山东地区儿童先天性甲状腺功能减低症伴甲状腺发育不全TUBB1基因突变的研究

目的 探讨山东地区先天性甲状腺功能减低症（CH）伴甲状腺发育不全（TD）患儿TUBB1基因突变的类型和特点。方法 对山东地区289例确诊CH伴TD患儿进行TUBB1基因全编码区突变研究。提取患儿外周血全基因组DNA，PCR扩增TUBB1基因全编码区，对扩增产物进行Sanger测序，并进行生物信息学分析。结果 289例CH伴TD患儿中发现4例（1.4%） TUBB1基因存在c.952C > T （p.R318W）杂合变异，导致TUBB1蛋白第318位色氨酸变成精氨酸，根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南，该变异评级为"可能致病的"。结论 在山东地区CH伴TD患儿中发现了新的TUBB1基因变异，提示TUBB1基因可能是CH伴TD的候选致病基因。     

SRD5A2基因新型复合杂合突变致类固醇5-α还原酶2型缺乏症的遗传变异分析

该文报道1例类固醇5-α还原酶2型缺乏症患儿的临床特征及SRD5A2基因突变特点。患儿男性,2月龄,生后即出现尿道下裂及阴茎短小。提取患儿及父母外周血DNA,通过高通量测序技术对患儿DNA样本进行内分泌疾病相关基因的捕获测序,并对家系DNA样本进行Sanger测序验证。结果显示患儿SRD5A2基因存在c.680G > A（p.R227Q）和c.608G > A（p.G203D）复合杂合突变,其中c.680G > A来源于其父亲,为已知致病性突变,c.608G > A来源于其母亲,为新发现的突变。该研究为患儿病因诊断及该家系的遗传咨询提供了分子依据,并扩展了SRD5A2基因突变谱。     

先天性无痛无汗症一家系 2 例报告#br#

目的：报告先天性无痛无汗症(CIPA)一家系中2例患儿的临床表现及基因突变。方法收集2例患儿的临床表现、实验室检查和家族史等资料,并采集患儿及父母的外周血,采用Sanger法对酪氨酸激酶受体1型（neurotrophic tyrosine kinase receptor type 1,NTRK 1）基因进行直接测序,利用生物信息学分析其突变的致病性。结果2例患儿均为女性,主要临床表现为反复的非感染性发热、无汗、痛觉不敏感、精神发育迟滞,其中先证者多次轻微外伤后骨折。在先证者及其妹妹的 NTRK 1基因第9外显子内发现1个已报道的杂合突变c.851-33 T?>?A;同时也发现 NTRK 1基因第13号外显存在另1个新的突变c.1711 G?>?A（p.G 571 S）,通过生物信息软件分析预测其为有害性突变,突变位点具有保守性。患儿父、母亲分别携带c.851-33 T?>?A和c.1711 G?>?A突变。结论2例患儿均具有典型的临床表现,新发现的p.G 571 S突变丰富了NTRK 1基因突变谱。     

GNAS 基因新生突变致假性甲状旁腺功能减退症Ia 型1 例

目的鉴定导致假性甲状旁腺功能减退症(PHP)Ia型发病的GNAS基因突变。方法回顾分析1例PHP-Ia型患儿的临床资料。利用Sanger测序方法对患儿及其父母GNAS基因的13外显子进行检测。疑似致病突变在478例健康对照者中进行筛查,排除非致病性变异。利用深度测序方法对患儿及其父母外周静脉血的DNA进行测序,分析确定致病突变的起源。结果女性患儿,实验室检查结果示低血钙、高血磷及高甲状旁腺素(PTH);体格检查有Albright遗传性骨营养不良(AHO)畸形。临床表现符合PHP-Ia型特征。GNAS基因突变筛查发现1个尚未见报道的,位于6号外显子的错义突变(c.479GC,p.R160P)。父母及健康对照均者未发现该突变。针对突变所在的GNAS基因6号外显子在患儿及其父母外周静脉血的DNA中进行深度测序,每个样本均获得8 000条左右的序列。患儿父母的所有序列中均筛查到该突变。患儿序列中,3 984条携带G等位基因,4 019条携带C等位基因,两者的数目大致相同。深度测序的结果提示,该突变是来源于母系生殖细胞的新发突变。结论发现一个导致PHP-Ia型发生的GNAS基因新突变(c.479GC,p.R160P),推测该突变起源于母亲生殖细胞。     

