小鼠子宫内膜原代上皮细胞及间质细胞的优化分离和培养

目的:建立一种获得高纯度、高活性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞的优化分离和体外培养的方法,提供研究子宫内膜相关疾病的理想体外模型.方法:双酶消化、过滤、离心法分离和培养小鼠子宫内膜上皮细胞和间质细胞.用光镜观察培养细胞;双重免疫荧光标记法检测上皮细胞角蛋白(CK)和间质细胞波形蛋白(Vim)的表达;MTT法测定间质细胞的生长曲线.结果:培养24h,小鼠子宫内膜上皮细胞呈多边形、铺路石样生长,CK免疫荧光阳性,纯度达95％以上.正常原代小鼠子宫内膜上皮细胞不能传代,培养5～6天后细胞逐渐走向衰老.间质细胞呈长梭形、漩涡状生长,Vim免疫荧光阳性,纯度达95％以上.原代间质细胞可有限传代,3代内细胞形态无改变.传代间质细胞第3～6天为细胞对数生长期,生长曲线呈“S”形,倍增时间约为56.97h.结论:双酶消化、过滤、离心法可获得高纯度、高活性的具有典型的生物学细胞特性的子宫内膜上皮细胞和间质细胞.     

中性蛋白酶和胰酶分离阴道黏膜上皮细胞的对比研究

目的：建立新的阴道黏膜上皮细胞分离方法,体外培养阴道黏膜细胞供进一步研究。方法：利用中性蛋白酶（dispase）和胰酶分离人阴道黏膜上皮细胞,并通过形态学、角蛋白13（CK13）染色、细胞产量和克隆形成率等比较分离效果。结果：dispase组的细胞产量及克隆形成率更高。形态学和CK13染色均可见胰酶的分离作用并不完整,细胞大部分仍附于固有层,而dispase组基底细胞则完整地分离开。结论：酶消化法能成功分离阴道黏膜细胞,在体外生长良好,而dispase分离效果更好。     

中性蛋白酶和胰酶分离阴道黏膜上皮细胞的对比研究

目的:建立新的阴道黏膜上皮细胞分离方法,体外培养阴道黏膜细胞供进一步研究.方法:利用中性蛋白酶(dispase)和胰酶分离人阴道黏膜上皮细胞,并通过形态学、角蛋白13(CK13)染色、细胞产量和克隆形成率等比较分离效果.结果:dispase组的细胞产量及克隆形成率更高.形态学和CK13染色均可见胰酶的分离作用并不完整,细胞大部分仍附于固有层.而dispase组基底细胞则完整地分离开.结论:酶消化法能成功分离阴道黏膜细胞,在体外生长良好,而dispase分离效果更好.     

胆红素对原代培养不同类型大鼠神经元的毒性作用

目的　观察胆红素对大鼠不同类型神经元的毒性作用及机制。　方法　采用原代培养的大鼠小脑颗粒神经元、皮质神经元及海马神经元 ,观察低浓度 (0～ 17.1μm ol/ L)胆红素对其毒性的影响。用二乙酸荧光素染色法测定神经元存活率 ,荧光技术测定细胞内胆红素的含量。　结果　胆红素呈剂量依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡 ,在胆红素浓度为 4.3、8.6及 17.1μm ol/ L 时 ,颗粒神经元的存活率分别为 (5 0 .1± 3.1) %、(18.5± 2 .3) %和 (2 .0± 2 .4) % ;皮质神经元的存活率分别为(90 .7± 7.8) %、(85 .3± 5 .3) %和 (74.5± 2 .4) % ;海马神经元的存活率分别为 (75± 6 ) %、(6 2± 5 ) %和 (4 9± 5 ) %。胆红素对大脑皮质神经元及海马神经元的毒性明显低于颗粒神经元。加入胆红素 3h后 ,颗粒神经元、皮质及海马神经元细胞内胆红素的荧光强度分别为 33.4± 2 .3、10 .7± 3.0、2 1.9±4.3,小脑颗粒神经元内胆红素含量明显高于海马及皮质神经元 (P<0 .0 1)。　结论　小脑颗粒神经元较海马及皮质神经元对胆红素的毒性敏感 ,与细胞内胆红素含量不同有关     

