2008年-2010年哈尔滨市哨点医院手足口病病原学检测结果及EV71 VP1基因特征分析

目的:了解哈尔滨市手足口病病原分布情况及基因特征,为哈尔滨市手足口病的预防控制工作提供参考。方法:收集哈尔滨市哨点医院的手足口病例样本,采用RT-PCR或real-time PCR方法进行病原核酸检测,病毒核酸阳性标本进行RD细胞培养分离病毒,将分离到的EV71采用RT-PCR的方法进行VP1区全基因扩增并测序,应用DNA Man和DNA Star软件序列整理分析。结果:2008年156份临床标本中EV71 59份,CA16 4份;2009年625份临床标本中EV71146份,CA16 82份,未分型别肠道病毒4份;2010年725份临床标本中EV71 202份,CA16 13份,未分型别肠道病毒36份。结论:通过基因比对2008年-2010年哈尔滨市EV71病毒感染手足口流行型别是EV71 C4亚型,未发现变异。     

2013年许昌市手足口病病原学监测分析

目的了解许昌市2013年手足口病(HFMD)病原体型别与分布特征。方法收集许昌市5县3区手足口病例患者的粪便、肛拭子或咽拭子标本。实验室检测采用Real-Time RT-PCR法对标本进行肠道病毒71型(EV 71)、柯萨奇病毒A组16型(CA 16)和其他肠道病毒核酸检测。结果共检测496份病例标本,阳性318份,阳性率为64.11%。其中EV71阳性99份,阳性率19.96%;CA16阳性100份,阳性率20.16%;其他肠病毒阳性119份,阳性率为23.99%。其中重症病例56份,实验室诊断43份,以EV71感染为主(48.84%,21/43)。结论 2013年许昌市手足口病的病原体呈现EV71、CA16和其他肠道病毒共存,引起重症的病原体以EV71型肠道病毒感染为主。     

2008年广东省儿童手足口病病原学监测

目的监测手足口病的病原体,为预防和控制肠道病毒感染提供依据。方法采集手足口病患儿的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液进行RT-PCR定性,肠道病毒通用引物阳性的标本进行病毒分离;分离株用EV71和CA16的VP1基因的特异性引物进行RT-PCR鉴定。结果共收集患儿标本443份,肠道病毒通用引物阳性259份;做病毒分离256份,阳性150份,其中粪便158份,病毒分离阳性112份,阳性率为70.89%;肛拭子21份,病毒分离阳性10份,阳性率为47.62%;咽拭子65份,病毒分离阳性26份,阳性率为40.00%;疱疹液10份,病毒分离阳性2份,阳性率为20.00%。结论粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液的分离率有显著差异,粪便分离率最高;EV71和CA16是引起小儿手足口病的主要病原体,死亡病例全部是由EV71病毒引起。     

一步RT-PCR方法在黑龙江省手足口病病原检测中的应用

目的了解核酸检测方法在黑龙江省手足口病病原谱调查中的应用价值,为疾病防控提供依据。方法在全省范围内收集2009年和2010年疑似手足口病病人疱疹液、咽拭子或肛拭子标本,使用人肠道病毒通用引物、肠道病毒71型(EV71)引物和萨奇病毒A组16型(CVA16)引物,采用一步RT-PCR方法进行病原核酸检测,进而分析病原构成,并对部分核酸检测阳性标本进行病毒分离。结果 2009年检测标本985份,其中EV71阳性226份、CVA16阳性191份、EV71和CVA16合并阳性3份,其他肠道病毒阳性100份。2010年检测标本1696份,其中EV71阳性354份、CVA16阳性356份、其他肠道病毒阳性188份。两年标本肠道病毒阳性率平均为52.87%,其中EV71和CVA16占阳性标本中病原总数的79.69%。选取353份核酸检测阳性标本进行病毒分离,共获得毒株265株。结论一步RT-PCR方法用于手足口病病原检测稳定、特异、快捷、易于分型,EV71和CVA16是黑龙江省近两年手足口病的主要病原体。     