小儿Sjögren-Larsson综合征临床特征及基因突变分析

目的 分析4例 Sjögren-Larsson 综合征 （Sjögren-Larsson syndrome, SLS）患儿临床特征及ALDH3A2基因突变, 以明确诊断, 并为遗传咨询和产前诊断提供依据。方法 收集 2008—2013 年中国人民解放军总医院儿童医学中心收治的 4 例 Sjögren-Larsson 综合征患儿的临床资料。抽取外周静脉血各3 mL, 应用二氧化硅法提取基因组DNA。采用聚合酶链反应（PCR）扩增ALDH3A2基因的11个外显子及其与内含子的连接区。PCR产物直接测序法检测基因突变。结果 来自3个家系的4例患儿均存在先天性鱼鳞病、智力低下、痉挛性截瘫或四肢瘫等典型临床表现。3例患儿 ALDH3A2基因测序均检出基因突变。分别为：例1, IVS5-1del G, c.1157A＞G（p.Asn386Ser）; 例2和例3, c.1157A＞G （p.Asn386Ser）纯合突变; 例4基因检测未发现编码区致病突变。结论 明确了 4 例 Sjögren-Larsson综合征患儿的基因诊断, 发现 2个ALDH3A2基因突变位点,其中 IVS5-1del G为新发突变。     

先天性甲状腺功能减退症患儿DUOX2基因突变的研究

目的 研究先天性甲状腺功能减退症(congenital hypothyroidism, CH)患儿DUOX2 基因突变类型和特点,并初步探讨基因型- 表现型的关系,为CH 患儿的基因诊断和基因治疗提供理论依据.方法 从10例CH 伴甲状腺肿大患儿外周血白细胞中提取基因组DNA,采用PCR 扩增和直接测序的方法对DUOX2 全部外显子进行基因突变检测.结果 在1 例患儿中发现DUOX2 基因第28 外显子cDNA 的3632 位点发生了G>A 的突变(c.G3632A),导致第1 211 密码子的精氨酸变为组氨酸(p.R1211H).在3 例患儿中发现DUOX2 基因第17 外显子cDNA 的2 033 位点发生了T>C 的突变(c.T2033C),导致第678 密码子的组氨酸变为精氨酸(p.H678R).此两种突变均为杂合型的错义突变.结论 CH 患儿存在DUOX2 基因杂合突变,该杂合突变可能引起蛋白质功能的改变从而导致CH;基因型与表现型的关系尚不明确,需要进一步的研究.     

双胎新生儿枫糖尿病及其基因突变分析

目的 分析一对经典型枫糖尿病（MSUD）汉族双胎新生儿的临床特点及其相关基因的致病性突变,为MSUD早期诊治提供指导。方法 收集患儿的临床及影像学资料,提取患儿及其父母的外周血,检测枫糖尿病相关基因（BCKDHA,BCKDHB,DBT,DLD）,确定基因突变位点,并进行生物信息学分析。结果 双胎患儿在BCKDHB基因上发现2个突变：错义突变c.304G > A（p.Gly102Arg）和无义突变c.331C > T（p.Arg111*）,均为杂合子,且c.304G > A（p.Gly102Arg）为国际上未报道的新突变。其父亲携带错义突变c.304G > A（p.Gly102Arg）,其母亲携带无义突变c.331C > T（p.Arg111*）。结论 BCKDHB基因c.331C > T（p.Arg111*）杂合突变是该双胎患儿的致病性突变,是枫糖尿病患儿临床表现的基因分子基础。     

先天性甲状腺功能减低症35例甲状腺过氧化物酶基因突变检测

目的 检测35例先天性甲状腺功能减低症(CH)患儿甲状腺过氧化物酶(TPO)基因突变.方法 抽取35例先天性甲状腺功能减低症患儿外周血并提取DNA,用PCR扩增患儿TPO基因所有17个外显子、外显子-内含子交界区以及3'端和5'端非翻译区,用DNA测序技术和限制性内切酶检测基因突变,并对发现突变的CH患儿父母进行对照分析.结果 5例CH患儿存在TPO基因突变:1例为c.961A＞G和c.2422delT突变复合杂合子,1例为c.2268insT和c.1477G＞A突变复合杂合子,3例为c.2268insT突变纯合子.其中c.961 A＞G[p.Thr321 Ala]为未见文献报道的突变.结论 在35例先天性甲状腺功能减低症检测到4种TPO基因突变.

