984株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解浙江省当前结核病对一线抗结核药物的耐药水平及耐多药情况，为今后结核病防治工作提供参考依据。方法采用WHO推荐的药敏比例法对984株临床分离结核分枝杆菌进行药物敏感性试验。结果总耐药率为30．6％，初始耐药率为26．6％，获得性耐药率为52．3％，耐多药（MDR）率为7．6％。结论浙江省耐药水平有上升趋势，应引起相关卫生部门的关注。     

耐利福平结核分枝杆菌30株对利福喷丁的药敏试验

利福喷丁 (RFT)为利福平 (RFP)的环戊衍生物 ,又名环戊基哌嗪利福霉素 ,理论上与利福平有交叉耐药。我们对 30例株耐利福平结核分枝杆菌进行利福喷丁药敏试验 ,结果如下。1.菌株来源30株结核分枝杆菌菌株由本院细菌室提供 ,取自 2 0 0 0年1月至 2 0 0 1年 3月 30例患者痰标本 ,经改良罗氏培养基培养阳性为耐利福平菌株 ,鉴定为人型结核分枝杆菌 ,其耐药浓度为目前国家暂行规定的 5 0 ug～ 2 5 0 ug/ ml[1 ] 。30例患者在治疗期中 ,均有 RFP用药史 ,用药时间 3个月至 1年。但无 RFT用药史。2 .材料与方法(1)该试验用 RFP及 RFT均为原…     

39株对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株23SrRNA检测结果分析

目的 分析对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株23S rRNA的A2058位点的变化。 方法 选择我院菌株库的结核分枝杆菌临床分离株64株,其中10株为对全部抗结核药物敏感的结核分枝杆菌临床分离株;14株为单耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株;15株为耐多药,同时耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株;15株为耐多药,同时对克拉霉素敏感的结核分枝杆菌临床分离株;10株为广泛耐药菌株,同时对克拉霉素耐药的结核分枝杆菌临床分离株;此外,还有结核分枝杆菌标准株H37Rv 1株。对结核分枝杆菌23S rRNA行PCR检测和测序。 结果 经检测,H37Rv标准株没有A2058突变,只有1株广泛耐药临床分离株检测有A2058A-G的突变,其他临床分离株均没有突变,在耐克拉霉素的结核分枝杆菌临床分离株中占2.56%（1/39）,在广泛耐药结核分枝杆菌临床分离株中占1/10。 结论 结核分枝杆菌临床分离株对克拉霉素耐药的机制中, A2058突变可能不是产生对克拉霉素耐药的主要机制。结核分枝杆菌产生对克拉霉素耐药的机制有待进一步研究。     

984株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解浙江省当前结核病对一线抗结核药物的耐药水平及耐多药情况,为今后结核病防治工作提供参考依据。方法采用WHO推荐的药敏比例法对984株临床分离结核分枝杆菌进行药物敏感性试验。结果总耐药率为30.6%,初始耐药率为26.6%,获得性耐药率为52.3%,耐多药(MDR)率为7.6%。结论浙江省耐药水平有上升趋势,应引起相关卫生部门的关注。     

591株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的回顾性分析湖南省结核病医院结核病人中结核分枝杆菌耐药状况并分析耐药形成原因。方法分析2003年5月1日—2007年12月31日间分离培养出并使用噻吩-2羧基肼（TCH）和对硝基苯甲酸（PNB）进行分型确认的591株结核分枝杆菌药物敏感试验结果,包括异烟肼（INH、H）、利福平(RFP、R)、硫酸链霉素（SM、S）、对氨基水杨酸钠(PAS、P)、乙胺丁醇(EMB、E)、卡那霉素(KM、K)、左氧氟沙星（OFLX、O）。7种药物采用绝对浓度法进行药物敏感性检测。结果591株结核分枝杆菌中,至少耐一药为63.6%（376/591）;同时对7种药物耐药率为0.2%（1/591）;耐多药率（MDR）为38.6%(228/591)。结论结核病人耐药情况比较严重,需要更严格的执行结核病控制策略,防止耐药病人及耐药菌株的产生和传播。     

