四季青中原儿茶酸在beagle犬体内的药动学研究

目的 建立LC-MS/MS法测定血浆中原儿茶酸的浓度,并对beagle犬灌胃四季青水煎液后原儿茶酸的药动学进行研究。方法 Beagle犬血浆样品以酮洛芬为内标,用乙腈沉淀蛋白,采用LC-MS/MS法进行分离和测定。色谱柱为C18(4.6mm×100mm, 2.7μm);流动相为80%乙腈-20%水(含0.1%甲酸),流速为0.2mL/min,柱温为30℃。质谱条件：电喷雾离子源(ESI),负离子模式,多反应离子监测(MRM),检测离子为原儿茶酸m/z 153.0→109.0,内标酮洛芬m/z 253.1→209.1。6只beagle犬单次灌胃四季青水煎液50mL(0.2g/mL)后,于给药前及给药后0.083、0.167、0.333、0.5、0.667、0.833、1、1.5、2、3、4和6h采血,以LC-MS/MS法测定原儿茶酸在beagle犬体内的血浆浓度,并用非房室模型计算药动学参数。结果 原儿茶酸浓度在0.05~2.00μg/mL范围内线性关系良好,定量下限为0.05μg/mL,批内和批间精密度RSD均小于8.6%,准确度为92.3%~102.0%。Beagle犬分别单次灌胃1g/kg(生药量)四季青水煎液后,其主要药动学参数Cmax为(1.53±0.33)μg/mL,Tmax为(0.42±0.09)h,t1/2为(0.80±0.16)h,MRT0~t 为(1.04±0.14)h,MRT0~∞ 为(1.32±0.26)h,AUC0~t为(1.90±0.35)(μg/mL)·h,AUC0-∞为(2.02±0.33)(μg/mL)·h。 结论 本实验中建立的LC-MS/MS法专属性强、快速灵敏,可以用于犬血浆中原儿茶酸的测定。Beagle犬单次灌胃四季青水煎液后,血浆中原儿茶酸能快速吸收,达峰速度较快,在体内能滞留一定时间,有利于四季青药效作用的发挥。     

高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中抗肿瘤化合物WJD-A-1及其药动学研究

目的：建立大鼠血浆中抗肿瘤化合物WJD-A-1的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）测定方法，并研究静脉注射WJD-A-1后在大鼠体内的药动学特征。方法：以苯海拉明为内标，大鼠血浆样品经甲醇-乙腈处理，用色谱柱Waters ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）进行分离，以甲醇-0.1%甲酸（80∶20）为流动相，采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式及多重反应监测模式，检测离子对分别为WJD-A-1（m/z 480.6→334.6，480.6→164.3）以及苯海拉明（m/z 256.0→166.8）。将建立的检测方法应用于测定大鼠静脉注射化合物WJD-A-1后的血浆浓度。结果：大鼠血浆中化合物WJD-A-1在5.40~5.40×10³ ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好；低、中、高3个质控浓度下的日内、日间精密度均小于10%，质控样品的准确度为97.45%~106.80%；提取回收率为95.40%~96.17%，无明显基质效应且稳定性良好。大鼠静脉给与化合物WJD-A-1三个剂量75，150，300 μg·kg^-1后，血浆中WJD-A-1的半衰期t_1/2分别为（0.10±0.05） h、（0.24±0.02） h、（0.51±0.06） h；其浓度-时间曲线下的面积AUC_（0-t）分别为（150.60±21.69）μg·h·L^-1、（883.07±135.68）μg·h·L^-1、（3 311.59±418.15）μg·h·L^-1。结论：该检测方法简单、快速、灵敏、准确，适用于抗肿瘤化合物WJD-A-1在大鼠血浆内的浓度测定及其药动学研究。药动学参数表明大鼠静脉注射该化合物后体内消除较快，且该化合物在大鼠体内的暴露量与给药剂量成正比。     

连翘酯苷A在大鼠体内的药动学及其血浆蛋白结合率研究

 目的：研究连翘酯苷A在大鼠体内的药动学及其血浆蛋白结合率。方法：大鼠按10 mg?kg-1静脉注射连翘酯苷A,不同时间点采集血样。采用高效液相色谱法(HPLC)测定其血药浓度,应用Topfit 2.0软件计算其主要药动学参数;采用超滤法研究连翘酯苷A的血浆蛋白结合率。结果：大鼠静脉注射连翘酯苷A后主要药动学参数为t1/2=(20.6±4.4) min,Ke=(0.034±0.006) min-1,Vd=(0.66±0.14) L,CL=(22.2±1.7) mL?min-1,MRT=(5.29±1.12) min,AUC0~100 min=(450.97±36.04) μg?min?mL-1,AUC0~∞=(453.22±36.37) μg?min?mL-1。连翘酯苷A在浓度为1,5和25 μg?mL-1时,大鼠平均血浆蛋白结合率分别为69.3%,67.2%和62.9%。结论：连翘酯苷A在大鼠体内符合二室开放模型,具有体内分布快、血药浓度下降迅速等特点。同时,血浆蛋白结合率结果表明,连翘酯苷A具有中等强度的血浆蛋白结合率。     

