01419诱导的 SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结果与癌旁组织［(1.00±0.09)、(1.01±0.08)］比较,结直肠癌组织中 lncRNA LINC01419表达量( 2.74± 0.26)明显增加( P<0.05)miR-132-3p表达量( 0.51±0.05)显著减少( P<0.05)。干扰 lncRNA LINC01419或 miR-132-3p过表达显著抑制 SW620细胞增殖、,迁移、侵袭、 cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,并促进细胞凋亡、 P21、Bax蛋白表达。 lncRNA LINC01419靶向调控 miR-132-3p的表达。抑制 miR-132-3p表达逆转了干扰 lncRNA LINC01419对结直肠癌细胞 SW620增殖、迁移、侵袭的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论 lncRNA LINC01419通过靶向 miR-132-3p调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移侵袭。     

TGF-β1对结直肠癌细胞株侵袭转移及IL-22表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对结直肠癌细胞株侵袭转移及白细胞介素22（IL-22）蛋白表达的 影响。方法 以结直肠癌HCT116细胞株为研究对象,以不同浓度（0、5、10、15、20、30、50 μg/L）TGF-β1处理24、48 h 后,CCK-8法检测结直肠癌HCT116细胞体外增殖情况;将结直肠癌HCT116细胞株分为对照组和10 μg/L TGF-β1 处理组。Transwell侵袭迁移实验和划痕实验检测TGF-β1对HCT116细胞侵袭迁移能力的影响;采用RT-PCR检测 TGF-β1对HCT116细胞TGF-β1、IL-22 mRNA表达的影响;免疫细胞化学染色和Western blot 检测HCT116细胞中 TGF-β1、IL-22、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达水平。结果 CCK-8结果显示, 0、5、10、15、20、30、50 μg/L TGF-β1 溶液刺激 24、48 h 后,不同 TGF-β1 浓度处理组结直肠癌 HCT116 细胞光密度 （OD）值差异均无统计学意义（均P＞0.05）。10 μg/L TGF-β1处理HCT116细胞48 h后,细胞侵袭能力、迁移能力和 迁移距离均明显升高（均P＜0.01）;TGF-β1处理组TGF-β1 mRNA表达水平明显高于对照组,而IL-22 mRNA表达水 平明显低于对照组（均P＜0.01）;免疫细胞化学染色和Western blot结果显示,TGF-β1处理组TGF-β1、STAT3蛋白表 达水平明显高于对照组,而IL-22、E-cadherin蛋白表达水平明显低于对照组（均P＜0.05）。结论 TGF-β1可能促进 HCT116细胞侵袭和迁移,但对HCT116细胞的增殖影响不明显,结直肠癌HCT116细胞中TGF-β1可能抑制IL-22蛋 白的表达。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素通过上调Slug促进结直肠癌细胞上皮-间质转化的研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)诱导结直肠癌细胞HCT116发生上皮-间质转化(EMT)的潜在分子机制.方法 TSA处理结直肠癌细胞HCT116,观察细胞形态变化;划痕实验观察细胞迁移侵袭能力的变化.实时定量PCR、Western blot检测HCT116细胞EMT标志物以及Slug的表达情况.siRNA敲除Slug表达,Western blot检测HCT116细胞EMT标志物表达变化,以及细胞形态变化.结果 TSA可以促进结直肠癌细胞HCT116的迁移能力,诱导HCT116细胞发生EMT转化,包括细胞形态改变,EMT标志物表达变化.TSA可以促进EMT关键转录因子Slug的表达,包括蛋白和mRNA水平;敲除Slug表达可以抑制TSA诱导的EMT转化过程.结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA通过上调Slug的表达促进结直肠癌细胞HCT116发生EMT转化,从而提高其迁移能力.     

