香芹酚对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌生物膜的体外抑制作用研究

目的：研究香芹酚对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）生物膜的体外抑制作用,及其与美罗培南和左氧氟沙星的联用效果。方法：采用肉汤稀释法检测亚胺培南和美罗培南对10株临床分离肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）,微量肉汤稀释法测定香芹酚的MIC和最低杀菌浓度（MBC）;通过生长曲线法检测香芹酚对CRKP生长能力的影响;采用结晶紫染色法测定香芹酚对CRKP生物膜形成能力影响,微量肉汤稀释法测定最低抑制生物膜浓度（MBIC）和最低清除生物膜浓度（MBEC）;采用微量棋盘法测定联合抗生物被膜分数（FBICs）。结果：香芹酚对2株CRKP的MIC和MBC分别为156和313 μg·mL-1,香芹酚的MBIC和MBEC分别为313和1250 μg·mL-1,明显降低CRKP1的生长能力和生物膜形成能力,与美罗培南和左氧氟沙星的FBIC分别为0.31和0.37。结论：香芹酚可以抑制CRKP生长和生物膜的生成,与美罗培南和左氧氟沙星联合用药有协同抑制CRKP生物膜作用,为治疗CRKP感染提供新的思路。     

ε-聚赖氨酸对白念珠菌抑菌活性及机制研究

目的 研究ε-多聚赖氨酸(ε-poly-L-lysine, ε-PL)对白念珠菌(Candida albicans)的抑菌活性及抑菌机制。方法 以白念珠菌的标准菌株ATCC64548(氟康唑敏感株)、ATCC64550(氟康唑耐药株)以及临床收集的50株菌为实验菌株,按照CLISI- M27文件中的微量稀释法测定ε-多聚赖氨酸的MIC、MFC和SMIC50值;绘制48h内的浮游菌株时间-生长曲线和生物膜抑制-时间曲线;连续观测并记录4h内的芽管形成率和芽管长度;测定药物处理前后白念珠菌的丙二醛和活性氧(ROS)含量。结果 ε-PL对白念珠的最低抑菌浓度(MIC)为512μg/mL,最低杀菌浓度(MFC)为1024μg/mL,SMIC50为512μg/mL,ε-PL对白念珠菌浮游菌及生物膜的抑菌作用随着浓度的升高作用愈明显。抑菌-时间曲线结果表明ε-PL对白念珠菌的浮游菌和生物膜在12h左右即产生明显抑制作用。芽管实验的结果表明高浓度的ε-PL对白念珠菌的芽管形成率及芽管长度具有明显抑制作用。ε-PL作用于白念珠菌后MDA和ROS含量呈现上升趋势,并且与药物浓度大小成正相关。结论 ε-PL对白念珠菌浮游菌株及生物膜均有良好的抑制作用,高浓度ε-PL对白念珠菌主要毒力菌丝有明显抑制作用,ε-PL作用导致白念珠菌内产生大量的活性氧(ROS)以及产生一定程度的脂质氧化,提示ε-PL可能通过氧化作用发挥抑菌效果。     

ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌生长及生物膜形成的影响#br#

目的 研究ε-聚赖氨酸(ε-poly-L-lysine, ε-PL)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)生长及生物膜形成的影响。方法 以金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC25923及社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)USA300为试验菌株,常量肉汤稀释法(试管)测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC),酶标仪检测吸光度法观察各株金黄色葡萄球菌的生长曲线,96孔板结晶紫染色法检测各株菌生物膜的形成并用扫描电子显微镜(SEM)观察生物膜的形成情况。结果 ε-PL对ATCC25923和USA300的MIC均为31.25mg/mL。ε-PL浓度升高时对两株菌生长的抑制作用随之增强。1/2MIC ε-PL能显著降低ATCC25923和USA300生物膜的形成能力。 结论 ε-PL作为一种安全、高效的天然防腐剂,能有效抑制金黄色葡萄球菌细菌的生长及生物膜的形成,为新型药物的研发提供了理论依据。     