2011年郴州市手足口病病原学及EV71型分离株基因特性研究

目的了解2011年郴州市手足口病病原学特征及EV71型分离株基因特性,为郴州地区手足口病防治工作提供依据。方法收集郴州市手足口病临床诊断病例的咽拭子或肛拭子、粪便标本,采用实时荧光PCR法检测EV71、CA16和其他肠道病毒核酸。随机挑选55份EV71阳性的标本进行RD细胞分离,10株分离株用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增EV71的VP1片段,并作基因测序和序列分子系统发生树分析。结果 2011年郴州市共报告手足口病例5 128例,发病有两个高峰,分别是5-7月和11-12月。病原学检测提示,2011年检测手足口病标本574例,发病年龄以1～3岁儿童为主,男性是女性的2.04倍,检出阳性标本461份,其中EV71占30.15%,CA16占31.89%,EV71和CA16同时阳性占0.65%,其他肠道病毒占37.31%;三种型别病毒分布在病例发病时间、发病年龄和地域上有所不同(P<0.001);重症病例25例,18例检出EV71病毒核酸,死亡病例6例均为EV71病毒感染;采用实时荧光PCR法随机检测68份其他肠道病毒,其中23份CA6、8份CA10,CA6和CA10占其他EV的45.59%。10株EV71分离株基因测序均为C4a亚型,重症和普通病例EV71的VP1基因序列差异较小。结论手足口病的发病存在明显季节、地区、性别、年龄差异,EV71是2011年郴州市引起手足口病重症和死亡病例的主要毒株类型,要开展对EV71型病毒的深入研究,同时也要关注非EV71和非CA16病毒的流行趋势,以防范其快速传播。     

天津市手足口病分子流行病学分析

目的分析天津市手足口病病原学分布及肠道病毒71型(EV71)分子流行病学特点。方法采集天津市各医院2008—2010年手足口病住院患者粪便标本2 377份,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道病毒核酸;选取部分EV71阳性标本分离病毒,采用RT-PCR扩增其VP1基因,进行序列测定和同源性分析,建立系统发生树。结果 2 377份手足口病粪便标本中,肠道病毒总阳性率为70.72%(1 681/2 377),其中EV71占48.30%,CV-A16占37.36%,其他EV占14.34%;31株EV71分离株与C4亚型的C4a分支参比株具有最高核苷酸序列同源性,同源性为95.7%～99.2%,在系统发生树上均归属于C4a分支。结论天津市2008—2010年手足口病主要病原体为EV71,其流行株为C4亚型中的C4a病毒株。     

宝鸡地区2009—2010年度手足口病病原体实时荧光法检测结果

目的了解宝鸡地区2009年及2010年手足口病流行的主要病原体。方法临床诊断为手足口病病例的咽拭子和疱疹液标本206份,运用实时荧光(RT-PCR)法对标本病毒RNA进行肠道病毒EV71、CA16和非EV71、CA16的其他肠道病毒检测。结果 2009年度阳性检出率为84.0%,其中EV71阳性率为76.0%;2010年度阳性检出率为68.0%,其中CA16阳性率为43.1%。综合两年的结果,重症以EV71为主;阳性者男女比例为1.55∶1;发病年龄以5岁以下儿童为主;收样较多月份为4—7月。结论 2009年宝鸡地区手足口病病原阳性以EV71为主,2010年宝鸡地区手足口病病原阳性以CA16为主。     

2010年深圳市手足口病的病原学检测分析

目的:了解深圳市2010年手足口病的病原学情况,为手足口病的控制和治疗提供实验室依据。方法:采集手足口病病例粪便标本,提取标本中的病毒核酸,采用RT-PCR方法,检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的核酸。结果:2010年共检测1238例手足口病例,其中重症病例122例。所有病例中,EV71阳性率为43.29%,CA16阳性率为11.14%;重症病例中,EV71阳性率75.4%,CA16阳性率仅1.63%;死亡病例均为EV71阳性。5月份病例数最多;城乡结合部为重症病例高发区。3岁以下儿童为手足口病重症高发年龄段。结论:EV71和CA16是引起深圳市手足口病的主要病原体,其中EV71是引起重症病例的最主要原因,必须加强对EV71引起的手足口病病例的监测和治疗。     

肠道病毒EV71和CAV6分离效果影响因素分析

目的探讨肠道病毒EV71、CAV6样本荧光定量RT-PCR的Ct值、接种剂量等因素对病毒分离效果的影响。方法采集确诊手足口病例咽拭子、肛拭子标本,应用荧光定量RT-PCR法检测病毒核酸,选取强阳性、阳性、弱阳性EV71、CAV6标本各30份,按不同剂量梯度(100,200,300,400μL)接种于RD细胞进行病毒培养分离。结果 180份标本的总体分离阳性率为52.2%,其中EV71阳性率60.0%,CAV6阳性率44.4%,差异有统计学意义(P0.05);肛拭子分离阳性率60.9%,咽拭子分离阳性率43.2%,差异有统计学意义(P0.05)。不同接种剂量的病毒分离阳性率差异有统计学意义(P0.05)。结论肠道病毒EV71、CAV6标本荧光定量RT-PCR的Ct值、接种剂量、标本类型、分离细胞株对分离阳性率均有影响。     