过表达的人β防御素-3可抑制结肠癌细胞增殖、迁移和细胞周期（英文）

本文研究探讨了人β防御素-3(hBD3)对结肠癌HCT116细胞的增殖、迁移和细胞周期的影响。将真核表达载体(pcDNA3.1-hBD3)转染于人结肠癌HCT116细胞。采用qPCR和Westernblot方法检测转染效率。使用Westernblot方法检测细胞中β-catenin, E-cadherin, N-cadherin蛋白的分子表达水平;采用单通道Hoechst染色检测细胞核数量和增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期;划痕法和Transwell法检测结肠癌HCT116细胞的迁移能力。结果显示,转染过真核表达载体(pcDNA3.1-hBD3)的结肠癌HCT116细胞, hBD3的mR NA表达和蛋白表达水平显著高于结肠癌HCT116和转染pCMV-Blank的HCT116细胞;其增殖能力和迁移侵袭能力均受到不同程度的抑制;细胞周期的G2/M期受到阻滞; HCT116-hBD3细胞中β-catenin和N-cadherin两种蛋白的表达水平均低于HCT116和HCT116-Blank细胞,而E-cadherin蛋白表达的水平均高于HCT116和HCT116-Blank细胞。本文发现,...     

长链非编码RNA赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA(LOXL1-AS1)在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响和可能的作用机制。方法 选取2016年1月至2018年12月在河南省人民医院行结直肠癌根治术的56例病人新鲜癌组织,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织样本及结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116和Lovo细胞中lncRNA LOXL1-AS1的表达水平,以配对癌旁组织及人正常结直肠黏膜细胞FHC作正常对照;构建靶向LOXL1-AS1序列的小干扰RNA(si-LOXL1-AS1)并转染SW480和Lovo细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell小室法检测沉默lncRNA LOXL1-AS1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测沉默LOXL1-AS1表达后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达情况。结果 LOXL1-AS1在结直肠癌...     

西红花苷抑制NFATc3活性促进与肿瘤成纤维细胞共培养的结直肠癌细胞放射敏感性

目的 探究西红花苷对与肿瘤成纤维细胞（CAFs）共培养的结直肠癌细胞放射敏感性的影响,并探究分子机制。方法 通过实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印记（Western blotting）比较人正常结肠上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116、LOVO中活化T细胞核因子c3（NFATc3）表达差异。建立CAFs与HCT116细胞共培养体系,西红花苷处理细胞后经不同剂量（0、2、4、6、8 Gy）X射线照射,细胞克隆形成实验分析细胞存活分数（SF）。再将HCT116细胞分为对照组、6 Gy组、CAFs/HCT116＋6 Gy组、CAFs/HCT116＋西红花苷＋6 Gy组,进行对应处理后,MTT法检测各处理组HCT116细胞活性,流式细胞术检测各处理组HCT116细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察各处理组HCT116细胞凋亡形态,qRT-PCR和Western blotting测定各处理组HCT116细胞中NFATc3表达水平。结果 相较于人正常结肠上皮细胞NCM460,人结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116、LOVO中的NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量均显著上调（P＜0.05）。与HCT116细胞比较,与CAFs共培养的HCT116细胞经辐射后的SF显著增高（P＜0.05）;与CAFs共培养的HCT116细胞比较,与CAFs共培养的HCT116细胞经西红花苷处理再进行辐射的SF显著降低（P＜0.05）。与6 Gy组比较,CAFs/HCT116＋6 Gy组HCT116细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著下降（P＜0.05）,细胞内染色也较为均匀,未见致密浓染的凋亡状细胞,细胞中NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量均显著上调（P＜0.05）;而与CAFs/HCT116＋6 Gy组比较,CAFs/HCT116＋西红花苷＋6 Gy组HCT116细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中有较多致密浓染、碎裂荧光块,同时,细胞中NFATc3 mRNA和蛋白相对表达量显著下调（P＜0.05）。结论 西红花苷能够明显提高与CAFs共培养的结直肠癌HCT116细胞的放射敏感性,从而促进细胞发生凋亡,该作用可能与抑制NFATc3有关。     

miR-27a对两种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨microRNA-27a(miR-27a)对2种结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法应用miR-27a反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO)在体外转染结肠癌细胞系SW620和HCT116,设置转染无义序列组作为对照组。RT-PCR检测细胞miR-27a表达;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测转染细胞FOXO1蛋白表达。结果与对照组相比,转染miR-27a ASO后结肠癌细胞系SW620和HCT116的miR-27a表达水平均明显降低(P<0.001),增殖能力和侵袭能力均受到明显抑制(P<0.01),FOXO1蛋白表达均明显增高(P<0.05)。结论抑制miR-27a表达可显著降低结肠癌细胞系SW620和HCT116的增殖能力和侵袭能力,而调控下游FOXO1蛋白表达可能是miR-27a参与结肠癌细胞增殖和侵袭的主要机制。     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。     

