广东省肺炎克雷伯菌临床分离株病原特征分析

目的 了解广东省肺炎克雷伯菌临床分离株的抗生素耐药情况与多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集了广东省9个地市的肺炎克雷伯菌临床分离株102株,采用微量肉汤稀释法测定菌株对30种抗菌药物的敏感性,同时对所有分离株进行MLST分型,分析其菌群分布特征。结果 根据药敏试验与黏液拉丝试验结果,广东省9个地市102株肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药特点可分成4类,即(ESBLs)KP(43株,其中9株为ESBLs-hvKP)、CRKP(8株,其中1株为CR-hvKP)、较敏感的KP(30株,均为hvKP)和其它类型多重耐药KP(MDRKP)(21株,其中6株为MDR-hvKP)。MLST分型结果显示102株临床分离株可分成54个MLST型,其中有6种为新发现的ST型,地区分布上看,湛江地区以ST23(4/30)为主;茂名地区以ST1224(4/12)为主;阳江地区以ST11(3/6)为主;珠海地区以ST15(3/8)为主,其他地区的ST型呈多态性。结论     

广东省肺炎克雷伯菌临床分离株病原特征分析

目的 了解广东省肺炎克雷伯菌临床分离株的抗生素耐药情况与多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集了广东省9个地市的肺炎克雷伯菌临床分离株102株,采用微量肉汤稀释法测定菌株对30种抗菌药物的敏感性,同时对所有分离株进行MLST分型,分析其菌群分布特征。结果 根据药敏试验与黏液拉丝试验结果,广东省9个地市102株肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药特点可分成4类,即(ESBLs)KP(43株,其中9株为ESBLs-hvKP)、CRKP(8株,其中1株为CR-hvKP)、较敏感的KP(30株,均为hvKP)和其它类型多重耐药KP(MDRKP)(21株,其中6株为MDR-hvKP)。MLST分型结果显示102株临床分离株可分成54个MLST型,其中有6种为新发现的ST型,地区分布上看,湛江地区以ST23(4/30)为主;茂名地区以ST1224(4/12)为主;阳江地区以ST11(3/6)为主;珠海地区以ST15(3/8)为主,其他地区的ST型呈多态性。结论 我省肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况较严重,菌群分布多样,在某些地区存在耐药变异株,应加强对此类菌株的耐药性和菌群结构变化的监测。     

产KPC酶肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的分子机制研究

摘要：目的 研究临床分离肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的分子耐药机制,为临床合理用药提供理论及实验依据。方 法 收集2020年1月-2020年12月皖南医学院弋矶山医院临床分离非重复肺炎克雷伯菌株923株,利用全自动微生物分析系统进 行菌种鉴定及药敏分析,并用16S rRNA PCR扩增产物测序验证菌种,K-B法复核碳青霉烯类药物耐药情况;胶体金法对耐碳青 霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia, CRKP)菌株进行碳青霉烯酶的表型检测,并用碳青霉烯酶PCR扩 增结果进行验证;同时利用全自动微生物分析系统对产KPC酶CRKP产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, ESBLs) 进行检测,并用ESBLs耐药相关基因PCR扩增结果进行验证;多位点序列分型技术(MLST)对产KPC酶CRKP进行序列分型 (ST)。 结果 923株肺炎克雷伯菌中256株(27.74%)为CRKP,其中183株携带blaKPC,ST分型为ST11型和ST12型,产KPC酶CRKP 携带3种ESBLs基因blaTEM-1、blaSHV-11和blaCTX-M-1。结论 CRKP产碳青霉烯酶以KPC酶型为主,blaKPC可合并3种ESBLs的产生。     