人阴道黏膜干细胞的筛选与培养

目的:探讨人阴道黏膜干细胞(vaginal mucosa stem cells,VMSCs)的分离、筛选与适合的体外培养方法。方法:用胰酶、胶原酶混合消化法获得阴道黏膜细胞。以丝裂酶素C处理的小鼠成纤维细胞作滋养层细胞。将20min内黏附于Ⅳ型胶原的阴道黏膜细胞定为VMSCs。对筛选的VMSCs与原代人阴道黏膜细胞分别用碘化丙啶(PI)一步荧光染色法,用流式细胞仪检测其细胞周期。分为4组体外培养原代VMSCs,第1组用滋养层细胞+上皮细胞完全培养液;第2组滋养层细胞+DMEM/F12(3:1);第3组无滋养层细胞+上皮细胞完全培养液;第4组无滋养层细胞+DMEM/F12(3:1)。培养至12天,比较各组的CK19、CK10阳性细胞的比例、克隆形成率(clony forming efficiency,CFE)与凋亡前传代的次数。结果:筛选的VMSCs与原代人阴道黏膜细胞的G_0/G_1细胞比例、CK19、CK10细胞阳性比例均有统计学差异(P＜0．05)。用滋养层细胞+上皮细胞完全培养液培养VMSCs12天的CFE与CK19阳性细胞比例最高,CK10阳性细胞比例最低,体外培养VMSCs能稳定传代15代以上。结论:Ⅳ型胶原快速黏附法可有效地筛选VMSCs。滋养层细胞+上皮细胞完全培养液为体外培养原代VMSCs的较佳方法。     

人正常宫颈上皮细胞的体外分离及细胞活性比较

目的:在传统上皮细胞消化分离方法基础上加以比较,探求一种最佳宫颈上皮细胞的体外分离方法。方法:取10例新鲜的正常宫颈组织,将同一组织分成大小相同的3部分,采用3种不同的消化方法(胰蛋白酶消化法、Ⅰ型胶原酶消化法、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化法)获取正常宫颈上皮角质细胞悬液,采用罗丹明B(SRB)法测定其细胞活性,同时比较其贴壁率。结果:胰蛋白酶组、Ⅰ型胶原酶组、Ⅱ型中性蛋白酶+胰蛋白酶联合消化组的细胞活性分别为0.9335、0.9544、0.9438,两两比较差异显著(P0.01);Ⅰ型胶原酶消化组的细胞贴壁率显著高于其他两组(P0.01)。结论:Ⅰ型胶原酶消化法是一种最理想的分离宫颈上皮细胞的方法。     

人羊膜负载小鼠阴道黏膜干细胞生长特点及鉴定

目前,生物组织工程和干细胞技术日益成为医学界关注的热点.利用生物组织工程原理构建人类组织器官以替代病变或缺如的组织器官,达到医学治疗的目的,是干细胞技术发展的重要目标.     

人足月胎盘原代巨噬细胞分离与培养

目的:建立一种高效、可靠的人足月胎盘巨噬细胞分离与培养的方法。方法:收取正常足月患者胎盘组织,用胶原酶-胰蛋白酶-DNA酶连续消化、网筛过滤、红细胞裂解、淋巴细胞分离液离心分离。流式细胞术鉴定细胞纯度;对巨噬细胞进行形态学观察;CCK-8增殖实验分析细胞体外增殖活力。结果:利用此法可成功分离并培养胎盘巨噬细胞,并且每次实验可获得超过10~7个细胞。体外培养时,原代巨噬细胞4h开始贴壁。结论:本研究改进了前期足月胎盘巨噬细胞的分离与培养,提高了细胞纯度、活性及稳定性,并且一次性可获得大量的胎盘巨噬细胞。     

保妇康栓对萎缩性阴道炎阴道上皮细胞修复机制的实验研究

目的 探讨保妇康栓对萎缩性阴道炎的阴道黏膜上皮修复作用,为临床治疗阴道炎提供依据.方法 2020年8月至2020年12月于首都医科大学附属北京妇产医院进行相关动物实验.选取体重在320 ～350g之间的4月龄SPF级雌性Sprague-Dawley (SD)大鼠,随机分为正常组、模型组、保妇康栓组、雌激素组、雌激素+保...     