多西环素联合左氧氟沙星对耐药肺炎克雷伯菌的体内外抗菌活性研究

目的:探究多西环素联合左氧氟沙星对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)的体内外抗菌活性。方法:于宜春市人民医院收集临床分离的8株CRKP,体外采用微量肉汤稀释法测定多西环素和左氧氟沙星对8株CRKP的最小抑菌浓度(minimal inhibition concentration, MIC),棋盘稀释法判断两药联用的抑菌效果，时间-杀菌曲线法进一步评价两药联合的杀菌作用。结晶紫染色半定量生物膜法测定两药联用对生物膜形成的抑制作用和消除作用。体内利用鼻腔滴注CRKP菌液建立小鼠肺部急性感染模型，记录小鼠精神状态及肺部组织荷菌量、血清炎性因子C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、白细胞介素(IL)-6的水平和病理形态学改变等指标评估，分析多西环素联合左氧氟沙星对CRKP的体内抗菌活性。结果:多西环素对8株CRKP的MIC为4～256 ug·mL^-1,左氧氟沙星对8株CRKP的MIC为16～256 ug·mL^-1。棋盘法显示多西环素联合左氧...     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)是临床常见的耐药菌之一。本研究对88株全国49家医院收集的CRKP菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测,其中65株(73.9%)检出blaKPC类基因(64株检出blaKPC-2、1株检出blaKPC-3)、9株(10.2%)检出blaNDM类基因(均为blaNDM-1)、7株(8.0%)检出blaIMP类基因(均为blaIMP-4)。通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)将88株CRKP分为25个MLST型,其中ST11型为优势型别,包含48株菌。88株CRKP通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分为79个PFGE型,呈现高度多态性。本研究揭示了我国blaKPC-2阳性CRKP菌株存在克隆化现象,存在ST11型流行克隆;而blaNDM-1和blaIMP-4阳性CRKP菌株分子型别多态性大,还没形成流行克隆。需要密切监测并采取措施控制携带blaKPC-2基因的ST11型CRKP的传播扩散。     

罗红霉素与乙酰螺旋霉素对眼部金黄色葡萄球菌生物膜的影响

目的:比较罗红霉素与乙酰螺旋霉素对眼部金黄色葡萄球菌生物膜的影响及与环丙沙星合用的抗菌协同作用。方法:用0.22μm微孔膜构建金黄色葡萄球菌生物膜模型;测定罗红霉素、乙酰螺旋霉素及环丙沙星的最低抑菌浓度(MIC)值;银染金黄色葡萄球菌生物膜,扫描电镜(SEM)观察生物膜形态结构,连续稀释法进行活菌计数。结果:生物膜(BF)可在7 d内稳定形成,1/16MIC、1/4MIC浓度罗红霉素显著减少单用环丙沙星组中的BF活菌数(P<0.05),乙酰螺旋霉素没有明显作用。结论:罗红霉素能显著提高环丙沙星对BF中金黄色葡萄球菌的抗菌活性。     

EDTA-2Na联合抗菌药物对铜绿假单胞菌的体外抑菌及生物膜抑制作用研究

目的 探讨乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic acid disodium,EDTA-2Na)联合抗菌药物对铜绿假单胞菌的体外抑菌及生物膜抑制作用。方法 对临床分离的10株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌、8株黏菌素耐药铜绿假单胞菌和8株阿米卡星耐药铜绿假单胞菌,通过微量肉汤稀释棋盘法检测EDTA-2Na分别与亚胺培南、黏菌素和阿米卡星联用以及各自单用时对相应耐药菌株的最小抑菌浓度(minimal inhibititory concentration,MIC),并通过计算部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)评价联合抑菌效果;结晶紫生物膜试验检测EDTA-2Na分别与亚胺培南、黏菌素和阿米卡星联用及各自单用时对相应耐药菌株生物膜的抑制作用,通过测量A595值评价抑制生物膜效果。结果 EDTA-2Na与亚胺培南、黏菌素和阿米卡星联用后对相应耐药菌株的抑菌作用表现为协同或相加,对生物膜也具有明显的协同抑制作用。结论 EDTA-2Na联合抗菌药物对铜绿假单胞菌具有良好的体外抑菌作用及抑制生物膜作用。     