血流感染中高毒力肺炎克雷伯菌的荚膜多糖血清型特点、多位点序列分型研究

目的 分析血流感染中高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)的荚膜多糖血清分型特点、多位点序列分型。方法 选取2020年10月—2021年12月河南省人民医院临床分离自血培养的165株肺炎克雷伯菌作为本次实验对象。应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术鉴定分离出的菌株,其中高毒力肺炎克雷伯菌(hvKP)55株,普通的肺炎克雷伯菌(KP)110株,采用微生物鉴定药敏分析仪进行药敏试验,分析其耐药性,通过聚合酶链式反应技术检测荚膜多糖血清分型和多位点序列分型。结果 hvKP对常见抗菌药物的耐药率均低于KP,且对头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、左氧氟沙星、阿米卡星、亚胺培南、美罗培南的耐药率较低(P<0.05);两组在K1、K2、K5、K54、K57荚膜多糖血清分型的分布比较方面差异较大(P<0.05),且与KP相比较,hvKP荚膜多糖血清分型K1、K2的检出率较高,K5、K54、K57的检出率较低(P<0.05);ST23、ST86、ST65是hvKP主要的多位点序列分型,依次占比32.73%、20.00%、16.36%。结论 引起的血流感染的hvKP对大部分常用抗菌药物的耐药性较...     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)是临床常见的耐药菌之一。本研究对88株全国49家医院收集的CRKP菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测,其中65株(73.9%)检出blaKPC类基因(64株检出blaKPC-2、1株检出blaKPC-3)、9株(10.2%)检出blaNDM类基因(均为blaNDM-1)、7株(8.0%)检出blaIMP类基因(均为blaIMP-4)。通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)将88株CRKP分为25个MLST型,其中ST11型为优势型别,包含48株菌。88株CRKP通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分为79个PFGE型,呈现高度多态性。本研究揭示了我国blaKPC-2阳性CRKP菌株存在克隆化现象,存在ST11型流行克隆;而blaNDM-1和blaIMP-4阳性CRKP菌株分子型别多态性大,还没形成流行克隆。需要密切监测并采取措施控制携带blaKPC-2基因的ST11型CRKP的传播扩散。     

某院不同病区间由肺炎克雷伯菌引起血流感染的相关分析

目的 了解不同病区肺炎克雷伯菌引起血流感染的临床特征、药物敏感性和产碳青霉烯酶的耐药基因型，为临床的预防与治疗提供依据。方法 收集某院2014年1月-2016年12月内科病区、外科病区、重症监护病区和老年病区间由肺炎克雷伯菌引起血流感染患者的临床资料和感染菌株，应用Whonet 5.6进行耐药性分析；PCR法检测产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药基因，并采用多点位序列分型(MLST)进行分子遗传学分析。结果 共纳入血流感染患者135例，以院内感染为主，男性患者居多。基础疾病以消化系统疾病为主，以合并肺部感染最常见，分别为31.11%和21.48%，不同病区间在性别分布和感染类型上有显著意义(P<0.05)。内科病区分离的肺炎克雷伯菌对11种药物敏感率普遍高于其他病区，除复方磺胺甲噁唑(P>0.05)外，其余10种药物(头孢曲松、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/三唑巴坦、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、环丙沙星和左氧氟沙星)敏感性在不同病区间有显著差异(P<0.05)。共检出CRKP 28例，其中重症监护病区25例(89.29%)，外科病区2例(7.14%)，内科病区1例(3.57%)；MLST结果显示，重症监护病区ST11型24株(96%)、ST1855型1株(4%)，外科病区2株为ST11型，内科病区1株为ST1224型；所有菌株均检测出blaKPC-2和外膜蛋白ompk35基因，外膜蛋白ompk36基因占96.43%。结论 不同病区间由肺炎克雷伯菌引起的血流感染在临床特征、体外药物敏感性和碳青霉烯类耐药的基因型存在不同，预防和治疗该类患者时应根据不同病区的特点区别对待。     

肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与分子流行病学分析

目的了解我院住院患者临床肺炎克雷伯菌分离株的耐药性与分子流行特征,为临床抗感染及合理用药提供依据。方法收集2018年4-12月我院住院病人肺炎克雷伯菌临床分离株,采用纸片扩散法或自动化仪器法按统一方案进行抗菌药物敏感性试验;聚合酶链反应(PCR)法检测耐药基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)技术对菌株进行同源性分析和分型。结果共分离到肺炎克雷伯菌211株,对第3代头孢(头孢噻肟)和第四代头孢(头孢吡肟)的耐药率分别为54.5%和44.1%,对碳青霉烯类抗菌药物亚胺培南和美罗培南的耐药率为32.7%和34.1%;其中107株(107/211,50.6%)菌株分离自ICU病房,56株(56/107,52.3%)为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CR-KP),MLST分型显示以ST11为主,PFGE分型结果主要为A型和F型两大聚类。结论肺炎克雷伯菌耐药率高,特别是分离自ICU病房的菌株耐药情况尤为严重,且携带KPC-2基因的ST11克隆株在ICU病房流行传播。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌多位点序列分型研究

目的：了解南昌四家教学医院的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（ CRKP）分子流行病学特征。方法收集2011年1月至2012年6月来自南昌地区四家教学医院临床分离的29株亚胺培南和／或美罗培南耐药肺炎克雷伯菌,聚合酶链反应（PCR）检测CRKP携带的耐药基因;用多位点序列分型技术（MLST）对CRKP进行分子遗传学分析;eBURST软件对多位点序列分型结果进行其种群结构分析。结果29株CRKP经MLST成功分成16个ST（序列类型）型。其中,以ST11和ST15为主（各5株）;其次为ST395（3株）,ST334、ST273、ST147（各2株）,ST1128、ST42、ST1031、ST764、ST629和ST37（各1株）;值得注意的是,4个新的ST型已被PubMlst数据库确认收录并分别命名为ST1369、ST1411、ST1412和ST1413。其中,有2个 ST 群,每个 ST 群分别包括2个 ST 型（ ST395和ST1369,ST147和ST273）,其他12个ST型都是单个的ST型,其中ST11、ST15和ST395均属于CC258克隆复合体。结论本地区CRKP具有基因多态性,主要克隆系为ST11和ST15,曾有过短暂局部的ST15流行。     

亚洲地区肺炎克雷伯菌耐药基因和毒力基因分析

目的:分析亚洲地区肺炎克雷伯菌毒力基因和耐药基因的携带情况,为制定菌株防治措施提供依据。方法:从GenBank中收集并分析了4 549株肺炎克雷伯菌的完整基因组(下载日期:2020年12月31日)。通过MLST、Kleborate和ABRicate等生物信息学软件分析肺炎克雷伯菌的MLST分型、KL分型、毒力基因以及耐药基因。结果:MLST分型结果显示,ST11是亚洲地区肺炎克雷伯菌的主要序列类型,共检测到1 519(33.39%)株,其中ST11-KL64、ST11-KL47,分别占51.15%(777/1 519)、37.20%(565/1 519)。毒力基因检测发现,ST11-KL64型菌株中,有36.04%(280/777)的菌株同时携带4种铁载体基因,有33.33%(259/777)的菌株同时携带rmpA和rmpA2基因。在ST11-KL47型菌株中,有13.52%(76/565)的菌株同时携带4种铁载体基因,有5.49%(31/565)的菌株同时携带rmpA和rmpA2基因。耐药基因检测发现,有97.25%(4 424/4 549)的菌株检测出β-内酰胺类耐药基因,有3.06%(139/4 549)的菌株携带粘菌素耐药基因。结论:亚洲地区肺炎克雷伯菌MLST分型以ST11为主、血清荚膜型以KL64、KL47为主。ST11-KL64型菌株的高毒力表型基因携带率高于ST11-KL47。应规范抗菌药物使用,加强对肺炎克雷伯菌的监测和医院内感染的防控工作,防止肺炎克雷伯菌的大规模流行。     

高毒力肺炎克雷伯菌耐药机制研究进展

肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,KP）是院内感染的常见革兰阴性致病菌;20世纪80年代以来,KP的一种新型变异株-高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent K.pneumoniae,hvKP）不断产生和蔓延,常感染健康宿主并引起严重的侵袭性感染;早期研究认为高毒力与耐药性不会在同一KP出现,但近期已有hvKP相关菌株耐药甚至多药耐药的报道,耐药性和高毒力的结合可能会成为下一个临床即将面临的重要挑战。现就hvKP耐药报道及相关机制研究进行综述和讨论,希望能为预防和控制耐药hvKP在我国的流行和发展以及为进一步对耐药机制进行深入研究提供参考。     