切除与保留黏膜的阴道后壁皱褶缝合法治疗阴道松弛的临床研究

目的 探讨切除与保留黏膜的阴道后壁皱褶缝合法治疗中重度阴道松弛的临床效果。方法 回顾性分析2019年3月至2020年6月郑州大学第三附属医院医疗美容科收治的中重度阴道松弛患者65例。依据手术方式分为：切除组31例,采用切除部分阴道后壁黏膜缝合法（阴道容2指为宜）;保留组34例,采用保留黏膜的阴道后壁皱褶缝合法。比较一般资料、围手术期情况和女性性功能指数问卷评分。结果 两组患者术后阴道动态压力、性欲望、性高潮、性唤醒的能力和性生活的满意度评分均较术前改善（P <0.05）,两组手术前后阴道润滑性和性交痛评分比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。保留组术后性唤醒能力、性满意度和性交痛评分较切除组改善明显（P <0.05）,但在性欲望、润滑性和性高潮的评分比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。两组患者切口均一期愈合,切除组于术后3个月出现性交痛1例,未行其他治疗,于术后6个月自行好转。结论 保留黏膜的阴道后壁皱褶缝合法治疗中重度阴道松弛效果显著,可有效改善性生活质量。     

一种高效分离原代人子宫内膜间质和上皮细胞的方法

目的建立一种高效分离子宫内膜上皮细胞与间质细胞的方法。方法收集全子宫切除患者的健康子宫内膜组织,将子宫内膜组织剪碎后,采用二次酶消化-二次过滤-差时贴壁的方法将人子宫内膜间质细胞(HUSC)与上皮细胞(HUEC)分离。采用流式细胞仪鉴定分离所得人子宫内膜基质和上皮细胞;并进一步对原代子宫内膜间质细胞进行诱导蜕膜化。结果流式细胞术检测分离的间质细胞波形蛋白阳性率为(97.0±2.5)%,上皮细胞角蛋白阳性率为(90.0±4.1)%。此外,使用环磷酸腺苷(c AMP)联合醋酸甲羟孕酮(MPA)体外诱导子宫内膜间质细胞产生了良好的蜕膜化反应。结论成功建立了一种高效分离原代人子宫内膜基质和上皮细胞的方法。     

Comparison between primary peritoneal and epithelial ovarian carcinoma: a population-based study

OBJECTIVE: This study was undertaken to characterize primary peritoneal carcinoma (PPC) compared with ovarian carcinoma (OvC). STUDY DESIGN: Within the framework of a nationwide epidemiologic Israeli study, 95 PPC patients were identified and compared with 117 FIGO stage III-IV epithelial OvC patients matched by age and continent of birth. Data were abstracted from medical records and personal interviews. RESULTS: Our data confirm the similarities between PPC and OvC. A higher rate of abdominal distention, volume of ascites, and malignant cells in ascitic fluid and lower rate of pelvic palpable mass and personal breast cancer history were found in the PPC compared with the OvC group. The overall survival was similar in both groups (30-33 months). In optimally cytoreduced patients, survival was better in the OvC group. Diameter of residual disease was associated with better survival only in the OvC group. CONCLUSION: The clinical differences do not enable a preoperative distinction between the neoplasms.     

Use of in vitro method to predict response of human ovarian carcinoma cells to chemotherapeutic agents

In vitro tissue culture and sensitivity tests were carried out on 16 cases of ovarian cancer to select the right anticancer drug(s) on an individual basis. The predictive accuracy of the in vitro drug sensitivity tests were 81.8%. The drug(s) suggested by in vitro tests did not reveal any correlation to the type of ovarian cancer. The drug sensitivity of cells from primary growth was different from that of secondary growth. The in vitro screening test also provided the choice of the next best drug(s), once the tumor had become resistant to a particular drug(s). Thus, the overall prognosis of patients at an advanced stage of malignancy could be improved with the help of in vitro predictive tests.     