亚抑菌浓度卡泊芬净对白念珠菌生物膜形成的影响及机制研究

目的 初步探讨亚抑菌浓度(sub-MIC)卡泊芬净对白念珠菌生物膜形成的影响,为清除生物膜策略的制定提供理论基础。方法 用微量肉汤稀释法测定卡泊芬净对白念珠菌的活性,并研究sub-MIC卡泊芬净对白念珠菌生长的影响;运用菌落计数、XTT染色和扫描电镜分析sub-MIC卡泊芬净作用下形成的白念珠菌生物膜特点;采用实时荧光定量RT-PCR测定Ece1,Can2,Hip1,GAP1,GCN4和Stp2等白念珠菌生物膜相关基因的mRNA表达水平。结果 12株白念珠菌对卡泊芬净的MIC值范围为0.625～0.875μg/mL,sub-MIC卡泊芬净对白念珠菌的生长有不同程度的抑制作用。针对白念珠菌生物膜的形成,1/4 MIC和1/8 MIC卡泊芬净皆对生物膜中的菌体数量、菌体代谢活性及生物膜结构有抑制作用,而1/16 MIC卡泊芬净则对生物膜无明显影响。1/4 MIC和1/8 MIC卡泊芬净对白念珠菌生物膜相关基因的表达水平也具有抑制作用,1/16 MIC卡泊芬净则对基因表达水平无影响。结论 sub-MIC卡泊芬净对白念珠菌生物膜的形成有一定抑制作用。但白念珠菌在sub-MIC卡泊芬净作用下仍能...     

硝酸镓联合氧氟沙星抑制尿路致病性大肠杆菌生物膜形成

目的 观察硝酸镓联合氧氟沙星对尿路致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)生物膜形成的抑制作用。方法 采用结晶紫染色法检测5株UPEC生物膜形成过程,将0.5×最低抑菌浓度(MIC)的硝酸镓和氧氟沙星单独应用与联合使用,计算其对UPEC生物膜的抑制率。结果 2种药物单独应用只能部分抑制生物膜形成,0.5×MIC硝酸镓(4.00 μg·mL^-1)和0.5×MIC氧氟沙星(0.25 μg·mL^-1)联合应用对细菌生物膜的抑制率为94.46%~97.03%,明显强于2种药物单独作用(P<0.01)。结论 硝酸镓联合氧氟沙星对UPEC生物膜形成有明显抑制作用,对尿路感染的防治具有进一步应用价值。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对多黏菌素B体外敏感性检测方法的差异性研究

摘要：目的 了解不同检测方法在耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)对多黏菌素 B体外药敏检测中的差异,为临床治疗和实验室检测提供依据。方法 选择2018-2020年宁波地区临床分离的CRKP 147株,分 别采用肉汤稀释法、E-test纸片法、仪器法(N335药敏卡)和纸片法检测其体外对多黏菌素B的敏感性,分析4种药敏检测方法所 存在的差异。结果 微量肉汤稀释法、E-test法和仪器检测CRCP对多黏菌素B MIC50分别为1、1和0.5μg/mL,MIC90分别为1、 1和0.5,累积敏感率分别为97.3%、99.3%和98%,具有较高一致性和敏感性;仪器法检测CRKP对多黏菌素B的平均MIC值为 (0.82±0.16)μg/mL,明显低于标准方法的(1.39±0.27)μg/mL,差异有统计学意义(P＜0.01);E-test法和仪器法的基本一致率(EA) 为92.5%和94.6%,标准符合(CA)分别为97.3%和98.6%,严重错误(VME)分别为2.7%和1.4%;重大错误(ME)和小错误(mE)均为 0;纸片法KB值与肉汤稀释法MIC值之间方差分析P＞0.05,故提示KB值与MIC值不具有线性关系。结论 4种方法检测CRKP 对多黏菌素B体外具有较高敏感性;仪器法和E-test法对于多黏菌素B的敏感性检测与微量肉汤稀释法高度一致,但其中仪器法 N335药敏卡检测MIC有所降低,建议标准方法复核。     

Bactericidal activity of various antibiotics against biofilm-producing Pseudomonas aeruginosa

Clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were collected from hospitals in Tehran, Iran, and identified using biochemical tests. A modified microtitre plate test was used to determine the biofilm-forming capacity of the isolates, measured with an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) reader. Results showed that P. aeruginosa strain 214 was the most efficient at producing biofilm compared with the other strains. Observation of the bacterial biofilm on Teflon sheets and on a catheter using a scanning electron microscope showed greater biofilm formation on the catheter than on Teflon sheets. In this study, we investigated the bactericidal activity of fluoroquinolones, beta-lactams, macrolides and aminoglycoside. The results showed differences in the antibiotic susceptibility of planktonic and biofilm cell populations. Fluoroquinolones showed more potent activity than the other antibiotics, and biofilms were completely eradicated by treatment with 16 x the minimum inhibitory concentration (MIC) of ciprofloxacin and 64 x MIC of ofloxacin, whereas all biofilms survived 2560 microg/mL of imipenem and ceftazidime. Production of an exopolysaccharide matrix is one of the distinguishing characteristics of biofilms. It has been suggested that this matrix prevents access of antibiotics to the bacterial cells embedded in the community. In this study, we also evaluated the permeation of antibiotics through alginate of P. aeruginosa strain 214 using a sandwich cup method. Macrolides were most efficient, showing 100% penetration; fluoroquinolones and beta-lactams had a high permeation rate > 75%, whereas the rates for aminoglycosides were low (amikacin = 59%; gentamicin = 73%).     

硝酸镓和万古霉素抑制表皮葡萄球菌生物膜形成的协同作用

目的观察硝酸镓和万古霉素联合应用对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响。方法采用半定量的分光光度法计算生物膜的形成程度。将低于最小抑菌浓度的古霉素和硝酸镓联合使用,观察它们对表皮葡萄球菌生物膜形成的影响。结果硝酸镓（2μmol/L）和万古霉素（1μg/m l）联合应用对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制率达到99.9%,明显高于单独使用的效果。结论硝酸镓可以提高万古霉素对表皮葡萄球菌生物膜形成的抑制效果。     

赶黄草水煎液对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响

目的 探究赶黄草水煎液在体外对金黄色葡萄球菌(SA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜(MRSA)形成的影响。方法 采用微量肉汤稀释法测定赶黄草水煎液对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),根据MIC和MBC绘制杀菌曲线,采用结晶紫染色法和激光共聚焦观察赶黄草水煎液对SA和MRSA生物膜形成的影响,并通过测定胞外多糖和胞外DNA的含量研究赶黄草水煎液破坏SA和MRSA生物膜的作用方式。结果 赶黄草水煎液对SA的MIC和MBC分别为1.36和2.71 mg/mL,对MRSA的MIC和MBC为2.71和5.73 mg/mL;赶黄草水煎液可使SA和MRSA均生长受到抑制,抑制生物膜的形成、减少胞外多糖和胞外DNA的释放。结论 赶黄草水煎液对SA和MRSA具有良好的抑菌作用,可通过抑制胞外多糖和DNA的分泌破坏生物膜的形成。     

克拉霉素/氟罗沙星对铜绿假单胞菌生物被膜体外作用研究

目的 :探讨克拉霉素和氟罗沙星对铜绿假单胞菌 (PA)生物被膜的影响。方法 :选取临床分离的呼吸道PA7株 ,用平板法培养细菌生物被膜 ,银染色法鉴定 ;微量稀释法检测克拉霉素和氟罗沙星对PA的最低抑菌浓度(MIC) ;噻唑兰法测定活菌数 ;结晶紫染色法观察不同浓度药物对PA粘附性的影响。结果 :1/16MIC、1/4MIC克拉霉素可减少细菌对硅胶膜粘附(P<0 05) ,且可显著增强1/4MIC、1/2MIC的氟罗沙星对铜绿假单胞菌生物被膜的抑菌活性 (F=20 193 ,P<0 01)。结论 :克拉霉素与氟罗沙星联合应用对生物被膜铜绿假单胞菌呈抗菌协同作用     

左氧氟沙星联合哌拉西林他唑巴坦对产超广谱β-内酰胺酶耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的防耐药突变浓度及耐药机制的研究