Abstract：

Objective To identify thyroid peroxidase (TPO) gene mutations in 35 patients with congenital hypothyroidism. Method Genomic DNA was isolated from peripheral blood samples of 35 patients with congenital hypothyroidism. All of the 17 exons and flanking introns of TPO gene were amplified by PCR, then the PCR products were sequenced bi-directionally and were analyzed by restriction endonucleases. Result One patient had compound heterozygous mutations c. 961A ＞ G/c. 2422delT, one was c. 2268insT/c. 1477G ＞ A, and three was homozygous mutation c. 2268insT. The TPO gene mutation c.961A ＞ G [p. Thr321Ala] was one novel mutation. Conclusion High frequency mutation in TPO gene was detected in patients with congenital hypothyroidism.     

先天性肌营养不良1C型1例临床特点和FKRP基因突变分析

先天性肌营养不良1C型（MDClC）是由FKRP基因纯合或复合杂合突变引起。该文报道1例MDClC患儿的临床和基因突变特点。患儿,男,8月龄,因发育落后就诊。临床表现为翻身不佳、独坐不稳,肌张力低下,膝腱、跟腱反射不能引出,表情刻板,眼内斜视。基因检测证实患儿FKRP基因存在c.350C > G和c.1303C > T复合杂合突变;c.350C > G来自于母亲,为已报道的致病性错义突变;c.1303C > T来自于父亲,是新发错义突变,生物信息学软件分析预测其有致病可能。结合患儿早发肌张力低下、运动发育落后的临床特征和FKRP基因突变测序结果,确诊为MDC1C。     

先天性甲状腺功能减低症患儿DUOXA2基因突变研究

目的 探讨广州地区先天性甲状腺功能减低症(CH)患儿DUOXA2基因突变特点及其基因型与表型的关系。方法 采用PCR及直接测序法,对2011年至2012年出生、广州市新生儿筛查中心诊断并排除DUOX2基因突变的20例疑似甲状腺激素合成障碍的CH患者进行DUOXA2基因突变分析。结果 20例CH患者中2例为p.Y246X/p.Y246X纯合突变;4例为单等位基因杂合突变:分别为已知致病突变c.413-414ins A携带者2例,p.Y246X携带者1例,新突变p.G79R携带者1例。2~3岁再评估时显示,2例p.Y246X/p.Y246X纯合突变者分别表现为暂时性CH及轻度永久性CH;4例单等位基因突变者,除1例p.Y246X携带者表现为典型永久性CH外,其余3例携带者均为暂时性CH。结论 DUOXA2基因突变是广州地区疑似甲状腺激素合成障碍性CH患儿较常见的分子发病基础,多数表现为暂时性CH,未发现DUOXA2基因型与表型的关系。新突变p.G79R为致病性突变的可能性大。     

氨酰基-tRNA合成酶基因变异10例分析

目的 研究氨酰基-tRNA合成酶（ARS）缺陷相关疾病的临床特征。方法 回顾性分析2016年1月至2019年10月通过二代测序诊断的10例ARS基因变异患儿的临床资料及基因突变类型。结果 10例ARS基因变异患儿中，起病年龄为0~9岁，首发症状多为抽搐（7例）。临床表现为共济失调为主而智力轻度落后或正常，伴或不伴有癫痫（4例）；或儿童期起病的癫痫，后出现发育倒退（2例）；也可表现为新生儿期起病，严重癫痫脑病，出现肌阵挛、全面强直及痉挛发作（4例），伴有严重发育落后（3例）、喂养困难（2例）、听力损害（1例）等。10例患儿中，共检测出5种基因突变，包括AARS2（c.331G > C、c.2682+5G > A、c.2164C > T、c.761G > A，均为新突变）3例，DARS2（c.228-16C > A、c.536G > A，均为已报道突变）2例，CARS2（c.1036C > T、c.323T > G，均为新突变）1例，RARS2（c.1210A > G、c.622C > T，均为新突变）1例，AARS（c.1901T > A、c.229C > T、c.244C > T、c.961G > C、Chr16：70298860-70316687del、c.2248C > T，均为新突变）3例。结论 ARS基因缺陷相关疾病临床表型异质性高。该研究共发现5种ARS基因的14个未报道的变异，丰富了ARS缺陷相关疾病的临床表型及基因型。     