河南省濮阳市手足口病病原检测及EV71基因序列特征分析

目的对2010年-2012年濮阳市手足口病病例进行病原检测及EV71基因测序,明确致病病原。方法用real-time RT-PCR法对病例的咽拭子、肛拭子进行EV、EV71、Cox A16核酸检测,用RD细胞进行病毒分离,病毒培养物的PCR产物进行双向测序,用Mega 4.0生物软件完成全基因序列进化树构建。结果 2 097例手足口病,男女比例为1.90∶1,0岁~3岁儿童占90.61%。重症患者EV71阳性率为74.95%;普通患者EV71阳性率为23.14%,检测结果差异有统计学意义(χ2=562.144,P0.001)。2012年15份肛拭子EV71病毒分离阳性率为46.67%,15份咽拭子未分离出病毒。选取2012年1株重症患者EV71全基因序列构建系统进化树,显示与山东2010年莱阳株、阜阳2008年流行株聚成一簇同属C4a亚型。结论学龄前儿童是手足口病防控的重点,EV71病毒分离标本肛拭子优于咽拭子,濮阳市手足口病重症患者以EV71感染为主,为C4a亚型。     

2009年深圳市手足口病病原学监测

目的了解深圳市2009年手足口病病原学情况,为制定手足口病防控策略及实现手足口病对症治疗提供科学依据。方法采集2009年491例手足口病病例的粪便标本,应用荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A 16型(coxsackievirus A16,CA16)RNA。结果 EV71阳性率为30.96%,CA16阳性率为19.14%;EV71和CA16的阳性率差异有统计学意义;不同性别之间EV71和CA16阳性率差异无统计学意义。其中59例重症及死亡病例中,EV71阳性率为54.24%,CA16阳性率为1.69%。重症及死亡病例集中在3~10月份,1、2月份和11、12月份未发现重症及死亡病例;7例手足口病死亡病例中,5例EV71阳性。结论 2009年深圳市手足口病病原体主要为EV71;3~7月份为手足口病高发季节,要特别加强对EV71引起的有中枢神经系统并发症的重症病例的监测,提前做好抢救措施,防止病情恶化导致死亡。     

2007-2010年上海市静安区儿童手足口病情况分析和病原学研究

目的 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病发病情况,并分析2009-2010年静安区监测点儿童手足口病病原型别及肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71) VP1区基因特征.方法 分析上海市静安区2007 -2009年手足口病流行概况;收集2009年4月～2010年12月辖区内儿童医院、幼托机构手足口病患儿咽拭标本,并进行实时荧光RT-PCR检测,确定手足口病病原型别.选择2010年不同月份共19份(含1份重症病例)EV71 PCR阳性标本,接种Vero细胞进行病毒分离培养,并设计特异引物对EV71 VP1全序列进行核苷酸序列测定、比对,构建系统发生树.结果 2008年静安区手足口病发病率明显增高,2009年发病数稳中略降,病例以发生在幼托机构为主.2009年病例咽拭标本实时荧光RT-PCR检测结果显示,柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CoxA16)阳性率为51.0％ (52/102),EV71阳性率为15.7％ (16/102),其他肠道病毒属阳性率2.9％ (3/102);2010年CoxA16和EV71阳性率均为31.3％ (36/115),其他肠道病毒属阳性率10.4％( 12/115).19株EV71分离株与2008年安徽阜阳EV71分离株同属C基因型中的C4a亚型,核苷酸同源性达95.0％ ～97.1％,氨基酸同源性为95.1％ ～98.3％.结论 静安区手足口病发病率2008年明显增高,2009年发病数稳中略降.2009-2010年静安区手足口病主要病原体为EV71和CoxA16,其他肠道病毒属引起的手足口病有所增加,需加强对其他肠道病毒属的鉴定.     