目的：探讨左氧氟沙星（LEV）联合哌拉西林他唑巴坦（TZP）对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）的防耐药突变浓度（MPC）及耐药机制,为降低细菌耐药提供依据。方法：采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定抗菌药物对36株临床分离ESBLs耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）,计算部分抑菌浓度（FIC）指数;用肉汤富集浓度为10¹³CFU·L^-1 CRKP,采用琼脂平板稀释法测定LEV和TZP单用及联用对36株临床分离CRKP的MPC,并计算相应的选择指数（SI）;通过PCR扩增和DNA测序法监测突变基因。结果：FIC值表明LEV联合TZP对36株临床ESBLs阳性CRKP主要表现协同和相加作用,无拮抗作用;LEV、TZP联用前后,MPC分别由32~1 024 mg·L^-1、512~1024 mg·L^-1降为4~256 mg·L^-1、16~512 mg·L^-1;SI明显下降。测序结果显示,联合用药较单一用药,耐药突变菌株的基因突变率明显降低。结论：LEV联合TZP显著降低了MIC、MPC,缩小突变选择窗（MSW）,耐药菌株的基因突变率明显降低,有效的减少CRKP突变菌株的产生。     

Effect of the antimicrobial decapeptide KSL on the growth of oral pathogens and Streptococcus mutans biofilm

Dental caries and periodontitis are common oral bacterial infectious diseases. Their prevention and treatment requires control of the causative pathogens, such as Streptococcus mutans and Porphyromonas gingivalis, that exist within dental plaque. As one of the attractive future substitutes for conventional antibiotics, antimicrobial peptides (AMPs), both natural and synthetic, have been widely tested and used for controlling bacterial infections. In this study, we investigated the antimicrobial activity of KSL (KKVVFKVKFK-NH(2)), a novel AMP, against several major cariogenic and periodontopathogenic bacteria as well as Candida albicans in vitro. Streptococcus mutans, the causative agent of dental caries, was chosen for in-depth testing. Bacterial susceptibility and time-kill assays were performed to investigate the sensitivity of S. mutans to KSL. The effect of KSL on biofilm formation and on pre-formed biofilm was also examined. For biofilm studies, confocal laser scanning microscopy (CLSM) was used to observe and analyse bacterial biofilm. The results showed that KSL had antimicrobial activity against a variety of oral bacteria and fungi. Streptococcus mutans and Lactobacillus acidophilus were the most susceptible strains to KSL peptide [minimum inhibitory concentration (MIC) of 0.0625 mg/mL] compared with other species tested (MICs of 0.125-1mg/mL). KSL also inhibited S. mutans biofilm formation, with a minimum biofilm inhibition concentration of 0.0625-0.125 mg/mL, and reduced 1-day-old developed S. mutans biofilm, with a minimum biofilm reduction concentration of 0.25-0.5mg/mL. CLSM images showed that KSL significantly reduced the viability of biofilm cells. This study suggests that KSL may have a potential clinical application in treating dental caries by killing S. mutans within dental plaque.     

克拉霉素和乙酰螺旋霉素对铜绿假单胞菌生物被膜的作用

目的 :研究克拉霉素 (CAM)、乙酰螺旋霉素 (ASM)对铜绿假单胞菌生物被膜 (BF)合成的影响及其与环丙沙星 (CIP)的相互作用。方法 :色氨酸法测定BF中的多糖蛋白复合物 (GLX) ;高氯酸 蒽酮反应物法定量测定BF的己糖成分 ;噻唑兰法测定活菌数。结果 :1/ 16最低抑菌浓度 (MIC)、1/ 4MIC的CAM可抑制BF中GLX、己糖的合成 ,且可显著增强 1/ 4MIC、1/ 2MIC的CIP对有BF的铜绿假单胞菌的杀菌作用 (P <0 0 5 ) ,而ASM则无以上作用。结论 :CAM可抑制铜绿假单胞菌BF的形成 ,并可增强CIP对有BF的铜绿假单胞菌的杀菌作用 ;而ASM则无抑制铜绿假单胞菌BF的作用