广东地区结核分枝杆菌利福布丁耐药株rpoB全基因序列突变特征

目的分析广东地区结核分枝杆菌利福布丁耐药株rpoB全基因序列突变特征。方法常规比例法检出100株结核分枝杆菌利福布丁（rifabutin,RBU）耐药株,30株敏感株,扩增rpoB全基因序列并进行序列测定,Clustal×软件比对所测序列突变情况。结果利福布丁敏感株rpoB基因无突变;利福布丁耐药株有24种突变类型,121个突变位点,其中106个在利福平耐药决定区（rifampin resistance determining region,RRDR）之内,15个在RRDR之外,包括3个是单点突变（V176F,P206R,H323Y）和12个联合突变;常见突变位点分别是531（70%）和526（20%）;两位点联合突变率21%,单点突变率79%。结论广东结核分枝杆菌敏感株rpoB基因不发生突变,利福布丁耐药株rpoB基因突变率100%,最常见突变位点分别是531和526。516、526和531之间不发生联合突变。RRDR之内鉴定出9种突变位点,RRDR之外鉴定出15个新突变位点,包括3个单点突变V176F,P206R和H323Y,位于rpoB基因起始端。     

结核分枝杆菌对利福喷汀与利福平交叉耐药的实验研究

目的 观察利福喷汀对结核分枝杆菌的杀菌效力及其与利福平的交叉耐药性，探讨利福喷汀对结核分枝杆菌的实验室耐药界限，为临床应用利福喷汀治疗结核病，包括治疗对利福平耐药的结核病提供依据。方法 用7H9液体培养基、苏通液体培养基、改良罗氏固体培养基测定利福喷汀和利福平对结核分枝杆菌标准株(H37Rv)及临床分离的利福平敏感株、利福平耐药株的最低抑菌浓度(MIC)。结果 在7H9液体培养基上对临床分离的19株利福平敏感株分别测定利福平和利福喷汀的MIC，有80％利福平敏感株利福平的MIC≥0．32μg／ml，而利福喷汀的MIC多分布在0．02～0．32μg／ml之间(占84％)；无论标准株H37Rv、利福平敏感株(19株)或是利福平耐药株(45株)，利福喷汀对结核分枝杆菌的MIC普遍比利福平低2～4倍；利福喷汀敏感株和耐药株的MIC差别较大，在MIC为5～10μg／ml处能最大限度地区分敏感菌和耐药菌。结论 利福喷汀与利福平存在着交叉耐药，但利福喷汀比利福平有更强的杀菌效力，部分结核分枝杆菌对利福平达到临床耐药时，仍未达到利福喷汀临床耐药，对利福平耐药的部分结核分枝杆菌对利福喷汀仍具有一定程度的敏感性，提示临床上对利福平耐药的结核病患者使用利福喷汀可能有一定效果；实验结果对利福喷汀临界耐药界限进行了初步筛查，为利福喷汀常规药敏试验的开展提供了基本试验数据。     