临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学特征研究

目的 分析近5年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药特性及其携带碳青霉烯酶基因等分子流行病学特征,为有效控制院内感染提供依据。方法 收集2012年1月-2016年12月苏州大学附属第二医院临床标本中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,用最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)法、KB法分析菌株对抗菌药物的敏感性,用改良碳青霉烯灭活试验检测产碳青霉烯酶表型,并通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)筛选blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA48碳青霉烯酶基因,通过脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)和多位点序列分型(multiple locus sequence typing, MLST)检测细菌的同源性和相关遗传性。统计分析相关患者临床资料。结果 共分离到82株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,主要来源于呼吸道43株(52.44%),中段尿12株(14.63%),血液10株(12.20%),无菌体液8株(9.76%),分泌物8株(9.76%),导管1株(1.22%),对头孢菌素类和β-内酰胺类抗菌药物表现为高度耐药(85.4%~100%),碳青霉烯灭活试验阳性率为84.1%。PCR检测到71株细菌携带碳青霉烯酶基因,包括KPC阳性56株(78.87%)、NDM阳性10株(14.08%)、IMP阳性4株(5.64%)、VIM阳性1株(1.41%)。感染患者主要集中在重症监护室(ICU)病区(41株,50.00%)和神经外科(14株,17.07%)。2016年检出的32株中有23株(71.9%)PFGE呈高度同源性,且MLST分型均为ST11,其余7株为ST64型(21.9%),2株为ST23型(6.2%)。结论 本院肺炎克雷伯菌主要分布于ICU,以呼吸道标本检出率最高,对碳青霉烯类耐受主要由于产KPC酶,需进一步加强临床耐药细菌的监测,为临床合理使用抗菌药物和严格执行消毒隔离措施提供参考依据。     

2015-2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药变迁及流行调查

目的 了解河北医科大学第二医院2015-2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)变迁及流行特征,并进行流行病学分析。方法 采用Vitek 2-Compact进行细菌鉴定和药物敏感试验测定,使用Whonet 5.6软件及SPSS 5.0进行数据统计分析,PCR扩增碳青霉烯酶基因blaKPC-2和blaNDM-1;对有流行病学意义的菌株进行多位点序列分型(MLST),目的产物经基因测序和BLAST网上比对确定其基因型。结果 2015-2017年共检出肺炎克雷伯菌非重复菌株4076株。其中,CRKP 831株,占比为20.4%,CRKP主要来源为痰、尿、血,以腹腔引流液耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌检出率最高,为22.4%~55.5%;3年间其对亚胺培南耐药率分别为19.3%、24.2%和22.4%,美罗培南耐药率为18.5%、23.1%和21.2%。CRKP对所测试全部抗菌药物耐药率均显著高于碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)。氨基糖苷类、复方磺胺甲噁唑、头孢替坦对CRKP相对敏感,其他抗菌药物耐药率均高于90%,CS-KP对所测试全部抗菌药物耐药率均低于40%;2016年神经外科耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌检出率由2015年3%上升至8%,集中在重症监护室(ICU),耐碳青霉烯酶基因型均为blaKPC-2型,选取神经外科ICU 10d内分离的5株CRKP进行MLST分型,均属于STll型。结论 3年间我院肺炎克雷伯菌耐药情况的变化及2016年在神经外科ICU病房出现的克隆传播,提示我们需采取有效的医院感染防控措施,进一步规范控制抗菌药物使用。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的表型分析