新型硫酸头孢喹肟乳液猪体内药物浓度测定

目的 测定硫酸头孢喹肟乳液在猪体内的血药浓度。方法 以吐温80、斯盘85为乳化剂,通过表面活性剂复配方法制备了新型硫酸头孢喹肟乳液制剂。与市售硫酸头孢喹肟混悬液对比研究硫酸头孢喹肟乳液生物等效性,将实验猪随机分组,并分别肌注硫酸头孢喹肟乳液及混悬液,采用高效液相色谱的方法测定其血药浓度,采用DAS 2.0药动学程序计算药动学参数。试验优化了硫酸头孢喹肟血液样品的处理方法,并考察了方法专属性。结果 硫酸头孢喹肟分析方法在0.10~10.00μg/mL之间呈良好的线性关系,回归方程：y=157.06x+18.347,r2=0.9996 (n=5),日内变异系数低于5.76%,日间变异系数低于8.35%;样品的平均回收率为93.4%~97.7%,完全符合生物样品分析要求;两组药动学行为均符合一级吸收二室模型,其主要药动学参数为：吸收半衰期(T1/2a)分别为(0.842±0.015)h和(0.825±0.021)h;达峰时间(Tmax)分别为(1.357±0.043)h和(1.345±0.051)h;峰浓度(Cmax)分别为(3.386±0.083)μg/mL和(3.526±0.091)μg/mL;消除半衰期(T1/2β)分别为(1.054±0.059)h和(1.025±0.087)h;药时曲线下面积(AUC0~t)达(12.706±0.553)mg·h/L和(12.787±0.394)mg·h/L。对两实验组AUC0~t、Cmax、Tmax进行差异性分析,3种药代参数组间差异均不显著(P＞0.05)。结论 自制硫酸头孢喹肟乳液与市售硫酸头孢喹肟混悬液具有生物等效性。     

橙黄决明素在正常大鼠体内的药动学

目的:建立高效液相色谱测定大鼠血浆中橙黄决明素含量的方法,研究橙黄决明素在大鼠体内的药动学过程。方法:橙黄决明素灌胃给药7.2 mg·kg^-1后于5,10,20,30 min及1,2,3,4,6,8,10,12,16,24 h断尾取血,液-液萃取法处理血浆样品,HPLC测定血浆中橙黄决明素浓度,以3P97软件拟合药动学参数。结果:血浆中橙黄决明素在0.12~7.62 μg·ml^-1线性良好,相关系数为0.999 5(n=5),低、中、高浓度萃取回收率均> 95%,日内、日间RSD均< 10%,符合要求。灌胃给药后,大鼠血浆中其药动学过程符合二室模型。主要药动学参数(拟合值):C_max为3.96±0.51 mg·L^-1,T_max为16.31±2.85 min,t_1/2β为5.16±0.77 h,CL为0.21±0.03 L·h^-1·kg^-1,AUC为7.91±1.02 mg·min^-1·L^-1,MRT为2.26±0.97 min。结论:本实验建立的血浆处理法及HPLC法适用于大鼠体内橙黄决明素的含量测定和药动学研究,灌胃给药后橙黄决明素吸收迅速,具有较好的应用前景。     

高效液相-质谱法研究大鼠体内香贝注射液的药动学

目的:以苦木碱丁为检定物,测定SD大鼠血浆中苦木碱丁的含量,研究香贝注射液药动学过程。方法:2组SD大鼠分别经尾静脉注射2.5,10mL.kg-1的香贝注射液后采集血样,用高效液相-质谱联用(HPLC-MS)的检测方法,测定各时间点血浆中的药物浓度,应用实用药动学软件3P97拟合计算药动学参数。结果:SD大鼠尾静脉给药后的血药浓度-时间曲线符合二室开放模型,2.5,10mL.kg-12个剂量对应的主要药动学参数分别为:(1)t1/2α为0.58min和0.44min;(2)t1/2β分别为6.64min和7.06min;(3)曲线下面积(AUC)为192.24μg.L-1.min-1和1 060.73μg.L-1.min-1;(4)血浆清除率(CL)为:18.21mL.min-1和13.20mL.min-1。结论:香贝注射液静脉给药后,在大鼠体内具有分布很快,消除迅速的特点。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中瑞格列奈和二甲双胍及其在人体药动学中的应用