不同方法治疗慢性宫颈炎的疗效分析

目的慢性宫颈炎是妇科最常见的疾病之一,可引起盆腔脏器炎症,并且与宫颈癌的发生关系密切。本文诣在探讨不同方法在慢性宫颈炎中的疗效。方法回顾性分析新乡市中心医院收治的210例宫颈炎患者,采用药物保妇康栓、聚焦超声治疗及宫腔镜下宫颈电切术的临床效果进行统计分析。结果宫颈电切术治疗有效率为97.9%,明显高于另外两组,差异有统计学意义。结论宫腔镜下宫颈电切术治愈慢性宫颈炎,并且切除宫颈移行带,减少宫颈癌发生。     

槲皮素代谢产物定性检出条件研究

目的:研究给予大鼠槲皮素后血浆中代谢产物的定性检出条件。方法:给予大鼠槲皮素单体(100mg.kg-1)后腹腔静脉取血,血浆样品经2mol.L-1盐酸(甲醇-水溶液)水解,采用高效液相色谱法对血浆样品中代谢产物进行定性分析。结果:大鼠给药后3h内取血、血浆样品经盐酸水解处理4h,可稳定检测槲皮素和异鼠李素,样品在—20℃条件下贮存稳定。结论:血浆样品采集时间、盐酸水解时间及贮存方式等不同均可影响代谢产物的有效检出。     

片剂溶出度影响因素分析

目的:考察片剂溶出度的影响因素,提高片剂溶出度,从而提高产品质量。方法:通过实验,研究各种参数对片剂溶出度的影响,选择出最佳工艺条件,如改进处方、控制颗粒硬度和大小、控制压力等工艺参数,用于指导大型生产,提高片剂溶出度。结论:崩解剂及润滑剂的用量对片剂溶出度影响较大,颗粒的硬度及大小、粘合剂的温度,压片压力对片剂的溶出度亦有影响;片剂直径大小对片剂溶出度影响不大。     

甲泼尼龙佐治毛细支气管炎疗效观察

目的探讨甲泼尼龙与布地奈德治疗毛细支气管炎的疗效。方法将182例毛细支气管炎患儿随机分成三组,三组均采用综合治疗,A组62例用甲泼尼龙静脉滴注,B组60例雾化吸入布地奈德,C组60例用静滴氢化可的松,观察三组喘憋、哮鸣音消失和住院时间。结果A组喘憋、哮鸣音消失时间及住院时间均比B,C组缩短（P〈0.05）。结论甲泼尼龙静滴治疗毛细支气管炎有效、安全、方便,明显加快治愈过程,优于布地奈德与氢化可的松。     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

住院患者抗菌药物不合理使用分析

目的了解该院住院患者不合理使用抗菌药物情况。方法随机抽取2009年住院使用抗菌药物病历544份。依据《抗菌药物临床使用原则》等相关规定进行评价,统计、分析抗菌药物不合理使用现象。结果该院住院患者抗菌药物不合理使用率为31.8%,不合理现象主要表现有选药不当、高起点用药、用法用量不当等。结论该院住院患者抗菌药物不合理使用现象严重,医院应采取措施加强监管,促进抗菌药物合理使用。     

对天津市北辰医院医务人员药品不良反应认知度调查分析

药品不良反应(ADR)监测工作是对上市药品安全性的再评价,是公众安全合理用药的保障,是药品监督管理工作的重要组成部分。本中心对天津市北辰医院103名医务人员进行了药品不良反应相关知识认知度调查,并对调查结果进行统计分析,为相关部门的药品监管工作提供依据和参考。