儿童铁粒幼红细胞贫血的临床特征及基因突变谱分析

目的 对铁粒幼红细胞贫血（SA）患儿的临床特征和基因突变谱进行分析，探讨目的基因捕获二代测序技术在SA患儿分子诊断中的临床应用价值，提高对SA的早期诊断和临床干预水平。方法 收集36例诊断为SA患儿的临床资料，采用目的基因捕获二代测序方法进行SA相关致病基因、与血红素合成及线粒体铁代谢有关的基因检测，分析基因型与临床表型的关系。结果 36例患儿中，32例为遗传性铁粒幼红细胞贫血（CSA），4例为骨髓增生异常综合征伴环形铁粒幼红细胞（MDS-RS）。共53%（19/36）患儿检测到CSA相关基因突变，其中ALAS2基因突变占47%（9/19），SLC25A38基因突变占21%（4/19），线粒体片段缺失占32%（6/19）。所有MDS-RS患儿均未检测到致病/可能致病性基因突变。89%（17/19）为已知致病突变，11%（2/19）为新变异。ALAS2基因新变异c.1153A > T （p.I385F）评级为"可能致病的"及SLC25A38基因新变异c.175C > T （p.Q59X）评级为"致病的"。结论 儿童CSA以ALAS2及SLC25A38基因突变为主，但线粒体基因片段缺失亦占有相当比例，对于婴儿期即出现的低增生性贫血，需考虑线粒体病的可能。     

13例早发型腓骨肌萎缩症的基因分型研究

目的 探讨早发型腓骨肌萎缩症（CMT）的临床特征及遗传变异分析。方法 以临床诊断为早发型CMT的患儿为研究对象，收集相关临床资料，进行肌电图及CMT相关基因检测并分析。结果 早发型CMT病例共13例，男9例（69%），女4例（31%），平均就诊年龄4.0±2.1岁，其中12例（92%）患儿起病年龄 < 2岁。9例（69%）诊断为CMT1型（其中Dejerine-Sottas综合征6人），1例（8%）为中间型，3例（23%）为CMT2型。13例患儿的基因检测结果显示6例（46%）患儿存在外周髓鞘蛋白22（PMP22）基因重复突变、3例（23%）髓鞘蛋白零（MPZ）基因插入突变及点突变、3例（23%）线粒体融合蛋白2（MFN2）基因点突变、1例（8%）人轻肽神经丝蛋白（NEFL）基因点突变，其中11例（85%）为已知致病突变，2例（15%）为新变异。MPZ基因新变异c.394C > G（p.P132A）评级为"可能致病的"及MFN2基因新变异c.326A > G（p.K109R）评级为"致病的"。结论 早发型CMT以PMP22基因重复突变及MPZ基因突变为主，临床分型以CMT1型为主，其中Dejerine-Sottas综合征占有相当比例。     

DGUOK相关线粒体DNA耗竭综合征1例报道及文献复习

该文患儿为4月龄男婴,主要临床表现为迁延性黄疸和肝脏肿大。多次生化检测结果均提示肝功能异常,伴甲胎蛋白和乳酸增高。遗传学分析结果证实患儿为DGUOK基因c.589C > T（p.Gln197Ter）和c.687G > C（p.Trp229Cys）突变,两者均为新突变类型,根据多种生物信息学软件及ACMG标准预测分别为致病性和可能致病性突变,从而确诊为DGUOK相关线粒体DNA耗竭综合征。文献复习发现,该病患儿以婴儿期起病的肝脏疾病表现为主要临床特征,部分患儿有神经系统表现。实验室检测结果主要表现为肝功能异常,血乳酸、血清铁蛋白和甲胎蛋白增高,以及低血糖。患儿DGUOK基因突变的异质性明显,其中错义突变最常见。该病预后不良,79.6%的患儿在3岁前死亡。     

脑肌酸缺乏综合征Ⅰ型两家系临床特征及SLC6A8基因变异分析

该文报道2例由SLC6A8基因变异导致的脑肌酸缺乏综合征Ⅰ型（CCDS1）的临床及遗传学特征。2例患儿均为男性,年龄分别为2岁10个月、8岁11个月,主要表现为精神运动发育落后、抽搐。均有一哥哥出现类似症状,患儿1母亲轻度智力低下。经家系基因分析发现X染色体上SLC6A8基因分别存在c.200G > A（p.Gly67Asp）和c.626_627delCT（p.Pro209Argfs^*87）变异,变异均来自患儿母亲。这2个变异分别评级为可能致病性变异、致病性变异,既往未见文献报道。该研究拓展了SLC6A8基因突变谱,对精神运动发育落后、癫痫的男性患者的诊断具有重要意义。     