黔东南州2010年手足口病病原学监测结果

目的:了解黔东南州2010年手足口病流行的主要病原体。方法:采集临床诊断为手足口病病例的咽拭子、粪便或肛拭子、疱疹液采用RT-PCR方法扩增病毒的特异性片段,检测EV71、CA16核酸和非EV71、CA16的其他肠道病毒核酸。结果:2010年4月-2010年11月共检测标本101份,病毒核酸检测阳性50份(49.50%),其中EV71为17.82%;CA16为19.80%;其他肠道病毒阳性为11.88%。101例标本中,从发病至采样0 d~2 d病毒核酸检出率最高(59.68%),其次是3 d~5 d(39.29%)。咽拭子、肛拭子或大便、疱疹液阳性率分别为48.42%、50.00%和100%。结论:黔东南州2010年手足口病流行毒株以肠道病毒CA16和EV71为主。     

实时荧光定量RT-PCR技术在手足口病疫情监测中的应用

[目的]对手足口病患者标本进行病毒核酸检测,探讨实时荧光定量RT-PCR方法在手足口病疫情监测中的意义。[方法]采用实时荧光定量RT-PCR方法对2010年3～8月连云港市采集的307份手足口病患者标本进行肠道病毒核酸检测,并对肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)进行分型。[结果]307份手足口病患者标本中有221份肠道病毒核酸阳性,阳性率71.99%,其中EV71型病毒核酸阳性标本123份,阳性率40.07%,CVA16型病毒核酸阳性标本66份,阳性率21.50%。[结论]实时荧光定量RT-PCR方法耗时短、特异性强、灵敏度高,可作为手足口病疫情监测的诊断方法。     

浙江省杭州地区手足口病病原谱分析和肠道病毒71型VP1基因分析

[目的]分析杭州地区手足口病的病原谱构成,并对肠道病毒(EV)71型的VP1基因进行核苷酸和氨基酸的序列的比对分析,了解杭州地区EV71的基因特征。[方法]采集98份手足口病确诊病例的粪便标本,用EV71和柯萨奇病毒A组(CoxA)16型特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定,并选择6例EV71检测结果阳性的标本进行病毒分离并进行VP1基因的特异性扩增并进行测序,结合EV71各亚型的代表株构建系统进化树,并对VP1蛋白的氨基酸序列进行分析。[结果]通过RT-PCR特异性检测,发现EV71阳性结果22份,阳性率为22.4%;CoxA16阳性结果27份,阳性率为27.6%。测序结果表明6株EV71之间的VP1基因核苷酸同源性为92.2%～98.5%,氨基酸同源性为99.0%～100%。通过与各代表亚型进行核苷酸同源性比较后发现此次分离得到的EV71病毒都属于C4亚型。6株EV71与部分亚型代表株间在BCloop区域的氨基酸序列存在着差别,而SP70区域的氨基酸序列则完全一致。[结论]在手足口病患者中,由EV71感染引起的比例越来越大;此外,此次在杭州地区分离的EV71病毒都属于C基因型的C4亚型,尚没有证据说明此次在杭州地区分离的6株EV71毒株的毒力有增强。     

2011年平顶山市手足口病实验室检测结果分析

目的：对平顶山市2011年手足口病实验室检查结果进行分析,了解2011年平顶山市手足口病病原学特征,为实验室诊断手足口病提供参考。方法采集2011年平顶山市各地送检的499例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液和脑脊液等标本507份,应用RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒、肠道病毒71型（ EV71）、柯萨奇病毒A组16型（ CA16）。结果499例手足口病患者的507份各类样本中,检测到肠道病毒（PE）阳性84份,EV71病毒特异性基因片段阳性167份, CA16特异性基因片段阳性125份。499例手足口病病例中,阳性376例,阳性率75.35%;其中EV71阳性167例,占阳性人数44.41%,CA16阳性共125例,占阳性人数33.24%, EV71的检出率较CA16高。已检验499例中,重症患者133例,阳性109例,阳性率81.95%;其中EV71共91例,占阳性人数83.49%,CA16共9例,占阳性人数8.26%。结论 EV71是2011年平顶山市手足口病的优势病原体;同时EV71是引起手足口病重症病例的主要毒株类型。     

2008年广东省手足口病实验室检测结果分析

目的对广东省2008年手足口病实验室检查结果进行分析,了解2008年广东省手足口病病原学特征,为实验室诊断手足口病提供参考。方法采集2008年4—12月广东省各地送检的292例手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子、疱疹液和脑脊液等标本426份和98名手足口病病例接触者的粪便、肛拭子和咽拭子等标本98份,应用RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)。结果292例手足口病患者的426份各类样本中,检测到肠道病毒阳性267份,EV71病毒特异性基因片段阳性169份,CVA16特异性基因片段阳性36份,EV71和CVA16病毒核酸同时阳性3份。292例手足口病病例中,EV71的检出率较CVA16高,分别为50.68%(148/292)和11.99%(35/292),20例手足口病死亡病例均为EV71感染病例。手足口病病例粪便样本的肠道病毒、EV71和CVA16的检测阳性率最高,分别为76.72%(178/232)、45.26%(105/232)和14.66%(34/232),且在发病9 d后仍能检测到EV71病毒。98名手足口病病例接触者的各类样本中,分别检测...     