目的:建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定人血浆中瑞格列奈和二甲双胍浓度的方法,并进行人体药动学研究。方法:以乙腈沉淀蛋白处理血浆样品,替米沙坦做内标,采用Kromasil 60-5CN色谱柱(2.1 mm×100 mm, 5 μm),流动相为20 mmol·L^-1醋酸铵水溶液(含0.2%甲酸)-乙腈(45:55);质谱采用电喷雾离子化-多反应离子监测(ESI-MRM)。并测定12名健康志愿者单剂量口服瑞格列奈盐酸二甲双胍复方片(2 mg:500 mg)后瑞格列奈和二甲双胍的血浆浓度。结果:瑞格列奈和二甲双胍分别在0.05~50 μg·L^-1、2~2 000 μg·L^-1范围内线性良好,定量下限分别为0.05 μg·L^-1和2 μg·L^-1,日内日间精密度均小于8%,提取回收率分别为77.32%~80.65%和78.98%~82.46%。瑞格列奈和二甲双胍的主要药动学参数C_max分别为(29.50±9.57),(1 167±197.77)μg·L^-1;t_max分别为(0.83±0.39),(1.88±0.64)h;t_1/2分别为(1.11±0.38),(4.31±0.86)h;AUC_0→∞分别为(56.90±20.31),(7 407.32±1 653.25)μg·L^-1·h^-1。结论:建立的分析方法灵敏、准确可靠,样品处理快速、简便,适用于瑞格列奈/盐酸二甲双胍复方片人体药动学和生物等效性研究。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度

目的：建立快速灵敏高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度,并研究其单用及联用时在其体内的药动学特征。方法：色谱柱：Diamonsil ODS C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（70∶30,V/V）;流速：0.8 mL·min^-1,进样量10 μL。采用ESI+源,选择性离子检测方式（SIM）,对离子反应m/z 559.2（阿托伐他汀钙）,m/z 406.0（非洛地平）,m/z 325.2（内标为甲基睾酮）进行检测。结果：阿托伐他汀钙和非洛地平在0.01~0.8 μg·mL^-1范围内线性关系良好,定量下限0.01 μg·mL^-1,精密度、稳定性均符合要求。与单用组相比,药物联用组阿托伐他汀钙的最大血药浓度由（677.74±100.86）μg·L^-1增加到（789.80±12.16）μg·L^-1,血浆药物-时间曲线下面积由（5 755.90±1 210.84）h·μg·L^-1增加到（6 931.74±228.11）h·μg·L^-1,半衰期由（3.77±0.89）h变为（3.60±0.36）h;联用组中非洛地平的最大血药浓度由（492.40±69.30）μg·L^-1上升到（751.50±26.12）μg·L^-1,血浆曲线下面积由（4 150.66±725.61）h·μg·L^-1增加到（6 854.87±725.61）h·μg·L^-1,半衰期由（2.64±0.20）h延长至（2.88±0.23）h。结论：该方法灵敏、准确、可靠,专属性强,适用于阿托伐他汀钙和非洛地平在大鼠体内的药动学研究。     

高效液相色谱法测定大鼠血浆中总槲皮素浓度及其药动学的应用

目的：建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中总槲皮素的浓度,并应用于其药动学研究。方法：血浆样本在酸性条件下经酶水解后,经乙酸乙酯进行萃取,以乙腈-0.2%磷酸水溶液（30：70）为流动相,阿魏酸作内标,采用Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm,5 μm）色谱柱进行分离,检测波长366 nm,进样体积20 μL,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃。8只SD雄性大鼠单次灌胃槲皮素50 mg·kg^-1后采集血样,以高效液相色谱法测定槲皮素浓度,采用DAS3.0软件计算药动学参数并进行分析。结果：槲皮素在0.10~10.07 μg·mL^-1范围内线性关系良好,方法定量下限为0.10 μg·mL^-1,回收率为88.85%~101.66%,日内精密度为1.11%~2.79%,日间精密度为2.60%~3.64%。大鼠单次灌胃50 mg·kg^-1的槲皮素后的C_max=（1.97±0.41） μg·mL^-1,t_1/2=（6.10±2.84） h,t_max=（8.63±3.89）h,AUC_0-∞=（29.07±8.24） μg·h·mL^-1。结论：该方法专属性强、灵敏度高,能准确地定量大鼠血浆中槲皮素的总浓度,适用于槲皮素的药代动力学研究。     