河南省濮阳市1119株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的了解河南省濮阳市涂阳肺结核耐药结核病的流行现状和特点,为今后结核病防治工作提供参考依据。方法收集2010年3月1日至2013年2月28日全市结核病防治机构发现的1291例涂阳肺结核患者的痰标本,进行分枝杆菌培养,用比例法进行6种抗结核药物（H、R、E、S、Ofx、Kin）敏感性试验。经培养阳性、菌型鉴定为结核分枝杆菌且药敏试验成功的1119例为研究对象,其中,初治患者1017例,复治患者102例,并对1119株结核分枝杆菌的药敏试验结果进行分析。计数资料组间比较采用X2检验,P〈0．05为差异有统计学意义。结果1119株结核分枝杆菌对6种抗结核药物的总耐药率、单耐药率、多耐药率、耐多药率分别为37．2％（416／1119）、24．3％（272／1119）、8．2％（92／1119）、4．5％（50／1119）。在总耐药方面,其中初治患者耐药率35．1％（357／1017）,复治患者耐药率57．8％（59／102）;复治患者耐药率明显高于初治患者,两者间差异有统计学意义（X2=20．525,P〈0．05）。对6种抗结核药物的耐药率由高到低的顺序是：H（19．9％,223／1119）、S（19．5％,218／1119）、R（10．8％,121／1119）、Ofx（3．7％,14／1119）、E（3．6％,40／1119）、Km（1．4％,16／1119）。初治患者单耐药率为24．3％（247／1017）,复治患者单耐药率为24．5％（25／102）,两者之间差异无统计学意义（X2=0．002,P〉0．05）。初治患者多耐药率为7．9％（80／1017）,复治患者多耐药率为11．8％（12／102）,两者间差异无统计学意义（X2=1．867,P〉0．05）。初治患者耐多药率为2．9％（30／1017）;复治患者耐多药率为19．6％（20／102）;两者间差异具有统计学意义（X2=56．423,P=0．000）。结论濮阳市1119例涂阳肺结核患者的耐药结果,反映了本地区耐药结核病的实际水平,为今后结核病防治、特别是耐药结核病防治,及时采取干预措施、更有效地控制疫情奠定了基础。     

结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物耐药相关基因突变特征分析

目的 分析宁波地区耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis, MDR-TB)不同基因型构成及氨基糖苷类药物耐药相关基因突变特征,为本地区耐多药结核病防控提供科学依据。方法 宁波市疾病预防控制中心2014-2016年耐药监测组共收集106例MDR-TB临床分离株,对其进行3种氨基糖苷类药物卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、卷曲霉素(Cm)耐药检测。应用RD105缺失基因检测法鉴定北京基因型及非北京基因型菌株。采用DNA直接测序法对所有MDR-TB菌株氨基糖苷类药物耐药相关基因rrs、tlyA、eis、gidB进行测序分析。结果 106株MDR-TB菌株中,北京基因型83株78.3%(83/106),非北京基因型23株(21.7%,23/106)。耐氨基糖苷类药物的菌株中北京基因型10株12.0%(10/83),非北京基因型0株0.0%(0/23)。10例耐氨基糖苷类药物的耐多药菌株中有4株发生耐药基因突变,突变率为40.0%(4/10),96例对氨基糖苷类药物全敏感的耐多药菌株中有24株发生耐药基因突变,突变率为26.7%(24/96),差异无统计学意义(χ²=1.048, P>0.05)。结论 宁波地区MDR-TB中北京基因型与氨基糖苷类药物耐药相关,目前已知的耐药相关基因突变不能完全解释结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物耐药的原因。     

耐氧氟沙星结核分枝杆菌对五种氟喹诺酮类药物交叉耐药的研究

目的 研究耐氧氟沙星结核分枝杆菌对5种不同氟喹诺酮类药物之间的交叉耐药性.方法 本研究选取来自于2007年全国结核病耐药性基线调查的130株对氧氟沙星耐药的结核分枝杆菌菌株,用微孔板稀释法检测这些菌株对5种氟喹诺酮类药物（氧氟沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星以及司帕沙星）的最低抑菌浓度,统计耐药率的差别并分析对某种氟喹诺酮类药物耐药的菌株中对其他4种药物的耐药率的差别,组间差异的比较采用卡方检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 130株对氧氟沙星耐药的菌株中,分别有110株（84.6％,110/130）、108株（83.1％,108/130）、46株（35.4％,46/130）及66株（50.8％,66/130）对左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星及司帕沙星耐药.加替沙星耐药率显著低于左氧氟沙星（x2=65.641,P＜0.01）、莫西沙星（x2=61.225,P＜0.01）和司帕沙星（x2=6.274,P=0.02）的耐药率.左氧氟沙星耐药菌株中分别有90.9％（100/110）、41.8％（46/110）和59.1％（65/110）的菌株对莫西沙星、加替沙星和司帕沙星耐药;在加替沙星和司帕沙星耐药菌株中,有97.8％（45/46）和97.0％（64/66）对莫西沙星耐药.莫西沙星耐药株中分别有41.7％（45/108）和59.3％（64/108）对加替沙星和司帕沙星耐药.结论 上述5种氟喹诺酮类药物之间呈现出不同的交叉耐药性,其中左氧氟沙星和莫西沙星交叉耐药,加替沙星和司帕沙星与莫西沙星之间表现为部分单向交叉耐药.     