2010年粤东地区手足口病的病原学研究

目的 了解粤东地区2010年手足口病患儿的病原学特点并探讨实时RT-PCR法检测手足口病患儿咽拭子和疱疹液样本病原体的敏感性.方法 收集94例手足口病(重症35例,轻症59例)患儿的咽拭子和疱疹液样本,以肠道病毒(EV)通用型、柯萨奇病毒A16(CA16)型、肠道病毒71(EV71)型核酸检测试剂盒,应用实时RT-PCR法检测样本中的EV,并结合临床资料对样本阳性率的样本进行比较.结果 94份咽拭子样本中,EV通用型阳性59例(62.77％),EV71阳性49例(52.13％),CA16阳性18例(19.15％),其中35份重症患儿咽拭子样本中EV通用型阳性31例(88.57％),EV71阳性23例(65.71％),CA16阳性7例(20.00％);94份疱疹液样本中EV通用型阳性44例(46.81％),EV71阳性33例(35.11％),CA16阳性15例(15.96％),其中35份重症患儿疱疹液样本中EV通用型阳性22例(62.86％),EV71阳性15例(42.86％),CA16阳性6例(17.14％).统计资料显示,咽拭子的阳性率高于疱疹液,EV71的检出率差异有统计学意义(x2=5.537,P＜0.05),重症患儿EV71阳性率高于轻症患儿,两组患儿的EV通用型及EV71检出差异有统计学意义(x2=15.889、4.125,P＜0.05).结论 2010年我院手足口病住院患儿的病原体主要为EV71和CA16,并且以EV71为主.应用实时RT-PCR法检测手足口病病原体,咽拭子的病毒检出率较疱疹液高,重症患儿的病毒检出率明显高于轻症患儿.     

2008-2010年湖南省哨点医院手足口病病原学检测结果及基因特征分析

目的针对2008-2010年湖南省哨点医院手足口病实验室检测结果及其基因特征进行分析,为湖南省手足口病的综合防治提供参考资料。方法收集湖南省哨点医院2008-2010年手足口病病例送检的咽拭子、粪便等标本,用RD、Hep-2细胞对标本进行病毒分离,应用RT-PCR及Real ti me-PCR技术检测原始样本和分离阳性毒株中的肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CVA16）、非EV71和CVA16的其它肠道病毒（EV）,将分离到的EV71采用RT-PCR方法进行VP1编码区基因扩增,并对扩增产物进行序列测定和分析。结果 2008-2010年湖南省哨点医院HFMD患者2 448例的各类标本中检测到EV71病毒阳性1 228份,CVA16病毒阳性169份,EV71和CVA16病毒核酸同时阳性12份,非EV71和CVA16的其它肠道病毒（以下简称为EV）阳性518份,病原谱构成以EV71型为主,其构成比为63.73%（1 228/1 927）,其次EV占26.88%（518/1 927）、CVA16占8.77%（169/1 927）、EV71＋CVA16混合感染占0.62%。三种不同型别肠道病毒在每月中均有报告,EV71为优势病原体,4-7月达到峰值,其次为EV型,CVA16型每月维持在低水平的感染。HFMD病例人群男性高于女性（1.95：1）,1~3岁儿童是重症病例数及死亡病例数最多年龄段;湖南省14个地市（州）HFMD的病原谱均以EV71型为主。对845份阳性标本进行病毒分离,共获得肠道病毒211株,其中EV71型131株,CVA16病毒19株,非EV71和CVA16的其它EV型49株,混合感染12株。13株EV71 VP1编码区全长序列之间核苷酸同源性为97.35%~100%,氨基酸同源性为98.2%~100%,基因型为C4a亚型。结论 EV71型是2008-2010年湖南省手足口病流行的主要病原,也是引起手足口重症病例和死亡病例的主要毒株类型,属于C4a亚型。