目的分析昆山市中医医院临床分离肺炎克雷伯菌病原株的分布及耐药情况,并对分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的主要耐药机制进行初步分析,为临床抗菌治疗及院内感染控制提供依据。方法采用VITEK-2 compact微生物鉴定及药敏系统对临床分离菌株进行鉴定和药敏测定,对其分布及耐药情况进行统计分析。对临床初筛的CRKP菌株进行K-B药敏试验、表型确证试验(改良Hodge试验)、产超广谱-内酰胺酶(ESBLs)确证试验以及检测AmpC酶的三维试验。结果临床分离的295株克雷伯菌中有CRKP 23株,主要来源于痰标本,送检科室以ICU为主;其中AmpC阳性12株,ESBLs阳性6株,2种酶均为阳性2株;CRKP大部分来自重症老年患者;CRKP的多重耐药性明显高于非耐碳青霉烯类肺炎克雷伯杆菌(CSKP)(P<0.05),对环丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素和丁胺卡那霉素的耐药率低于50.00%,而既产AmpC酶又产ESBLs的菌株对上述4种抗生素敏感。结论CRKP的多重耐药性明显高于CSKP,其中产AmpC酶CRKP的检出率比产ESBLs更高,治疗由CRKP所致感染时,应根据其药敏检测结果,选用耐药性较低的抗生素治疗,如环丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素和丁胺卡那霉素等。     

Role of IncHI2 plasmids harbouring blaVIM-1, blaCTX-M-9, aac(6')-Ib and qnrA genes in the spread of multiresistant Enterobacter cloacae and Klebsiella pneumoniae strains in different units at Hospital Vall d'Hebron, Barcelona, Spain

Seven Enterobacter cloacae isolates and seven Klebsiella pneumoniae isolates harbouring a phenotype compatible with the production of a metallo-β-lactamase were recovered between 2009 and 2011 in three Intensive Care Units of Hospital Vall d'Hebron (Barcelona, Spain). The presence of bla(VIM), bla(IMP), bla(NDM), bla(CTX-M), aac(6')-Ib, qnrA, qnrB and qnrS genes was screened by polymerase chain reaction (PCR) and sequencing. Clonal relatedness of the isolates was assessed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and, in the case of K. pneumoniae isolates, by multilocus sequence typing (MLST). PCR-based replicon typing, Southern hybridisation, plasmid double-locus sequence typing and MOB relaxase classification methods were used to identify and characterise the plasmids carrying the resistance genes. Transferability of the identified plasmids was tested by conjugation assays. All 14 isolates were found to carry bla(VIM-1), bla(CTX-M-9) (except one isolate), aac(6')-Ib and qnrA genes. Clonality assessment demonstrated that E. cloacae isolates were distributed in three clonal clusters, whereas all of the K. pneumoniae isolates belonged to one unique clone, identified as sequence type ST252. All studied isolates harboured a large conjugative IncHI2 MOB(H11) plasmid carrying all of the detected resistance genes. Plasmid DNA analysis showed that all of them belonged to the ST1 IncHI2 plasmid cluster and shared the same relaxase partial sequence. In conclusion, the present study describes the dissemination within a hospital of multiresistant E. cloacae and K. pneumoniae isolates producing VIM-1. A complex clonal epidemiology of the E. cloacae isolates was observed and plasmid DNA analysis strongly supports horizontal exchanges of the same IncHI2 plasmid between different strains and species.     

天津地区耐甲氧西林葡萄球菌的分子流行病学研究

目的：了解天津地区葡萄球菌的耐药状况、分子分型及遗传学特点.方法：受检菌株94株,抗生素药敏试验测定;应用PCR及多重引物PCR技术对耐甲氧西林葡萄球菌中的葡萄球菌盒染色体mec（SCCmec）以及盒染色体重组酶基因（ccr）进行基因分型;8株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行脉冲场凝胶电泳分型;6株做多位点测序分型（MLST）.结果：8株MRSA对包括苯唑西林在内的多种抗生素耐药,但MRSA和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）对糖肽类和新的抗革兰阳性菌药物均敏感;天津地区MRSA多含有Ⅲ型SCCmec,MIST分型以ST239为主;MRCNS中的SCCmec类型复杂,用现有的方法大多不能分型.结论：天津地区葡萄球菌中耐药情况较为严重,本地区MRSA所携带的SCCmec并非来自：MRCNS,而MRCNS含有更为复杂的SCCmec.