新型钙离子拮抗剂DY-9836在大鼠体内的药动学

目的建立测定大鼠血浆中新型钙离子拮抗剂DY-9836浓度的高效液相色谱-荧光检测(HPLCFl)法,研究DY-9836在大鼠体内的药动学。方法以维拉帕米为内标,色谱柱:Extend C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙酸钠(pH=6.5)-乙腈(50∶50,V/V);流速:1 mL·min-1;柱温:35℃;λex=304 nm,λem=335 nm。大鼠灌胃后,测定血浆中DY-9836的浓度,采用WinNonLin 5.2软件计算药动学参数。结果 DY-9836的血药浓度线性范围为0.327～4.083μg·mL-1;方法回收率分别为93.35%～98.08%;DY-9836在大鼠体内的主要药动学参数:Ke为(0.05±0.01)h-1、t1/2为(14.20±0.92)h、tmax为(1.25±0.42)h、ρmax为(2.98±0.56)μg·mL-1、AUC0-t为(37.74±2.00)μg·h·mL-1、AUC0-∞为(41.71±1.90)μg·h·mL-1、CL为(480.3±22.0)mL·h-1·kg-1、MRT0-t为(19.30±0.60)h。结论本实验所建立的测定血浆中DY-9836的HPLC-Fl方法简便、快速、灵敏、准确、可靠。     

高效液相色谱法测定大鼠血浆中欧前胡素与异欧前胡素的浓度及药动学研究

目的：建立利用高效液相色谱法检测大鼠血浆内欧前胡素及异欧前胡素的方法,并进行灌胃及静脉注射后药动学研究。方法：血浆样品经乙醚萃取,吸取上层液置于氮气流下吹干,甲醇溶解后取20 μL进行检测。采用Agilent 1100型液相色谱仪,Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,Agilent C₁₈（12.5 mm×4.6 mm）预柱,流动相为甲醇-水（70：30）,流速为1.0 mL·min^-1,紫外波长为300 nm,进样体积为20 μL,蛇床子素作为内标物质。大鼠灌胃和静脉注射欧前胡素与异欧前胡素,定时剪尾取血测定血浆中药物浓度,药动学参数以3p97统计学软件处理。结果：欧前胡素及异欧前胡素浓度均为0.05~36.45 μg·mL^-1时,线性较好（r=0.999 9）;定量限均为0.05 μg·mL^-1;日内、日间精密度RSD<15%;方法回收率均在80%~90%之间;低、中、高3个系列规格的血浆样品在4℃保存7 d、-20℃及-80℃各保存2个月后结果均保持稳定。灌胃给予含欧前胡素与异欧前胡素剂量均为30 mg·kg^-1混合溶液,房室模型均拟合为一室模型：欧前胡素t_1/2Ke（74.7±18.15）min,t_max（8.7±1.54） min,C_max（1.15±0.16） μg·mL^-1,AUC（124.42±44.74） μg·min·mL^-1,CL/F（s）（0.25±0.1） L·kg^-1·min^-1,V/F（c）（24.44±3.55） L·kg^-1;异欧前胡素t_1/2Ke（60.48±14.22）min,t_max（8.6±1.21）min,C_max（0.3±0.04）μg·mL^-1,AUC（27.27±5.46） μg·min·mL^-1,CL/F（s）（1.14±0.25）L·kg^-1·min^-1,V/F（c）（96.42±12.96）L·kg^-1。静脉给予含欧前胡素与异欧前胡素剂量均为20 mg·kg^-1混合溶液,房室模型均拟合为二室模型：欧前胡素t_1/2β（85.64±23.25） min,AUC（1 152.02±555.25） μg·min·mL^-1,CL（s）（0.022 8±0.014 2） L·kg^-1·min^-1,V（c）（0.73±0.31）L·kg^-1;异欧前胡素t_1/2β（89.28±29.02） min,AUC（210.26±75.76） μg·min·mL^-1,CL（s）（0.105 4±0.034 1） L·kg^-1·min^-1,V（c）（2.74±0.6） L·kg^-1。欧前胡素与异欧前胡素灌胃给药,其绝对生物利用度经过计算结果为7.20%与8.65%。结论：经方法学验证,此方法具有操作简单、专属性强和准确率高等特点,能满足大鼠体内中欧前胡素与异欧前胡素含量检测及药动学研究。     