结核分枝杆菌新疆临床分离株耐药情况调查

目的分析新疆部分地区结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对抗结核药物的耐药情况,探讨本地区耐药结核病的发生率及特点。方法收集2008年11月～2009年10月新疆喀什、和田、皮山等南疆地区确诊的结核病患者痰液标本,进行MTB的分离培养及菌种初步鉴定,并应用比例法对分离菌株进行耐药性检测,与本课题组所做北疆地区耐药情况进行比对。结果共分离到102株分枝杆菌,88株(86.3%)属于结核分枝杆菌复合群,7株(6.9%)属于牛分枝杆菌,7株(6.9%)属于非结核分枝杆菌。88株结核分枝杆菌中对1种以上抗结核药物具有耐药性的有20株,总耐药率为22.7%(20/88),MDR-TB为6.8%(6/88)。新疆南疆地区4种一线抗结药物的耐药率:H15.9%、R8.0%、S12.5%、E3.4%,明显低于新疆北疆地区抗结药物的耐药率:H53.3%、R28.5%、S48.4%、E46.8%。结论新疆南疆地区结核总耐药率有所下降,耐多药率有上升趋势,在结核病防治工作中应给予高度重视;新疆南、北疆地区耐药情况不同,北疆耐药率明显高于南疆地区。     

微孔板稀释法检测结核分枝杆菌丙硫异烟胺耐药结果分析

目的以MGIT960快速药敏法为参照,微孔板稀释法检测结核分枝杆菌丙硫异烟胺耐药的效果。方法采用MGIT960快速药敏(MGIT法)和微孔板稀释法对248株结核分枝杆菌临床分离株进行丙硫异烟胺药敏试验,检测结核分枝杆菌对该药物的耐药性。随机选取117株菌株进行该药物的11个浓度梯度(0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64μg/mL)的药敏检测,比较两种方法最低抑菌浓度的一致性。结果 MGIT法的平均检测时间为10.1d,微孔板稀释法检测时间为8d,两者差异有统计学意义(P0.001)。与MGIT法测定结果比较,微孔板稀释法检测的敏感度为96.5%(55/57),特异度为93.2%(178/191),符合率为94.0%(233/248),Kappa值为0.84。两种方法所获得的MIC值的总一致率为81.2%(95/117),其中在MIC值8.0μg/mL的分离株中,两种方法的一致率为86.3%(82/95);在MIC值≥8.0μg/mL的分离株中,两种方法的一致率仅为59.1%(13/22)。结论两种方法对丙硫异烟胺进行耐药检测有较高的一致性,但也存在一定的差异。微孔板稀释法比MGIT法简单,快速,适合用于结核分枝杆菌对丙硫异烟胺耐药性的快速检测。     

388例患者结核分枝杆菌耐药情况分析

目的回顾性分析陕西省结核病防治院肺结核病人中结核分枝杆菌耐药状况并分析耐药形成原因。方法分析2008年分离培养388株结核分枝杆菌药物敏感试验结果,包括异烟肼（H）,利福平（R）,盐酸乙胺丁醇（E）,硫酸链霉素（S）。结果 388株结核分枝杆菌中,至少耐一种药物耐药率为64.43%,同时对4种药物耐药率为4.12%,耐多药率为10.31%。结论结核病人耐药情况比较严重,需要更严格执行结核病控制策略,防止耐药病人及耐药菌株的产生和传播。     