人早孕绒毛组织的体外原代培养和人滋养细胞株的建立

目的:建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外原代培养的方法以及建立人滋养细胞株和初步评价。方法:采用胰酶和胶原酶I混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦方法对培养出的细胞进行形态和骨架评价。结果:显微镜下可见细胞呈多边形,细胞平铺生长,有细胞融合后形成的合体滋养层细胞;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富;胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的脂滴,以及细胞间紧密的桥粒样结构连接;直接免疫荧光双标记染色检测到角蛋白18和波形蛋白均为阳性。结论:采用胰酶和胶原酶I混合消化法可获得较纯的滋养细胞,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦检测细胞外形和骨架,确定该体外传至56代的细胞株为滋养细胞株。     

甘露糖结合受体在阴道上皮细胞抗念珠菌中的作用

目的:研究小鼠阴道上皮细胞抗念珠菌的作用机制。方法:用酶消化法将动情间期C57小鼠阴道分离成单个阴道上皮细胞,用流式细胞术及3H-葡萄糖液闪计数法研究甘露聚糖、高碘酸及钙离子螯合剂EGTA对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附及阴道上皮细胞抗白色念珠菌作用的影响。结果:甘露聚糖组(3mg/ml)阴道上皮细胞与白色念珠菌的粘附率为(4.47±1.89)%,显著低于对照组的(14.16±2.17)%(P<0.05),阴道上皮细胞对白色念珠菌生长抑制率为(43.29±9.79)%,高于对照组的(34.81±10.02)%,但差异无显著性(P>0.05);高碘酸组粘附率为(12.27±2.17)%,与对照组的差异无显著性(P>0.05),抑制率为(2.2±2.07)%,显著低于对照组(P<0.05);EGTA组粘附率为(0.4±0.29)%,抑制率为(1.6±1.53)%,均明显低于对照组(P<0.05)。结论:小鼠阴道上皮细胞表面的甘露糖结合受体介导了与白色念珠菌之间的粘附,此受体蛋白上的糖链可能参与了阴道上皮细胞的抗白色念珠菌作用。     

Development of vitrified-warmed mouse embryos co-cultured with polarized or non-polarized uterine epithelial cells using sequential culture media

PURPOSE: To our knowledge, little is known about the effect of polarized and non-polarized uterine epithelial cells on cryopreserved embryo growth. This study was, therefore, set up to investigate the effect of these monolayers together with sequential culture media on vitrified-warmed mouse embryos in terms of blastocyst development, blastocyst quality, incidence of apoptosis and related genes expression. METHODS: Two cell vitrified-warmed mouse embryos were cultured in G-1ver3 medium to the eight-cell stage when they were randomly assigned to three treatment groups of no co-culture (control), non-polarized and polarized mouse uterine epithelial monolayer co-culture. The culture medium was G-2ver3 during the treatment phase. After 96 h on treatment, the significance of differences were evaluated by the one way analysis of variance for continuous data. RESULTS: In the polarized monolayer group, the hatched blastocyst formation and blastocyst quality improved significantly than other two groups (P < 0.05). Whereas the incidence of apoptosis and related gene expression such as Bax were higher in the blastocysts of control group (P < 0.05). The relative abundance of Bcl-2 mRNA to the beta-tubulin was similar for all treatments. CONCLUSION: Co-culture system involving polarized uterine epithelial cells and sequential culture media is a promising method for the improvement of vitrified-warmed mouse embryo development.     

宫颈高危型HPV感染程度与阴道菌群、宫颈局部调节性T细胞的关系分析

目的 探讨宫颈高危型人乳头瘤病毒(human papilloma viruses,HPV)感染感染是否转阴与阴道菌群及宫颈局部调节性T细胞关系.方法 选择2018年9月至2019年12月南通市妇幼保健院收治的230例高危HPV感染患者为研究对象,所有患者随访6个月,观察两组阴道菌群和宫颈局部CD4+CD25+Foxp3...     

预防初次剖宫产指南对促进阴道试产的作用

剖宫产术是处理妊娠并发症和合并症、解决难产和宫内缺氧的重要手段。但近年剖宫产率的上升并未明显降低孕产妇和围产儿发病率及死亡率,相反增加了剖宫产术后并发症的发生率。文章分析剖宫产的风险,从孕期管理,个性化引产,提高助产技术,新产程的运用,胎儿监护的管理,臀位外倒转以及剖宫产后阴道试产等7个方面阐述有关预防剖宫产、促进阴道试产问题。