制备液相色谱法分离纯化恩拉霉素预混剂中恩拉霉素A和恩拉霉素B

目的建立从恩拉霉素预混剂中分离纯化恩拉霉素A和恩拉霉素B的制备高效液相色谱(Pre-HPLC)方法。方法采用正丁醇与酸水反复萃取,利用Pre-HPLC方法对恩拉霉素精制品中的恩拉霉素A和恩拉霉素B进行分离纯化。结果用紫外、质谱和核磁共振法进行结构确证,经分析型HPLC检查,恩拉霉素A和恩拉霉素B的纯度均达98.0%以上。结论由该法制备恩拉霉素A和恩拉霉素B简便、快速,所得产物纯度高,适合于其对照品的制备。     

恩拉霉素的最新研究进展

本文从恩拉霉素的抗菌活性,在动物生产中的应用研究,检测方法和分离纯化方法的研究,生产工艺的研究,国内外市场现状五个方面综述了恩拉霉素的最新研究进展,并对恩拉霉素未来的研究方向及研究重点进行了展望.旨在为恩拉霉素的生产和应用等方面的研究提供参考和借鉴.     

恩拉霉素与雷莫拉宁生物合成研究进展

目前耐药革兰阳性菌在医院感染中的比例不断上升,具有新型革兰阳性病原菌抑制机制的恩拉霉素和雷莫拉宁成为目前研究的热点.含有17个氨基酸的肽类抗生素,恩拉霉素和雷莫拉宁的生物合成基因簇已分别从链霉菌Streptomyces fungicidicus ATCC21013和游动放线菌Actinoplanes sp.ATCC33076中克隆到.本文综述了恩拉霉素与雷莫拉宁生物合成途径研究的最新进展,为进一步利用基因工程手段对其进行结构改造提供依据.     

HPLC法测定预混剂中恩拉霉素的含量

目的采用高效液相色谱法测定饲料中恩拉霉素的含量。方法测定色谱条件为：色谱柱为C18（5um,4．6mm×250mm）,流动相为0．05mol／L磷酸二氢钠-乙腈（70：30）,检测波长为267nm。结果恩拉霉素A及恩拉霉素B在12．5～200ug/mL范围内线性关系良好,相关系数R。分别为0．9960和0．9945;恩拉霉素A的回收率为96．4％-101．6％,恩拉霉素B的回收率为96．8％～101．2％。恩拉霉素A及恩拉霉素B的RSD分别为0．65％和1．12％。结论该方法线性范围宽、分析时间短、样品前处理简便、定量结果准确、重复性好,为其质量控制提供了依据。     

恩拉霉素高产菌株选育的研究#br#

目的 进一步提高恩拉霉素发酵生产水平。方法 对杀真菌链霉菌RN16-7进行ARTP(常压室温等离子体)等离子与庆大霉素复合处理。结果 经大量筛选,得到了恩拉霉素高产突变株RN16-242,其遗传性状稳定,发酵效价达7423u/mL,比出发菌株RN16-7(4703u/mL)提高了57.8%。菌株保存,采用甘油管低温保藏法、沙土管保藏法和冷冻真空干燥保藏法进行了比较,结果是甘油管低温保藏法最好。     

注射用替考拉宁的组分分析

目的 采用高效液相色谱法测定4个厂家生产的注射用替考拉宁的组分含量,比较其异同;采用微生物检定法测定效价,初步探讨替考拉宁的组分与活性的关系.方法 色谱柱为TSK-GEL ODS-100V(3),4.6mm×150mm;流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈,梯度洗脱;流速1.8mL/min;柱温40℃;检测波长254nm.培养基为抗生素检定用I号培养基,pH7.8～8.0;灭菌缓冲液为磷酸盐缓冲液,pH6.0;试验菌为枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501];高、低浓度分别为20U/mL,和10U/mL.结果 4个厂家的产品的TA2-1和TA2-3的含量差异不大,但TA2-2、TA2-4和TA2-5的含量有较大差异;TA2-4和TA2-5的含量较高的产品的活性较高.结论 替考拉宁的组分与活性的关系密切,研究者可据此对注射用替考拉宁进行有效的质量控制.     