青海省251株结核分枝杆菌Spoligotyping基因型与4种一线药物耐药表型的研究

目的研究青海结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物耐药状况及与Spoligotyping基因型的关系,为结核病有效预防提供依据。方法采用常规比例法对分离的251株结核分枝杆菌进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)等4种一线抗结核药物的药敏试验,并对菌株进行Spoligotyping分型,对药敏试验和基因分型结果进行综合分析。结果 251株结核分枝杆菌中,总耐药率为56.2%;对INH、RFP、SM和EMB的耐药率分别为43.0%(108/251)、37.1%(93/251)、39.0%(98/251)和27.9%(70/251);耐多药率为31.5%(79/251)。所有菌株经Spoligotyping分型,分为北京基因型185株(73.7%)与非北京型菌株66株(26.3%)。未发现北京型与非北京型结核菌株与耐药存在统计学关联。结论青海流行的结核分枝杆菌耐药率及多耐药率较高,Spoligotyping分型显示北京基因型为主要流行型。     

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rpsL基因突变特征分析

目的了解我国结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）rpsL基因突变特征及其与链霉素耐药的相关性,并评价其应用价值。方法对302株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因采用聚合酶链反应-直接测序（PCR-DS）进行检测。结果 59株对INH、RFP、SM、EMB和PAS全部敏感,rpsL基因没有突变,61株对SM敏感的耐药株有6株突变,SM敏感菌株突变率为5.00%（6/120）。182株SM耐药MTB,rpsL基因突变率为70.33%,其中43位密码子赖氨酸转变为精氨酸（Lys43Arg）突变率为52.20%;88位密码子有4种突变类型,突变率为17.58%;86位密码子精氨酸转变为谷氨酰胺（Arg86Gln）突变率为0.55%。SM耐药株的rpsL基因突变率明显高于SM敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义,χ2=125.05,P〈0.05。结论 rpsL基因突变与结核分枝杆菌链霉素耐药高度相关,其中Lys43Arg突变是主要突变类型,PCR-DS检测rpsL基因突变可以用于临床结核菌链霉素耐药的快速检测。     

高分辨率熔解曲线技术用于结核分枝杆菌临床分离株异烟肼耐药性的快速检测

目的评价高分辨率熔解曲线分析技术(high-resolution melting curve,HRM)检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的应用价值。方法 1)通过传统比例法药敏实验对本实验室保存的49株结核分枝杆菌进行异烟肼耐药性分析。2)进一步对该结核分枝杆菌进行异烟肼耐药相关基因KatG基因和inhA基因进行异烟肼耐药决定区测序分析,筛查突变位点。3)根据筛查到的突变位点设计高分辨率熔解曲线分析所用的特异性引物,对异烟肼耐药基因耐药决定区进行高分辨率熔解曲线分析检测DNA突变,评估用高分辨率熔解曲线分析技术对结核分枝杆菌异烟肼耐药性检测的效率。结果 1)比例法药敏结果显示,49株实验菌株中20株为异烟肼耐药株,29株为异烟肼敏感株。2)测序分析结果显示:(1)KatG基因出现了4种突变形式,分别是234单位点突变;234、315双位点突变;234、463双位点突变;234、315、463三位点联合突变。(2)inhA基因检测到3种突变,即-8位、-15位、-152位。3)(1)对耐药株的基因突变进行分析发现:20株异烟肼耐药株中11株存在KatG基因第315位密码子的突变、占异烟肼耐药株的55%;6株存在inhA基因-15(4株)位碱基、-8(1株)位碱基、-152(1株)位碱基的突变,共占异烟肼耐药株的30%;2株同时存在基因KatG315密码子和inhA-15位碱基的突变,占异烟肼耐药株的10%;1株均未检测到KatG基因和inhA基因的突变,占异烟肼耐药株的5%。通过基因突变检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的敏感性为95%、特异性为100%。(2)用高分辨率溶解曲线检测实验菌株耐药基因突变的结果显示,18株存在基因突变,24株不存在基因突变,检测的灵敏度为94.7%、特异性为80%。(3)以高分辨率熔解曲线检测到突变为耐药的判断标准,检出19株为耐药株,24株为敏感株。以比例法药敏结果为参照,检测的灵敏度为95%、特异性为82.76%。结论高分辨率溶解曲线用于结核分枝杆菌对异烟肼耐药性的检测具有较好的灵敏度,耗时短,在异烟肼耐药结核病的快速诊断方面具有一定的应用价值。     