4例遗传性球形红细胞增多症患者的临床及遗传学分析

4例遗传性球形红细胞增多症患儿（男、女各2例），年龄3岁7个月至5岁，均有轻中度贫血、轻度肝脾肿大，以及间接胆红素增高为主的黄疸、网织红细胞比例增高、外周血涂片球形红细胞 > 10%和渗透性脆性增加。高通量测序分析发现病例1、2的SLC4A1基因分别存在新突变：c.37G > A和c.340T > C，其父母该基因均未见异常。c.37G > A和c.340T > C突变经Mutation Taster预测有致病意义；Polyphen2预测值分别为0.87、0.83，提示可能有害；SIFT的预测值分别为0.008、0.09，提示可能有害。病例3、4的ANK1基因分别存在已报道的c.830A > G和c.985G > C杂合突变；病例3的父母未做基因检测；病例4的母亲为遗传性球形红细胞增多症患者，也检出ANK1基因c.985G > C杂合突变。病例3的Hb常低于80 g/L，于5岁6个月行脾切除术，术后定期复查Hb均大于105 g/L。HS是一种由于红细胞膜蛋白异常导致的遗传性溶血性疾病，基因检测可协助确诊。     

伴髓系恶性转化的Shwachman-Diamond综合征患儿的临床特征及基因突变分析

目的 探讨伴髓系恶性转化的Shwachman-Diamond综合征（SDS）患儿的临床特征及基因突变情况。方法 采用二代测序方法检测11例伴髓系恶性转化的SDS患儿的基因突变情况，分析患儿的临床特征和基因突变谱。结果 11例SDS患儿中，9例（82%）表现为儿童难治性血细胞减少（RCC），1例（9%）为骨髓增生异常综合征（MDS）伴原始细胞增多（MDS-EB），1例（9%）为急性髓系白血病伴MDS相关改变（AML-MRC）。发生髓系恶性转化的中位年龄为48个月（范围：7个月~14岁）。5例（45%）患儿表现为单纯的血液系统异常。所有患儿均检测到SBDS基因突变，常见的突变形式为c.258+2T > C纯合突变（5例，45%）和c.184A > T+c.258+2T > C复合杂合突变（3例，27%）。SBDS基因新变异c.634_635insAACATACCTGT+c.637_638delGA和c.8T > C分别评级为"致病的"和"可能致病的"。转化为RCC和MDS-EB/AML-MRC的患儿3年预期总体生存率分别为100%、0%（P=0.001）。结论 SDS患儿可能以血液系统症状为唯一表现，临床应引起重视。恶性转化的类型与预后相关。     

儿童EBV阳性噬血细胞综合征的遗传分析及其与Th1/Th2细胞因子的关系

目的 探讨遗传变异对EBV阳性噬血细胞综合征（HLH）患儿预后的影响及其与细胞因子的关系。方法 选取81例EBV阳性且已进行相关基因测序的HLH患儿，根据有无基因突变分为无突变组（n=35）和突变组（n=46），再根据基因突变方式分为单杂合突变（SHM）亚组、双杂合突变（DHM）亚组和纯合或复合杂合突变（H-CHM）亚组。测定各组患儿血清细胞因子水平，分析其与HLH基因突变的关系。结果 UNC13D基因突变出现频率最高（13/46，28%）。STXBP2 c.575G > A （p.R192H）和UNC13D c.604C > A （p.L202M）基因突变首次被报道，均判定为“可能致病的”。突变组TNF-α水平高于无突变组，IFN-γ水平低于无突变组（P < 0.05）。DHM亚组IL-4水平高于无突变组，H-CHM亚组IL-4水平低于DHM组（P < 0.0083）。H-CHM亚组的1年总生存率（39%±15%）低于无突变组、SHM亚组和DHM亚组（分别为85%±6%、86%±7%和91%±9%，P=0.001）。结论 具有基因突变的HLH患儿IFN-γ水平显著降低；H-CHM患儿的预后较差，而其他突变对其预后影响不显著，这可能有助于医生进行临床决策。