盐酸大观霉素效价测定方法的探讨

盐酸大观霉素含量测定文献规定为微生物效价测定方法。笔者对此方法进行改进，结果与原方法比较抑菌圈清晰、直径大小符合规定、重现性好、效价测定与原方法无显著性差异。     

浊度法测定阿奇霉素的效价

目的建立浊度法测定阿奇霉素效价的方法。方法金黄色葡萄球菌为实验菌,加菌量1.5%~2.0%(V/V),培养温度35℃~37℃,培养时间4~6h测定。结果阿奇霉素线性浓度1.42u·mL-1~5.67u·mL-1,(R=0.99)。二剂量法的平均回收率103.4%(n=6),RSD为1.7%。结论本方法灵敏,快速、可作为测定阿奇霉素效价的方法。     

克拉霉素的不良反应

对近几年关于克拉霉素的不良反应文献资料进行综述。其不良反应主要为过敏反应、糠疗、心律失常、肝炎、眩晕、失眠以及呃逆等。     

An approach to on-line electrospray mass spectrometric detection of polypeptide antibiotics of enramycin for high-speed counter-current chromatographic separation

In the field of pharmaceutical and biomedical analysis of peptides, a rapid on-line detection and identification for a methodology have been required for the discovery of new biological active products. In this study, a high-speed counter-current chromatography with electrospray mass spectrometry (HSCCC/ESI-MS) was developed for the on-line detection and purification of polypeptide antibiotics of enramycin-A and -B. The analytes were purified on HSCCC model CCC-1000 (multi-layer coil planet centrifuge) with a volatile solvent of two-phase system composed of n-butanol/hexane/0.05% aqueous trifluoroacetic acid solution (43/7/50, V/V/V), and detected on an LCMS-2010EV quadrupole mass spectrometer fitted with an ESI source system in positive ionization following scan mode (m/z 100–2000). The HSCCC/ESI-MS peaks indicated that enramycin-A (major m/z 786 [M+3H]³⁺ and minor m/z 1179 [M+2H]²⁺) and enramycin-B (major m/z 791 [M+3H]³⁺ and minor m/z 1185 [M+2H]²⁺) have the peak resolution value of 2.9 from 15 mg of loaded enramycin powder. The HSCCC collected amounts of the peak fractions were additionally 4.3 mg (enramycin-A), and 5.9 mg (enramycin-B), respectively. These purified substances were analyzed by LC/ESI-MS with scan positive mode. Based on the LC/ESI-MS chromatograms and spectra of the fractions, enramycin-A and -B were estimated to be over 95% purity. The overall results indicate that this approach of HSCCC/ESI-MS is a powerful technique for the purification and identification of bioactive peptides.     

清肝化瘀合剂质量标准的建立

目的建立清肝化瘀合剂的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别处方中的主要药味绞股蓝、山楂、赤芍、白芍、丹参、川芎;采用Hypersil 0DS₂（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-0.8%磷酸水溶液-水（16:11:73,V/V/V）,流速0.8 mL·min^-1,检测波长230 nm,柱温25℃。结果主要药味具有鉴别特征;芍药苷进样量在16.5～82.5 mg·L^-1时与峰面积之间的线性关系为y=29.9794x-40.2444,r=0.999 9,平均加样回收率为98.89%,RSD为1.60%。结论该法简便准确,可作为该制剂质量控制的标准方法。     

妇痛宁颗粒质量标准研究

目的:建立妇痛宁颗粒质量标准.方法:采用薄层色谱法对方中赤芍、丹参、肉桂进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对丹酚酸B进行含量测定.色谱柱为Agilent Eclipse Plus-C18(100 mm ×4.6 mm,3.5μm),流动相为甲醇-甲酸-水-乙腈(28∶1∶61∶ 10),流速为1.0 ml/min;柱温为25℃.结果:薄层色谱中的特征斑点明显,重现性好,无干扰;丹酚酸B在0.258 4 ～ 155.04 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为99.43％,RSD为1.25％.结论:本法专属性强、准确、快速,可用于妇痛宁颗粒的质量控制.     