结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药性的噬菌体测定

目的　建立噬菌体生物扩增法快速测定乙胺丁醇 (EMB)耐药性 ,并探讨其在结核分枝杆菌 (MTB)EMB耐药性测定中的应用价值。方法　应用噬菌体生物扩增法测定 10 2株MTB临床分离株EMB耐药性 ,并与绝对浓度法结果进行比较 ,对不符合的菌株测定其最低抑菌浓度 (MIC)。结果　噬菌体法测定 10 2株MTB临床分离株EMB敏感 82株、耐药 2 0株 ,绝对浓度法敏感 77株、耐药 2 5株 ;二法测定均为敏感 74株、耐药 17株。噬菌体法与绝对浓度法测定EMB耐药性结果相符 91株 ,符合率 89.2 % ;不符 11株 ,不符合率 10 .8%。11株两种测定方法结果不符的菌株中 ,7株(6 3.6 % )噬菌体法与MIC测定结果相符合 (5株噬菌体法敏感、绝对浓度法耐药 ,2株噬菌体法耐药、绝对浓度法敏感 )。结论　噬菌体生物扩增法测定EMB耐药性只需 3d时间 ,操作简便 ,不需特殊仪器设备 ,可作为MTB的EMB耐药性快速筛选方法。     

结核分支杆菌inhA基因突变的测序研究

目的 对耐药结核分支杆的inhA基因进行测序分析以研究其变异的分子机制。方法 以inhA片段为引物,聚合酶链反应扩增H27Rv、耐药株和敏感株的inhA基因,产物克隆后制备质粒,ABI377全自动核酸测序系统测定DNA序列。结果 在17个耐异烟肼菌株中,11株出现inhA基因变异,突变率为65％,其中在10株至少每株有1个错义突变。变异主要为点突变,包括碱基置换和缺失。各菌株变异不同。katG和inhA同时变异的达62％。首次发现了18个与结核分支杆菌耐INH和EMB特性有关的inhA基因位点。结论 结核分支杆菌耐INH和EMB特性与inhA突变异致药物结合位点减少有关。     

杭州市1 731株结核分枝杆菌耐药状况分析

目的 了解杭州市区县范围内耐药结核病的流行状况。方法 采用浓度比例法和PNB/TCH生长实验对2018年1月至2019年12月分离自杭州市周边7个县区的1 975份肺结核病人的培养菌株进行药物敏感性实验和菌种鉴定,并用统计学方法分析耐药谱和耐药率。结果 1 731株结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)中, 18.26%(316/1 731)菌株至少对一种受试药物耐药,一线药物、二线药物、单耐药、多耐药、耐多药、广泛耐药、利福平耐药的耐药率分别是14.96%(259/1 731)、4.97%(86/1 731)、11.84%(205/1 731)、3.81%(66/1 731)、2.60%(45/1 731)、0.06%(1/1 731)、3.24%(56/1 731),共28种耐药谱。初治患者耐药率与复治患者耐药率差异无统计学意义(P>0.05)。比较2011年、2015年、2018-2019年这3个时间段,一线药物的总耐药率、初治患者耐药率、复治患者耐药率以及耐多药的总耐药率和复治耐药率均呈现下降趋势(均P<0.05)。二线药物OFX的总耐药率和初治患者耐药率较2015年升高(P<0.05)。60岁以上的结核病患者占比最大(47.95%)。7个区县的耐药率存在差异。结论 2011-2019年杭州市区县结核病定点医院收治的结核病人的耐药率逐年下降,目前采取的防控措施切实有效。今后要重点关注耐药率较高区县的耐药病人和40~60岁耐药病人的治疗和管控,加强老年人结核病的防控。