Determination of mefunidone,a novel anti-fibrotic agent analogue of pirfenidone,in plasma by HPLC-UV and its pharmacokinetic application in rats

Mefunidone (MFD), a pirfenidone analogue, has been suggested as a novel anti-fibrotic agent in preclinical research stage. In this work, we developed a sensitive and specified HPLC-UV method and validated it for the determination of MFD in rat plasma. A cost-effective protein precipitation method using methanol was used to process the plasma samples, and pirfenidone was employed as the internal standard (IS). Chromatographic separation was performed on an Agilent ZORBAX SB-Aq column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with a mobile phase consisting of 10 mM ammonium formate solution (pH 3.0, adjusted by 1.5‰ formic acid)–acetonitrile–methanol (60:23:17, v/v/v) at a flow rate of 1.0 mL/min, and the samples were monitored at an ultraviolet wavelength of 245 nm. The retention times of MFD and IS were 5.5 and 7.8 min, respectively. The calibration curve was linear (r² = 0.9997) between 0.1 and 20 μg/mL. The intra- and inter-day precisions were within 8.6%, and the bias of intra- and inter-accuracies of the method was between –4.2% and 6.5%. The method was successfully applied to pharmacokinetic study of MFD after i.g. and i.v. administration in rats. The elimination half-life was (3.41±0.81) h for i.g. administration and (2.26±0.87) h for i.v. administration. The absolute bioavailability of MFD in rat was 79.1%.     

大鼠血浆中硫醚-雷贝拉唑浓度测定方法的建立和验证

目的:建立高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)测定大鼠血浆中硫醚-雷贝拉唑浓度。方法:血浆样品以地西泮为内标,乙腈沉淀蛋白处理,采用HPLC-MS法检测。色谱柱为Inertsil^®ODS - 3(4.6 mm ×150 mm,5 μm),流动相为乙腈-5 mmol·L ^-1醋酸铵溶液(65:35),流速为0.7 ml·min^-1。用ESI离子源,正离子检测模式,选择监测质荷比(m/z)为344.2(硫醚-雷贝拉唑)和285.1(内标)的离子峰。结果:硫醚-雷贝拉唑在2 ~ 800 ng·ml^-1浓度范围内线性关系良好,最低定量限为2 ng·ml^-1。提取回收率为102.9%~109.3%,日内、日间精密度分别小于3.9%和6.4%。结论:本方法专属性强,灵敏度高,简便易行,可用于雷贝拉唑大鼠体内药动学的研究。     

Determination of corosolic acid, a natural potential anti-diabetes compound, in rat plasma by high-performance liquid chromatography-mass spectrometry and its application to pharmacokinetic and bioavailability studies

A simple, robust, and sensitive high-performance liquid chromatography/mass spectrometric method was developed for the determination of corosolic acid, a potential anti-diabetes substance, in rat plasma using glycyrrhetinic acid as the internal standard (IS). This method involved a liquid-liquid extraction with acetic ether and a subsequent analysis performed on an LC-MS system which contained an electrospray ionization interface. Chromatographic separation was performed using an ODS column, and the mobile phase was composed of methanol and 5?mmol/L ammonium acetate (88?:?12, v/v). Good linearity was observed over the concentration range of 20-10?,000 ng/mL with a correlation coefficient (r2?≥?0.995. The method was proved to be accurate and reliable and was applied to a pharmacokinetic study in the rat following intragastric and intravenous administration of corosolic acid.     

Liquid chromatographic/mass spectrometry assay of triptolide in dog plasma and its application to pharmacokinetic study

A rapid and sensitive method for the determination of triptolide in dog plasma was developed and validated, using high-performance liquid chromatography/atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry (LC/APCI/MS). Sample preparation consisted of liquid-liquid extraction with ethyl acetate from dog plasma. The analytes and internal standard prednisolone were well separated on a Zorbax Extend-C18 analytical column. Detection was performed on a triple quadrupole mass spectrometer using selected-ion monitoring (SIM) mode on the deprotonated ions [M-H]- at m/z 359. Calibration curves were linear over the concentration range of 0.5-200 ng/mL of triptolide with the intra- and inter-day precision (the relative standard deviation values) were being less than 7%. Triptolide was stable under different conditions. The intra-day and inter-day accuracy were 99.3-105.2% and 101.3-107.0%, respectively. The lower limit of quantification was 0.5 ng/mL. The method was successfully applied to a pharmacokinetic study after an intragastric administration (i.g.) of triptolide to dogs with a dose of 0.05 mg/kg. The results confirm that the assay is suitable for the pharmacokinetic study of triptolide.