八宝眼粉质量标准的研究

目的:建立八宝眼粉的质量控制方法.方法:采用化学反应和薄层色谱法(TLC)鉴别方中炉甘石、人工牛黄、冰片;采用气相色谱法(GC)测定冰片的含量.结果:鉴别效果满意;冰片在0.09808～0.78464 μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为101.5%,RSD=1.40%(n=5).结论:本方法简便、快速准确,可作为该制剂质量控制方法.     

烫伤油质量标准研究

目的提高烫伤油的质量标准,更好地控制产品质量。方法采用薄层色谱法对紫草、黄芩和大黄进行定性鉴别,采用气相色谱法对冰片进行含量测定。结果紫草、黄芩和大黄的薄层鉴别斑点清晰,阴性无干扰。所测冰片的回收率为98.96%,RSD为1.60%(n=6)。结论该方法准确、灵敏、重现性好,可用于烫伤油质量控制。     

皮炎消的质量标准

目的：用薄层扫描法测定“皮炎消”中的苦参碱含量。方法：外用制剂“皮炎消”碱化后以乙醚萃取，点样于硅胶Ｇ 板上。氯仿∶甲醇∶氨水（５∶１∶０．１）为展开剂，２０％ 甘油改良碘化铋钾液显色，薄层扫描定性及定量。结果：苦参碱检出范围在１ ．０３ ～５．１５ μｇ 之间，１５ ～９０ ｍｉｎ 内稳定。ＲＳＤ＝２ ．１７ ％ 。结论：本法快速，定量准确，能用于“皮炎消”的质量控制。     

比浊法快速测定硫酸多黏菌素E效价

研究比浊法测定硫酸多黏菌素E效价的影响因素和规律，建立了硫酸多黏菌素E的比浊法快速测定方法，检测时间由杯碟法的20h缩短到4h。当硫酸多黏菌素E的效价为30～100u／ml时，检测菌液接种浓度为5％，培养时间为4h，吸光度对数值与抗生素效价具有良好的线性关系。本法重现性好，相对误差小于5％。     

第4批蛋白含量测定国家标准品的制备和标定

目的:建立蛋白含量测定用国家标准品。方法:按2005年版中国药典三部、WHO 和 ICH 标准品有关要求,对标准品进行制备、分装、冻干、质量检测并开展协作标定。结果:批号为2002/04的蛋白含量测定标准品经检测,外观、无菌实验合格。pH 为7.5,水分含量为0.7%。蛋白含量经过6家单位共计39次的凯氏定氮法协作标定后,确定其含量为21.24 mg·支~(-1),标准差为0.694 mg·支~(-1),总体 RSD 为1.06%。采用 Lowry 法对第3批蛋白含量测定国家标准品与该批蛋白标准品进行比较后,结果表明两者无显著差异。结论:该批蛋白含量测定标准品各项指标均符合要求,可作为国家标准用于 Lowry 法蛋白含量测定,特定为第4批蛋白含量测定国家标准品。     

金胆胶囊质量标准的研究

目的建立金胆胶囊质量标准。方法采用TLC法对处方中金钱草、虎杖、龙胆、猪胆膏进行定性鉴别,并用HPLC法对制剂中山柰素、槲皮素进行含量测定。结果薄层色谱特征明显,阴性无干扰。山柰素在0.018μg~0.539μg,槲皮素在0.00538μg~0.1614μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率分别为101.1%、91.3%,RSD分别为1.4%、1.9%(n=5)。结论本方法具有简便易行、重现性好,结果可靠、专属性强等特点,可用于该制剂的质量控制。